CN112843326B - 一种纤维蛋白粘合剂速效止血复合粉及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明属于生物医用材料的技术领域，具体涉及一种纤维蛋白粘合剂速效止血复合粉及其制备方法。其制备过程包括如下步骤：(1)制备纤维蛋白原混悬液；(2)制备凝血酶混悬液；(3)将已制备的纤维蛋白原混悬液和凝血酶混悬液充分混合，灌装，真空干燥，辐射灭菌。本发明纤维蛋白粘合剂速效止血复合粉的制备工艺简单，临床应用中无需配制、即开即用，可室温贮存及运输，具有显著的技术、成本和临床优势，具有广阔的临床应用和市场前景。

Description

一种纤维蛋白粘合剂速效止血复合粉及其制备方法
技术领域
本发明涉及生物医用材料的技术领域，具体涉及为一种纤维蛋白粘合剂速效止血复合粉及其制备方法。
背景技术
临床创面出血难以缝合及术后缝合渗血等问题常给手术的完成和患者术后恢复带来困扰，选择合适的医用粘合剂能够有效解决此问题。纤维蛋白粘合剂具有良好的止血、组织相容性和黏合性，其通过模拟血液凝固的终末阶段，纤维蛋白原在凝血酶的作用下裂解为纤维蛋白单体，同时在钙离子的作用下凝血因子XIII生成活性凝血因子，纤维蛋白单体在活性凝血因子的催化作用下交联形成具有粘性的凝胶状纤维蛋白凝块，达到止血和粘合的效果。
目前，现有的纤维蛋白粘合剂由健康血浆，经分离、提纯纤维蛋白原和凝血酶，并经病毒去除和灭活处理、冻干制成，包含纤维蛋白原冻干粉及其稀释剂、凝血酶冻干粉及其稀释剂四组分。其制备过程除了需要将纤维蛋白原和凝血酶分装冻干以外，还需额外配备两瓶对应稀释剂，整个制备工艺时间长且繁琐。使用前需用纤维蛋白原稀释剂和凝血酶稀释剂分别溶解纤维蛋白原冻干粉和凝血酶冻干粉，溶解完全后再混合使用，操作复杂，配制时间长，临床使用不便；且该产品需低温贮存和冷链运输，成本较高，限制了其广泛应用。
CN02804097.X公开了一种含有纤维蛋白原、凝血酶、醇和通过于乙醇中将纤维蛋白原与凝血酶而获得任意性的抑肽酶的悬浮液。该悬浮液含有具有Folk Ward平均直径为25-100μm的纤维蛋白原和凝血酶颗粒，该凝血酶可以是人体的、牛的或重组的凝血酶，纤维蛋白原可以是人体的或重组的纤维蛋白原。该发明还公开了一种利用该悬浮液涂敷诸如胶原海绵载体的方法，所述涂层胶原载体可以用作一种即可使用的可吸收组合物，用于组织粘合、组织封口和止血，其中该载体利用固态固定的成分纤维蛋白胶，即纤维蛋白原和凝血酶来涂敷。但是，该产品需通过涂敷在涂层胶原载体，再进行组织粘合、封口和止血，并不能直接用于创面的止血，而且其中并未给出纤维蛋白原、凝血酶的具体制备方法。
发明内容
为解决现有纤维蛋白粘合剂制品制备工艺复杂、临床使用不便、贮存和运输成本较高等一系列技术问题，本发明提供一种纤维蛋白粘合剂速效止血复合粉及其制备方法。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种纤维蛋白粘合剂速效止血复合粉的制备方法，包括如下步骤：
(1)纤维蛋白原混悬液制备：于-3～4℃无水乙醇中，用均质机粉碎精制纤维蛋白原沉淀至粒径0.2～200μm，加入粉碎至粒径5～200μm的药用辅料，混合均匀，得纤维蛋白原混悬液。
(2)凝血酶混悬液制备：于-3～4℃无水乙醇中，用均质机粉碎精制凝血酶沉淀至粒径0.2～200μm，加入粉碎至粒径5～200μm的药用辅料，混合均匀，得凝血酶混悬液。
