CN115400260A - 一种含重组人源化胶原蛋白的修复凝胶及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种含重组人源化胶原蛋白的修复凝胶及其制备方法；制备所述修复凝胶的原料包括按质量百分比计算的以下组分：功效物0.01‑2％、增稠剂0.5‑8％，保湿剂2‑10％、耦合剂0.1‑1％、医用防腐剂0.01‑1％，余量为纯化水；所述功效物包括重组人源Ⅲ型胶原蛋白和重组人源Ⅳ型胶原蛋白。本发明提供的修复凝胶中重组人源Ⅲ型胶原蛋白能够补充创面修复过程中的减少或缺失，促进皮肤细胞再生；重组人源Ⅳ型胶原蛋白能在创面表面形成大分子网状结构的Ⅳ型胶原蛋白保护膜，作为细胞生长的依附和支架；本申请通过重组人源Ⅲ型胶原蛋白和重组人源Ⅳ型胶原蛋白配合使用，制得机械强度高、包含重组人源化胶原蛋白的修复凝胶。

Description

一种含重组人源化胶原蛋白的修复凝胶及其制备方法
技术领域
本发明涉及生物材料技术领域，具体涉及一种含重组人源化胶原蛋白的修复凝胶及其制备方法。
背景技术
皮肤是保护人体不受外界环境损伤的最重要的物理屏障，皮肤受损会影响表皮组织和血管网络，真皮结构也可能会被破坏，带来一系列的安全隐患。外伤及外伤感染造成的皮肤受损是医院的多发病例，医用敷料可充当保护屏障，用来覆盖伤口，吸收伤口渗出液体，帮助创面愈合。
传统的医用敷料，如纱布、绷带等，可以提供一定的保护作用且价格低廉，但使用过程中容易与伤口发生粘连造成二次伤害。与传统敷料相比，水凝胶具有良好的柔韧性和生物相容性，其制作的敷料吸收液体性能好，能够为创面创造一个利于组织再生的湿润环境，且凝胶的滑弹状态可有效地避免伤口黏连造成的二次伤害，因此成为医用敷料的极佳选择。现有的水凝胶敷料大多数只添加水和亲水性高分子凝胶等增稠剂，基本只能够起到对伤口的一个覆盖作用，提供一个促进伤口恢复的环境。
胶原蛋白约占皮肤成分的70％，在皮肤创面的修复中尤为重要。胶原蛋白中含有大量羟脯氨酸、羟赖氨酸以及甘氨酸等天然保湿因子，能为创面提供湿润环境。此外，胶原蛋白多肽与皮肤细胞的生长、分裂、增殖、迁移以及分化有关，具有促进皮肤创面修复的作用。I型胶原蛋白和Ⅲ型胶原蛋白共同组成皮肤的胶原蛋白，婴幼儿皮肤中的胶原蛋白主要是Ⅲ型，青壮年和老年人皮肤中的胶原蛋白主要是I型。在创面修复过程中，Ⅲ型胶原蛋白减少或缺失，引起I型～Ⅲ型胶原蛋白比例失调。Ⅳ型胶原主要存在于各器官的基底膜中，是维持组织结构和调节细胞和细胞间相互作用的重要成分，存在的结构形式为网状结构，其特点在于它具有超大分子结构，可在创面表面形成保护膜。
重组人源化胶原蛋白是基于人胶原蛋白的特征和主要功能序列重新优化设计并表达的具有人胶原蛋白特征的水溶性蛋白质，有良好的生物学相容性、细胞黏附性、促新细胞形成和止血功能，能迅速补充体内流失的胶原蛋白，促进皮肤细胞生长，修复断裂的纤维框架，修复皮肤屏障。因而重组胶原蛋白在医学领域，尤其是创面修复中极受欢迎，可制成胶原海绵、胶原膜、人工皮肤等。近几年涌现许多含重组胶原蛋白的疤痕修复产品，包括促进伤口愈合的水凝胶敷料、重组胶原蛋白医用水凝胶、重组人胶原蛋白可吸收水凝胶皮肤支架等。重组胶原蛋白修复凝胶能与皮肤完全融合，无任何排异或排斥现象，并能使创面及其周围皮肤保持一个湿润的环境，促进创面及周围皮肤的自我修复，以恢复正常状态起到屏障作用。但是，这类胶原蛋白水凝胶都是添加单一的重组胶原蛋白，机械强度较弱，一般需要另外添加高分子胶粘剂以构建水凝胶网络，在创面表面形成物理保护膜；或者提高重组胶原蛋白浓度以提高其机械强度，但同时也极大地提高了成本。
