CN112841029B - 一种利用广藿香气雾培根生产广藿香酮的方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种利用广藿香气雾培根生产广藿香酮的方法，包括以下步骤：1)广藿香的选取及无菌培养；2)广藿香无菌外植体增殖培养及生根培养；3)广藿香组培苗气雾栽培；4)广藿香气雾培根积累及提取广藿香酮。本发明将组织培养、气雾栽培组合一起培育中药广藿香，并通过诱导剂促进根内广藿香酮的积累，提供了一种新的广藿香培育方式及广藿香酮生产模式；气雾栽培的广藿香克服传统大田种植的病虫害影响、连作障碍等问题，生产周期短、生产效率提高一倍以上；并且采用诱导剂对采收的广藿香根进行离体培养，可以大大提升广藿香根中广藿香酮的含量，是生产天然真菌抑制剂广藿香酮的新途径。

Description

一种利用广藿香气雾培根生产广藿香酮的方法

技术领域

本发明属于广藿香技术领域，具体涉及一种利用广藿香气雾培根生产广藿香酮的方法。

背景技术

广藿香(Pogostemon cablin Benth)是广东道地药材之一，具有芳香化浊、发表解暑和开胃止呕等功能，是藿香正气水(丸、液)和抗病毒口服液等多种中成药的主要原料。现代药理学研究表明，广藿香中的主要功效成分为挥发油中的广藿香酮和广藿香醇，其中，广藿香酮为抗真菌活性成分，对多种皮肤真菌、植物病原真菌都具有抑制活性。目前国内外种植的广藿香品种中，只有石牌广藿香含有较高的广藿香酮(约0.2-0.3％)，而其它品种广藿香中的广藿香酮含量仅为0.1％左右。广藿香药用部分为地上茎和叶，而叶中几乎不含广藿香酮，广藿香酮主要在茎和根中含有，尤其是根中的含量极高。广藿香为多年生灌木状草本植物，生产上以扦插方式繁殖，植物的根系都由须根组成，产量极为有限，一株干重2千克的广藿香，其根重不到80g，可提取广藿香酮少。