(3)将步骤(1)纤维蛋白原混悬液和步骤(2)凝血酶混悬液充分混合，灌装，真空干燥，辐射灭菌，制得一种纤维蛋白粘合剂速效止血复合粉。
其中，步骤(1)中纤维蛋白原混悬液包括如下重量百分数的组分：精制纤维蛋白原沉淀2～5％、药用辅料5～12％、余量为无水乙醇。
其中，步骤(2)凝血酶混悬液包括如下重量百分数的组分：精制凝血酶沉淀0.1～0.5％、药用辅料1～8％、余量为无水乙醇。
其中，步骤(1)所述纤维蛋白原悬浮液中止血成分为纤维蛋白原和凝血因子XIII，其中凝血因子XIII在纤维蛋白原中的用量为0.1～0.4IU/mg。
其中，步骤(2)所述凝血酶悬浮液中止血成分为凝血酶和氯化钙，质量比为(0.4～0.8):1。
其中，步骤(1)和(2)中所述的药用辅料为海藻糖、氯化钙、氯化钠、醋酸钠、枸橼酸钠、甘氨酸、盐酸精氨酸、蔗糖、右旋糖酐20中的一种或几种。
其中，步骤(1)所述精制纤维蛋白原沉淀的制备，包括如下步骤：
①冰冻血浆于25～37℃水浴中融解，按终浓度0.2～1.2％比例加入磷酸三丁酯和0.8～1.2％比例加入聚山梨酯80，混匀，25±1℃搅拌保温5～7h。血浆降温至-3～4℃，按乙醇终浓度6～12％加入-20～0℃、30～95％的乙醇溶液，-3～4℃醇沉1～12h，离心收集沉淀，得一次纤维蛋白原沉淀。
②于-3～4℃、6～12％乙醇溶液中粉碎步骤①制得的一次纤维蛋白原沉淀，搅拌10～60min，离心收集沉淀。于复溶液(0.625～1.4％枸橼酸钠，0.425～0.85％氯化钠，pH6.8～7.2)中粉碎沉淀，25～37℃复溶30～90min，得一次复溶液。一次复溶液降温至-3～4℃，按乙醇终浓度6～12％加入-20～0℃、30～95％的乙醇溶液，-3～4℃醇沉1～12h，离心收集沉淀，得二次纤维蛋白原沉淀。
③于复溶液(0.625～1.4％枸橼酸钠，0.425～0.85％氯化钠，pH6.8～7.2)中粉碎步骤②制得的二次纤维蛋白原沉淀，25～37℃复溶30～90min，得二次复溶液。二次复溶液超滤浓缩透析至浓缩液中纤维蛋白原含量为10～25mg/ml。浓缩液降温至-3～4℃，按乙醇终浓度6～12％加入-20～0℃、30～95％的乙醇溶液，-3～4℃醇沉1～12h，离心收集沉淀，得三次纤维蛋白原沉淀。
④于-3～4℃无水乙醇中粉碎步骤③制得的三次纤维蛋白原沉淀，搅拌2～8min，离心收集沉淀，重复2～5次，即得精制纤维蛋白原沉淀。
其中，步骤(2)所述精制凝血酶沉淀的制备，包括如下步骤：
①冰冻血浆于25～37℃水浴中融解，按终浓度0.2～1.2％比例加入磷酸三丁酯和0.8～1.2％比例加入聚山梨酯80，25±1℃搅拌保温5～7h，或取权利要求7中步骤(1)的一次纤维蛋白原沉淀上清液，按照每升血浆或上清液加50～120ml浓度为0.85～1.2mol/L氯化钡溶液，搅拌30～40min，静置20～30min，离心收集沉淀，得凝血酶原钡盐沉淀。
②取步骤①制得的凝血酶原钡盐沉淀，加0.25～0.75倍血浆体积的注射用水漂洗，搅拌2～8min，静置5～30min，排上清液，重复2～5次。将漂洗后的沉淀溶解于0.1～0.5倍血浆体积的2.5～5.5％的枸橼酸钠溶液，常温搅拌30～90min，得复溶液。对复溶液进行超滤浓缩透析，浓缩液体积不超过0.05～0.2倍血浆体积，加入氯化钙溶液至钙离子终浓度为0.01～0.04mol/L，调节pH至7.0～7.6，于20～30℃激活24～72h。激活结束后，超滤浓缩至浓缩液中凝血酶含量为10～25mg/ml。浓缩液降温至-3～4℃，按乙醇终浓度6～19％加入-20～0℃、30～95％的乙醇溶液，-3～4℃醇沉1～12h，离心收集沉淀，得凝血酶沉淀。