因此，提供一种机械强度高、包含重组人源化胶原蛋白的修复凝胶成为人们亟待解决的问题。
发明内容
鉴于上述问题，提出了本发明以便提供一种克服上述问题或者至少部分地解决上述问题的含重组人源化胶原蛋白的修复凝胶及其制备方法。
依据本发明的一个方面，提供了一种含重组人源化胶原蛋白的修复凝胶，制备所述修复凝胶的原料包括按质量百分比计算的以下组分：功效物0.01-2％、增稠剂0.5-8％，保湿剂2-10％、耦合剂0.1-1％、医用防腐剂0.01-1％，余量为纯化水；所述功效物包括重组人源Ⅲ型胶原蛋白和重组人源Ⅳ型胶原蛋白。
进一步的，所述重组人源Ⅲ型胶原蛋白的分子量为35-60KD，所述重组人源Ⅳ型胶原蛋白的分子量为150-200KD。
进一步的，所述重组人源Ⅲ型胶原蛋白和重组人源Ⅳ型胶原蛋白的质量比为1:1-1:2。
进一步的，所述重组人源Ⅲ型胶原蛋白和所述重组人源Ⅳ型胶原蛋白的质量和在制备所述修复凝胶的原料中质量百分比为0.01-2％。
进一步的，所述增稠剂包括羧甲基纤维素钠，所述羧甲基纤维素钠在制备所述修复凝胶的原料中质量百分比为0.5-8％。
进一步的，所述保湿剂包括甘油，所述甘油在制备所述修复凝胶的原料中质量百分比为2-10％。
进一步的，所述耦合剂包括乙二胺四乙酸二钠，所述乙二胺四乙酸二钠在制备所述修复凝胶的原料中质量百分比为0.1-1％。
进一步的，所述医用防腐剂包括羟苯甲酯，所述羟苯甲酯在制备所述修复凝胶的原料中质量百分比为0.01-1％。
进一步的，所述修复凝胶的粘度为500-1000cp；和/或所述修复凝胶的pH值为4.0-8.0。
依据本发明的又一方面，提供了一种含重组人源化胶原蛋白的修复凝胶的制备方法，包括以下步骤：
S1、将纯化水放入容器中加热，当容器中液体加热至第一温度后加入羟苯甲酯医用防腐剂搅拌溶解；
S2、对容器中的液体降温，当容器中液体自第一温度降温至第二温度，向容器中加入增稠剂羧甲基纤维素钠并搅拌溶解；
S3、当容器中液体自第二温度降温至第三温度，向容器中加入甘油保湿剂并搅拌至完全溶解；之后向容器中依次加入乙二胺四乙酸二钠耦合剂并搅拌至完全溶解，然后向容器中加入重组胶原蛋白功效物并搅拌至完全溶解；
S4、待容器中液体温度低于第三温度时，室温下静置溶涨，直至没有明显气泡；
S5、将容器封口后灭菌，制得所述的修复凝胶。
进一步的，步骤S5中所述的灭菌方法包括采用钴60辐照灭菌或电子束辐照灭菌。
进一步的，所述钴60辐照灭菌的辐照剂量为3.5-4.5kGy；所述电子束辐照灭菌的辐照剂量为20-40kGy。
依据本发明的再一方面，提供了一种含重组人源化胶原蛋白的修复凝胶于非慢性创面覆盖中的应用。
进一步的，所述非慢性创面包括手术后缝合创面，但不限于此。
由上述可知，本发明的技术方案，提供一种含重组人源化胶原蛋白的修复凝胶及其制备方法，所述修复凝胶中的功效物包括重组人源Ⅲ型胶原蛋白和重组人源Ⅳ型胶原蛋白，其中，重组人源Ⅲ型胶原蛋白既能够补充创面修复过程中Ⅲ型胶原蛋白的减少或缺失，又可连接受损皮肤真皮层断裂的胶原纤维，促进皮肤细胞再生；重组人源Ⅳ型胶原蛋白可在创面表面形成大分子网状结构的Ⅳ型胶原蛋白保护膜，作为细胞生长的依附和支架，提升机械强度，促进皮肤细胞再生，修复皮肤屏障，提升恢复速度；通过重组人源Ⅲ型胶原蛋白和重组人源Ⅳ型胶原蛋白配合使用，制得机械强度高、包含重组人源化胶原蛋白的修复凝胶。
附图说明
