CN112852830A - 一种提高植物中花青素含量的基因BnaPAP2.c6.a及其应用 - Google Patents

一种提高植物中花青素含量的基因BnaPAP2.c6.a及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明属于植物基因工程领域，特别是涉及一种提高植物中花青素含量的基因BnaPAP2.c6.a及其应用。本发明提供了一种提高植物中花青素含量的基因BnaPAP2.c6.a，所述基因BnaPAP2.c6.a的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。上调表达本发明提供的基因BnaPAP2.c6.a能够有效提高植物中花青素的合成。

Description

一种提高植物中花青素含量的基因BnaPAP2.c6.a及其应用
技术领域
本发明属于植物基因工程领域，特别是涉及一种提高植物中花青素含量的基因BnaPAP2.c6.a及其应用。
背景技术
花青素是自然界一类广泛存在于植物中的水溶性天然色素，属于黄酮类的次生代谢物。花青素具有较强的抗氧化特性，其在植物抵抗生物和非生物逆境以及人类延缓衰老、癌症治疗等健康领域中具有重要作用。
甘蓝型油菜(Brassica napus L.，2n＝38)中富含花青素的种质资源缺乏，有关花青素合成基因的研究较为匮乏。
发明内容
为了解决上述问题，本发明提供了一种提高植物中花青素含量的基因BnaPAP2.c6.a及其应用。上调表达本发明提供的基因BnaPAP2.c6.a能够有效提高甘蓝型油菜中花青素的合成，探究了甘蓝型油菜中花青素合成的关系。
为了实现上述目的，本发明提供了如下技术方案：
本发明提供了一种提高植物中花青素含量的基因BnaPAP2.c6.a，所述基因BnaPAP2.c6.a的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。
本发明还提供了上述基因BnaPAP2.c6.a的扩增引物，所述扩增引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示。
本发明提供了上述基因BnaPAP2.c6.a的表达在提高植物中花青素含量中的应用。
本发明提供了上述基因BnaPAP2.c6.a的表达在提高甘蓝型油菜中花青素含量中的应用。
本发明提供了上述基因BnaPAP2.c6.a的表达在提高甘蓝型油菜的茎秆中花青素含量中的应用。
本发明提供了上述的基因BnaPAP2.c6.a的表达在提高甘蓝型油菜的角果皮中花青素含量中的应用。
本发明提供了上述基因BnaPAP2.c6.a在植物育种中的应用。
本发明提供了一种提高植物中花青素含量的基因BnaPAP2.c6.a，所述基因BnaPAP2.c6.a的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。由实施例数据可知，上调表达本发明提供的基因BnaPAP2.c6.a能够有效提高甘蓝型油菜的的茎秆和角果皮中花青素的合成。
附图说明
图1为PR、ZS11及杂种F1表型，其中，A为PR苗期表型；B为杂种F1苗期表型；C为ZS11苗期表型；D为PR开花期表型；E为杂种F1开花期表型；F为ZS11开花期表型；图中红色标尺为1cm；
图2为BSA分析SNP分布图；
图3为紫秆性状精细定位；其中，RN为重组单株数量；Phen为表型；G为绿色；P为紫色；
图4为PR重测序数据部分同源交换分析；
图5为ZS11和PR茎秆9个AtPAP2同源基因表达量和qRT-PCR分析；其中，A为ZS11和PR茎秆9个AtPAP2同源基因表达量分析；B为BnaPAP2.C6.a特异引物qRT-PCR分析；
图6为甘蓝型油菜AtPAP2同源基因不同拷贝在PR不同组织表达模式分析。
具体实施方式
本发明提供了一种提高植物中花青素含量的基因BnaPAP2.c6.a，所述基因BnaPAP2.c6.a的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。所述SEQ ID NO:1为：
