CN112842976A - 酵母菌发酵的桦树汁及其在抗炎化妆品组合物中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种酵母菌发酵的桦树汁，其是通过采用酵母菌作为菌种在包含桦树汁和任选的燕麦仁粉的培养基中进行发酵得到的。本发明还涉及一种生产酵母菌发酵的桦树汁的方法，其包括采用酵母菌作为菌种在包含桦树汁和任选的燕麦仁粉的培养基中进行发酵的步骤。
Description
技术领域
本发明涉及酵母菌发酵的桦树汁及其在抗炎化妆品组合物中的应用，其中所述酵母菌发酵的桦树汁是通过采用酵母菌作为菌种在包含桦树汁和任选的燕麦仁粉的培养基中进行发酵而得到的。
背景技术
随着社会经济水平变化及化妆品种类与成分复杂化，敏感性皮肤出现及接受刺激的可能性增加,加上人们对皮肤健康意识及审美标准的提高，敏感皮肤的关注度逐渐上升。
桦树为桦木科落叶乔木，目前全球大约有100个品种，主要分布于北温带和寒温带。其中，我国境内约有29个品种，主要分布在东北、西北、华北和西南等地。桦树汁是白桦树的生命之源，富含人体需要的多种果糖、氨基酸、维生素、生物素、矿物质等，具有良好的抗炎舒敏功效，能够抑制由各种原因引起的皮肤红斑、水肿、刺痛、发热、瘙痒、血管扩张问题。
酵母菌发酵能够富集营养成分，降低毒副作用，在化妆品领域的应用具有广阔前景。目前，使用酵母菌发酵的桦树汁用于抗炎领域还没有报道。
为探索发酵的桦树汁的应用，本发明人采用酵母菌作为菌种，以桦树汁为主要底物，任选地向其中添加促生长成分，例如燕麦仁粉，进行发酵工艺，所得酵母菌发酵的桦树汁具有良好的抗炎功效。
发明内容
本发明人经研究发现，采用酵母菌作为菌种，桦树汁作为主要底物，任选地向其中添加燕麦仁粉，进行发酵，可以得到一种具有改进性能的酵母菌发酵的桦树汁产物，其在具有桦树汁本身活性成分的同时还富含发酵工艺产生的活性成分，可作为抗炎化妆品组合物的活性原料。
一方面，本发明涉及一种生产酵母菌发酵的桦树汁的方法，其包括采用酵母菌作为菌种在包含桦树汁和任选的燕麦仁粉的培养基中进行发酵的步骤。
所述方法还包括过滤发酵中得到的发酵液，得到作为上清液的发酵的桦树汁滤液(即作为产物的“酵母菌发酵的桦树汁”)，和得到酵母菌菌体副产物。
进一步地，所述方法还包括破碎所得到的酵母菌菌体，然后进行过滤，得到作为上清液的可溶性酵母菌溶胞物，和将所得酵母菌溶胞物与所述发酵的桦树汁滤液混合，过滤，得到发酵的桦树汁滤液产物 (即作为优选产物的“酵母菌发酵的桦树汁”)。
在一个优选的实施方案中，所述方法包括下述步骤：
(1)采用酵母菌作为菌种，在包含桦树汁和任选的燕麦仁粉的培养基中进行发酵，得到发酵液产物；
(2)过滤所述发酵液产物，分别得到酵母菌菌体和发酵的桦树汁滤液；
(3)破碎所述酵母菌菌体，然后进行过滤，得到作为上清液的可溶性酵母菌溶胞物；和
(4)将所得酵母菌溶胞物与所述发酵的桦树汁滤液混合，过滤，得到发酵的桦树汁滤液产物(即作为优选产物的“酵母菌发酵的桦树汁”)。
本发明中所采用的酵母菌可包括酿酒酵母菌、布拉迪酵母菌、解脂耶氏酵母菌等，其中优选酿酒酵母菌。所述酵母菌可以干酵母菌形式商购，例如商购于杜邦丹尼斯克有限公司、安琪酵母菌有限公司等；或者，所述酵母菌也可由野生酵母菌种扩大培养得到。
本发明中所涉及的桦树汁得自桦木科桦树属，其可来自白桦 (Betula alba)、柔毛桦(Betula pubescens)、垂枝桦(Betula Pendula) 和亚洲白桦(Betula platyphyl la)等品种。所述桦树汁为在解冻至早春发叶之间，人工在桦树的树干基部钻孔收集而得的无色透明、无沉淀、无杂物，具有桦树清香营养丰富的汁液。所述桦树汁可商购得到并原样采用，例如可购自大兴安岭超越野生浆果开发有限责任公司。
