CN112858697B - ALG-2-interacting protein X在制备分子标志物中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了ALG‑2‑interacting protein X在制备分子标志物中的应用，所述的分子标志物用于检测、诊断或预测阿尔茨海默症的进展。上述分子标志物还可用于鉴别诊断阿尔茨海默症和血管性痴呆两种临床症状相似的疾病。本发明通过大量临床样本的验证，证明了ALG‑2‑interacting protein X在AD患者低表达，作为AD分子标记物，具有较高的诊断价值，其血清含量低于199.5pg/ml时，可辅助AD诊断，亦可作为区分阿尔茨海默症和血管性痴呆的辅助指标。
Description
技术领域
本发明属于生物医药领域，具体涉及ALG-2-interacting protein X在制备分子标志物中的应用。
背景技术
阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)是一种慢性进行性神经系统变性疾病，是仅次于心脑血管疾病和恶性肿瘤之后威胁老年人群健康的第三大杀手。AD的患病率随着年龄的增长而升高，由于人口结构老龄化及平均寿命的增加，AD患病率在全球范围内日益增高。毫无疑问，AD已成为当今和未来人类所面临的最大的全球公共健康和社会保健挑战之一。
AD发病有较长的临床前期，可为治疗提供一个时间窗，一般认为治疗AD的主要药物(多奈哌齐、石杉碱甲、美金刚等)在AD早期应用效果最佳，能有效遏制或延缓其病程进展。从某种角度说，疾病疗效的好坏取决于能否早期准确诊断。因此，迫切需要找到能够辅助诊断早期AD的方法。近年来发展较快的生物标志物研究为解决上述问题提供了有力手段。探索AD生物标志物的研究已成为热点，但至今尚未发现适合于常规筛查的具有较高诊断价值的AD生物标记物。
发明内容
本发明针对上述现有技术存在的不足，提供ALG-2-interacting protein X在制备分子标志物中的应用。经研究发现，ALG-2-interacting protein X在AD患者的脑组织和血清中显著低表达，其作为AD诊断生物标记物具有较高的灵敏度、特异性和准确度，且能有效区分阿尔茨海默症和血管性痴呆，ALG-2-interacting protein X作为AD生物标记物，具有良好的实际应用价值。
具体技术方案如下：
本发明的目的之一是提供ALG-2-interacting protein X(程序性细胞死亡相互作用蛋白)在制备分子标志物中的应用，所述的分子标志物用于检测、诊断或预测阿尔茨海默症的进展。
本发明的目的之二是提供ALG-2-interacting protein X在制备分子标志物中的另一应用，所述的分子标志物用于鉴别诊断阿尔茨海默症和血管性痴呆两种临床症状相似的疾病。
ALG-2-interacting protein X在AD患者的脑组织和血清中显著低表达，其作为AD诊断生物标记物具有较高的灵敏度、特异性和准确度。
本发明与临床合作，获得404份AD患者、404份同龄志愿者以及52份血管性痴呆患者的血清样本，采用ELISA方法检测样品中的ALG-2-interacting protein X浓度，并通过Logistic回归分析(SPSS14.0)，评价ALG-2-interacting protein X血清水平与认知损伤程度(MMSE评分)之间的相关性，判断ALG-2-interacting protein X的表达是否与AD疾病进程密切相关。同时，进行ROC曲线分析，判断ALG-2-interacting protein X作为AD生物标记物的诊断价值。ROC曲线目前已成为广泛应用于临床诊疗和人群筛检研究中，其能将某种检测的灵敏度及特异性联系起来，是一种全面的、科学的评价生物标记物诊断效能的方法。ROC曲线由Medcalc软件完成，可得出灵敏度、特异性和准确度，同时可得出生物标记物的最佳Cut-off值。
此外，采用同样的方法检测ALG-2-interacting protein X在AD患者和血管性痴呆患者血样中的差异表达，判断其是否能够区分两种临床症状相似的疾病。
本发明的目的之三是提供一种用于检测、诊断或预测阿尔茨海默症的进展的组合物，其包含基于免疫检测方法检测样本中ALG-2-interacting protein X蛋白的物质。
进一步，所述的免疫检测方法为酶联免疫吸附测定(ELISA)、胶体金检测、蛋白质免疫印迹(Western blot)、蛋白质芯片检测中的一种或数种。
进一步，所述的样本为人类或哺乳动物的血清样本或脑组织样本。
本发明的目的之四是提供一种用于检测、诊断或预测阿尔茨海默症的进展的试剂盒，包括上述用于检测、诊断或预测阿尔茨海默症的进展的组合物。
本发明的目的之五是提供一种用于鉴别诊断阿尔茨海默症和血管性痴呆的组合物，其包含基于免疫检测方法检测样本中ALG-2-interacting protein X蛋白的物质。
进一步，所述的免疫检测方法为酶联免疫吸附测定、胶体金检测、蛋白质免疫印迹、蛋白质芯片检测中的一种或数种。
进一步，所述的样本为人类或哺乳动物的血清样本或脑组织样本。
