CN112877218B - 牛樟芝子实体栽培及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种牛樟芝菌，分类命名为牛樟芝(Taiwanofungus camphoratus)YZZ‑09‑XZ‑01，于2020年08月07日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏编号为CGMCC No.20234，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。本发明的优点是：牛樟芝YZZ‑09‑XZ‑01综合性状较好，生长速度快，性状优良，实用性强，适用于生产。提供的栽培方法高效、无毒、安全、简便，通过母种分离、液体发酵培养、子实体培养等环节，室内人工栽培，从而实现牛樟芝高效的生产；试验表明，该方法成效显著、稳定，可以有效高产地栽培出牛樟芝子实体，且药用成分含量较高。

Description

牛樟芝子实体栽培及其应用
技术领域
本发明属于微生物技术领域，特别涉及牛樟芝子实体栽培及其应用。
背景技术
牛樟芝(Taiwanofungus camphoratus(M.Zang&C.H.Su)Sheng H.Wu,Z.H.Yu,Y.C.Dai&C.H.Su)隶属于担子菌门(Basidiomycota)、层菌纲(Hymenomycetes)、多孔菌目(Polyporales)、多孔菌科(Polyporaceae)、台芝属(Taiwanofungus)，又名樟生薄孔菌、牛樟菇、血灵芝等，主要寄生于中国台湾的牛樟树(Cinnamomum kanehirai(Hayata)Hayata)腐朽心材内壁，或枯死倒地的牛樟木材潮湿表面，牛樟芝的自然生长速度缓慢且生长期短，仅为每年的6-10月。牛樟芝具有马蹄形或不规则状的子实体，多年生，平伏或平伏反卷，菌肉浅黄色，菌管棕红色至红褐色，孔口圆形，4-6个/mm，孔面与菌管同色；有性孢子为担孢子，长椭圆形至圆柱形，无色，薄壁，表面平滑，非淀粉质，不嗜蓝；菌丝体为棕黄色或至红色。新鲜和干燥的子实体都具有浓郁的牛樟树香气。
牛樟芝含有多醣体(Polysaccharides)、萜类化合物(Terpenoids)、超氧歧化酵素(SOD：Superoxide Dismutase)等多种药用成分，被广泛用于解毒、防治由持续性化学物质刺激导致的肝损伤、抵抗病毒、预防流行性感冒、肠病毒、提高免疫力、抵抗过敏、气喘、防癌、抑制癌细胞生长、抗肿瘤等，还具有强心、降血压、抗血栓、降低胆固醇及抗炎症活性和松弛血管、清除自由基抗衰老等方面功效；此外，牛樟芝也已被证实不具有基因毒性，因此，牛樟芝极具良好的药用和保健价值，牛樟芝生物活性物质具备开发新药原料的价值。
发明内容
针对上述问题，本发明的目的是提供一种牛樟芝(Taiwanofungus camphoratus)YZZ-09-XZ-01。
为实现上述目的，本发明所采用的技术方案是：
一种牛樟芝菌，分类命名为牛樟芝(Taiwanofungus camphoratus)YZZ-09-XZ-01，于2020年08月07日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏编号为CGMCC No.20234，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
本发明还提供了上述牛樟芝(Taiwanofungus camphoratus)YZZ-09-XZ-01在栽培牛樟芝子实体上的应用。
其中，所述牛樟芝子实体的栽培方法包括以下步骤：
(1)菌种培养：将牛樟芝冲洗干净，取内部小块菌肉接种于培养基中培养，得到母种；
(2)菌种扩大培养：将所述母种切碎，接入液体培养基中，使牛樟芝菌丝在所述液体培养基中长满；
(3)木材选择：选用樟属树种；所述樟属树种选自牛樟、香樟或云南樟中的一种；