③于-3～4℃无水乙醇中粉碎步骤②制得的凝血酶沉淀，搅拌2～8min，离心收集沉淀，重复2～5次，即得精制凝血酶沉淀。
本发明还提供了一种由上述方法制得的一种纤维蛋白粘合剂速效止血复合粉。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
本发明将现有技术中的纤维蛋白粘合剂的四组分变为单组分粉，不仅减少了两个主成分(纤维蛋白原和凝血酶)的单独的制备，且省去了两个稀释剂的制备过程。
本发明的整体制备工艺更简单、时间更短；使用时无需配制，即开即用，临床应用更简便；可室温贮存及运输，成本更低。
因此，本发明具有显著的技术、成本和临床优势，具有更广阔的临床应用和市场前景。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
一种纤维蛋白粘合剂速效止血复合粉的制备方法，包括如下步骤：
(1)精制纤维蛋白原沉淀的制备：冰冻血浆于37℃水浴中融解，按终浓度1％比例加入磷酸三丁酯和1％比例加入聚山梨酯80，混匀，25℃搅拌保温6h。血浆降温至1℃，按乙醇终浓度10％加入-15℃、50％的乙醇溶液，1℃醇沉6h，离心收集沉淀，得一次纤维蛋白原沉淀。于1℃、10％乙醇溶液中粉碎一次纤维蛋白原沉淀，搅拌30min，离心收集沉淀。于复溶液(0.85％枸橼酸钠，0.65％氯化钠，pH 7.0)中粉碎沉淀，37℃复溶60min，得一次复溶液。一次复溶液降温至1℃，按乙醇终浓度8％加入-15℃、50％的乙醇溶液，1℃醇沉6h，离心收集沉淀，得二次纤维蛋白原沉淀。于复溶液(0.85％枸橼酸钠，0.65％氯化钠，pH 7.0)中粉碎二次纤维蛋白原沉淀，37℃复溶60min，得二次复溶液。二次复溶液超滤浓缩透析至浓缩液中纤维蛋白原含量为20mg/ml。浓缩液降温至1℃，按乙醇终浓度8％加入-15℃、50％的乙醇溶液，1℃醇沉1h，离心收集沉淀，得三次纤维蛋白原沉淀。于1℃无水乙醇中粉碎三次纤维蛋白原沉淀，搅拌5min，离心收集沉淀，重复3次，即得精制纤维蛋白原沉淀。
(2)精制凝血酶沉淀的制备：冰冻血浆于37℃水浴中融解，按终浓度1％比例加入磷酸三丁酯和1％比例加入聚山梨酯80，25℃搅拌保温6h，按照每升血浆加80ml浓度为1mol/L氯化钡溶液，搅拌30min，静置30min，离心收集沉淀，得凝血酶原钡盐沉淀。加0.4倍血浆体积的注射用水漂洗凝血酶原钡盐沉淀，搅拌5min，静置10min，排上清液，重复5次。将漂洗后的沉淀溶解于0.25倍血浆体积的4.5％的枸橼酸钠溶液，常温搅拌60min，得复溶液。对复溶液进行超滤浓缩透析，浓缩液体积不超过0.1倍血浆体积，加入氯化钙溶液至钙离子终浓度为0.02mol/L，调节pH至7.4，于25℃激活65h。激活结束后，超滤浓缩至浓缩液中凝血酶含量为20mg/ml。浓缩液降温至1℃，按乙醇终浓度15％加入-15℃、50％的乙醇溶液，1℃醇沉1h，离心收集沉淀，得凝血酶沉淀。于1℃无水乙醇中粉碎凝血酶沉淀，搅拌5min，离心收集沉淀，重复3次，即得精制凝血酶沉淀。