本发明中可采用的桦树汁为桦树汁原液或浓缩的桦树汁，其中浓缩的桦树汁的浓缩倍数为约1.2-12倍，优选约1.5-6倍，更优选约 2-4倍。
所述浓缩的桦树汁是通过将商购得到的桦树汁产品进行浓缩得到的。浓缩方法是本领域已知的，例如加热浓缩、低温真空浓缩、膜浓缩等。在本发明中，优选通过低温冷冻浓缩或膜浓缩工艺进行浓缩，例如，将商购的桦树汁原液输入低温干燥设备，降温至约-40℃至- 70℃，抽真空至约0.1-30Pa而进行低温真空浓缩，从而得到不同浓缩倍数的浓缩桦树汁。
上述步骤(1)发酵是本领域已知的。例如，按照约60-70％(v/v)的装液量，将桦树汁培养基加入约100-12000L发酵罐中，在约105℃下灭菌约20-30分钟；以发酵培养基体积为准，将酵母菌种子液在无菌条件下接入发酵罐中，在约25-30℃温度和约180-350rmp的转速下进行搅拌，在约1.2-2.0vvm的通气量下，连续发酵约8-48小时，停罐，即完成发酵过程，得到发酵产物。
其中，上述酵母菌种子液可通过使活性干酵母菌复水得到的。活性干酵母菌复水是本领域已知的，例如，按照约0.1-0.8g/L，优选约0.3-0.5g/L桦树汁底物的用量称取活性干酵母菌，将其加入到约 5-15倍体积无菌水中，在约28-35℃下复水约15-20分钟，即得到酵母菌种子液。或者，酵母菌种子液也可以通过将野生酵母菌在培养基中扩大培养得到，这种培养是本领域已知的。
所述桦树汁培养基可以采用桦树汁、尤其是浓缩的桦树汁，例如浓缩约1.5-6倍的桦树汁作为底物来制备。桦树汁在所述桦树汁培养基中的含量在约92％以上，优选约94％以上,基于所述桦树汁培养基的总重量。
优选地，可将燕麦仁粉加入桦树汁培养基中。所述燕麦仁粉可商购得到，例如可购自康跃科技有限公司。所述燕麦仁粉在所述桦树汁培养基中的含量通常为约0-3％，优选约0.5-2％，基于所述桦树汁培养基的总重量。
进一步地，可将pH调节剂加入到所述桦树汁培养基中，以将桦树汁培养基的pH调节到4.5-5.0。所述pH调节剂是本领域已知的，例如，包括但不限于乳酸、柠檬酸、乳酸钠、柠檬酸钠和氢氧化钠，优选柠檬酸钠。
此外，还可以将促进酵母菌生长的无机盐加入到培养基中，其实例包括但不限于磷酸二氢钾、无水硫酸镁、磷酸二氢钠等。所述无机盐的用量是本领域已知的，例如约0.05-0.2％，基于所述桦树汁培养基的总重量。
在包含燕麦仁粉、pH调节剂和/或无机盐的情况下，将这些物质加入桦树汁中即可制备桦树汁培养基。
上述步骤(2)离心和过滤所得发酵产物是本领域已知的。通常，在例如高速离心机上，在约6000-10000rpm下，进行约15-30分钟。所述离心和过滤步骤将发酵产物中的酵母菌菌体和发酵的桦树汁滤液 (上清液)分开。
上述步骤(3)高压破碎所得酵母菌菌体是本领域已知的。例如，使用3-5倍质量的发酵桦树汁将所得酵母菌菌体重悬，得到酵母菌菌体的悬浮液，然后采用高压细胞破碎机，在1-2升/分钟的流速和 1000-1200巴压力下均匀处理所述悬浮液，直至酵母菌菌体的破碎率达到95％以上。然后，将经破碎的酵母菌菌体液离心过滤，通常在6000-10000rpm下进行15-30分钟，所得上清液即为可溶性酵母菌溶胞物。
上述步骤(4)中，将步骤(3)所得可溶性酵母菌溶胞物与步骤(2)所得发酵的桦树汁滤液混合均匀，然后进一步过滤，所得滤液即为酵母菌发酵的桦树汁滤液产物。