(4)接种；将所述牛樟芝(Taiwanofungus camphoratus)YZZ-09-XZ-01接种于所述樟属树种上；
(5)子实体培养：在温度26℃～28℃、湿度80％～90％的条件下培养3～5个月，即得。
作为优选，所述步骤(1)中冲洗采用以下方式来进行：无菌水清洗3次，然后放入75％酒精中浸泡1分钟，再用无菌水清洗3次。
作为优选，所述步骤(1)中培养基的配方为：马铃薯200-300g/L、麦芽糖15-20g/L、硝酸钠2-4g/L、磷酸二氢钾0.1-5g/L、硫酸镁0.1-5g/L、酵母粉1-4g/L、维生素B15-10mg/L、琼脂15-20g/L，pH值5.5-6.5。
作为优选，在所述培养基中培养的条件为在26℃的温度下来进行。
作为优选，所述步骤(2)中液体培养基的配方为：大米10-60g/L、麦芽糖10-30g/L、硝酸钠5-20g/L、磷酸二氢钾0.5-5g/L、硫酸镁0.5-5g/L、酵母粉1-10g/L、维生素B110-20mg/L，pH值5.5-6.5。
作为优选，在所述液体培养基中培养的条件为在26℃恒温条件下震荡培养10～20天，转速120～160r/min。
作为优选，所述步骤(4)中接种采用打孔接种：选择牛樟、香樟或云南樟树种的段木，在段木上打孔或砍出伤口，在水中充分浸泡透，捞出晾至不滴水后装入聚丙烯袋中，盖上密封盖，进行高压灭菌，待冷却后，在超净工作台上打开密封盖，向孔内或伤口处接种所述牛樟芝(Taiwanofungus camphoratus)YZZ-09-XZ-01，完成后盖上密封盖；
或，采用涂抹接种：将牛樟、香樟或云南樟树种的段木剥去树皮，在水中充分浸泡透，捞出晾至不滴水后装入布袋中，进行高压灭菌，待冷却后，在超净工作台上，将所述牛樟芝(Taiwanofungus camphoratus)YZZ-09-XZ-01涂抹在段木表面，完成后用保鲜膜包裹，放入灭过菌的玻璃缸中培养；
或，采用注射接种：将牛樟、香樟或云南樟树种的段木放入水中充分浸泡透，捞出晾至不滴水后装入布袋中，进行高压灭菌，待冷却后，在超净工作台上，将所述牛樟芝(Taiwanofungus camphoratus)YZZ-09-XZ-01注射进段木内部，然后用石蜡封口，完成后放入灭过菌的玻璃缸中培养。
作为优选，所述段木的直径为10～20cm，长度为10～25cm；在段木上打孔或砍出伤口的深度为露出木质部0.4～0.6cm。
本发明具有以下有益效果：
(1)本发明提供的牛樟芝YZZ-09-XZ-01综合性状较好，生长速度快，性状优良，实用性强，适用于生产。
(2)本发明所述方法高效、无毒、安全、简便，通过母种分离、液体发酵培养、子实体培养等环节，室内人工栽培，从而实现牛樟芝高效的生产；经西南林业大学实验室内进行的试验表明，该方法成效显著、稳定，可以有效高产地栽培出牛樟芝子实体，且药用成分含量较高。
附图说明
图1为牛樟芝YZZ-09-XZ-01的菌落特性图；
图2为牛樟芝YZZ-09-XZ-01的液体培养性状图；
图3为实施例1中牛樟段木上牛樟芝子实体的生长状况图；
图4为实施例2中香樟段木上牛樟芝子实体的生长状况图；
图5为实施例3中云南樟段木上牛樟芝子实体的生长状况图。
具体实施方式
下面结合附图对本发明的具体实施方式作进一步说明。在此需要说明的是，对于这些实施方式的说明用于帮助理解本发明，但并不构成对本发明的限定。此外，下面所描述的本发明各个实施方式中所涉及的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互组合。
实施例1
将YZZ-09-XZ-01纯菌株用于栽培，具体包括以下步骤：
(1)菌种培养
将牛樟芝冲洗干净，用无菌水冲洗3次，放入75％酒精中浸泡1min，再用无菌水冲洗3次，切取内部菌肉0.5×0.5cm的小块，浸入青霉素液(20μg/ml)中5s，用灭菌滤纸吸干表面水分后，接种于培养基上培养。
培养基配方为：马铃薯200g/L(煮汁取滤液)、麦芽糖15g/L、硝酸钠2g/L、磷酸二氢钾0.1g/L、硫酸镁0.1g/L、酵母粉1g/L、维生素B15mg/L、琼脂15g/L、pH值6.5。