因此，迫切需要提供一种新的广藿香培育技术，扩充药源，以获得更多的广藿香酮，提高广藿香酮的生产效率。

发明内容

有鉴于此，有必要针对上述的问题，提供一种生产效率高的利用广藿香气雾培根生产广藿香酮的方法。

本发明一种利用广藿香气雾培根生产广藿香酮的方法，包括以下步骤：

1)、广藿香的选取及无菌培养

选取无病虫害、健壮的石牌广藿香新枝的茎段或叶片作为外植体；经灭菌处理后接种至MS培养基上进行诱导培养，得到广藿香无菌外植体；

2)、广藿香无菌外植体增殖培养及生根培养

将广藿香无菌外植体接种至增殖培养基中，培养25～30天，得到广藿香丛生芽；将广藿香丛生芽转移到不含激素的MS培养基进行继代培养，得到广藿香无菌芽苗；

将广藿香无菌芽苗转移到生根培养基中培养20～30天，得到广藿香组培苗；

3)、广藿香组培苗气雾栽培

将广藿香组培苗移植到气雾栽培装置进行培养，并采用连续培养、多次收割的方式持续获得广藿香气雾培根；

4)、广藿香气雾培根积累及提取广藿香酮

将广藿香气雾培根置于可密封的容器中，利用诱导剂浸泡或喷洒离体的广藿香气雾培根，促进根内广藿香酮的积累；广藿香气雾培根干燥、粉碎后可提取广藿香酮。

作为优选的技术方案，所述茎段为带节的小段；所述叶片为广藿香顶芽下第2、第3对叶。

作为优选的技术方案，所述增殖培养基为MS+0.5～1.5mg/mL 6-BA；所述的继代培养周期为25～30天培养一代，继代培养两代。

作为优选的技术方案，所述生根培养基为MS+0.1mg/mL NAA。

作为优选的技术方案，所述的诱导培养、增殖培养及生根培养条件为：温度25℃，光照培养16小时，避光培养8小时，光照强度为1500～3000Lx。

作为优选的技术方案，所述将广藿香组培苗移植到气雾栽培装置进行培养，并采用连续培养、多次收割的方式持续获得广藿香气雾培根包括以下步骤：

3.1)、将广藿香组培苗的茎基部插入气雾栽培板，营养液通过气雾装置喷洒到广藿香根部；

3.2)、连续培养45～50天，其根系平均长度达到40～50cm时，从根系中间距离根基部2～3cm处剪断部分广藿香气雾培根，继续气雾培养保留的部分广藿香根；

3.3)、重复步骤3.1～3.2，即可连续培养、多次收割持续获得广藿香气雾培根。

气雾栽培是利用喷雾装置将营养液雾化为小雾滴状，直接喷射到植物根系以提供植物生长所需的水分和养分的一种新型无土栽培技术。利用气雾栽培技术培育广藿香，可以使广藿香生长出茂密发达的根系，并且可以持续生长。因此，通过气雾栽培广藿香，可以分批收获培养的广藿香气雾培根，并且保持广藿香根上部茎和叶的正常生长。气雾栽培的培养方法不仅提供了充足的天然广藿香酮药源，而且不影响广藿香茎叶的正常生长，生长周期也比大田种植大大缩短。

作为优选的技术方案，所述营养液为稀释4～9倍的1/2MS培养基+0.2～2.0mg/LNAA；或稀释5～10倍不含激素的White培养基。

作为优选的技术方案，所述气雾装置喷洒时间为5～10分钟喷洒一次，每次喷洒时长为5～15秒。

作为优选的技术方案，浸泡于诱导剂中或喷洒诱导剂的广藿香根于密封的容器内培养48～96小时，温度控制在25℃。

作为优选的技术方案，所述诱导剂包括真菌诱导子、植物激素；所述真菌诱导子包括黑曲霉提取物；所述植物激素包括NAA。

相对现有技术，本发明具备以下有益效果：

1、通过组织培养的方式获得广藿香组培苗，再将广藿香组培苗通过气雾栽培方式进行连续培养、多次收割持续获得广藿香气雾培根，扩充了广藿香酮的天然药源，不断获得广藿香酮，为广藿香酮作为天然真菌抑制剂的广泛应用提供了可能性。

2、将组织培养、气雾栽培组合一起培育中药广藿香，并通过诱导剂促进根内广藿香酮的积累，提供了一种新的广藿香培育方式及广藿香酮生产模式；气雾栽培的广藿香克服传统大田种植的病虫害影响、连作障碍等问题，生产周期短、生产效率提高一倍以上；并且采用诱导剂对采收的广藿香根进行离体培养，可以大大提升广藿香根中广藿香酮的含量，是生产天然真菌抑制剂广藿香酮的新途径。

具体实施方式

为了便于本领域技术人员理解，下面将结合实施例、对比例对本发明进行进一步描述。

下述实施例中所使用的气雾栽培装置为广州田润家科技有限公司研发的箱式气雾栽培装置，栽培板孔数为4*6，每箱可栽培24株苗。

实施例1、2所采用黑曲霉真菌冻干粉采购自广东省微生物研究所。

实施例1

一种利用广藿香气雾培根生产广藿香酮的方法，包括以下步骤：

1)、广藿香的选取及无菌培养

选取健壮、无病虫害的石牌广藿香当年新枝，剪去叶片，保留一小截叶柄作为外植体；将叶柄剪成5cm的茎段，进行灭菌处理。

灭菌处理过程为：

1、前处理：将上述5cm的茎段放入清洁自来水中，滴入洗涤液，间歇式搅拌，使茎段充分接触洗涤液，5～10分钟后滤去洗涤液，并用流水冲洗茎段5～10分钟，洗去茎段表面残留的洗涤剂，滤干水后，将茎段转移到超净工作台。

