CN112831493A - 生物气溶胶中四环素抗性基因的微波辐射处理方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供生物气溶胶中四环素抗性基因的微波辐射处理方法,含有四环素抗性基因的大肠杆菌生物气溶胶样品进入微波辐射装置,保持微波辐射装置关闭,上述样品进入空气液体撞击式采样器,然后,开启微波辐射装置,调整微波辐射装置的微波辐射输出功率并对气体样品进行加热,同时对吸波材料的温度进行实时监测与记录,微波辐射后的气体样品进入空气液体撞击式采样器。微波辐射的电磁能量使大肠杆菌细胞形态破损,细胞结构被破坏,胞内DNA释放,暴露于空气中的游离态DNA被迅速降解,其中的抗性基因也迅速被去除,达到较好的处理效果。
Description
技术领域
本发明涉及大气微生物处理技术领域,更具体地说涉及一种生物气溶胶中四环素抗性基因的微波辐射处理方法。
背景技术
大量抗生素以原药形态或代谢产物形态进入环境,所产生的环境压力能加剧抗生素抗性基因(ARGs)的传播和扩散,造成潜在基因污染。ARGs是基因组DNA中的一个片段,当环境中的ARGs位于细胞内一些可移动基因元件上,如质粒、转座子、整合子等,然后可通过转导、接合等作用,在微生物种内、种间等进行传递转移。通过这种基因水平转移(Horizontal gene transfer),ARGs可以在不同微生物物种间传播扩散。因此,ARGs作为一种新型的基因污染物,具有可复制性,传播性和环境持久性等特点,比传统化学污染物更加难以研究和控制。目前,己有多种ARGs在水、土壤、沉积物、空气等环境介质中被检出,然而国内外对于空气中ARGs的研究相对薄弱。不同于水、土壤环境中ARGs的高浓度特点,空气中ARGs的环境风险主要体现于病原菌等携带ARGs的微生物易被人吸入,可能对人体造成直接的健康危害。
近年来,虽然污水与污泥中四环素抗性基因的处理方法较多,如厌氧消化、生物膜法和氯消毒等,却无法用于处理生物气溶胶中四环素抗性基因。目前生物气溶胶中胞内四环素抗性基因的处理方法尚为空白。
发明内容
本发明克服了现有技术中的不足,目前生物气溶胶中胞内四环素抗性基因的处理方法尚为空白,且气载四环素抗性基因传播性和环境持久性,提供了一种生物气溶胶中四环素抗性基因的微波辐射处理方法,微波辐射的电磁能量使大肠杆菌细胞形态破损,细胞结构被破坏,胞内DNA释放,暴露于空气中的游离态DNA被迅速降解,其中的抗性基因也迅速被去除,达到较好的处理效果。
本发明的目的通过下述技术方案予以实现。
生物气溶胶中四环素抗性基因的微波辐射处理方法,含有四环素抗性基因的大肠杆菌生物气溶胶样品进入微波辐射装置,保持微波辐射装置关闭,上述样品进入空气液体撞击式采样器,然后,开启微波辐射装置,调整微波辐射装置的微波辐射输出功率并对气体样品进行加热,同时对吸波材料的温度进行实时监测与记录,微波辐射后的气体样品进入空气液体撞击式采样器。
微波辐射装置内的热电偶采用K型热电偶,微波辐射装置内的吸波材料采用Fe3O4@SiC泡沫陶瓷吸波材料。
微波辐射装置的微波辐射输出功率为100-700W,气体样品的微波加热的时间为10-30s,吸波材料的温度为27-330℃。
微波辐射装置的微波辐射输出功率为700W,气体样品的微波加热的时间为20s,吸波材料的温度为327.3℃。
空气液体撞击式采样器采用AGI-30空气液体撞击式采样器。
DNA的去除率为43-65%,tetM的去除率为95-100%,tetG的去除率为94-97%,tetC的去除率为77-79%,tetO的去除率为95-100%。