通过阅读下文优选实施方式的详细描述，各种其他的优点和益处对于本领域普通技术人员将变得清楚明了。附图仅用于示出优选实施方式的目的，而并不认为是对本发明的限制。而且在整个附图中，用相同的参考符号表示相同的部件。在附图中：
图1：实施例5、实施例6和实施例7的修复凝胶形态图
图2：实施例7、对比例1、实施例10和对比例2的修复凝胶形态图
图3：实施例1辐照前后菌落总数测试图
具体实施方式
鉴于现有技术中的不足，本案发明人经长期研究和大量实践，得以提出本发明的技术方案。如下将对该技术方案、其实施过程及原理等作进一步的解释说明。
本发明提供一种含重组人源化胶原蛋白的修复凝胶，制备所述修复凝胶的原料包括按质量百分比计算的以下组分：功效物0.01-2％、增稠剂0.5-8％，保湿剂2-10％、耦合剂0.1-1％、医用防腐剂0.01-1％，余量为纯化水；所述功效物包括重组人源Ⅲ型胶原蛋白和重组人源Ⅳ型胶原蛋白。
在一些实施例中，所述重组人源Ⅲ型胶原蛋白的分子量为35-60KD，所述重组人源Ⅳ型胶原蛋白的分子量为150-200KD。所述重组人源Ⅲ型胶原蛋白和重组人源Ⅳ型胶原蛋白的质量比为1:1-1:2。优选的，重组人源Ⅲ型胶原蛋白和重组人源Ⅳ型胶原蛋白的质量和在制备所述修复凝胶的原料中质量百分比为0.01-2％。在该实施例中，重组人源Ⅲ型胶原蛋白能更好地连接受损皮肤真皮层断裂的胶原纤维，促进皮肤细胞再生，重组人源Ⅳ型胶原蛋白能在创面表面形成稳定的网状结构胶原蛋白保护膜。两者经过配合使用，能提高胶原蛋白修复创面的效率。此外，本申请采用重组人源化胶原蛋白促细胞迁移能力、促细胞黏附能力与透皮性都明显优于动物胶原蛋白，且可以避免使用动物胶原带来的病毒隐患、免疫排斥反应等不良影响，获得更高的亲水性和安全性。
在一些实施例中，所述增稠剂包括羧甲基纤维素钠，优选的，所述羧甲基纤维素钠在制备所述修复凝胶的原料中质量百分比为0.5-8％。在日常使用中，羧甲基纤维素钠还可以作为水溶胶，也可以作为在医药行业中片剂的粘结剂、成膜剂，针剂的乳化稳定剂。
在一些实施例中，所述保湿剂包括甘油，优选的，所述甘油在制备所述修复凝胶的原料中质量百分比为2-10％。由于甘油与水可无限混溶，因此有强烈的吸水保湿性。
在一些实施例中，所述耦合剂包括乙二胺四乙酸二钠，优选的，所述乙二胺四乙酸二钠在制备所述修复凝胶的原料中质量百分比为0.1-1％。由于乙二胺四乙酸二钠具有广泛的配位性能，因此能与多种物质形成稳定的螯合物，且螯合物大多数带电荷，易溶于水，提高了产品的稳定性。
在一些实施例中，所述医用防腐剂包括羟苯甲酯，优选的，所述羟苯甲酯在制备所述修复凝胶的原料中质量百分比为0.01-1％。羟苯甲酯在医药工业中常用作药剂的防腐杀菌剂，可破坏微生物的细胞膜，抑制微生物细胞的呼吸酶系与电子传递酶系的活性，抗细菌性能比苯甲酸、山梨酸都强。
在一些实施例中，所述修复凝胶的粘度为500-1000cp，在此区间的修复凝胶能更好地吸收创面渗出液，提升创面修复速度。优选的，所述修复凝胶的pH值为4.0-8.0。
在另一实施例中，提供了一种含重组人源化胶原蛋白的修复凝胶的制备方法，包括以下步骤：
S1、将纯化水放入容器中加热，当容器中液体加热至第一温度后加入羟苯甲酯医用防腐剂搅拌溶解；
S2、对容器中的液体降温，当容器中液体自第一温度降温至第二温度，向容器中加入增稠剂羧甲基纤维素钠并搅拌溶解；
S3、当容器中液体自第二温度降温至第三温度，向容器中加入甘油保湿剂并搅拌至完全溶解；之后向容器中依次加入乙二胺四乙酸二钠耦合剂并搅拌至完全溶解，然后向容器中加入重组胶原蛋白功效物并搅拌至完全溶解；