本发明的目的之六是提供一种用于鉴别诊断阿尔茨海默症和血管性痴呆的试剂盒，其包含上述用于鉴别诊断阿尔茨海默症和血管性痴呆的组合物。
在基于本发明关于ALG-2-interacting protein X血清水平与认知损伤程度(MMSE评分)之间的相关性的研究结果的基础上，本发明的目的之七是提供一种用于预防或治疗阿尔茨海默症的药物，其包含升高ALG-2-interacting protein X表达和/或提高ALG-2-interacting protein X活性的物质。
进一步，所述的药物包含基于RNA的microRNA功能性获得技术和/或慢病毒shRNA过表达技术升高ALG-2-interacting protein X表达和/或提高ALG-2-interactingprotein X活性的物质。
进一步，所述的药物的剂型为固体口服制剂、液体口服制剂、注射剂、可注射埋植剂、乳剂、脂质体、微囊剂、微球剂或纳米粒。
本发明的有益效果如下：
本发明为阿尔茨海默症的诊断、病情评估和预后判断提供有效的分子标记物。本发明通过大量临床样本的验证，采用Western blot以及ELISA等方法证明了ALG-2-interacting protein X在AD患者低表达，作为AD分子标记物，具有较高的诊断价值，其血清含量低于199.5pg/ml时，可辅助AD诊断，亦可作为区分阿尔茨海默症和血管性痴呆的辅助指标。
附图说明
图1为实施例1中ALG-2-interacting protein X在AD患者和正常对照血清中的表达情况；
图2为实施例1中ALG-2-interacting protein X与AD患者认知损伤程度(MMSE评分)之间的相关性分析图；
图3为实施例1中ALG-2-interacting protein X的ROC曲线分析图；
图4为实施例2中ALG-2-interacting protein X区分阿尔茨海默症(AD)和血管性痴呆(VaD)的实验证明(图4A为Western blot方法检测ALG-2-interacting protein X在AD、VaD患者和正常对照血清中的表达情况，图4B为ELISA方法检测ALG-2-interactingprotein X在AD、VaD患者和正常对照血清中的表达情况，图4C为ALG-2-interactingprotein X在AD和VaD患者中表达水平的ROC曲线图)。
具体实施方式
以下结合实例对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。
需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本申请的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也意图包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作、器件、组件和/或它们的组合。应理解，本发明的保护范围不局限于下述特定的具体实施方案；还应当理解，本发明实施例中使用的术语是为了描述特定的具体实施方案，而不是为了限制本发明的保护范围。下列具体实施方式中如果未注明具体条件的实验方法，通常按照本领域技术内的生物化学和分子生物学的常规方法和条件，这种技术和条件在文献中有完整解释。
本发明的一个具体实施方式中，提供ALG-2-interacting protein X在制备分子标志物中的应用，所述标志物用于检测、诊断或预测AD的进展。
本发明的又一具体实施方式中，提供ALG-2-interacting protein X在制备分子标志物中的另一应用，所述的分子标志物用于鉴别诊断阿尔茨海默症和血管性痴呆。
本发明的又一具体实施方式中，提供一种用于检测、诊断或预测AD的进展的组合物，其包含基于免疫检测方法检测样本中ALG-2-interacting protein X蛋白的物质，所述的免疫检测方法为酶联免疫吸附测定。
本发明的又一具体实施方式中，提供一种用于检测、诊断或预测AD的进展的组合物，其包含基于免疫检测方法检测样本中ALG-2-interacting protein X蛋白的物质，所述的免疫检测方法为蛋白质免疫印迹。
本发明的又一具体实施方式中，提供一种用于检测、诊断或预测AD的进展的组合物，其包含基于免疫检测方法检测样本中ALG-2-interacting protein X蛋白的物质，所述的免疫检测方法为胶体金检测。
本发明的又一具体实施方式中，提供一种用于检测、诊断或预测AD的进展的组合物，其包含基于免疫检测方法检测样本中ALG-2-interacting protein X蛋白的物质，所述的免疫检测方法为蛋白质芯片检测。
本发明的又一具体实施方式中，提供一种试剂盒，所述的试剂盒包括用于检测、诊断或预测阿尔茨海默症的进展的组合物。
实施例1
1、确认ALG-2-interacting protein X在AD患者血清中低表达。
本发明与临床合作，获得404份AD患者、404份同龄志愿者(对照组)以及52份血管性痴呆(Vascular dementia,VaD)患者的血清样本，各样本具体信息如表1所示。