当培养基上的牛樟芝菌丝产生分枝时，用打孔器切取直径2mm生长旺盛的菌丝块，移入另一培养基(配方同上)，26℃下培养，待菌丝长满培养基，即为纯化好的母种。
(2)菌种扩大培养
将切碎的母种接入液体培养基中，在26℃条件下，160r/min，震荡培养10-20d后，牛樟芝菌丝在培养液中长满。
培养液配方：大米60g/L(煮汁取滤液)、麦芽糖15g/L、硝酸钠5g/L、磷酸二氢钾0.5g/L、硫酸镁0.5g/L、酵母粉5g/L、维生素B110mg/L、pH值6.5。
(3)无菌接种
本实施例中用的段木为牛樟，段木的直径为5-10cm，长度为10-25cm，即可用于培养。
根据段木的长度和直径在段木上打孔或砍出伤口(鱼鳞口/环形口/条形口)(深度以露出木质部0.5cm)，在水中充分浸泡透(36-48h)，捞出晾至不滴水后装入聚丙烯袋中，盖上密封盖，放入高压灭菌锅内(0.15MPa，121℃)灭菌2h。待冷却后，在超净工作台上打开密封盖，向孔内或伤口处接种牛樟芝液体菌种。
(4)子实体培养
在恒温(28℃)恒湿(湿度90％)条件下培养2-3月，长出有牛樟芝菌丝和子实体的段木，即获得牛樟芝，如图3所示。
实施例2
将YZZ-09-XZ-01纯菌株用于栽培，具体包括以下步骤：
(1)菌种培养
将牛樟芝冲洗干净，用无菌水冲洗3次，放入75％酒精中浸泡1min，再用无菌水冲洗3次，切取内部菌肉0.2×0.2cm的小块，浸入青霉素液(20μg/ml)中3s，用灭菌滤纸吸干表面水分后，接种于培养基上培养。
培养基配方为：马铃薯200g/L(煮汁取滤液)、麦芽糖20g/L、硝酸钠3g/L、磷酸二氢钾0.5g/L、硫酸镁0.5g/L、酵母粉2g/L、维生素B110mg/L、琼脂18g/L、pH值6。
当培养基上的牛樟芝菌丝产生分枝时，用打孔器切取直径3mm、生长旺盛的菌丝块，移入另一培养基(配方同上)，26℃下恒温培养，待菌丝长满培养基，即为纯化好的母种。
(2)菌种扩大培养
将切碎的母种接入液体培养基中，在28℃恒温条件下，转数150r/min，震荡培养10-20天后，牛樟芝菌丝在培养液中长满。
培养液配方：大米60g/L(煮汁取滤液)、麦芽糖20g/L、硝酸钠10g/L、磷酸二氢钾1g/L、硫酸镁1g/L、酵母粉5g/L、维生素B120mg/L、pH值6.5。
(3)无菌接种
本实施例中所用的段木为香樟，段木的直径为10-15cm，长度为10-20cm，即可用于培养牛樟芝。
将香樟树种的段木剥去树皮，在水中充分浸泡透，捞出晾至不滴水后装入布袋中，进行高压灭菌，待冷却后，在超净工作台上，将牛樟芝液体菌种涂抹在段木表面，完成后用保鲜膜包裹，放入灭过菌的玻璃缸中培养。
(4)子实体培养
在恒温(28℃)恒湿(湿度90％)条件下培养3月，长出带有牛樟芝菌丝和子实体的段木，即得牛樟芝，如图4所示。
实施例3
将YZZ-09-XZ-01纯菌株用于栽培，具体包括以下步骤：
(1)菌种培养
将牛樟芝冲洗干净，用无菌水冲洗3次，放入75％酒精中浸泡1min，再用无菌水冲洗3次，切取内部菌肉0.3×0.3cm的小块，浸入青霉素液(20μg/ml)中4s，用灭菌滤纸吸干表面水分后，接种于培养基上培养。
培养基配方为：马铃薯250g/L、麦芽糖18g/L、硝酸钠3g/L、磷酸二氢钾1g/L、硫酸镁1g/L、酵母粉5g/L、维生素B110mg/L、琼脂20g/L、pH值6.5。当培养基上的牛樟芝菌丝产生分枝时，用打孔器切取直径2-3mm生长旺盛的菌丝块，移入另一培养基(配方同上)，28℃下恒温培养，待菌丝长满培养基，即为纯化好的母种。
(2)菌种扩大培养
将切碎的母种接入液体培养基中，在26℃恒温条件下，转数150r/min，震荡培养10-20d后，牛樟芝菌丝在培养液中长满。
培养液配方：大米60g/L、麦芽糖18g/L、硝酸钠6g/L、磷酸二氢钾2g/L、硫酸镁2g/L、酵母粉5g/L、维生素B110mg/L、pH值6.5。