TGATCCATTCCTTGAAGCCATCAGGATCCAAAACCAGTTCAGAGGACTCCCCGAAGGAACTGTAATAATGAAGATACAGACAAGCAGGCAGAACTGTCTATCAGAAGAGAGCAAGATTGTGTGGAACAATGGAAAGATTGTCCAGAATATGTTCCTTAAGCTCCAGAACGTTGAGTGTGGAGAGGTCGAGCTTCAACTTGAGTGGATCGATGTCTCAGGTCTTCTGAGTATAAATGAGCATGAGGATGTTGCTTACTAGATCTATTATCTTATTACATCAAGTTTGTTAGAAAATATACTAGTTATGAAGCTGGCGTGGGGGAGTTATGGGCTTTAAACCAAAACTCCCCCAATTGTTTTTTTATAAATTGAAAAGAAAAAACTCTTCTCTGGTTTTGTGTTCTTACTCTAACAAGAAAAACATAACACACTTTGTTGTAGAGAGAGGAAACAAGGAATGAGATGAAATCAAGTAGATAGCATAAGATGAGATGGAGAAACTGATTTTTTTCTCTCATTTTACACAACATCTTCTACTACATATTCATATAAGAAAATCAGAGTAATGAACTCTGTTTTCTCTACCCTTACACATGTTATAAAGCCCCATAAAGCTACCACTCTAGACACCACATTTTAGCAAAAGAAACAAGCAACTTCAAGAACTTGAACAATTCAAAATAAACAGTTAACTTCAACAACTTCCTTGACTTGTTGTACTTTGTTTTCTTTCATTATTCTCACTTGTTTTGTTGATACCATTGTGCAGGATTAACAGAGATGAGATTTCAGCATACTTGTTATGATAAATGTAAAAAAGCTACTGAATCAACGATATGGTTTTTATGTGTTTCTGACCTTTGTTTTTGTTTTCAACACTTTAATTGCATCTTATTGAAAGAGAGACTTGCTCGGGTCCTGTTTAGTAATGACAAATGGTGATCATCAAATGTGAAAAGATCAAGAATCGATATGCTTGCATCTAAGTTTGAAAATCCGCAGATGGATGAGAATTAATCATTTGAGGAACTCAGTGGAAAACTGAGTGCAACAGCAAATATGAAGCACAAACAATGGGAAAGACATACAAAGACAAAAAGCTTGGAAGAAACTTCTCAGATGTTTACCCTCAAAGTTAAATCCAAGAAGACAGCTATGGACACTGCACTAGACACTGACACAATGGATTTTGGTGAAGTCACGGGTCACTTACAAGCATATGAGATGAATGAGAAACTCAAGGAAGAACTGTCTAAAAAAATCTGAAACTAGAAAGCAGATTCACATGCTGAATAGTGGAACCAAGAATCTGGAGAAGATTCTCTCTGTTAGAAGGGTAGGCAAGTCCAACTTTGTGTCTCGGTTACAGTGGAAAACTACAGAAAAACAGAGTTTGTTCCGGCTAAGACTTGAGAGATTGCGTCTGATACTACAGGAAGTAGGATATCAACCAAGATCATCTATTGTGAAACTGAAACCAGTAAGAACTATAATGTAGGCTACTTCTGTGGTAAATACATGCACATACCAAGAGATACTTACAAATTTCAAAAAAGAATCACTCCAGAGTTGACTTTGCTTTCCAATCTTTACAGGTTTAACGTTAAATATGAAATTTGTAGTCAAACGATTATGATGGATTTCATCAAATCTTATTGTTTTAATATCAAATGAGGTTCAAGTTACATATTTCTGAACTCCCTAGCCAAAAGTACATACTCACAATGTGAGACACTTTAAATACGGAACAATTTGCAAAATAGTGATTTGTGTACTCATAATTATTGTAGCTGATTTTTGTCTACATACATTTGTTGACAGAAAAACAATACGCTACTTATCAAGTTGTGTACTCATACATCAACCCTCTGTCTCTCTGTCTCCCTGTCCCTGTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTCTATTCTGTTTTTAACTCTGGTGCATGAAGCTGTTCTCTCTTTTAATCATATAAACCACCTTTCCACCAATCATTAATCGTCCTTTCTGCTAACTTTGCTAAGAGGCATGTTTTTCCTTTAAAGTACTGAAAAATATGAAGAGACTAAGTGATATGCTATGCTATGACGAAAATGGACTAAGTGCTATGAACCTTTTCTGTATTTAGTTTGAATCAGTAGCAGAACATAAATAACTAAATTAGCAAATTAGACACGACAAAATGTGCTATGAACCTTTTTTGTTTCTGCATCGTACCCTGGAAGTTGTTAAAAAAAAAAGACACGACAAAAATGTGGATGTTAGACATGCACGTCACTTCTCTTTGCCCGTCACGTGTATAAATAAAGTCCTCGAAGGATTTGTCAAGCCACAATAGAAACCCTTTTCCTCAAGCCTGCCTTTACGTATAACTTTTTAAAATAAAATTTGGTTAGATACTTCTAAAATTATCGCTGGTCCATGGAGGGTATGTCCAAAGGGTTGAAAAAAGGTGCATGGACTGCTGAAGAAGATAATCTCTTGAGGCAATGCATTGATAAGTATGGAGAAGGGAAATGGCACCAAGTTCCTTTAAGAGCTGGTATGTCTTTTTTTTTTTGATAAAATAAGAGCTGGTATGCTACTTTTATTAATTTTCACACACACACACATATATATATATACATATAACTAATAAGTACGTATACTCTTTTTATTTTTCAGTACATTTATTTTCTTTCTCTCTGTCTACTATTAGGAAATTAATTAACACCGGGGTACACAATCATTGTTTTTTTTTTTTGTAACTGAGGCTTACAATCACAATCATTGTTTTTCTTTTCGTTTTAATGAAGGAATCATAGATTCAAATGTTTGTTTTTCATGAGAAAAAAAAAATATTTGCGTTCTTCATGTTTAAGTATAAAGCGAGAAGGCAATTCTCTTTATTGATTCGTAGTTTTTTTTTGAGAAATAGCTTTTTTTATTTGTTGAATTTTCTGCACGAACCAGTATGTTTGTGTGGAATATGTTGTTTATACTGGTGTACTTTGATTCTTCTTTTAATAATATTAAATGTCAATTGGTTTTGTAGGTCTAAATCGGTGCAGGAAGAGTTGTAGACTAAGATGGTTGAACTATTTGAAGCCAAGTATCAAGAGAGGAAAACTCAACTCTGATGAAGTTGATCTTCTTATTCGCCTTCATAAGCTTTTAGGAAACAGGTTTACATTCAAGACACAAATTCAACTTTATTTCGTATCCTCATTCGGTCTAATCTAATCATTTGATTTGTTTTTTTTTTTGATAAAAAGTACTTTTCATATGTAATGATCCATTACTAAGTCATATATATCCCTAATTTTTCAAATGCATGCTTAGGTGGTCTTTAATTGCTGGTAGATTACCCGGTCGGACCGCCAATGACGTCAAAAATTACTGGAACACCCATTTGAGTAAGAAACATGAACCAGGTTGTAAGACCCAGATGAAAAAGAGAAACATTCCTTGCTCTTATACCACACCAGCCCAAAAAATCGACGTTTTCAAACCTCGACCTCGATCCTTCACCGTTAACAACGGCTGCAGCCATATTAATGGCATGCCAGAAGCTGACATTGTTCCTCTATGCCTTGGACTCAACGACACTAATAATGTTTCTGAAAATATAATCACATGTAACAAAGATGATGATAAATTTGAGCTTGTTAGTAATTTAATGGATGGTCAGAATAGGTGGTGGGAAAGTTTGCTAGATGAGAGCCAAGATCCAGCTGCGCTCTTTCCAGAAGCTACAGCAACAAAAAAAGGCGCAACCTCCGCGTTTGACGTTGAGCAACTTTGGAGCCTGTTGGATGGAGAAACTGGAACTTGA。上调表达本发明提供的基因BnaPAP2.c6.a能够有效提高花青素的合成。
本发明还提供了上述基因BnaPAP2.c6.a的扩增引物，所述扩增引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示。本发明提供的扩增引物能够应用于提高花青素合成中。
本发明提供了上述基因BnaPAP2.c6.a的表达在提高植物中花青素含量中的应用。
本发明提供了上述基因BnaPAP2.c6.a的表达在提高甘蓝型油菜中花青素含量中的应用。
本发明提供了上述基因BnaPAP2.c6.a的表达在提高甘蓝型油菜的茎秆中花青素含量中的应用。
本发明提供了上述的基因BnaPAP2.c6.a的表达在提高甘蓝型油菜的角果皮中花青素含量中的应用。在本发明中，所述甘蓝型油菜的品种优选为PR(甘蓝型油菜，来自中国农业科学院油料作物研究所，型号为L1)。由实施例可知，BnaPAP2.C6.a参与了不同PR组织的花青素的转录调控，BnaPAP2.C6.a主要调控茎秆和角果皮中花青素的合成。