S4、待容器中液体温度低于第三温度时，室温下静置溶涨，直至没有明显气泡；
S5、将容器封口后灭菌，制得所述的修复凝胶；其中，所述灭菌方法包括采用钴60辐照灭菌或电子束辐照灭菌；优选的，所述钴60辐照灭菌的辐照剂量为3.5-4.5kGy；所述电子束辐照灭菌的辐照剂量为20-40kGy。
在上述实施例中，第一温度可选自90℃，第二温度可选自50℃，第三温度可选自30℃，在具体实施中，可根据需要进行调整。
本申请以无菌形式提供修复凝胶，可防止创面受到微生物感染。通过电子束辐照，还能促进胶原蛋白发生交联，形成更稳定的网状结构，进一步提升修复凝胶的机械强度。
此外，在一些实施例中，还提供了一种含重组人源化胶原蛋白的修复凝胶于非慢性创面覆盖中的应用。所述非慢性创面包括手术后缝合创面。
为更好的阐述本发明的设计思想，以下结合具体实施例对本发明进行详细论述。
实施例1
本实施例提供一种含重组人源化胶原蛋白的修复凝胶，由如下各组分制成：功效物分子量55KD的重组人源Ⅲ型胶原蛋白0.4％、分子量165KD的重组人源Ⅳ型胶原蛋白0.4％，增稠剂羧甲基纤维素钠4％、保湿剂甘油4％、耦合剂乙二胺四乙酸二钠0.2％、医用防腐剂羟苯甲酯0.3％、余量纯化水组成。经钴60辐照灭菌，产品以无菌形式提供。
具体制备工艺包括如下步骤：
1)先将90.7mL纯化水加入搅拌烧杯内，水浴加热至90℃，加入0.3g羟苯甲酯搅拌溶解。
2)降温至50℃，加入4g羧甲基纤维素钠并搅拌溶解。
3)降温至30℃，加入4g甘油搅拌至完全溶解。
4)加入0.2g乙二胺四乙酸二钠搅拌至完全溶解。
5)加入0.4g重组人源Ⅲ型胶原蛋白、0.4g重组人源Ⅳ型胶原蛋白搅拌至完全溶解。
6)慢慢搅拌，待温度降至30℃以下，室温静置溶涨，至没有明显气泡。
7)灌装封口后，经钴60辐照灭菌，辐照剂量为4kGy。
实施例2
本实施例提供一种含重组人源化胶原蛋白的修复凝胶，由如下各组分制成：功效物分子量45KD的重组人源Ⅲ型胶原蛋白0.4％、分子量165KD的重组人源Ⅳ型胶原蛋白0.4％，增稠剂羧甲基纤维素钠4％、保湿剂甘油4％、耦合剂乙二胺四乙酸二钠0.2％、医用防腐剂羟苯甲酯0.3％、余量纯化水组成。经钴60辐照灭菌，产品以无菌形式提供。
具体制备工艺包括如下步骤：
1)先将90.7mL纯化水加入搅拌烧杯内，水浴加热至90℃，加入0.3g羟苯甲酯搅拌溶解。
2)降温至50℃，加入4g羧甲基纤维素钠并搅拌溶解。
3)降温至30℃，加入4g甘油搅拌至完全溶解。
4)加入0.2g乙二胺四乙酸二钠搅拌至完全溶解。
5)加入0.4g重组人源Ⅲ型胶原蛋白、0.4g重组人源Ⅳ型胶原蛋白搅拌至完全溶解。
6)慢慢搅拌，待温度降至30℃以下，室温静置溶涨，至没有明显气泡。
7)灌装封口后，经钴60辐照灭菌，辐照剂量为4kGy。
实施例3
本实施例提供一种含重组人源化胶原蛋白的修复凝胶，由如下各组分制成：功效物分子量55KD的重组人源Ⅲ型胶原蛋白0.4％、分子量190KD的重组人源Ⅳ型胶原蛋白0.4％，增稠剂羧甲基纤维素钠4％、保湿剂甘油4％、耦合剂乙二胺四乙酸二钠0.2％、医用防腐剂羟苯甲酯0.3％、余量纯化水组成。经钴60辐照灭菌，产品以无菌形式提供。
具体制备工艺包括如下步骤：
1)先将90.7mL纯化水加入搅拌烧杯内，水浴加热至90℃，加入0.3g羟苯甲酯搅拌溶解。
2)降温至50℃，加入4g羧甲基纤维素钠并搅拌溶解。