(3)无菌接种
本实施例中所用的段木为云南樟，段木直径为10-15cm，长度为10-25cm，即可用于培养牛樟芝。
将云南樟树种的段木放入水中充分浸泡透，捞出晾至不滴水后装入布袋中，进行高压灭菌，待冷却后，在超净工作台上，将牛樟芝液体菌种注射进段木内部，然后用石蜡封口，完成后放入灭过菌的玻璃缸中培养。
(4)子实体培养
在恒温(28℃)恒湿(湿度90％)条件下培养3月，长出带有牛樟芝菌丝和子实体的段木，即得牛樟芝，如图5所示。
试验结果与分析
本实施例1-3分别采用牛樟、香樟和云南樟3个树种培养牛樟芝，栽培质量结果见表1。
表1
由上表可知，培养3-5月，牛樟芝YZZ-09-XZ-01在3种樟属植物上的生长都较好，每个段木均能长出牛樟芝菌丝，萌发率均为100％，所产出的数量稳定。子实体形成则有一定个体差异，牛樟段木上生长的牛樟芝子实体生物量为平均500g/块，香樟段木上生长的牛樟芝子实体生物量为平均300g/块，云南樟段木上生长的牛樟芝子实体生物量为平均150g/块；有效成分中总多糖含量均高于0.6％，三萜化合物总含量均高于1.0％，说明本发明方法可用于牛樟芝的栽培生产，且药用成分含量不低于国家标准(三萜含量不少于0.25％)；本发明所述方法子实体形成时间在2-5月间，不超过5个月，较传统培养方式时间缩短2-5倍，生产效率提高约4倍。
本发明所述方法全过程均在室内人为控制温湿度条件下完成，所使用的栽培材料均经过消毒灭菌，且每个操作程序均保证在超净工作环境中进行，可以提高生产效益，大大缩短栽培时间，同时避免栽培过程中的污染问题，实现高效生产，满足市场需求，带动经济发展。
本发明所述牛樟芝YZZ-09-XZ-01的培养特性：
牛樟芝菌落初期橘黄色、圆形，厚度中等，绒毛状，后期颜色变深，为橘红色至鲜红色；菌丝细，较密，15-20天长满皿，萌发率100％，菌丝平均生长速为1.25mm/d，如图1所示。牛樟芝液体发酵培养初期菌丝体形成浅黄色小菌球、溶液呈浅红褐色，后期菌丝体形成红褐色大菌球、溶液澄清，呈浅黄褐色，如图2所示。牛樟芝子实体幼嫩时橘黄色，成熟后橘红色至红褐色，圆球形或不规则形，如图3、4、5所示。
牛樟芝总多糖的提取
(1)样品的制备
牛樟芝菌株生长一个月后，用刀片把平板表面生长的菌丝或段木上的子实体刮下，放入干净的培养皿中，标记菌株号及培养基类型，放入烘箱60℃烘干。烘干后用研钵研磨成粉末状，称重，记录菌丝或子实体干重后装入离心管备用。
(2)菌丝多糖的提取
①取出装有牛樟芝粉末的离心管，加入5ml蒸馏水，震摇离心管，使牛樟芝粉末与蒸馏水混合均匀，制得牛樟芝母液，然后置于55℃的水浴锅内处理1h；
②取出离心管，待牛樟芝母液冷却，放入-20℃低温速冻冰箱处理1h；
③取出经过低温处理后的牛樟芝母液，置于55℃水浴锅内处理2h。
④将牛樟芝母液置于高速离心机6000rpm离心20min，取上清液转移至新的干净离心管中加无水乙醇至乙醇浓度为80％，4℃静置过夜；
⑤取出过夜后的牛樟芝母液，6000rpm/min离心20min，弃去上清液，将沉淀溶解转移至50ml容量瓶，加蒸馏水定容，得牛樟芝多糖粗提液，4℃保存备用。
(3)多糖含量的测定
①标准曲线的制作
精密称取0.1g无水葡萄糖至干燥烧杯，加蒸馏水溶解后，转移至1L容量瓶中，定容，摇匀；再用移液管取出10ml转移至100ml容量瓶中，加蒸馏水定容，摇匀，备用。精密称取5g苯酚于烧杯中，溶解后迅速转移至100ml容量瓶中，加蒸馏水定容，摇匀，4℃保存，备用(苯酚需要现配现用)。精密吸取0.01mg/ml葡萄糖标准液0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2mL分别置于具塞试管中，再分别补加蒸馏水至2.0mL，各加5％苯酚试液1.0mL摇匀，迅速滴加浓硫酸5.0mL立即振荡混匀，将所有试管置于100℃沸水中水浴20min取出置于室温冷却。以蒸馏水2mL为空白对照，于489nm处测定吸光度，绘制葡萄糖标准曲线。
②多糖含量的测定