本发明提供了上述基因BnaPAP2.c6.a在植物育种中的应用。所述的BnaPAP2.C6.a基因表型相较于现有技术中的BnaPAP2.A7更稳定，更容易被观察，具有更高的育种价值。
为了进一步说明本发明，下面结合附图和实施例对本发明提供的一种提高植物中花青素含量的基因BnaPAP2.c6.a及其应用进行详细地描述，但不能将它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例
1、甘蓝型油菜PR纯化
申请人于2015年5月将PR种植于青海大学实验基地，于7月26日初花，选取PR初花期花序，用显微镜观察油菜小孢子的发育时期，选取单核靠边期的小花蕾，测定花蕾大小，便于后期花蕾挑选。利用小孢子培养技术，获得双单倍体PR幼苗，于2015年11月种植于华中农业大学试验基地。
2、紫秆性状的遗传分析
选取ZS11(中双11号)为绿色茎秆亲本，与纯化后的双单倍体PR分别做正反杂交。杂交F1代幼嫩叶片、叶柄、茎秆和角果均表现为紫色，这与亲本PR相同，但紫色浅于紫秆亲本。PR、ZS11及杂种F1表型如图1所示，其中，A为PR苗期表型，幼嫩叶片、叶柄和茎秆呈紫色；B为杂种F1苗期表型幼嫩叶片、叶柄和茎秆呈紫色，但比PR亲本浅；C为ZS11苗期表型幼嫩叶片、叶柄和茎秆呈绿色；D为PR开花期表型幼嫩叶片、叶柄和茎秆呈紫色；E为杂种F1开花期表型幼嫩叶片、叶柄和茎秆呈紫色，但比PR亲本浅；F为ZS11开花期表型幼嫩叶片、叶柄和茎秆呈绿色；图中红色标尺为1cm。F1单株自交获得F2分离群体，在F2分离群体中，共计调查了370株F2分离群体，其中紫秆单株275株，绿秆单株95株，分离比例符合3:1(χ2＝0.130)。F1单株与ZS11回交，获得BC1回交群体，在BC1回交群体中，共计调查了246株单株表型，其中紫秆127株，绿秆119株，分离比例符合1:1(χ2＝0.199)。综合以上结果可知，紫秆性状受单个显性基因控制，且不存在细胞质效应，将该目标位点命名为BnaPS.C6。
3、BnaPS.C6的初步定位
从F2分离群体中分别选取了极端紫秆和极端绿秆单株各30株，分别将30株极端紫秆和极端绿秆的DNA混合后测序，结合亲本PR和ZS11重测序数据，进行了集团分离分析法(BSA)分析，结果见图2。
由图2可知，以甘蓝型油菜Darmor-bzh为参考基因组，紫秆亲本和紫秆混池在C6染色体有一个显著的上调的SNP峰，效应值较高；绿秆混池在C6染色体有一个显著的下调的SNP峰，差异最明显。因此，BnaPS.C6位于C6染色体，根据SNP最高峰在参考基因组C6染色体上的物理位置，推测紫秆性状目标基因位于C6染色体27～28.6M区间。
4、BnaPS.C6的精细定位
利用PR和ZS11的SNP信息，设计了从27～32M区间的InDel引物837对，设计条件为插入或缺失碱基数大于等于2个。首先，利用亲本PR和ZS11筛选差异引物，其中763对引物在两个亲本之间存在差异。其次，利用PR、ZS11和两个极端单株混池(极端紫秆10株混合成一个样，极端绿秆单株混合成一个样)筛选双亲间存在差异的标记，其中546对引物存在差异且与表型一致(紫色表型的紫叶油菜和极端紫色单株带型一致，绿色表型的ZS11和极端绿秆单株带型一致)。随后，利用PR、ZS11、极端紫秆单株10株和极端绿秆单株10株共22个DNA样品筛选上述546对差异引物，其中505对引物在PR和紫秆极端单株与ZS11和绿秆极端单株间存在差异，用于后续基因定位。
构建了约22000株的F2分离群体，其中极端绿秆单株5254株。首先，利用目标区间两端InDel引物1-I015和3-I662筛选交换单株。其中1-I015从5254株极端绿秆单株中筛选获得交换单株232株，3-I662从5254株极端绿秆单株中筛选得到219株交换单株，共计451株交换单株。其次，分别选取C6染色体28M、29M、30M、31M位置的InDel引物扩增451株交换单株DNA，根据交换情况将目标基因定位于28～29M之间。随后，利用28～29M之间筛选的InDel引物，进一步筛选交换单株，逐步缩小目标区间。最后，451株交换单株在InDel引物3-I122和InDel引物3-I126之间均没有发现交换，将BnaPS.C6定位在3-I122和3-I126之间，结合Darmor-bzh参考基因组C6染色体序列信息，目标区间物理距离约18.5Kb(上述各步骤具体如图3所示，图3为紫秆性状精细定位；其中，RN为重组单株数量；Phen为表型；G为绿色；P为紫色)。