所述方法可进一步包括将所得产物经超高温瞬时杀菌，其中杀菌温度为约115±5℃，时间为约10-30秒；然后，将杀菌过的产物转至存储罐存储。
通过上述方法得到的酵母菌发酵的桦树汁色浅、透明，其包含 100-1000mg/L的多酚，2-10g/L的多糖，0.05-1.6％的蛋白质，和300- 1100mg/L的核酸。因此，所得酵母菌发酵的桦树汁含有丰富的活性营养物，可以作为原料营养物用于抗炎化妆品组合物中，显示了显著的抗炎功效。
另一方面，本发明涉及一种酵母菌发酵的桦树汁，其是通过采用酵母菌作为菌种在包含桦树汁和任选的燕麦仁粉的培养基中进行发酵得到的。
通常，所述酵母菌发酵的桦树汁包含100-1000mg/L的多酚，2- 10g/L的多糖，0.05-1.6％的蛋白质，和300-1100mg/L的核酸。
又一方面，本发明涉及酵母菌发酵的桦树汁在抗炎化妆品组合物中的用途。
再一方面，本发明涉及一种抗炎化妆品组合物，其包含(A)酵母菌发酵的桦树汁。所述抗炎化妆品组合物显示了显著的抗炎护肤功效。
所述酵母菌发酵的桦树汁在所述抗炎化妆品组合物中的用量可在宽范围内变化，通常为大于0至小于100％，优选为约20-95％。
除了所述(A)酵母菌发酵的桦树汁外，所述抗炎化妆品组合物还可以任选地包含(B)化妆品组合物中常用的成分。所述常用成分是本领域已知的，包括例如媒介物、活性成分和辅料等。本领域技术人员可根据需要选择组分(B)的类型和用量，例如，组分(B)的含量为约2- 85％重量，基于所述抗炎化妆品组合物的总重量。
所述媒介物是本领域已知的，包括例如稀释剂、分散剂或载体等。其实例包括但不限于乙醇、双丙甘醇、丁二醇等。所述媒介物在所述抗炎化妆品组合物中的含量是本领域已知的，例如，其通常占组分(B) 总重量的约0.3-30％。
所述活性成分是本领域已知的，包括例如润肤剂、保湿剂、抗炎活性成分等。
所述润肤剂的实例包括但不限于橄榄油、澳洲坚果油、甜杏仁油、葡萄籽油、鳄梨油、玉米油、芝麻油、大豆油、花生油、白池花籽油、红花籽油、狗牙蔷薇果油、刺阿干树仁油、霍霍巴籽油、向日葵籽油、毛瑞榈果油、角鲨烷、棕榈酸乙基己酯、肉豆蔻酸异丙酯、氢化聚异丁烯、异十六烷、异十二烷、碳酸二乙基己酯、碳酸二辛酯、月桂酰肌氨酸异丙酯、异壬酸异壬酯、氢化聚癸烯、甘油三(乙基己酸)酯、鲸蜡醇乙基己酸酯、双-二乙氧基二甘醇环己烷1,4-二羧酸酯、辛酸/癸酸甘油三酯、油醇芥酸酯、辛基十二醇肉豆蔻酸酯、辛基十二醇、聚二甲基硅氧烷、辛基聚甲基硅氧烷、鲸蜡基聚二甲基硅氧烷、环五聚二甲基硅氧烷等的一种或多种。固体润肤剂的实例包括但不限于鲸蜡醇、硬脂醇、鲸蜡硬脂醇、山嵛醇、鲨肝醇、月桂酸、肉豆蔻酸、棕榈酸、硬脂酸、蜂蜡、小烛树蜡、巴西棕榈蜡、羊毛脂、地蜡、霍霍巴籽蜡、石蜡、微晶蜡、氢化米糠蜡、氢化椰油甘油酯类、甘油山嵛酸酯/二十酸酯、肉豆蔻醇肉豆蔻酸酯、双-二甘油多酰基己二酸酯-2、牛油果树果脂、木鲁星果棕籽脂等中的一种或多种。所述润肤剂在所述抗炎化妆品组合物中的含量是本领域已知的，例如其通常占组分(B)总重量的约0.5-60％。
所述保湿剂的实例包括但不限于甘油、双甘油、丁二醇、丙二醇、 1,3-丙二醇、双丙甘醇、1,2-戊二醇、聚乙二醇-8、聚乙二醇-32、甲基葡糖醇聚醚-10、甲基葡糖醇聚醚-20、PEG/PPG-17/6共聚物、甘油聚醚-7、甘油聚醚-26、甘油葡糖苷、PPG-10甲基葡糖醚、PPG- 20甲基葡糖醚、PEG/PPG/聚丁二醇-8/5/3甘油、蔗糖、海藻糖、鼠李糖、甘露糖、棉子糖、甜菜碱、赤藓醇、木糖醇、尿素、甘油聚醚 -5乳酸酯、透明质酸钠、水解透明质酸钠、乙酰化透明质酸钠、聚谷氨酸钠、水解小核菌胶、出芽短梗酶多糖、银耳多糖、酸豆籽多糖等中的一种或多种。所述保湿剂在所述抗炎化妆品组合物中的含量是本领域已知的，例如，其通常占组分(B)总重量的约0.5-40％。