3)降温至30℃，加入4g甘油搅拌至完全溶解。
4)加入0.2g乙二胺四乙酸二钠搅拌至完全溶解。
5)加入0.4g重组人源Ⅲ型胶原蛋白、0.4g重组人源Ⅳ型胶原蛋白搅拌至完全溶解。
6)慢慢搅拌，待温度降至30℃以下，室温静置溶涨，至没有明显气泡。
7)灌装封口后，经钴60辐照灭菌，辐照剂量为4kGy。
实施例4
本实施例提供一种含重组人源化胶原蛋白的修复凝胶，由如下各组分制成：功效物重组人源Ⅲ型胶原蛋白0.4％、重组人源Ⅳ型胶原蛋白0.6％，增稠剂羧甲基纤维素钠4％、保湿剂甘油4％、耦合剂乙二胺四乙酸二钠0.2％、医用防腐剂羟苯甲酯0.3％、余量纯化水组成。经钴60辐照灭菌，产品以无菌形式提供。
具体制备工艺包括如下步骤：
1)先将90.5mL纯化水加入搅拌烧杯内，水浴加热至90℃，加入0.3g羟苯甲酯搅拌溶解。
2)降温至50℃，加入4g羧甲基纤维素钠并搅拌溶解。
3)降温至30℃，加入4g甘油搅拌至完全溶解。
4)加入0.2g乙二胺四乙酸二钠搅拌至完全溶解。
5)加入0.4g重组人源Ⅲ型胶原蛋白、0.6g重组人源Ⅳ型胶原蛋白搅拌至完全溶解。
6)慢慢搅拌，待温度降至30℃以下，室温静置溶涨，至没有明显气泡。
7)灌装封口后，经钴60辐照灭菌，辐照剂量为4kGy。
实施例5
本实施例提供一种含重组人源化胶原蛋白的修复凝胶，由如下各组分制成：功效物重组人源Ⅲ型胶原蛋白0.4％、重组人源Ⅳ型胶原蛋白0.8％，增稠剂羧甲基纤维素钠4％、保湿剂甘油4％、耦合剂乙二胺四乙酸二钠0.2％、医用防腐剂羟苯甲酯0.3％、余量纯化水组成。经钴60辐照灭菌，产品以无菌形式提供。
具体制备工艺包括如下步骤：
1)先将90.3mL纯化水加入搅拌烧杯内，水浴加热至90℃，加入0.3g羟苯甲酯搅拌溶解。
2)降温至50℃，加入4g羧甲基纤维素钠并搅拌溶解。
3)降温至30℃，加入4g甘油搅拌至完全溶解。
4)加入0.2g乙二胺四乙酸二钠搅拌至完全溶解。
5)加入0.4g重组人源Ⅲ型胶原蛋白、0.8g重组人源Ⅳ型胶原蛋白搅拌至完全溶解。
6)慢慢搅拌，待温度降至30℃以下，室温静置溶涨，至没有明显气泡。
7)灌装封口后，经钴60辐照灭菌，辐照剂量为4kGy。
实施例6
本实施例提供一种含重组人源化胶原蛋白的修复凝胶，由如下各组分制成：功效物重组人源Ⅲ型胶原蛋白0.4％、重组人源Ⅳ型胶原蛋白0.4％，增稠剂羧甲基纤维素钠5％、保湿剂甘油4％、耦合剂乙二胺四乙酸二钠0.2％、医用防腐剂羟苯甲酯0.3％、余量纯化水组成。经钴60辐照灭菌，产品以无菌形式提供。
具体制备工艺包括如下步骤：
1)先将89.7mL纯化水加入搅拌烧杯内，水浴加热至90℃，加入0.3g羟苯甲酯搅拌溶解。
2)降温至50℃，加入5g羧甲基纤维素钠并搅拌溶解。
3)降温至30℃，加入4g甘油搅拌至完全溶解。
4)加入0.2g乙二胺四乙酸二钠搅拌至完全溶解。
5)加入0.4g重组人源Ⅲ型胶原蛋白、0.4g重组人源Ⅳ型胶原蛋白搅拌至完全溶解。
6)慢慢搅拌，待温度降至30℃以下，室温静置溶涨，至没有明显气泡。
7)灌装封口后，经钴60辐照灭菌，辐照剂量为4kGy。
实施例7
本实施例提供一种含重组人源化胶原蛋白的修复凝胶，由如下各组分制成：功效物重组人源Ⅲ型胶原蛋白0.4％、重组人源Ⅳ型胶原蛋白0.4％，增稠剂羧甲基纤维素钠6％、保湿剂甘油4％、耦合剂乙二胺四乙酸二钠0.2％、医用防腐剂羟苯甲酯0.3％、余量纯化水组成。经钴60辐照灭菌，产品以无菌形式提供。
具体制备工艺包括如下步骤：