2、消毒：将上述经过前处理的茎段置于75％乙醇溶液中浸泡30～60秒，取出后，用无菌滤纸吸干茎段表面酒精溶液；然后再将茎段浸入0.1％HgCl₂溶液8～15分钟，取出后，用无菌清水清洗茎段4～5次；然后再用无菌滤纸吸干茎段表面水分。

将经灭菌处理后的广藿香茎段两头切去，并分割成带节的小茎段，每段带一个节；将带节茎段接种至MS培养基上进行诱导培养，培养7天后，淘汰有污染的外植体，保留无菌的广藿香外植体。诱导培养的条件为温度25℃，光照培养16小时，避光培养8小时，光照强度为1500～3000Lx。

2)、广藿香无菌外植体增殖培养及生根培养

将广藿香无菌外植体接种到含有0.5～1.5mg/mL 6-BA的MS增殖培养基中，培养25～30天，得到广藿香丛生芽，丛生芽高度超过1cm；将广藿香丛生芽转移到不含激素的MS培养基进行继代培养；本操作在超净工作台上按照无菌操作的要求完成；继代培养周期为25～30天培养一代，继代培养两代后，得到广藿香无菌芽苗，芽苗高度为5cm。

将广藿香无菌芽苗转移到含有0.1mg/mL NAA的MS生根培养基中，培养20～30天后，每株广藿香无菌芽苗生根数量达到10条左右，平均根长度在15mm以上，即得到合格的广藿香组培苗。上述增殖培养及生根培养条件为：温度25℃，光照培养16小时，避光培养8小时，光照强度为1500～3000Lx。

增殖培养的时间可以根据需要的广藿香无菌芽苗的数量进行控制，增殖培养的时间越长，得到广藿香无菌芽苗数量越多。

3)、广藿香组培苗气雾栽培

用无菌水将广藿香组培苗根部附着的培养基清洗干净，在组培苗茎基部套上栽培海绵块后插入气雾栽培装置中的气雾栽培板上；气雾栽培装置的营养液罐中装入配制好的营养液，所述营养液为稀释4～9倍的1/2MS培养基+0.2～2.0mg/L NAA。营养液通过气雾装置喷洒到广藿香根部，气雾装置喷洒时间为5～10分钟喷洒一次，每次喷洒时长为5～15秒。喷洒时间参数可根据气雾栽培装置的具体型号和季节空气湿度情况进行调整。

广藿香组培苗连续气雾栽培45～50天，其根系平均长度达到40～50cm，根系茂密，此时可从根系中间距离根基部2～3cm处剪断部分广藿香气雾培根，保留根系中间根基部2～3cm处的根头和根系周围较短的根，继续进行气雾培养，此操作可连续培养、多次收割持续获得广藿香气雾培根。同时，记录广藿香组培苗气雾栽培期间的生长数据。

4)、广藿香气雾培根积累及提取广藿香酮

将广藿香气雾培根置于可密封的容器中，用喷雾器将黑曲霉真菌提取物与水配制的0.1～3％诱导剂溶液均匀喷洒在广藿香气雾培根表面；容器密封，广藿香气雾培根于25℃的条件下培养48～96小时，促进根内广藿香酮的积累；然后取出广藿香气雾培根在50℃条件下干燥、粉碎后提取天然真菌抑制剂广藿香酮。

黑曲霉真菌提取物的制备：

黑曲霉真菌冻干粉经活化后接种于马铃薯葡萄糖琼脂培养基上，于28℃的条件下培养5～8天；当菌丝表面有大量黑色孢子产生后，用少量无菌马铃薯葡萄糖液体培养基将孢子洗脱并接种至装有马铃薯葡萄糖液体培养基的三角瓶中，在仪器转速为120rpm条件下震荡培养5天后，孢子萌发为菌丝；培养一周后，菌丝成毛球状，过滤培养基，得到菌丝体；将菌丝体加入到pH6.0的适量缓冲液中进行匀浆，菌液体积比为1:10；将匀浆后的混合液在4℃、转速为8000rpm的条件下进行离心分离，得到的上清液即为黑曲霉真菌提取物。