(3)纤维蛋白原混悬液制备：于1℃无水乙醇中，用均质机粉碎精制纤维蛋白原沉淀至粒径0.2～50μm，加入粉碎至粒径5～100μm的药用辅料(92％海藻糖、3％氯化钠、1％枸橼酸钠、4％盐酸精氨酸)，其中无水乙醇、精制纤维蛋白原沉淀和药用辅料占比分别为3.5％、10.5％和86％，混合均匀，得纤维蛋白原混悬液。
(4)凝血酶混悬液制备：于1℃无水乙醇中，用均质机粉碎精制凝血酶沉淀至粒径0.2～50μm，加入粉碎至粒径5～100μm的药用辅料(98％海藻糖、0.5％氯化钙、1.5％甘氨酸)，其中无水乙醇、精制凝血酶沉淀和药用辅料占比分别为0.3％、6.5％和93.2％，混合均匀，得凝血酶混悬液。
(5)将步骤(1)纤维蛋白原混悬液和步骤(2)凝血酶混悬液充分混合，灌装，真空干燥，辐射灭菌，制得纤维蛋白粘合剂速效止血复合粉。
实施例2
一种纤维蛋白粘合剂速效止血复合粉的制备方法，包括如下步骤：
(1)精制纤维蛋白原沉淀的制备：冰冻血浆于37℃水浴中融解，按终浓度1％比例加入磷酸三丁酯和1％比例加入聚山梨酯80，混匀，25℃搅拌保温6h。血浆降温至1℃，按乙醇终浓度10％加入-15℃、50％的乙醇溶液，1℃醇沉6h，离心收集沉淀，得一次纤维蛋白原沉淀。于1℃、10％乙醇溶液中粉碎一次纤维蛋白原沉淀，搅拌30min，离心收集沉淀。于复溶液(0.85％枸橼酸钠，0.65％氯化钠，pH7.0)中粉碎沉淀，37℃复溶60min，得一次复溶液。一次复溶液降温至1℃，按乙醇终浓度8％加入-15℃、50％的乙醇溶液，1℃醇沉6h，离心收集沉淀，得二次纤维蛋白原沉淀。于复溶液(0.85％枸橼酸钠，0.65％氯化钠，pH7.0)中粉碎二次纤维蛋白原沉淀，37℃复溶60min，得二次复溶液。二次复溶液超滤浓缩透析至浓缩液中纤维蛋白原含量为20mg/ml。浓缩液降温至1℃，按乙醇终浓度8％加入-15℃、50％的乙醇溶液，1℃醇沉1h，离心收集沉淀，得三次纤维蛋白原沉淀。于1℃无水乙醇中粉碎三次纤维蛋白原沉淀，搅拌5min，离心收集沉淀，重复3次，即得精制纤维蛋白原沉淀。
(2)精制凝血酶沉淀的制备：取步骤(1)中一次纤维蛋白原沉淀上清液，按照每升上清液加80ml浓度为1mol/L氯化钡溶液，搅拌30min，静置30min，离心收集沉淀，得凝血酶原钡盐沉淀。加0.4倍血浆体积的注射用水漂洗凝血酶原钡盐沉淀，搅拌5min，静置10min，排上清液，重复5次。将漂洗后的沉淀溶解于0.25倍血浆体积的4.5％的枸橼酸钠溶液，常温搅拌60min，得复溶液。对复溶液进行超滤浓缩透析，浓缩液体积不超过0.1倍血浆体积，加入氯化钙溶液至钙离子终浓度为0.02mol/L，调节pH至7.4，于25℃激活65h。激活结束后，超滤浓缩至浓缩液中凝血酶含量为20mg/ml。浓缩液降温至1℃，按乙醇终浓度15％加入-15℃、50％的乙醇溶液，1℃醇沉1h，离心收集沉淀，得凝血酶沉淀。于1℃无水乙醇中粉碎凝血酶沉淀，搅拌5min，离心收集沉淀，重复3次，即得精制凝血酶沉淀。
(3)纤维蛋白原混悬液制备：于1℃无水乙醇中，用均质机粉碎精制纤维蛋白原沉淀至粒径0.2～50μm，加入粉碎至粒径5～100μm的药用辅料(92％海藻糖、3％氯化钠、1％枸橼酸钠、4％盐酸精氨酸)，其中无水乙醇、精制纤维蛋白原沉淀和药用辅料占比分别为3.5％、10.5％和86％，混合均匀，得纤维蛋白原混悬液。