1)先将88.7mL纯化水加入搅拌烧杯内，水浴加热至90℃，加入0.3g羟苯甲酯搅拌溶解。
2)降温至50℃，加入6g羧甲基纤维素钠并搅拌溶解。
3)降温至30℃，加入4g甘油搅拌至完全溶解。
4)加入0.2g乙二胺四乙酸二钠搅拌至完全溶解。
5)加入0.4g重组人源Ⅲ型胶原蛋白、0.4g重组人源Ⅳ型胶原蛋白搅拌至完全溶解。
6)慢慢搅拌，待温度降至30℃以下，室温静置溶涨，至没有明显气泡。
7)灌装封口后，经钴60辐照灭菌，辐照剂量为4kGy。
实施例8
本实施例提供一种含重组人源化胶原蛋白的修复凝胶，由如下各组分制成：功效物重组人源Ⅲ型胶原蛋白0.4％、重组人源Ⅳ型胶原蛋白0.4％，增稠剂羧甲基纤维素钠4％、保湿剂甘油4％、耦合剂乙二胺四乙酸二钠0.2％、医用防腐剂羟苯甲酯0.3％、余量纯化水组成。经电子束辐照灭菌，产品以无菌形式提供。
具体制备工艺包括如下步骤：
1)先将90.7mL纯化水加入搅拌烧杯内，水浴加热至90℃，加入0.3g羟苯甲酯搅拌溶解。
2)降温至50℃，加入4g羧甲基纤维素钠并搅拌溶解。
3)降温至30℃，加入4g甘油搅拌至完全溶解。
4)加入0.2g乙二胺四乙酸二钠搅拌至完全溶解。
5)加入0.4g重组人源Ⅲ型胶原蛋白、0.4g重组人源Ⅳ型胶原蛋白搅拌至完全溶解。
6)慢慢搅拌，待温度降至30℃以下，室温静置溶涨，至没有明显气泡。
7)灌装封口后，经电子束辐照灭菌，辐照剂量为20kGy。
实施例9
本实施例提供一种含重组人源化胶原蛋白的修复凝胶，由如下各组分制成：功效物重组人源Ⅲ型胶原蛋白0.4％、重组人源Ⅳ型胶原蛋白0.4％，增稠剂羧甲基纤维素钠4％、保湿剂甘油4％、耦合剂乙二胺四乙酸二钠0.2％、医用防腐剂羟苯甲酯0.3％、余量纯化水组成。经电子束辐照灭菌，产品以无菌形式提供。
具体制备工艺包括如下步骤：
1)先将90.7mL纯化水加入搅拌烧杯内，水浴加热至90℃，加入0.3g羟苯甲酯搅拌溶解。
2)降温至50℃，加入4g羧甲基纤维素钠并搅拌溶解。
3)降温至30℃，加入4g甘油搅拌至完全溶解。
4)加入0.2g乙二胺四乙酸二钠搅拌至完全溶解。
5)加入0.4g重组人源Ⅲ型胶原蛋白、0.4g重组人源Ⅳ型胶原蛋白搅拌至完全溶解。
6)慢慢搅拌，待温度降至30℃以下，室温静置溶涨，至没有明显气泡。
7)灌装封口后，经电子束辐照灭菌，辐照剂量为25kGy。
实施例10
本实施例提供一种含重组人源化胶原蛋白的修复凝胶，由如下各组分制成：功效物重组人源Ⅲ型胶原蛋白0.4％、重组人源Ⅳ型胶原蛋白0.4％，增稠剂羧甲基纤维素钠4％、保湿剂甘油4％、耦合剂乙二胺四乙酸二钠0.2％、医用防腐剂羟苯甲酯0.3％、余量纯化水组成。经电子束辐照灭菌，产品以无菌形式提供。
具体制备工艺包括如下步骤：
1)先将90.7mL纯化水加入搅拌烧杯内，水浴加热至90℃，加入0.3g羟苯甲酯搅拌溶解。
2)降温至50℃，加入4g羧甲基纤维素钠并搅拌溶解。
3)降温至30℃，加入4g甘油搅拌至完全溶解。
4)加入0.2g乙二胺四乙酸二钠搅拌至完全溶解。
5)加入0.4g重组人源Ⅲ型胶原蛋白、0.4g重组人源Ⅳ型胶原蛋白搅拌至完全溶解。
6)慢慢搅拌，待温度降至30℃以下，室温静置溶涨，至没有明显气泡。
7)灌装封口后，经电子束辐照灭菌，辐照剂量为30kGy。
对比例1
本对比例提供一种含重组人源化胶原蛋白的修复凝胶，由如下各组分制成：功效物重组人源Ⅲ型胶原蛋白0.4％、重组人源Ⅳ型胶原蛋白0.4％，增稠剂羧甲基纤维素钠6％、保湿剂甘油4％、耦合剂乙二胺四乙酸二钠0.2％、医用防腐剂羟苯甲酯0.3％、余量纯化水组成。经钴60辐照灭菌，产品以无菌形式提供。