实施例2

一种利用广藿香气雾培根生产广藿香酮的方法，包括以下步骤：

1)、广藿香的选取及无菌培养

选取健壮、无病虫害的石牌广藿香当年新枝，剪去叶片，保留一小截叶柄作为外植体；将叶柄剪成5cm的茎段，进行灭菌处理。

灭菌处理过程为：

1、前处理：将上述5cm的茎段放入清洁自来水中，滴入洗涤液，间歇式搅拌，使茎段充分接触洗涤液，10分钟后滤去洗涤液，并用流水冲洗茎段5分钟，洗去茎段表面残留的洗涤剂，滤干水后，将茎段转移到超净工作台。

2、消毒：将上述经过前处理的茎段置于75％乙醇溶液中浸泡45秒，取出后，用无菌滤纸吸干茎段表面酒精溶液；然后再将茎段浸入0.1％HgCl₂溶液12分钟，取出后，用无菌清水清洗茎段4～5次；然后再用无菌滤纸吸干茎段表面水分。

将经灭菌处理后的广藿香茎段两头切去，并分割成带节的小茎段，每段带一个节；将带节茎段接种至MS培养基上进行诱导培养，培养7天后，淘汰有污染的外植体，保留无菌的广藿香外植体。诱导培养的条件为温度25℃，光照培养16小时，避光培养8小时，光照强度为2500Lx。

2)、广藿香增殖培养及生根培养

将广藿香无菌外植体接种到含有0.5mg/mL 6-BA的MS增殖培养基中，培养30天，得到广藿香丛生芽，丛生芽高度超过1cm；将广藿香丛生芽转移到不含激素的MS培养基进行继代培养；本操作在超净工作台上按照无菌操作的要求完成，继代培养周期为30天培养一代，继代培养两代后，得到广藿香无菌芽苗，芽苗高度为5cm。

将广藿香无菌芽苗转移到含有0.1mg/mL NAA的MS生根培养基中，培养20天后，每株广藿香无菌芽苗生根数量达到10条左右，平均根长度在15mm以上，即得到合格的广藿香组培苗。上述增殖培养及生根培养条件为：温度25℃，光照培养16小时，避光培养8小时，光照强度为2500Lx。

增殖培养的时间可以根据需要的广藿香无菌芽苗的数量进行控制，增殖培养的时间越长，得到广藿香无菌芽苗数量越多。

3)、广藿香组培苗气雾栽培

用无菌水将广藿香组培苗根部附着的培养基清洗干净，在组培苗茎基部套上栽培海绵块后插入气雾栽培装置中的气雾栽培板上；气雾栽培装置的营养液罐中装入配制好的营养液，所述营养液为稀释4～9倍的1/2MS培养基+0.2～2.0mg/L NAA。营养液通过气雾装置喷洒到广藿香根部，气雾装置喷洒时间为10分钟喷洒一次，每次喷洒时长为5秒。喷洒时间参数可根据气雾栽培装置的具体型号和季节空气湿度情况进行调整。

广藿香组培苗连续气雾栽培45～50天，其根系平均长度达到40～50cm，根系茂密，此时可从根系中间距离根基部2cm处剪断部分广藿香气雾培根，保留根系中间根基部2cm处的根头和根系周围较短的根，继续进行气雾培养，此操作可连续培养、多次收割持续获得广藿香气雾培根。

4)、广藿香气雾培根积累及提取广藿香酮

将广藿香气雾培根置于可密封的容器中，用喷雾器将黑曲霉真菌提取物与水配制的3％诱导剂溶液均匀喷洒在广藿香气雾培根表面；容器密封，广藿香气雾培根于25℃的条件下培养48小时，促进根内广藿香酮的积累；然后取出广藿香气雾培根在50℃条件下干燥、粉碎后提取天然真菌抑制剂广藿香酮。