所述抗炎活性成分的实例包括但不限于甘草酸二钾、马齿苋 (PORTULACAOLERACEA)提取物、泛醇、尿囊素、生物糖胶-1、β-葡聚糖、果聚糖、黄芩(SCUTELLARIABAICALENSIS)根提取物、欧洲七叶树(AESCULUS HIPPOCASTANUM)提取物、红没药醇、4-叔丁基环己醇、神经酰胺3、氢化卵磷脂、光果甘草(GLYCYRRHIZA GLABRA)提取物、水解蜂王浆蛋白质、谷维素、植物鞘氨醇、五羟黄酮(槲皮素)、姜根提取物、迷迭香叶提取物、白花黄春菊提取物、金盏花提取物、积雪草提取物、柚皮苷、橙皮苷等中的一种或多种。所述抗炎活性成分也可以是糖皮质激素或钙调神经磷酸酶抑制剂中的一种或多种，例如可的松、红霉素、糠酸莫米松、丙酸氟替卡松、他克莫司、吡美莫司等。所述抗炎活性成分在所述抗炎化妆品组合物中的含量是本领域已知的，例如，其通常占组分(B)总重量的约0.01-10％。
所述辅料是本领域已知的，包括例如乳化剂、增稠剂、防腐剂、香料等。
所述乳化剂的实例包括但不限于鲸蜡硬脂醇橄榄油酸酯、山梨坦橄榄油酸酯、聚山梨醇酯-60、聚山梨醇酯-80、甲基葡糖倍半硬脂酸酯、PEG-20甲基葡糖倍半硬脂酸酯、PEG-40氢化蓖麻油、PPG-26-丁醇聚醚-26、PEG-4聚甘油-2硬脂酸酯、PEG-60氢化蓖麻油、硬脂醇聚醚-2、硬脂醇聚醚-21、PPG-13-癸基十四醇聚醚-24、鲸蜡硬脂基葡糖苷、PEG-100硬脂酸酯、甘油硬脂酸酯、甘油硬脂酸酯SE、椰油基葡糖苷、鲸蜡硬脂醇聚醚-25、PEG-40硬脂酸酯、聚甘油-3甲基葡糖二硬脂酸酯、甘油硬脂酸酯柠檬酸酯、聚甘油-10硬脂酸酯、聚甘油-10肉豆蔻酸酯、聚甘油-10二油酸酯、聚甘油-10月桂酸酯、聚甘油-10异硬脂酸酯、聚甘油-10油酸酯、聚甘油-10二异硬脂酸酯、聚甘油-6月桂酸酯、聚甘油-6肉豆蔻酸酯、蔗糖硬脂酸酯、蔗糖多硬脂酸酯等中的一种或多种。所述乳化剂在所述抗炎化妆品组合物中的含量是本领域已知的，例如，其通常占组分(B)总重量的约0.5- 10％。
所述增稠剂的实例包括但不限于卡波姆类、丙烯酸(酯)类及其衍生物、黄原胶、阿拉伯胶、聚乙二醇-14M、聚乙二醇-90M、琥珀酰聚糖、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素等高分子聚合物中的一种或多种。所述增稠剂在所述抗炎化妆品组合物中的含量是本领域已知的，例如，其通常占组分(B)总重量的约0.1-10％。
所述防腐剂的实例包括但不限于羟苯甲酯、羟苯丙酯、苯氧乙醇、苯甲醇、苯乙醇、双(羟甲基)咪唑烷基脲、山梨酸钾、苯甲酸钠、氯苯甘醚、脱氢乙酸钠、辛酰羟肟酸、1,2-己二醇、1,2-戊二醇、对羟基苯乙酮、辛甘醇、甘油辛酸酯、十一碳烯酸甘油酯、山梨坦辛酸酯、乙基己基甘油、牡丹根提取物等中的一种或多种。所述防腐剂在所述抗炎化妆品组合物中的含量是本领域已知的，例如，其通常占组分(B) 总重量的约0.01-2％。
本发明的抗炎化妆品组合物可以通过本领域已知的任何合适的方法制备。例如，使用化妆品领域中常用的溶解槽、乳化锅、分散器、输送泵等设备制备。制备时先将水溶性物质投入水相溶解釜，将油溶性物质投入油相溶解釜，将两个釜的温度加热至约80℃，其中对于易结块的原料，可先用分散器将其预分散。待溶解完成后将油相和水相输送至乳化锅中，均质乳化约5-15分钟。乳化完成后将料体温度降至常温，加入任选的香精、防腐剂等，并视需要调节产物的pH。相关检测指标都合格后方可灌装出货。以上制备方法可根据剂型要求进行删减或调整。