采用ELISA方法检测样品中的ALG-2-interacting protein X浓度，结果如表2及图1所示。ELISA结果表明，与正常对照相比，ALG-2-interacting protein X在AD患者血清中表达显著降低，具有统计学意义。
表1样本信息表
表2 AD患者与对照组的血清样本中的ALG-2-interacting protein X表达水平
2、评价ALG-2-interacting protein X与AD疾病进程的相关性。
采用SPSS14.0软件进行Logistic回归分析，评价ALG-2-interacting protein X血清水平与认知损伤程度(MMSE评分)之间的相关性，判断ALG-2-interacting protein X的表达是否与AD疾病进程密切相关。具体结果如图2所示。结果显示，ALG-2-interactingprotein X的蛋白表达水平与MMSE评分(AD疾病严重程度的重要指标)之间呈现明显的正相关(r＝0.80；p<0.001)，说明ALG-2-interacting protein X的表达与AD的进展密切相关。
3、评价ALG-2-interacting protein X作为AD生物标记物的诊断价值。
通过ROC曲线分析，判断ALG-2-interacting protein X作为生物标记物的灵敏度、特异性和准确度，确定其最佳诊断浓度(Cut-off值)，由Medcalc软件完成。具体结果如图3所示。结果显示，ALG-2-interacting protein X的曲线下面积AUC为0.80(AUC越接近于1，则认为诊断价值越好，一般AUC>0.5则认为其具有诊断价值)，最佳诊断Cut-off值为199.5pg/mL，其诊断灵敏度为74％，特异度为76％，准确率为71％。
实施例2
ALG-2-interacting protein X区分阿尔茨海默症(AD)和血管性痴呆(VaD)。
采用Western blot(图4A)和ELISA(图4B)方法检测正常志愿者、AD患者和VaD患者血清中ALG-2-interacting protein X的表达情况，并进行ROC曲线分析，具体结果如图4所示。
Western blot和ELISA结果显示，与正常对照比较，ALG-2-interacting proteinX在AD患者血清中表达显著降低；与VaD组比较，ALG-2-interacting protein X的表达在AD患者血清中也显著降低；而ALG-2-interacting protein X的表达在AD和VaD之间无统计学差异。ALG-2-interacting protein X在AD和VaD患者中表达水平的ROC曲线分析表明(图4C)，曲线下面积AUC为0.777，证明ALG-2-interacting protein X能有效区分AD和VaD。
具体实施方式中的ELISA步骤如下：
(1)将各种试剂移至室温平衡至少30min。
(2)加样：分别设定标准品孔、待测样品孔。每孔分别加入等体积的标准品或待测样品，轻轻晃动混匀。覆上板贴，37℃温育2h。
(3)弃去液体，甩干，不用洗涤。
(4)每孔加入生物素标记抗体工作液100μL，覆上新的板贴，37℃温育1h。
(5)弃去孔内液体，甩干，洗板3次。每次浸泡2min，200μL/孔，甩干。
(6)每孔加辣根过氧化物酶标记亲和素工作液100μL，覆上新的板贴，37℃温育1h。
(7)弃去孔内液体，甩干，洗板5次。每次浸泡2min，200μL/孔，甩干。
(8)依序每孔加底物溶液90μL，37℃避光显色15～30min。
(9)依序每孔加终止溶液50μL，终止反应。
(10)在反应终止后5min内用酶标仪在450nm波长依序测量各孔的光密度值。
具体实施方式中的Western blot实验步骤如下：
1、蛋白提取
取空腹静脉血5mL/人，置于加入抗凝剂的取血管中，4℃静置2h。3000g，4℃离心10min，取上清即为血清总蛋白。200μL分装，液氮中保存备用。
2、蛋白定量
采用Bradford法进行蛋白定量。取蛋白样品2μL，稀释40倍(至78μl)。在96孔板上，每孔加入稀释后的蛋白样品20μL，每个样品设两个复孔。蛋白标准设置6个浓度：0.563，0.2815，0.14，0.07，0.035,0μg/μL，也按20μL/孔加样。各孔再加入考马斯亮兰工作液180μL(1:4稀释)，混匀，室温静止10min后于波长595nm处测定OD值。根据标准曲线计算蛋白浓度。
3、SDS-PAGE电泳
(1)配制10％分离胶10mL，将分离胶注入垂直放置的干净玻璃板间隙中，其顶层加入约1cm高度的无水乙醇覆盖胶面。室温下静置45min，可看见凝胶与无水乙醇之间有一水平的清晰界面，倾斜装置，如胶面无变化，可认为聚合基本完成。倒掉无水乙醇，用滤纸尽可能吸干凝胶顶部液体。
(2)按上表配制5％浓缩胶5mL，将其注入玻璃板间隙后，立即插入洁净的Teflon梳子，垂直放置于室温，30min后聚合完成。拔出梳子，用双蒸水反复冲洗，并用针拨直梳齿。
(3)将样品与5×Loading Buffer按4：1比例混匀，100℃加热5min。