黑曲霉真菌提取物的制备：

黑曲霉真菌冻干粉经活化后接种于马铃薯葡萄糖琼脂培养基上，于28℃的条件下培养5～8天；当菌丝表面有大量黑色孢子产生后，用少量无菌马铃薯葡萄糖液体培养基将孢子洗脱并接种至装有马铃薯葡萄糖液体培养基的三角瓶中，在仪器转速为120rpm条件下震荡培养5天后孢子萌发为菌丝；培养一周后，菌丝成毛球状，过滤培养基，得到菌丝体；将菌丝体加入到pH6.0的适量缓冲液中进行匀浆，菌液体积比为1:10；将匀浆后的混合液在4℃、转速为8000rpm的条件下进行离心分离，得到的上清液即为黑曲霉真菌提取物。

实施例3

与实施例1不同的是：步骤1)中所采用外植体为石牌广藿香顶芽下第2、第3对叶；步骤3)中，气雾栽培所采用的营养液为稀释5～10倍不添加激素的White培养基；步骤4)中，采用0.2～2.0mg/L NAA作为诱导剂喷洒广藿香气雾培根表面，促进根内广藿香酮的积累。

对比例1

1)、广藿香的选取及扦插育苗

选取健壮、无病虫害的石牌广藿香当年新枝，从顶芽下第3～4个节处剪断茎，将剪下的带顶芽茎段进行扦插育苗；扦插基质的配方为：珍珠岩：蛭石：泥炭＝1；1；1；每天定时浇水，保持基质湿润。扦插20天后，带顶芽茎段有新叶长出，单株广藿香扦插苗根数为10根左右，平均根长度20mm以上，即得到合格的广藿香扦插苗。

2)、广藿香扦插苗气雾栽培

将广藿香扦插苗取出，用清水洗净扦插苗根部附着的基质后，用0.1％的高锰酸钾溶液浸泡20分钟；取出广藿香扦插苗，再用无菌水冲洗扦插苗根部，即可将扦插苗置于气雾栽培装置进行气雾栽培。

在扦插苗茎基部套上栽培海绵块后插入气雾栽培装置中的气雾栽培板上；气雾栽培装置的营养液罐中装入配制好的营养液，所述营养液为稀释4～9倍的1/2MS培养基+0.2～2.0mg/L NAA；营养液通过气雾装置喷洒到广藿香根部，气雾装置喷洒时间为10分钟喷洒一次，每次喷洒时长为5秒。喷洒时间参数可根据气雾栽培装置的具体型号和季节空气湿度情况进行调整。

广藿香扦插苗连续气雾栽培45～50天。记录广藿香扦插苗气雾栽培期间的生长数据。

将实施例1与对比例1中广藿香组培苗(下称幼苗)和广藿香扦插苗(下称幼苗)气雾栽培的生长数据进行对比，具体如下表所示：

由上表的数据对比可看出，相对于实施1，对比例1采用扦插苗进行气雾栽培时，幼苗的生长有明显的延迟；气雾栽培50天后，广藿香植株的高度和根系生长情况与实施1有较大的差异。对比例1中幼苗出现生长延迟情况的原因在于：1、少数扦插苗不适应气雾栽培的环境；2、广藿香扦插苗在被清洗时，根表皮被基质损坏，高锰酸钾消毒不彻底，导致根部腐烂未能成活。由此可见，广藿香组培苗相对于广藿香扦插苗更适合用于气雾栽培。

对比例2

对比例2与实施例1不同的是：步骤3)中广藿香组培苗在进行气雾栽培前，根部的培养基先用自来水清洗，然后用高锰酸钾消毒20分钟，再用少量无菌水冲洗根部残留的高锰酸钾溶液；步骤3)中，广藿香组培苗在气雾栽培装置中进行气雾培养时，所使用的营养液为市售的茎叶类植物无土栽培营养液，生产厂家为广州田润家科技有限公司。记录广藿香组培苗气雾栽培期间的生长数据。