所述抗炎化妆品组合物可以是化妆水、喷雾、乳液、膏、霜或凝胶等各种剂型。
实施例
以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。但是，应当理解为，这些实施例、对比例仅仅是用于更详细地说明本发明，而不应理解为用于以任何形式限制本发明所附权利要求书的范围。
实施例1
(1)使活性干酵母菌复水
将干酵母菌按1:15的比例投放于30℃的温水中复水15分钟，得到酵母菌种子液。
(2)桦树汁培养基的制备
以东北大兴安岭采集的桦树汁原液(brix 1.1)为底物，向其中添加2％燕麦仁粉，添加0.06％磷酸二氢钾和0.04％无水硫酸镁，使用1M 柠檬酸钠水溶液调整桦树汁培养基的pH为4.5。
(3)接种发酵
按照70％(v/v)体积装液量，将步骤(2)所配制的桦树汁培养基加入到200L发酵罐中，105℃灭菌20分钟；将适量酵母菌种子液投入发酵培养基中，于30℃、搅拌转速320rmp、通气量1.5vvm的条件下，连续发酵36小时，停罐，得到发酵液产物。
(4)离心分离，得到发酵滤液和菌体
使用蝶式离心机处理发酵液产物，离其中心转速5000rpm，离心时间25分钟，得到作为上清液的发酵的桦树汁滤液产物，并将其打入储存罐。
取发酵的桦树汁滤液产物，测定其中的多糖、蛋白质、核酸、总酚含量，结果如表1所示。
实施例2
(1)使活性干酵母菌复水
将干酵母菌按1:15的比例投放于30℃的温水中复水15分钟，得到酵母菌种子液。
(2)桦树汁培养基的制备
以东北大兴安岭采集的桦树汁的浓缩液(浓缩3倍，brix 3.23) 为底物，向其中添加2％燕麦仁粉，添加0.06％磷酸二氢钾和0.04％无水硫酸镁，使用1M柠檬酸钠水溶液调整桦树汁培养基的pH为4.5。
(3)接种发酵
按照70％(v/v)体积装液量，将步骤(2)所配制的桦树汁培养基加入到200L发酵罐中，105℃灭菌20分钟；将适量酵母菌种子液投入发酵培养基中，于30℃、搅拌转速320rmp、通气量1.5vvm的条件下，连续发酵36小时，停罐，得到发酵液产物。
(4)离心分离，得到发酵滤液和菌体
使用蝶式离心机处理发酵液产物，其中离心转速为5000rpm，离心时间25分钟，得到作为上清液的发酵的桦树汁滤液产物，并将其打入储存罐。
取发酵的桦树汁滤液产物，测定其中的多糖、蛋白质、核酸、总酚含量，结果如表1所示。
实施例3
(1)使活性干酵母菌复水
将干酵母菌按1:15的比例投放于35℃的温水中复水15分钟，得到酵母菌种子液。
(2)桦树汁培养基的制备
以东北大兴安岭采集的桦树汁原液(brix 1.1)为底物，添加0.06％磷酸二氢钾和0.04％无水硫酸镁，使用1M柠檬酸钠水溶液调整桦树汁培养基的pH为4.5。
(3)接种发酵
按照70％(v/v)体积装液量，将步骤(2)所配制的桦树汁培养基加入到200L发酵罐中，105℃灭菌20分钟；将适量酵母菌种子液投入发酵培养基中，于30℃、搅拌转速320rmp、通气量1.5vvm的条件下，连续发酵36小时，停罐，得到发酵液产物。
(4)离心分离，得到发酵滤液和菌体
使用蝶式离心机处理发酵液产物，其中离心转速5000rpm，离心时间25分钟，得到作为上清液的发酵的桦树汁滤液产物，并将其打入储存罐。
取发酵的桦树汁滤液产物，测定其中的多糖、蛋白质、核酸、总酚含量，结果如表1所示。
实施例4
(1)使活性干酵母菌复水
将干酵母菌按1:15的比例投放于30℃的温水中复水15分钟，得到酵母菌种子液。