(4)将凝胶放入垂直电泳槽。上下槽各加入适量的1×SDS凝胶电泳缓冲液，梳孔中加入蛋白样品(40μg/lane)和蛋白质分子量标准，在所有不用的样品孔中加入等体积的凝胶上样缓冲液。
(5)将电泳装置与电源连接，样品在浓缩胶中泳动90min，电压为80V，当溴酚蓝进入分离胶后，将电压增大至160V，继续电泳直到溴酚蓝接近分离胶底部，切断电源。
(6)卸下并撬开玻璃板。
4、转膜
(1)剪6张与凝胶块大小相同的滤纸和一张PVDF膜(0.22μm)，将滤纸及海绵垫用转移缓冲液浸泡30min。
(2)打开转膜夹，将海绵垫、3张滤纸和凝胶按顺序对齐铺于其上，将PVDF膜于甲醇溶液中浸润10s左右，立即盖膜，盖膜后勿再移动。在膜上盖3张滤纸，最后盖上另一海绵垫。用玻璃棒逐层赶走气泡，合上夹板，放入转膜槽中(槽中转移缓冲液加至超过最上面的金属线，PVDF膜侧为阳极侧)。
(3)接通电源，按2mA/cm2，恒流电转2.5h。
5、抗原抗体反应
(1)封闭：电转移完毕后，将PVDF膜放入含5％脱脂奶粉的TBST中，室温振摇封闭2h以上。
(2)孵育一抗：将PVDF膜放于一洁净孵育盒中，向膜上均匀滴加一抗，4℃静置过夜。
(3)取出PVDF膜，用TBST室温洗膜5min×5次；
(4)孵育二抗：将PVDF膜转移至另一湿盒中，加入辣根过氧化物酶标记的二抗，室温振摇孵育2h。
(5)取出PVDF膜，用TBST室温洗膜5min×5次。
6、显色反应
(1)将PVDF膜置于显色托盘上，均匀滴加Millipore化学发光液于PVDF膜上。
(2)LAS-3000凝胶成像仪检测化学发光并照相。
(3)用Bio-rad quantity one密度分析软件对图像中蛋白条带进行灰度分析。
(4)目的蛋白的定量：目的蛋白相对含量＝目的条带灰度值/β-actin条带灰度值。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (1)
1.ALG-2-interacting protein X在制备用于鉴别阿尔茨海默症和血管性痴呆的试剂盒中的应用。
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Citations (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1543571A (zh) * | 2001-04-25 | 2004-11-03 | SYN.Xҽҩ����˾ | 阿尔茨海默痴呆的鉴别治疗方法及其设备 |
| WO2007042897A1 (en) * | 2005-10-10 | 2007-04-19 | Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) | Method for the differential diagnosis and the monitoring of alzheimer-type dementia |
| WO2007098020A2 (en) * | 2006-02-16 | 2007-08-30 | Reliant Pharmaceuticals, Inc. | Methods of screening patients for omega-3 fatty acid therapy |
| CN101246164A (zh) * | 2008-01-29 | 2008-08-20 | 广州益善生物技术有限公司 | 阿尔茨海默病早期诊断液相芯片及其制备方法 |
| CN102188438A (zh) * | 2010-03-05 | 2011-09-21 | 昆明制药集团股份有限公司 | 乙酰天麻素在制备防治血管性痴呆和阿尔茨海默症药物中的应用 |
| KR20110136503A (ko) * | 2010-06-15 | 2011-12-21 | 울산대학교 산학협력단 | 알츠하이머 전구단백질 분비 펩타이드의 축적물을 포함하는 뇌 노화 및 치매 감별 진단 마커 |
| CN103191407A (zh) * | 2013-04-15 | 2013-07-10 | 中国人民解放军第二军医大学 | 一种五肽及其代谢物用于制备抗痴呆产品的新用途 |
| CN104487847A (zh) * | 2012-07-06 | 2015-04-01 | 兰道克斯实验有限公司 | 与阿尔茨海默氏病和轻度认知障碍相关的原肌球蛋白同种型 |
| CN105164536A (zh) * | 2013-03-05 | 2015-12-16 | 兰道克斯有限公司 | 阿尔兹海默症诊断的组合物和方法 |
| CN105353135A (zh) * | 2015-11-23 | 2016-02-24 | 中国人民解放军第三军医大学第一附属医院 | 阿尔茨海默病标志物的用途 |
| CN106062563A (zh) * | 2014-01-28 | 2016-10-26 | 普雷德姆泰克有限公司 | 用于阿尔兹海默症的早期诊断的生物标志物及方法 |
| CN107238711A (zh) * | 2017-05-18 | 2017-10-10 | 无锡市精神卫生中心 | 一种检测阿尔茨海默病外周血蛋白标志物的诊断试剂盒及其检测方法 |