为了确定候选基因，结合Darmor-bzh参考基因组基因注释信息，在约18.5Kb的目标区间内没有发现与花青素相关的基因。甘蓝型油菜基因组测序和大量的研究表明甘蓝型油菜A7和C6染色体同源性较高，容易发生部分同源交换，随后利用PR的重测序数据做了部分同源交换(Homeologous exchanges，HEs)分析，分析结果如图4所示。
由图4可知，PR在A7和C6染色体不存在部分同源交换，排除定位在C6染色体上的目标基因为A7交换到C6的可能。推测在该区间Darmor-bzh基因组在组装时可能存在gap，导致目标性状基因在定位区间未能找到。
5、BnaPS.C6候选基因预测
利用BLAST比对获得了目标区段在NY7(宁油7号)和ZS11基因组C6染色体序列上的同源区段，NY7对应的区间大小约284Kb，包含34个获得注释的基因；ZS11对应的区间大小约292Kb，获得注释的的基因数为28个。结合花青素代谢通路相关基因在NY7和ZS11中同源基因的信息，发现在NY7和ZS11区间均存在三个与拟南芥AtPAP2基因高度同源的基因，且均分别以串联重复的形式存在。NY7中的三个基因为chrC06g003359、chrC06g003363和chrC06g003367，ZS11中的三个基因为BnaC06G0328400、BnaC06G0328700和BnaC06G0329100。将这三个基因分别命名为BnaPAP2.C6.a(BnaC06G0329100-chrC06g003367)，BnaPAP2.C6.c(BnaC06G0328700-chrC06g003363)和BnaPAP2.C6.b(BnaC06G0328400-chrC06g003359)(如图3所示)。
6、BnaPAP2.C6.a是调控PR紫色茎秆的关键基因
BnaPAP2.A7全长基因能够显著上调花青素晚期合成基因的表达，从而促进受体植株叶片紫色的产生。
分别选取了3株PR和ZS11，收集幼嫩茎秆并提取RNA，用于转录组测序(对AtPAP2的9个同源基因进行测序检测，检测目的是为了分析不同基因的表达)，结果见图5中的A(图5中的A为ZS11和PR茎秆9个AtPAP2同源基因表达量分析)及表1。
表1 转录组测序表达量
Figure BDA0002913402840000091
注：BnaPAP2.c6.b和BnaPAP2.c6.a在ZS11中的表达为正常的误差数据；未表达的基因序列与公布的参考基因组序列相同。
由图5中的A和表1可知，转录组测序分析表明，BnaPS.C6位点的三个AtPAP2的同源基因BnaPAP2.C6.a、BnaPAP2.C6.b和BnaPAP2.C6.c中，基因BnaPAP2.C6.a在PR茎秆中上调表达，在ZS11茎秆中不表达，而基因BnaPAP2.C6.a的同源基因BnaPAP2.C6.b和BnaPAP2.C6.c在ZS11和PR茎秆中均不表达。
分别选取了3株PR和ZS11，收集幼嫩茎秆并提取RNA，经反转录后获得相应的cDNA。结合NY7和ZS11参考基因组信息，分别针对基因BnaPAP2.C6.a、BnaPAP2.C6.b和BnaPAP2.C6.c设计三对特异引物如SEQ ID NO:2～7所示。
表2 C6染色体目标区间三个PAP2同源基因定量特异引物
Figure BDA0002913402840000101
设置62℃条件进行退火延伸，直至基因BnaPAP2.C6.a、BnaPAP2.C6.b和BnaPAP2.C6.c的特异引物在ZS11和PR的DNA中均能扩增得到单一目的基因片段。随后，利用扩增得到的ZS11和PR的cDNA进行荧光定量分析，结果见图5中的B(图5中的B为BnaPAP2.C6.a特异引物qRT-PCR分析)和表3。
表3 实时表达量
Figure BDA0002913402840000102
由图5中的B和表3可知，只有BnaPAP2.C6.a的在PR中表达，在ZS11中不表达。说明基因BnaPAP2.C6.a是调控PR中花青素合成的关键基因。
7、基因BnaPAP2.C6.a在不同组织部位表达模式分析
分别选取PR的叶片(Leaf)、茎秆(Stem)、花(Flower)和幼嫩角果(Pod skin)做了转录组测序分析(对AtPAP2的9个同源基因)。结果见图6(图6为甘蓝型油菜AtPAP2同源基因不同拷贝在PR不同组织表达模式分析)和表4。
表4 转录组测序分析
Figure BDA0002913402840000111
由图6和表4可知，在PR的茎秆中，BnaPAP2.C6.a有较高的表达，而BnaPAP2.C6.a的表达量远高于BnaPAP2.A7，表明所述的BnaPAP2.C6.a基因表型更稳定，更容易被观察，育种利用价值更高。在幼嫩的角果皮中，BnaPAP2.A7和BnaPAP2.C6.a均有一定的表达，BnaPAP2.C6.a的表达量高于BnaPAP2.A7。上述结果表明，在PR中，BnaPAP2.A7和BnaPAP2.C6.a参与了不同组织的花青素的转录调控，BnaPAP2.C6.a主要调控茎秆和角果皮中花青素的合成。