(2)桦树汁培养基的制备
以东北大兴安岭采集的桦树汁的浓缩液(浓缩3倍，brix 3.2)为底物，添加0.06％磷酸二氢钾和0.04％无水硫酸镁，使用1M柠檬酸钠水溶液调整桦树汁培养基的pH为4.5。
(3)接种发酵
按照70％(v/v)体积装液量，将步骤(2)所配制的桦树汁培养基加入到200L发酵罐中，105℃灭菌20分钟；将适量酵母菌种子液投入发酵培养基中，于30℃、搅拌转速320rmp、通气量1.5vvm的条件下，连续发酵36小时，停罐，得到发酵液产物。
(4)离心分离，得到发酵滤液和菌体
使用蝶式离心机处理发酵液产物，离心转速为5000rpm，离心时间25分钟，得到作为上清液的发酵的桦树汁滤液产物，并将其打入储存罐。
取发酵的桦树汁滤液产物，测定其中的多糖、蛋白质、核酸、总酚含量，结果如表1所示。
实施例5
与实施例1类似，包括其中所述的步骤(1)-(4)，但进一步包括如下步骤：
(5)将所得上清液打入储存罐，和将作为菌泥得到的酵母菌菌体用5倍体积上清液重悬，得到酵母菌悬液；利用高压破碎设备，在1000 巴、1.2升/分钟的条件下，对该酵母菌悬液进行高压均质破碎；然后使用硅藻土板框过滤，得到可溶性的酵母菌溶胞物。
(6)将步骤(5)所得酵母菌溶胞物与步骤(4)所得发酵的桦树汁滤液混合，然后使用硅藻土板框过滤，得到最终的酵母菌发酵的桦树汁产物。
取最终的酵母菌发酵的桦树汁产物，测定其中的多糖、蛋白质、核酸、总酚含量，结果如表1所示。
实施例6
与实施例2类似，包括其中所述的步骤(1)-(4)，但进一步包括如下步骤：
(5)将所得上清液打入储存罐，和将作为菌泥得到的酵母菌菌体用 5倍体积上清液重悬，得到酵母菌悬液；利用高压破碎设备，在1000 巴、1.2升/分钟的条件下，对该酵母菌悬液进行高压均质破碎；然后使用硅藻土板框过滤，得到可溶性的酵母菌溶胞物。
(6)将步骤(5)所得酵母菌溶胞物与步骤(4)所得发酵的桦树汁滤液混合，然后使用硅藻土板框过滤，得到最终的酵母菌发酵的桦树汁产物。
取最终的酵母菌发酵的桦树汁产物，测定其中的多糖、蛋白质、核酸、总酚含量，结果如表1所示。
实施例7
与实施例3类似，包括其中的所述的步骤(1)-(4)，但进一步包括如下步骤：
(5)将所得上清液打入储存罐，和将作为菌泥得到的酵母菌菌体用 5倍体积上清液重悬，得到酵母菌悬液；利用高压破碎设备，在1000 巴、1.2升/分钟的条件下，对该酵母菌悬液进行高压均质破碎；然后使用硅藻土板框过滤，得到可溶性的酵母菌溶胞物。
(6)将步骤(6)所得酵母菌溶胞物与步骤(4)所得发酵的桦树汁滤液混合，然后使用硅藻土板框过滤，得到最终的酵母菌发酵的桦树汁产物。
取最终的酵母菌发酵的桦树汁产物，测定其中的多糖、蛋白质、核酸、总酚含量，结果如表1所示。
实施例8
与实施例4类似，包括其中所述的步骤(1)-(4)，但进一步包括如下步骤：
(5)将所得上清液打入储存罐，和将作为菌泥得到的酵母菌菌体用 5倍体积上清液重悬，得到酵母菌悬液；利用高压破碎设备，在1000 巴、1.2升/分钟的条件下，对该酵母菌悬液进行高压均质破碎；然后使用硅藻土板框过滤，得到可溶性的酵母菌溶胞物。
(6)将步骤(5)所得酵母菌溶胞物与步骤(4)所得发酵的桦树汁滤液混合，然后使用硅藻土板框过滤，得到最终的酵母菌发酵的桦树汁产物。
取最终的酵母菌发酵的桦树汁产物，测定其中的多糖、蛋白质、核酸、总酚含量，结果如表1所示。
表1:发酵的桦树汁滤液产物的总酚、多糖、蛋白质、核酸含量
实施例9：发酵的桦树汁滤液的抗炎功效测试
在该实施例中，根据RBL-2H3细胞释放组胺情况和斑马鱼肥大细胞脱颗粒影响，评价实施例1-8中发酵的桦树汁滤液产物的抗炎功效，具体如下。