(4)凝血酶混悬液制备：于1℃无水乙醇中，用均质机粉碎精制凝血酶沉淀至粒径0.2～50μm，加入粉碎至粒径5～100μm的药用辅料(98％海藻糖、0.5％氯化钙、1.5％甘氨酸)，其中无水乙醇、精制凝血酶沉淀和药用辅料占比分别为0.3％、6.5％和93.2％，混合均匀，得凝血酶混悬液。
(5)将步骤(1)纤维蛋白原混悬液和步骤(2)凝血酶混悬液充分混合，灌装，真空干燥，辐射灭菌，制得纤维蛋白粘合剂速效止血复合粉。
实施例3
一种纤维蛋白粘合剂速效止血复合粉的制备方法，包括如下步骤：
(1)精制纤维蛋白原沉淀的制备：冰冻血浆于37℃水浴中融解，按终浓度0.3％比例加入磷酸三丁酯和1％比例加入聚山梨酯80，混匀，25℃搅拌保温6h。血浆降温至1℃，按乙醇终浓度10％加入-15℃、50％的乙醇溶液，1℃醇沉1h，离心收集沉淀，得一次纤维蛋白原沉淀。于1℃、10％乙醇溶液中粉碎一次纤维蛋白原沉淀，搅拌30min，离心收集沉淀。于复溶液(0.85％枸橼酸钠，0.65％氯化钠，pH7.0)中粉碎沉淀，37℃复溶60min，得一次复溶液。一次复溶液降温至1℃，按乙醇终浓度8％加入-15℃、50％的乙醇溶液，1℃醇沉1h，离心收集沉淀，得二次纤维蛋白原沉淀。于复溶液(0.85％枸橼酸钠，0.65％氯化钠，pH7.0)中粉碎二次纤维蛋白原沉淀，37℃复溶60min，得二次复溶液。二次复溶液超滤浓缩透析至浓缩液中纤维蛋白原含量为20mg/ml。浓缩液降温至1℃，按乙醇终浓度8％加入-15℃、50％的乙醇溶液，1℃醇沉1h，离心收集沉淀，得三次纤维蛋白原沉淀。于1℃无水乙醇中粉碎三次纤维蛋白原沉淀，搅拌5min，离心收集沉淀，重复3次，即得精制纤维蛋白原沉淀。
(2)精制凝血酶沉淀的制备：冰冻血浆于37℃水浴中融解，按终浓度0.3％比例加入磷酸三丁酯和1％比例加入聚山梨酯80，25℃搅拌保温6h，按照每升血浆加80ml浓度为1mol/L氯化钡溶液，搅拌30min，静置30min，离心收集沉淀，得凝血酶原钡盐沉淀。加0.4倍血浆体积的注射用水漂洗凝血酶原钡盐沉淀，搅拌5min，静置10min，排上清液，重复5次。将漂洗后的沉淀溶解于0.25倍血浆体积的4.5％的枸橼酸钠溶液，常温搅拌60min，得复溶液。对复溶液进行超滤浓缩透析，浓缩液体积不超过0.1倍血浆体积，加入氯化钙溶液至钙离子终浓度为0.02mol/L，调节pH至7.4，于25℃激活65h。激活结束后，超滤浓缩至浓缩液中凝血酶含量为20mg/ml。浓缩液降温至1℃，按乙醇终浓度15％加入-15℃、50％的乙醇溶液，1℃醇沉1h，离心收集沉淀，得凝血酶沉淀。于1℃无水乙醇中粉碎凝血酶沉淀，搅拌5min，离心收集沉淀，重复3次，即得精制凝血酶沉淀。
(3)纤维蛋白原混悬液制备：于1℃无水乙醇中，用均质机粉碎精制纤维蛋白原沉淀至粒径0.2～50μm，加入粉碎至粒径5～100μm的药用辅料(92％海藻糖、3％氯化钠、1％枸橼酸钠、4％盐酸精氨酸)，其中无水乙醇、精制纤维蛋白原沉淀和药用辅料占比分别为3.5％、10.5％和86％，混合均匀，得纤维蛋白原混悬液。
(4)凝血酶混悬液制备：于1℃无水乙醇中，用均质机粉碎精制凝血酶沉淀至粒径0.2～50μm，加入粉碎至粒径5～100μm的药用辅料(98％海藻糖、0.5％氯化钙、1.5％甘氨酸)，其中无水乙醇、精制凝血酶沉淀和药用辅料占比分别为0.3％、6.5％和93.2％，混合均匀，得凝血酶混悬液。