将实施例1与对比例2中广藿香组培苗气雾栽培的生长数据进行对比，具体如下表所示：

由上表的数据对比可看出，相对于实施例1，对比例2的广藿香组培苗进行气雾栽培时，幼苗的生长有明显的延迟；气雾栽培50天后，广藿香植株的高度和根系生长情况与实施1有较大的差异。这是由于对比例2在对广藿香组培苗进行气雾栽培时，所采用的营养液为市售的茎叶类植物无土栽培营养液；市售的茎叶类植物无土栽培营养液主要是无机营养物，与实施例1所采用的营养液相比，营养成分不全，因此，对比例2的广藿香植株和根系的生长相对于实施例1的有一定差距。由此可见，相对于对比例1所采用的市售茎叶类植物无 土栽培营养液，实施例1所采用的营养液(稀释4～9倍浓度的1/2MS培养基+0.2～2.0mg/L NAA)更适合于广藿香组培苗的气雾栽培。

对比例3

对比例3与实施例1不同的是：步骤2)获得的广藿香组培苗采用水栽培的方式进行培育，具体过程为：

将广藿香组培苗用无菌水洗净根部附着的培养基，然后在组培苗茎基部套上海绵块，并将其插入水栽培装置水培架种植槽上的种植孔；水栽培装置的水箱内装有市售的茎叶类植物无土栽培营养液，生产厂家为广州田润家科技有限公司，并通过水泵将营养液泵入水培架的种植槽内；广藿香组培苗连续水栽培45～50天，并记录广藿香组培苗水栽培期间的生长数据。

分别统计实施例1气雾栽培、对比例3水栽培获得的广藿香植株的平均高度、单株根系平均鲜重、单株平均鲜重、鲜重叶占比(单株植株叶片总重量占植株鲜重的百分比)、根系生长情况。分别将经实施例1和对比例3获得的广藿香植株的根(未进行离体培养)、茎、叶分离，用低温(50℃)干燥24小时，直至广藿香植株的根、茎、叶的含水量约为10％，称量它们的干重，计算单株植株干重的平均值、干重植株的叶占比及单株根系平均干重。将上述数据规整如下表所示：

对比项	实施例1	对比例3
			植株平均高度(cm)	55	50
根系生长情况(长*宽，cm)	茂密，60*55	较密，30*45
			单株根系平均鲜重(g)	480	300
单株平均鲜重(g)	3200	2700
			鲜重叶占比(％)	43	39
单株平均干重(kg)	300	230
			干重叶占比(％)	35	30
单株根系平均干重(g)	50	33

由上表的数据对比可看出，通过气雾栽培得到的广藿香植株生长情况明显优于通过水栽培得到的广藿香植株；通过实施例1气雾栽培得到的广藿香植株的植株平均高度、单株平均鲜重、鲜重叶占比、单株平均干重、干重叶占比数据，尤其是广藿香酮含量高的单株根系鲜重和干重数据，均优于对比例3通过水栽培得到广藿香植株的。因此，对于广藿香酮 的生产，优选使用气雾栽培方式培养广藿香组培苗。

对比例4

对比例4与实施例1不同的是：步骤3)中收割得到的广藿香气雾培根不喷洒或浸泡诱导剂。

通过实施例1和对比例4获得的广藿香气雾培根分别在50℃的条件下干燥，干燥后的广藿香根粉碎至1mm左右的颗粒；按照2015版《中华人民共和国药典》附录中关于广藿香挥发油含量测定方法测定实施例1和对比例4获得的广藿香气雾培根挥发油含量，并用气相色谱-质谱联用仪分别测定实施例1和对比例4获得的广藿香气雾培根挥发油中广藿香酮的含量。分别记录实施例1和对比例4广藿香气雾培根的挥发油含量、挥发油中广藿香酮含量的数据，并整理数据如下表所示：

对比项	实施例1	对比例4
			挥发油含量(％)	0.2	0.18
挥发油中的广藿香酮含量(％)	92	80

由上述数据可看出，将气雾栽培后获得的广藿香气雾培根进行离体培养，在诱导剂的作用下，可以促进广藿香根细胞内的次生代谢物积累，即药用成分(广藿香酮)的合成，使得广藿香气雾培根中广藿香酮的含量增高，以此可以获得更多的广藿香酮，提高广藿香酮的生产效率。