(1)RBL-2H3细胞释放组胺情况评价
对数生长期RBL-2H3细胞铺满培养瓶底后用含0.25％胰蛋白质酶， 0.03％EDTA的消化液消化细胞，1200rpm，5分钟离心；1倍台氏液重悬计数，稀释到1*104/mL；再次1200rpm，5分钟离心去上清。模型组取700uL细胞悬液离心后用台氏液重悬，37℃放置30分钟。样品组取700uL细胞悬液离心后分别用实施例1-8发酵滤液重悬，37℃放置30分钟。
将以上样品混匀后分装到3管，每管200uL；模型组和8个样品组：加50uL的48/80溶液到细胞悬液，终浓度为10ug/mL，37℃放置20分钟。每组3个重复。
组胺测定：将上述各组样本置入冰盒冷却10分钟以终止反应。将反应终止后的样本离心(4℃，1500rpm，30分钟)，使细胞沉淀在 EP管底部，转移上清到新的离心管。以250μL的1倍台氏液重悬沉淀的细胞，置入90℃水浴锅加热，5分钟后取出，立即置入冰盒，待样本彻底冷却后取出，再次置入90℃水浴锅加热，反复冻融数次，破碎细胞。将上清和细胞液稀释10倍，原液于-20℃冰箱保存。稀释后的样品采用进口组胺试剂盒进行组胺测定并计算。组胺释放率计算公式为：
组胺释放率(％)＝胞外组胺释放量/(胞外组胺释放量+胞内组胺量)*100％
测试结果如表2所示。
(2)斑马鱼肥大细胞脱颗粒情况
收集AB野生型斑马鱼胚胎，在28.5℃培养箱中用E3 buffer培养至5dpf，每天换液。随机将5dpf的斑马鱼幼鱼以每孔10尾的数量转入48孔细胞培养板中分组，每组4个复孔。模型组以RO水(纯水)+15μg/ml P物质(SP)培养；阳性药组：60μg/ml酮替芬+15μ g/mlSP培养。样品组以发酵的桦树汁滤液+15μg/ml SP培养。
吸干各组孔内残余的E3 buffer并加入250μl对应各个组别的溶液，在28.5℃培养箱中避光反应60分钟。60分钟后，取各组上清液200ul于96孔细胞培养板中，再分别加入酶反应底物Na-苯甲酰 -DL-精氨酸-对硝基酰胺盐酸盐(BAPNA)使其浓度达到400μg/ml。将96孔板避光加盖放入28.5℃培养箱中反应2h，2h后测量一次全板405nm下的光吸收值，数值大小反映了斑马鱼肥大细胞的类胰蛋白质酶释放情况。
测试结果如表2所示。
表2：发酵的桦树汁滤液的抗炎情况
| 项目 | RBL-2H3释放量％ | 肥大细胞保护率％ |
| 桦树汁原液(未发酵) | 66.3 | 52 |
| 模型组 | 70.7 | 0 |
| 实施例1 | 43.6 | 95 |
| 实施例2 | 35.4 | 98 |
| 实施例3 | 54.6 | 64 |
| 实施例4 | 52.1 | 72 |
| 实施例5 | 40.2 | 96 |
| 实施例6 | 32.1 | 100 |
| 实施例7 | 50.1 | 71 |
| 实施例8 | 49.6 | 76 |
实施例10：抗炎喷雾
采用实施例1中制备的发酵的桦树汁滤液产物来制备抗炎喷雾，其配方如下：
| 成分 | 实验组 | 空白组 |
| 发酵的桦树汁滤液 | 95 | 0 |
| 水 | 0 | 95 |
| 苯甲酸钠 | 0.35 | 0.35 |
| 泛醇 | 0.65 | 0.65 |
| 1,2-戊二醇 | 4 | 4 |
所述抗炎喷雾的制备方法为：将所述发酵的桦树汁滤液产物、苯甲酸钠和戊二醇、泛醇混合后过滤，即得。
对18名自评为敏感性皮肤的志愿者进行半脸对照测试，测试周期 4周:
1)用Periscan PIM 3测试志愿者左右两侧面颊部位的血流灌注值；
2)用Neurometer CPT对志愿者左右两侧面颊部位的电流感觉阈值进行测定；
3)通过VISIA-CR采集志愿者在使用前后偏正光条件下的面部图形，利用IPP软件分析志愿者左右两侧面颊部位不同测试时间点同一测量区域的红斑面积。
结果显示，与使用对照组配方的一侧相比，使用实验组抗炎喷雾的面颊部位的血流灌注值显著下降，红斑面积显著减少，电流感觉阈值显著提高。
以上所述实施例的技术方案是本发明优选实施方式，在不脱离本发明原理的前提下还可以进行若干改进和变换，这些改进和变化也应视为在本发明的保护范围内。
Claims (18)
1.一种生产酵母菌发酵的桦树汁的方法，其包括采用酵母菌作为菌种在包含桦树汁和任选的燕麦仁粉的培养基中进行发酵的步骤。
2.权利要求1所述的方法，其包括下述步骤：
(1)采用酵母菌作为菌种，在包含桦树汁和任选的燕麦仁粉的培养基中进行发酵，得到发酵液产物；
(2)过滤所述发酵液产物，分别得到酵母菌菌体和发酵的桦树汁滤液；
(3)破碎所述酵母菌菌体，然后进行过滤，得到作为上清液的可溶性酵母菌溶胞物；和
(4)将所得酵母菌溶胞物与所述发酵的桦树汁滤液混合，过滤，得到发酵的桦树汁滤液产物，即作为产物的酵母菌发酵的桦树汁。
3.权利要求1或2所述的方法，其中所述桦树汁是浓缩倍数为1.2-12倍，优选1.5-6倍，更优选2-4倍的浓缩的桦树汁。
4.权利要求1-3任一项所述的方法，其中所述酵母菌选自酿酒酵母菌、布拉迪酵母菌和解脂耶氏酵母菌。
5.权利要求4所述的方法，其中所述酵母菌为酿酒酵母菌。
6.权利要求1-5任一项所述的方法，其中所述桦树汁在所述桦树汁培养基中的含量在92％以上，优选94％以上,基于所述桦树汁培养基的总重量。
7.权利要求1-6任一项所述的方法，所述燕麦仁粉在所述桦树汁培养基中的含量为0-3％，优选0.5-2％，基于所述桦树汁培养基的总重量。
8.可通过权利要求1-7任一项所述的方法得到的酵母菌发酵的桦树汁。
9.一种酵母菌发酵的桦树汁，其是通过采用酵母菌作为菌种在包含桦树汁和任选的燕麦仁粉的培养基中进行发酵而得到的。
10.权利要求8或9所述的酵母菌发酵的桦树汁，其包含100-1000mg/L的多酚，2-10g/L的多糖，0.05-1.6％的蛋白质和300-1100mg/L的核酸。
11.权利要求9或10所述的酵母菌发酵的桦树汁，其中所述桦树汁是浓缩倍数为1.2-12倍，优选1.5-6倍，更优选2-4倍的浓缩的桦树汁。
12.权利要求9-11任一项所述的酵母菌发酵的桦树汁，其中所述酵母菌选自酿酒酵母菌、布拉迪酵母菌和解脂耶氏酵母菌。
13.权利要求12所述的酵母菌发酵的桦树汁，其中所述酵母菌为酿酒酵母菌。
14.权利要求9-13任一项所述的酵母菌发酵的桦树汁，其中所述桦树汁在所述桦树汁培养基中的含量在92％以上，优选94％以上,基于所述桦树汁培养基的总重量。
15.权利要求9-14任一项所述的酵母菌发酵的桦树汁，所述燕麦仁粉在所述桦树汁培养基中的含量为0-3％，优选0.5-2％，基于所述桦树汁培养基的总重量。
16.权利要求8-15任一项所述的酵母菌发酵的桦树汁在抗炎化妆品组合物中的用途。
17.一种抗炎化妆品组合物，其包含权利要求8-15任一项所述的酵母菌发酵的桦树汁。
18.权利要求17所述的抗炎化妆品组合物，其中酵母菌发酵的桦树汁在所述抗炎化妆品组合物中的含量为大于0至小于100％，优选为20-95％，基于所述抗炎化妆品组合物的总重量。
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