取出制备好的牛樟芝多糖粗提液，精密吸取2ml于具塞试管中，按照标准曲线的测定方法对加入苯酚和硫酸，迅速振荡摇匀，置于100℃沸水中水浴20min，在紫外分光光度计489nm波长下测定吸光度，根据所得标准曲线推导出计算公式，对牛樟芝多糖含量进行计算，记录数据。
牛樟芝菌丝体和子实体总三萜含量检测
(1)试剂与仪器
齐墩果酸(sigma，纯度≥97％)。冰醋酸、香草醛、高氯酸等均为分析纯。
UV-2100紫外可见分光光度计(UNICO)、恒温水浴锅、电热烘箱等。
(2)实验方法
①菌粉的制备
取培养的菌丝体或子实体，喷雾干燥得红褐色粉末。
②比色条件的选择
A、最大吸收波长的确定：准确称取干燥恒重的齐墩果酸标准品10.0mg于50mL的量瓶中，加入甲醇溶解，稀释至刻度，摇匀，即为浓度0.2mg/mL的标准品溶液。取齐墩果酸标准品溶液0.4mL于10mL具塞磨口试管，水浴蒸干，加0.2mL新鲜配制的5％香草醛—冰醋酸溶液和0.8mL高氯酸，60℃反应20min，冰水冷却，加10mL冰醋酸，摇匀，在200～700nm处进行扫描，确定最大吸收波长。
B、香草醛用量的选择：取齐墩果酸标准品溶液0.4mL于10mL具塞磨口试管，水浴蒸干，加不同体积新鲜配制的5％香草醛—冰醋酸溶液和1mL高氯酸，60℃反应20min，冰水冷却，加5mL冰醋酸，摇匀，在550nm波长下测定吸光度。
C、高氯酸用量的选择:取齐墩果酸标准品溶液0.4mL于10mL具塞磨口试管，水浴蒸干，加0.3mL新鲜配制的5％香草醛—冰醋酸溶液和不同体积的高氯酸，60℃反应20min，冰水冷却，加10mL冰醋酸，摇匀，在550nm波长下测定吸光度。
D、显色温度的选择：取齐墩果酸标准品溶液0.4mL于10mL具塞磨口试管，水浴蒸干，加0.3mL新鲜配制的5％香草醛—冰醋酸溶液和1mL的高氯酸，不同温度下反应20min，冰水冷却，加10mL冰醋酸，摇匀，在550nm波长下测定吸光度。
E、显色时间的选择：取齐墩果酸标准品溶液0.4mL于10mL具塞磨口试管，水浴蒸干，加0.3mL新鲜配制的5％香草醛—冰醋酸溶液和1mL的高氯酸，60℃反应不同时间，冰水冷却，加10mL冰醋酸，摇匀，在550nm波长下测定吸光度。
(3)标准曲线的测定
精确吸取齐墩果酸标准品甲醇溶液0.00、0.10、0.20、0.30、0.40、0.50、0.60、0.70mL，分别加入10mL的具塞试管中，水浴挥尽溶剂，按前述方法显色，于550nm处测定吸光度，并以齐墩果酸质量(μg)为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制成标准曲线。
(4)测定方法的评价
①测定方法的稳定性
按前述方法显色，在550nm波长下测定经过不同时间的吸光度。
②测定方法的精密度
按前述方法取样、处理、显色和测定吸光度，连续测定5次。
③加样回收率
将样品准确测定后，加入已知量齐墩果酸进行测定，然后用差减法求出齐墩果酸的回收率。
(5)菌粉中总三萜的提取和含量的分析
取5.0g菌粉，加50％乙醇500mL室温浸提48h，过滤，减压浓缩至没有乙醇味。剩余水相用氯仿萃取3次。合并氯仿相，用氯仿定容至50mL。取样品溶液40μL于10mL具塞磨口试管，水浴蒸干，按前述方法显色并测定吸光度，计算总三萜的含量。
以上结合附图对本发明的实施方式作了详细说明，但本发明不限于所描述的实施方式。对于本领域的技术人员而言，在不脱离本发明原理和精神的情况下，对这些实施方式进行多种变化、修改、替换和变型，仍落入本发明的保护范围内。

Claims (10)

1.一种牛樟芝菌，分类命名为牛樟芝(Taiwanofungus camphoratus)YZZ-09-XZ-01，于2020年08月07日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏编号为CGMCC No.20234，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