具体制备工艺包括如下步骤：
1)先将88.7mL纯化水加入搅拌烧杯内，水浴加热至90℃，加入0.3g羟苯甲酯搅拌溶解。
2)降温至50℃，加入6g羧甲基纤维素钠并搅拌溶解。
3)降温至30℃，加入4g甘油搅拌至完全溶解。
4)加入0.2g乙二胺四乙酸二钠搅拌至完全溶解。
5)加入0.4g重组人源Ⅲ型胶原蛋白、0.4g重组人源Ⅳ型胶原蛋白搅拌至完全溶解。
6)慢慢搅拌，待温度降至30℃以下，室温静置溶涨，至没有明显气泡。
7)灌装封口后，经钴60辐照灭菌，辐照剂量为20kGy。
对比例2
本对比例提供一种含重组人源化胶原蛋白的修复凝胶，由如下各组分制成：功效物重组人源Ⅲ型胶原蛋白0.4％、重组人源Ⅳ型胶原蛋白0.4％，增稠剂羧甲基纤维素钠4％、保湿剂甘油4％、耦合剂乙二胺四乙酸二钠0.2％、医用防腐剂羟苯甲酯0.3％、余量纯化水组成。经电子束辐照灭菌，产品以无菌形式提供。
具体制备工艺包括如下步骤：
1)先将90.7mL纯化水加入搅拌烧杯内，水浴加热至90℃，加入0.3g羟苯甲酯搅拌溶解。
2)降温至50℃，加入4g羧甲基纤维素钠并搅拌溶解。
3)降温至30℃，加入4g甘油搅拌至完全溶解。
4)加入0.2g乙二胺四乙酸二钠搅拌至完全溶解。
5)加入0.4g重组人源Ⅲ型胶原蛋白、0.4g重组人源Ⅳ型胶原蛋白搅拌至完全溶解。
6)慢慢搅拌，待温度降至30℃以下，室温静置溶涨，至没有明显气泡。
7)灌装封口后，经电子束辐照灭菌，辐照剂量为50kGy。
实施例性能测试结果如下：
Figure BDA0003804465740000141
实施例1-10的PH值都为6.8，对皮肤无刺激，有利于保持创面酸碱度，便于创面修复。实施例1-10的粘度均在500cp以上，成膜性较好，能覆盖创面形成物理保护膜，保持创面湿润环境，有利于创面修复。实施例5-7的产品形态如图1所示，实施例7的粘度高于实施例5和6，成膜性相对较好，说明羧甲基纤维素钠含量的增加有助于提升粘度，便于成膜。实施例10的粘度相对实施例8、9低，流动性较大，成膜性相对较差，说明辐照剂量的增加会导致粘度降低，流动性变大，这一点在图2展示的对比例1和对比例2中得到了进一步体现，采用超过本发明辐照剂量的方式进行辐照，其流动性将导致难以成膜。对在所有实施例中，最终样品6个月内均无菌落生成。如图3所示，实施例1中样品在辐照前、辐照后和辐照后90天的照片可以看出，并无菌落生成。
综上，本申请提供的含重组人源化胶原蛋白的修复凝胶，同时添加了小分子的重组人源Ⅲ型胶原蛋白(分子量约为35-60KD)和大分子的重组人源Ⅳ型胶原蛋白(分子量约为150-200KD)，两者合理配比后，既能补充创面缺失的Ⅲ型胶原蛋白，连接受损皮肤真皮层断裂的胶原纤维，促进皮肤细胞再生，又能在创面表面形成Ⅳ型胶原蛋白保护膜，作为细胞生长的依附和支架。
本申请的修复凝胶是一种含重组人源化胶原蛋白的水凝胶制剂，可在创面表面形成双膜结构(物理保护膜+生物活性膜)，加强水合作用，减少水分蒸发，修复皮肤屏障，同时可以避免创面受到微生物等外界环境的伤害。
本申请修复凝胶中使用重组人源化胶原蛋白，避免了来自动物组织的胶原蛋白所存在的病毒隐患，且重组人源化胶原蛋白进入人体后，免疫排异反应大大减少，具有更好的生物相容性。更进一步的，本申请修复凝胶经电子束辐照灭菌，不仅可以杀菌防止创面受到微生物感染，还能促进胶原蛋白发生交联，形成更稳定的网状结构，进一步提升修复凝胶的机械强度。