虽然本发明已以较佳的实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可以做各种改动和修饰，因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。
序列表
<110> 赣南师范大学
<120> 一种提高植物中花青素含量的基因BnaPAP2.c6.a及其应用
<160> 7
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 3885
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
tgatccattc cttgaagcca tcaggatcca aaaccagttc agaggactcc ccgaaggaac 60
tgtaataatg aagatacaga caagcaggca gaactgtcta tcagaagaga gcaagattgt 120
gtggaacaat ggaaagattg tccagaatat gttccttaag ctccagaacg ttgagtgtgg 180
agaggtcgag cttcaacttg agtggatcga tgtctcaggt cttctgagta taaatgagca 240
tgaggatgtt gcttactaga tctattatct tattacatca agtttgttag aaaatatact 300
agttatgaag ctggcgtggg ggagttatgg gctttaaacc aaaactcccc caattgtttt 360
tttataaatt gaaaagaaaa aactcttctc tggttttgtg ttcttactct aacaagaaaa 420
acataacaca ctttgttgta gagagaggaa acaaggaatg agatgaaatc aagtagatag 480
cataagatga gatggagaaa ctgatttttt tctctcattt tacacaacat cttctactac 540
atattcatat aagaaaatca gagtaatgaa ctctgttttc tctaccctta cacatgttat 600
aaagccccat aaagctacca ctctagacac cacattttag caaaagaaac aagcaacttc 660
aagaacttga acaattcaaa ataaacagtt aacttcaaca acttccttga cttgttgtac 720
tttgttttct ttcattattc tcacttgttt tgttgatacc attgtgcagg attaacagag 780
atgagatttc agcatacttg ttatgataaa tgtaaaaaag ctactgaatc aacgatatgg 840
tttttatgtg tttctgacct ttgtttttgt tttcaacact ttaattgcat cttattgaaa 900
gagagacttg ctcgggtcct gtttagtaat gacaaatggt gatcatcaaa tgtgaaaaga 960
tcaagaatcg atatgcttgc atctaagttt gaaaatccgc agatggatga gaattaatca 1020
tttgaggaac tcagtggaaa actgagtgca acagcaaata tgaagcacaa acaatgggaa 1080
agacatacaa agacaaaaag cttggaagaa acttctcaga tgtttaccct caaagttaaa 1140
tccaagaaga cagctatgga cactgcacta gacactgaca caatggattt tggtgaagtc 1200
acgggtcact tacaagcata tgagatgaat gagaaactca aggaagaact gtctaaaaaa 1260
atctgaaact agaaagcaga ttcacatgct gaatagtgga accaagaatc tggagaagat 1320
tctctctgtt agaagggtag gcaagtccaa ctttgtgtct cggttacagt ggaaaactac 1380