| KR20200025195A (ko) * | 2018-08-29 | 2020-03-10 | 조선대학교산학협력단 | 알츠하이머성 치매 진단용 바이오마커 조성물 및 이의 용도 |
| WO2020227084A2 (en) * | 2019-05-03 | 2020-11-12 | Anand Rene | Reagents and methods for alzheimer's disease and comorbidities thereof |
| CN112567248A (zh) * | 2018-06-06 | 2021-03-26 | Alzohis公司 | 在受试者中进行神经退行性疾病的鉴别诊断的方法 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20200150133A1 (en) * | 2017-05-31 | 2020-05-14 | Public University Corporation Nagoya City University | Biomarker for alzheimer's disease |
-
2021
- 2021-03-29 CN CN202110337070.6A patent/CN112858697B/zh active Active
Patent Citations (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1543571A (zh) * | 2001-04-25 | 2004-11-03 | SYN.Xҽҩ����˾ | 阿尔茨海默痴呆的鉴别治疗方法及其设备 |
| WO2007042897A1 (en) * | 2005-10-10 | 2007-04-19 | Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) | Method for the differential diagnosis and the monitoring of alzheimer-type dementia |
| WO2007098020A2 (en) * | 2006-02-16 | 2007-08-30 | Reliant Pharmaceuticals, Inc. | Methods of screening patients for omega-3 fatty acid therapy |
| CN101246164A (zh) * | 2008-01-29 | 2008-08-20 | 广州益善生物技术有限公司 | 阿尔茨海默病早期诊断液相芯片及其制备方法 |
| CN102188438A (zh) * | 2010-03-05 | 2011-09-21 | 昆明制药集团股份有限公司 | 乙酰天麻素在制备防治血管性痴呆和阿尔茨海默症药物中的应用 |
| KR20110136503A (ko) * | 2010-06-15 | 2011-12-21 | 울산대학교 산학협력단 | 알츠하이머 전구단백질 분비 펩타이드의 축적물을 포함하는 뇌 노화 및 치매 감별 진단 마커 |
| CN104487847A (zh) * | 2012-07-06 | 2015-04-01 | 兰道克斯实验有限公司 | 与阿尔茨海默氏病和轻度认知障碍相关的原肌球蛋白同种型 |
| CN105164536A (zh) * | 2013-03-05 | 2015-12-16 | 兰道克斯有限公司 | 阿尔兹海默症诊断的组合物和方法 |
| CN103191407A (zh) * | 2013-04-15 | 2013-07-10 | 中国人民解放军第二军医大学 | 一种五肽及其代谢物用于制备抗痴呆产品的新用途 |
| CN106062563A (zh) * | 2014-01-28 | 2016-10-26 | 普雷德姆泰克有限公司 | 用于阿尔兹海默症的早期诊断的生物标志物及方法 |
| CN105353135A (zh) * | 2015-11-23 | 2016-02-24 | 中国人民解放军第三军医大学第一附属医院 | 阿尔茨海默病标志物的用途 |
| CN107238711A (zh) * | 2017-05-18 | 2017-10-10 | 无锡市精神卫生中心 | 一种检测阿尔茨海默病外周血蛋白标志物的诊断试剂盒及其检测方法 |
| CN112567248A (zh) * | 2018-06-06 | 2021-03-26 | Alzohis公司 | 在受试者中进行神经退行性疾病的鉴别诊断的方法 |
| KR20200025195A (ko) * | 2018-08-29 | 2020-03-10 | 조선대학교산학협력단 | 알츠하이머성 치매 진단용 바이오마커 조성물 및 이의 용도 |
| WO2020227084A2 (en) * | 2019-05-03 | 2020-11-12 | Anand Rene | Reagents and methods for alzheimer's disease and comorbidities thereof |