2.权利要求1所述的牛樟芝(Taiwanofungus camphoratus)YZZ-09-XZ-01在栽培牛樟芝子实体上的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述牛樟芝子实体的栽培方法包括以下步骤：
(1)菌种培养：将牛樟芝冲洗干净，取内部小块菌肉接种于培养基中培养，得到母种；
(2)菌种扩大培养：将所述母种切碎，接入液体培养基中，使牛樟芝菌丝在所述液体培养基中长满；
(3)木材选择：选用樟属树种；所述樟属树种选自牛樟、香樟或云南樟中的一种；
(4)接种；将所述牛樟芝(Taiwanofungus camphoratus)YZZ-09-XZ-01接种于所述樟属树种上；
(5)子实体培养：在温度26℃～28℃、湿度80％～90％的条件下培养3～5个月，即得。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述步骤(1)中冲洗采用以下方式来进行：无菌水清洗3次，然后放入75％酒精中浸泡1分钟，再用无菌水清洗3次。
5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述步骤(1)中培养基的配方为：马铃薯200-300g/L、麦芽糖15-20g/L、硝酸钠2-4g/L、磷酸二氢钾0.1-5g/L、硫酸镁0.1-5g/L、酵母粉1-4g/L、维生素B15-10mg/L、琼脂15-20g/L，pH值5.5-6.5。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：在所述培养基中培养的条件为在26℃的温度下来进行。
7.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述步骤(2)中液体培养基的配方为：大米10-60g/L、麦芽糖10-30g/L、硝酸钠5-20g/L、磷酸二氢钾0.5-5g/L、硫酸镁0.5-5g/L、酵母粉1-10g/L、维生素B110-20mg/L，pH值5.5-6.5。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于：在所述液体培养基中培养的条件为在26℃恒温条件下震荡培养10～20天，转速120～160r/min。
9.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述步骤(4)中接种采用打孔接种：选择牛樟、香樟或云南樟树种的段木，在段木上打孔或砍出伤口，在水中充分浸泡透，捞出晾至不滴水后装入聚丙烯袋中，盖上密封盖，进行高压灭菌，待冷却后，在超净工作台上打开密封盖，向孔内或伤口处接种所述牛樟芝(Taiwanofungus camphoratus)YZZ-09-XZ-01，完成后盖上密封盖；
或，采用涂抹接种：将牛樟、香樟或云南樟树种的段木剥去树皮，在水中充分浸泡透，捞出晾至不滴水后装入布袋中，进行高压灭菌，待冷却后，在超净工作台上，将所述牛樟芝(Taiwanofungus camphoratus)YZZ-09-XZ-01涂抹在段木表面，完成后用保鲜膜包裹，放入灭过菌的玻璃缸中培养；
或，采用注射接种：将牛樟、香樟或云南樟树种的段木放入水中充分浸泡透，捞出晾至不滴水后装入布袋中，进行高压灭菌，待冷却后，在超净工作台上，将所述牛樟芝(Taiwanofungus camphoratus)YZZ-09-XZ-01注射进段木内部，然后用石蜡封口，完成后放入灭过菌的玻璃缸中培养。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于：所述段木的直径为10～20cm，长度为10～25cm；在段木上打孔或砍出伤口的深度为露出木质部0.4～0.6cm。
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