综上，气雾栽培石牌广藿香不仅克服了传统大田种植的病虫害影响、连作障碍等问题；并且与水栽培方式相比，在生产效率、节水节能方面都具有显著优势；是可以实现规模化的创新栽培模式。通过这种方式可以持续收获植株中的抗真菌有效成分广藿香酮含量最高的根部，并且采用诱导剂对采收的广藿香气雾培根进行离体培养，可以大大提升广藿香气雾培根中广藿香酮的含量，是生产天然真菌抑制剂广藿香酮的新途径。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (7)

1.一种利用广藿香气雾培根生产广藿香酮的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)、广藿香的选取及无菌培养

选取无病虫害、健壮的石牌广藿香新枝的茎段或叶片作为外植体；经灭菌处理后接种至MS培养基上进行诱导培养，得到广藿香无菌外植体；

2)、广藿香无菌外植体增殖培养及生根培养

将广藿香无菌外植体接种至增殖培养基中，培养25～30天，得到广藿香丛生芽；将广藿香丛生芽转移到不含激素的MS培养基进行继代培养，得到广藿香无菌芽苗；

将广藿香无菌芽苗转移到生根培养基中培养20～30天，得到广藿香组培苗；

3)、广藿香组培苗气雾栽培

将广藿香组培苗移植到气雾栽培装置进行培养，将营养液喷洒于广藿香根部，并采用连续培养、多次收割的方式持续获得广藿香气雾培根；

4)、广藿香气雾培根积累及提取广藿香酮

将广藿香气雾培根置于可密封的容器中，利用诱导剂浸泡或喷洒离体的广藿香气雾培根，促进根内广藿香酮的积累；广藿香气雾培根干燥、粉碎后可提取广藿香酮；

所述营养液为稀释4～9倍的1/2MS培养基+0.2～2.0mg/L NAA，或稀释5～10倍不含激素的White培养基；

所述增殖培养基为MS+0.5～1.5mg/mL 6-BA；

所述生根培养基为MS+0.1mg/mL NAA；

所述诱导剂为黑曲霉提取物或NAA。

2.根据权利要求1所述的利用广藿香气雾培根生产广藿香酮的方法，其特征在于：所述茎段为带节的小段；所述叶片为广藿香顶芽下第2、第3对叶。

3.根据权利要求1所述的利用广藿香气雾培根生产广藿香酮的方法，其特征在于：所述的继代培养周期为25～30天培养一代，继代培养两代。

4.根据权利要求1所述的利用广藿香气雾培根生产广藿香酮的方法，其特征在于：所述的诱导培养、增殖培养及生根培养条件为：温度25℃，光照培养16小时，避光培养8小时，光照强度为1500～3000Lx。

5.根据权利要求1所述的利用广藿香气雾培根生产广藿香酮的方法，其特征在于，所述将广藿香组培苗移植到气雾栽培装置进行培养，将营养液喷洒于广藿香根部，并采用连续培养、多次收割的方式持续获得广藿香气雾培根包括以下步骤：

3.1)、将广藿香组培苗的茎基部插入气雾栽培板，营养液通过气雾装置喷洒到广藿香根部；

3.2)、连续培养45～50天，其根系平均长度达到40～50cm时，从根系中间距离根基部2～3cm处剪断部分广藿香气雾培根，继续气雾培养保留的部分广藿香根；

3.3)、重复步骤3.1～3.2，即可连续培养、多次收割持续获得广藿香气雾培根。

6.根据权利要求5所述的利用广藿香气雾培根生产广藿香酮的方法，其特征在于：所述气雾装置喷洒时间为5～10分钟喷洒一次，每次喷洒时长为5～15秒。

7.根据权利要求1所述的利用广藿香气雾培根生产广藿香酮的方法，其特征在于：浸泡于诱导剂中或喷洒诱导剂的广藿香根于密封的容器内培养48～96小时，温度控制在25℃。