agaaaaacag agtttgttcc ggctaagact tgagagattg cgtctgatac tacaggaagt 1440
aggatatcaa ccaagatcat ctattgtgaa actgaaacca gtaagaacta taatgtaggc 1500
tacttctgtg gtaaatacat gcacatacca agagatactt acaaatttca aaaaagaatc 1560
actccagagt tgactttgct ttccaatctt tacaggttta acgttaaata tgaaatttgt 1620
agtcaaacga ttatgatgga tttcatcaaa tcttattgtt ttaatatcaa atgaggttca 1680
agttacatat ttctgaactc cctagccaaa agtacatact cacaatgtga gacactttaa 1740
atacggaaca atttgcaaaa tagtgatttg tgtactcata attattgtag ctgatttttg 1800
tctacataca tttgttgaca gaaaaacaat acgctactta tcaagttgtg tactcataca 1860
tcaaccctct gtctctctgt ctccctgtcc ctgtctctct ctctctctct ctctctctct 1920
ctctctctct ctctctctct ctctctctct ctctctctct ctctctctct ctctctctct 1980
ctctctctct ctctattctg tttttaactc tggtgcatga agctgttctc tcttttaatc 2040
atataaacca cctttccacc aatcattaat cgtcctttct gctaactttg ctaagaggca 2100
tgtttttcct ttaaagtact gaaaaatatg aagagactaa gtgatatgct atgctatgac 2160
gaaaatggac taagtgctat gaaccttttc tgtatttagt ttgaatcagt agcagaacat 2220
aaataactaa attagcaaat tagacacgac aaaatgtgct atgaaccttt tttgtttctg 2280
catcgtaccc tggaagttgt taaaaaaaaa agacacgaca aaaatgtgga tgttagacat 2340
gcacgtcact tctctttgcc cgtcacgtgt ataaataaag tcctcgaagg atttgtcaag 2400
ccacaataga aacccttttc ctcaagcctg cctttacgta taacttttta aaataaaatt 2460
tggttagata cttctaaaat tatcgctggt ccatggaggg tatgtccaaa gggttgaaaa 2520
aaggtgcatg gactgctgaa gaagataatc tcttgaggca atgcattgat aagtatggag 2580
aagggaaatg gcaccaagtt cctttaagag ctggtatgtc tttttttttt tgataaaata 2640
agagctggta tgctactttt attaattttc acacacacac acatatatat atatacatat 2700
aactaataag tacgtatact ctttttattt ttcagtacat ttattttctt tctctctgtc 2760
tactattagg aaattaatta acaccggggt acacaatcat tgtttttttt ttttgtaact 2820
gaggcttaca atcacaatca ttgtttttct tttcgtttta atgaaggaat catagattca 2880
aatgtttgtt tttcatgaga aaaaaaaaat atttgcgttc ttcatgttta agtataaagc 2940
gagaaggcaa ttctctttat tgattcgtag tttttttttg agaaatagct ttttttattt 3000
gttgaatttt ctgcacgaac cagtatgttt gtgtggaata tgttgtttat actggtgtac 3060