(5)将步骤(1)纤维蛋白原混悬液和步骤(2)凝血酶混悬液充分混合，灌装，真空干燥，辐射灭菌，制得纤维蛋白粘合剂速效止血复合粉。
实施例4
止血试验
在大鼠肝左外叶下缘以上0.8cm处快速切除左外叶小部分使其流血，切口长度约20mm，宽度约5mm，切口后迅速给予相应的止血材料，记录肝脏创面的出血时间和出血量，空白对照组为不给予任何止血材料的空白试验，考察本发明各实施例制备的止血材料对肝脏出血创面的止血作用，并与市售纤维蛋白原粘合剂对比，结果见表1所示。
表1实施例1～3及市售纤维蛋白粘合剂止血试验
组别 出血时间(s) 出血量(g)
空白对照组 458±101 1.2536±0.1224
市售纤维蛋白粘合剂 173±79 0.1566±0.7583
实施例1 113±85 0.0646±0.0341
实施例2 99±73 0.0581±0.0332
实施例3 105±69 0.0598±0.0245
由表1可知，与空白对照组相比，本发明实施例1～3制备的止血复合粉具有显著的止血作用；与市售纤维蛋白粘合剂相比，本发明实施例1～3制备的止血复合粉出血时间和出血量均更少。
实施例5
稳定性试验
将实施例1-3制得的样品与市售纤维蛋白粘合剂置于25℃、60％RH条件下保存0月、3月、6月、9月、12月、18月、24月取样检测成胶性能，包括成胶时间、粘合力试验，结果见表2和表3所示。
表2实施例1～3及市售纤维蛋白粘合剂成胶时间试验
Figure BDA0002915630630000091
表3实施例1～3及市售纤维蛋白粘合剂粘合力试验
Figure BDA0002915630630000101
由表2、表3可知，与市售纤维蛋白粘合剂(长期贮存需在2～8℃)相比，本发明实施例1～3制备的止血复合粉于25℃、60％RH条件下保存24月，成胶时间试验和粘合力试验结果均保持稳定，说明本发明制备的止血复合粉能够室温贮存和运输。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。

Claims (4)

1.一种纤维蛋白粘合剂速效止血复合粉的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)纤维蛋白原混悬液制备：于-3～4℃无水乙醇中，用均质机粉碎精制纤维蛋白原沉淀至粒径0.2～200μm，加入粉碎至粒径5～200μm的药用辅料，混合均匀，得纤维蛋白原混悬液；其中，精制纤维蛋白原沉淀2～5％、药用辅料5～12％、余量为无水乙醇；
精制纤维蛋白原沉淀的制备过程包括如下步骤：
1)冰冻血浆于25～37℃水浴中融解，按终浓度0.2～1.2％的比例加入磷酸三丁酯和0.8～1.2％比例加入聚山梨酯80，混匀，25±1℃搅拌保温5～7h；血浆降温至-3～4℃，按乙醇终浓度6～12％加入-20～0℃、30～95％的乙醇溶液，-3～4℃醇沉1～12h，离心收集沉淀，得一次纤维蛋白原沉淀；
2)于-3～4℃、6～12％乙醇溶液中粉碎步骤1)制得的一次纤维蛋白原沉淀，搅拌10～60min，离心收集沉淀；于复溶液中粉碎沉淀，所述复溶液中含有0.625～1.4％枸橼酸钠、0.425～0.85％氯化钠，pH6.8～7.2；
25～37℃复溶30～90min，得一次复溶液；一次复溶液降温至-3～4℃，按乙醇终浓度6～12％加入-20～0℃、30～95％的乙醇溶液，-3～4℃醇沉1～12h，离心收集沉淀，得二次纤维蛋白原沉淀；