Non-Patent Citations (14)
| Title |
|---|
| ALG-2 interacting protein-X (Alix) is required for activity-dependent bulk endocytosis at brain synapses;Marine H. Laporte et al.,;bioRXiv;全文 * |
| Chunyan, Wang et al.,.Identification of pivotal markers in vascular dementia based on proteomics data..Dementia and geriatric cognitive disorders.2015,第39卷全文. * |
| Daniela Perani ; Chiara Cerami ; Silvia Paola Caminiti ; Roberto Santangelo ; Elisabetta Coppi ; Laura Ferrari ; Patrizia Pinto ; Gabriella Passerini ; Andrea Falini ; Sandro Iannaccone ; Stefano Francesco Cappa ; Giancarlo Comi ; Luigi Gianolli ; Giuseppe Magnani.Cross-validation of biomarkers for the early differential diagnosis and prognosis of dementia in a clinical setting.European Journal of Nuclear Medicine and Molecular Imaging.2016,(第3期),全文. * |
| Daniela Perani et al.,.Cross-validation of biomarkers for the early differential diagnosis and prognosis of dementia in a clinical setting.European Journal of Nuclear Medicine and Molecular Imaging.2016,(第3期),全文. * |
| HEDDA AGÜERO-TORRES ; BENGT WINBLAD.Alzheimer's Disease and Vascular Dementia: Some Points of Confluence.Dementia and geriatric cognitive disorders.2000,第903卷(第1期),全文. * |
| Morra, L. F. (AUTHOR) ; Donovick, P. J. (AUTHOR).Clinical presentation and differential diagnosis of dementia with Lewy bodies: a review..International Journal of Geriatric Psychiatry.2013,第28卷(第10期),全文. * |
| Morra, L. F. et al.,.Clinical presentation and differential diagnosis of dementia with Lewy bodies: a review..International Journal of Geriatric Psychiatry.2013,第28卷(第10期),全文. * |
| 伍明超 ; 万争艳 ; .血清中NFL、T-tau、sNRG-1联合对阿尔茨海默症的诊断价值.国际检验医学杂志.2020,(第06期),全文. * |
| 伍明超 等，.血清中NFL、T-tau、sNRG-1联合对阿尔茨海默症的诊断价值.国际检验医学杂志.2020,(第06期),全文. * |
| 王海红 等，.中重度阿尔茨海默病与血管性痴呆患者脑脊液tau蛋白的预研究.上海精神医学.2016,第28卷(第005期),全文. * |
| 秦琰，.阿尔茨海默病与血管性痴呆的鉴别诊断.世界复合医学.2020,(第08期),全文. * |
| 秦绪珍 等，.脑脊液生物标志物在阿尔茨海默病与非痴呆神经疾病间的浓度比较.标记免疫分析与临床.2013,(第06期),全文. * |
| 薛海波 ; 肖世富 ; 孙云 ; 张明园 ; .脑脊液生物学标志物诊断阿尔茨海默病与血管性痴呆.中国现代神经疾病杂志.2007,(第03期),全文. * |
| 薛海波 等，.脑脊液生物学标志物诊断阿尔茨海默病与血管性痴呆.中国现代神经疾病杂志.2007,(第03期),全文. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
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