tttgattctt cttttaataa tattaaatgt caattggttt tgtaggtcta aatcggtgca 3120
ggaagagttg tagactaaga tggttgaact atttgaagcc aagtatcaag agaggaaaac 3180
tcaactctga tgaagttgat cttcttattc gccttcataa gcttttagga aacaggttta 3240
cattcaagac acaaattcaa ctttatttcg tatcctcatt cggtctaatc taatcatttg 3300
atttgttttt ttttttgata aaaagtactt ttcatatgta atgatccatt actaagtcat 3360
atatatccct aatttttcaa atgcatgctt aggtggtctt taattgctgg tagattaccc 3420
ggtcggaccg ccaatgacgt caaaaattac tggaacaccc atttgagtaa gaaacatgaa 3480
ccaggttgta agacccagat gaaaaagaga aacattcctt gctcttatac cacaccagcc 3540
caaaaaatcg acgttttcaa acctcgacct cgatccttca ccgttaacaa cggctgcagc 3600
catattaatg gcatgccaga agctgacatt gttcctctat gccttggact caacgacact 3660
aataatgttt ctgaaaatat aatcacatgt aacaaagatg atgataaatt tgagcttgtt 3720
agtaatttaa tggatggtca gaataggtgg tgggaaagtt tgctagatga gagccaagat 3780
ccagctgcgc tctttccaga agctacagca acaaaaaaag gcgcaacctc cgcgtttgac 3840
gttgagcaac tttggagcct gttggatgga gaaactggaa cttga 3885
<210> 2
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
ctggtccatg gagggtat 18
<210> 3
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
cgaataagaa gatcaacttc atca 24
<210> 4
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
ggttgagaaa aggtgcatgg 20
<210> 5
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 5
caaaagttta tgaaggcgga gc 22
<210> 6
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 6
aaacgtttga gaaaaggtgc atatat 26
<210> 7
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 7
caaaagttta tgaaggcgga gc 22

Claims (7)

1.一种提高植物中花青素含量的基因BnaPAP2.c6.a，所述基因BnaPAP2.c6.a的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。
2.权利要求1所述基因BnaPAP2.c6.a的扩增引物，其特征在于，所述扩增引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示。
3.上调权利要求1所述基因BnaPAP2.c6.a的表达在提高植物中花青素含量中的应用。
4.上调权利要求1所述基因BnaPAP2.c6.a的表达在提高甘蓝型油菜中花青素含量中的应用。
5.上调权利要求1所述基因BnaPAP2.c6.a的表达在提高甘蓝型油菜的茎秆中花青素含量中的应用。
6.上调权利要求1所述的基因BnaPAP2.c6.a的表达在提高甘蓝型油菜的角果皮中花青素含量中的应用。
7.权利要求1所述基因BnaPAP2.c6.a在植物育种中的应用。
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