应该注意的是上述实施例对本发明进行说明而不是对本发明进行限制，并且本领域技术人员在不脱离所附权利要求的范围的情况下可设计出替换实施例。

Claims (14)

1.一种含重组人源化胶原蛋白的修复凝胶，其特征在于，制备所述修复凝胶的原料包括按质量百分比计算的以下组分：功效物0.01-2％、增稠剂0.5-8％，保湿剂2-10％、耦合剂0.1-1％、医用防腐剂0.01-1％，余量为纯化水；所述功效物包括重组人源Ⅲ型胶原蛋白和重组人源Ⅳ型胶原蛋白。
2.根据权利要求1所述含重组人源化胶原蛋白的修复凝胶，其特征在于：所述重组人源Ⅲ型胶原蛋白的分子量为35-60KD，所述重组人源Ⅳ型胶原蛋白的分子量为150-200KD。
3.根据权利要求1或2所述含重组人源化胶原蛋白的修复凝胶，其特征在于：所述重组人源Ⅲ型胶原蛋白和重组人源Ⅳ型胶原蛋白的质量比为1:1-1:2。
4.根据权利要求1或2所述含重组人源化胶原蛋白的修复凝胶，其特征在于：所述重组人源Ⅲ型胶原蛋白和所述重组人源Ⅳ型胶原蛋白的质量和在制备所述修复凝胶的原料中质量百分比为0.01-2％。
5.根据权利要求1所述含重组人源化胶原蛋白的修复凝胶，其特征在于：所述增稠剂包括羧甲基纤维素钠，所述羧甲基纤维素钠在制备所述修复凝胶的原料中质量百分比为0.5-8％。
6.根据权利要求1所述含重组人源化胶原蛋白的修复凝胶，其特征在于：所述保湿剂包括甘油，所述甘油在制备所述修复凝胶的原料中质量百分比为2-10％。
7.根据权利要求1所述含重组人源化胶原蛋白的修复凝胶，其特征在于：所述耦合剂包括乙二胺四乙酸二钠，所述乙二胺四乙酸二钠在制备所述修复凝胶的原料中质量百分比为0.1-1％。
8.根据权利要求1所述含重组人源化胶原蛋白的修复凝胶，其特征在于：所述医用防腐剂包括羟苯甲酯，所述羟苯甲酯在制备所述修复凝胶的原料中质量百分比为0.01-1％。
9.根据权利要求1所述含重组人源化胶原蛋白的修复凝胶，其特征在于：所述修复凝胶的粘度为500-1000cp；和/或所述修复凝胶的pH值为4.0-8.0。
10.一种如权利要求1-9任一项所述含重组人源化胶原蛋白的修复凝胶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、将纯化水放入容器中加热，当容器中液体加热至第一温度后加入医用防腐剂搅拌溶解；
S2、对容器中的液体降温，当容器中液体自第一温度降至第二温度，向容器中加入增稠剂并搅拌溶解；
S3、当容器中液体自第二温度降至第三温度，向容器中加入保湿剂并搅拌至完全溶解；之后向容器中加入耦合剂并搅拌至完全溶解，然后向容器中加入功效物并搅拌至完全溶解；
S4、待容器中液体温度低于第三温度时，室温下静置溶涨，直至没有明显气泡；
S5、将容器封口后灭菌，制得所述的修复凝胶。
11.根据权利要求10所述的制备方法，其特征在于：步骤S5中所述的灭菌方法包括采用钴60辐照灭菌或电子束辐照灭菌。
12.根据权利要求11所述的制备方法，其特征在于：所述钴60辐照灭菌的辐照剂量为3.5-4.5kGy；所述电子束辐照灭菌的辐照剂量为20-40kGy。
13.一种如权利要求1-9任一项所述含重组人源化胶原蛋白的修复凝胶于非慢性创面覆盖中的应用。
14.根据权利要求13所述的应用，其特征在于：所述非慢性创面包括手术后缝合创面。
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