3)于复溶液中粉碎步骤2)制得的二次纤维蛋白原沉淀，所述复溶液中含有0.625～1.4％枸橼酸钠、0.425～0.85％氯化钠，pH6.8～7.2；
25～37℃复溶30～90min，得二次复溶液；二次复溶液超滤浓缩透析至浓缩液中纤维蛋白原含量为10～25mg/ml；浓缩液降温至-3～4℃，按乙醇终浓度6～12％加入-20～0℃、30～95％的乙醇溶液，-3～4℃醇沉1～12h，离心收集沉淀，得三次纤维蛋白原沉淀；
4)于-3～4℃无水乙醇中粉碎步骤3)制得的三次纤维蛋白原沉淀，搅拌2～8min，离心收集沉淀，重复2～5次，即得精制纤维蛋白原沉淀；
所述纤维蛋白原悬浮液中含有纤维蛋白原和凝血因子XIII，所述凝血因子XIII在纤维蛋白原中的用量为0.1～0.4IU/mg；
(2)凝血酶混悬液制备：于-3～4℃无水乙醇中，用均质机粉碎精制凝血酶沉淀至粒径0.2～200μm，加入粉碎至粒径5～200μm的药用辅料，混合均匀，得凝血酶混悬液；其中，精制凝血酶沉淀0.1～0.5％、药用辅料1～8％、余量为无水乙醇；所述凝血酶悬浮液中止血成分为凝血酶和氯化钙，质量比为(0.4～0.8):1；
精制凝血酶沉淀的制备过程包括如下步骤：
1)冰冻血浆于25～37℃水浴中融解，按终浓度0.2～1.2％比例加入磷酸三丁酯和0.8～1.2％比例加入聚山梨酯80，25±1℃搅拌保温5～7h；或取精制纤维蛋白原沉淀的制备过程中步骤1)的一次纤维蛋白原沉淀上清液；
按照每升血浆或上清液加50～120ml浓度为0.85～1.2mol/L氯化钡溶液，搅拌30～40min，静置20～30min，离心收集沉淀，得凝血酶原钡盐沉淀；
2)取步骤1)制得的凝血酶原钡盐沉淀，加0.25～0.75倍血浆体积的注射用水漂洗，搅拌2～8min，静置5～30min，排上清液，重复2～5次；将漂洗后的沉淀溶解于0.1～0.5倍血浆体积的2.5～5.5％的枸橼酸钠溶液，常温搅拌30～90min，得复溶液；
对复溶液进行超滤浓缩透析，浓缩液体积为0.05～0.2倍血浆体积，加入氯化钙溶液至钙离子终浓度为0.01～0.04mol/L，调节pH至7.0～7.6，于20～30℃激活24～72h；激活结束后，超滤浓缩至浓缩液中凝血酶含量为10～25mg/ml；浓缩液降温至-3～4℃，按乙醇终浓度6～19％加入-20～0℃、30～95％的乙醇溶液，-3～4℃醇沉1～12h，离心收集沉淀，得凝血酶沉淀；
3)于-3～4℃无水乙醇中粉碎步骤2)制得的凝血酶沉淀，搅拌2～8min，离心收集沉淀，重复2～5次，即得精制凝血酶沉淀；
(3)将已制备的纤维蛋白原混悬液和凝血酶混悬液充分混合，灌装，真空干燥，辐射灭菌，制得纤维蛋白粘合剂速效止血复合粉。
2.根据权利要求1所述的纤维蛋白粘合剂速效止血复合粉的制备方法，其特征在于：所述步骤(1)中的药用辅料为海藻糖、氯化钙、氯化钠、醋酸钠、枸橼酸钠、甘氨酸、盐酸精氨酸、蔗糖、右旋糖酐20中的一种或几种。
3.根据权利要求2所述的纤维蛋白粘合剂速效止血复合粉的制备方法，其特征在于：所述步骤(2)中的药用辅料为海藻糖、氯化钙、氯化钠、醋酸钠、枸橼酸钠、甘氨酸、盐酸精氨酸、蔗糖、右旋糖酐20中的一种或几种。
4.根据权利要求1～3任一所述的制备方法制得的纤维蛋白粘合剂速效止血复合粉。
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