其中,tetM、tetG、tetC、tetO是四环素类抗性基因中的四种基因亚型,是较为常见四种抗生素抗性基因亚型。为研究生物气溶胶中抗生素抗性基因,本方法则选取tetM、tetG、tetC和tetO为例。
本发明的有益效果为:微波电磁场的共振作用产生热能,迅速上升的温度可破坏微生物细胞结构,使细胞失活,微波辐射装置腔体内部温度在升温20s后,可达85-325℃,随着温度的升高,气载抗性基因去除率增大;微波辐射功率在100-700W时,随着辐射功率的增大,生物气溶胶样品的DNA去除率增大,微波辐射的电磁能量使大肠杆菌细胞形态破损,细胞结构被破坏,胞内DNA释放,暴露于空气中的游离态DNA被迅速降解,其中的抗性基因也迅速被去除,达到较好的处理效果。
附图说明
图1为微波辐射功率与Fe3O4@SiC泡沫陶瓷吸波材料温度的关系图;
图2为Fe3O4@SiC泡沫陶瓷温度与生物气溶胶中DNA去除率的关系图;
图3为Fe3O4@SiC泡沫陶瓷温度与生物气溶胶中抗性基因去除率的关系图;
图4为基于Fe3O4@SiC泡沫陶瓷的微波辐射时间与生物气溶胶中抗性基因去除率的关系图;
图5为SiC泡沫陶瓷温度与生物气溶胶中抗性基因去除率的关系图。
具体实施方式
下面通过具体的实施例对本发明的技术方案作进一步的说明。
实施例中所使用的实验仪器和药品如下:
实验仪器:
高速冷冻离心机(3K15,德国Sigma)
生物气溶胶发生装置(ATM226,德国Topas公司)
真空抽气泵(常州市索奥仪器制造有限公司)
K型热电偶(天津荣创先科科技发展有限公司)
微波辐射装置(山东科弘微波能有限公司)
超微量紫外-可见分光光度计(UV-Vis Spectrophotometer Q5000,Quawell,USA)
Bio-Rad iQ5定量PCR仪(Bio-Rad Company,CA,USA)
实验药品:
大肠杆菌标准菌株(中科院菌种保藏中心购得)
四氧化三铁Fe3O4(天津元立化工有限公司)
SiC泡沫陶瓷(宁津县博涵机械有限公司)
Fast DNA TM SPIN Kit for Soil试剂盒
Premix Taq(Takara,大连宝生物)
Fe3O4@SiC泡沫陶瓷吸波材料的制备方法专利:专利号:201810852610.2,专利名称:一种负载四氧化三铁陶粒及其制备方法和应用。
实施例1
步骤1,使用7μg/L四环素不断诱导培养大肠杆菌,使大肠杆菌含有四环素抗性基因,进而配置含有四环素抗性基因的大肠杆菌菌悬液;
步骤2,将生物气溶胶发生器出口和真空抽气泵排气口分别通过橡胶管与微波辐射装置进口连接,将K型热电偶接入微波辐射装置中的Fe3O4@SiC泡沫陶瓷吸波材料中,将生物气溶胶采样器和微波辐射装置出口连接,K型热电偶用于监测微波辐射装置吸波材料实时温度;
步骤3,将培养好的含有四环素抗性基因的大肠杆菌配制为菌悬液,装入生物气溶胶发生器;
步骤4,打开生物气溶胶发生器使生物气溶胶发生器中含有四环素抗性基因的大肠杆菌生物气溶胶菌悬液产生含有四环素抗性基因的大肠杆菌生物气溶胶,并且同时启动真空抽气泵,所述的含有四环素抗性基因的大肠杆菌生物气溶胶与真空抽气泵抽入的空气混合后通入微波辐射装置,使生物气溶胶在微波辐射装置中20s后进入空气液体撞击式采样器;
步骤5,打开微波辐射装置,将微波辐射装置的微波辐射输出功率调整为100-700W,装置中所述的吸波材料的温度实时监测,通过进入空气液体撞击式采样器;
步骤6,通过将采集的样品提取DNA后,使用qPCR定量检测tetM、tetG、tetC和tetO浓度,最后得出处理前后DNA和四种气载抗性基因的去除率。
具体实验结果与分析如下:以下分别通过温度对生物气溶胶处理效果的影响,对本技术方案进行详细陈述,在研究某对应关系时其他实验条件均保持一致。
从图1中可以看出,随着微波辐射装置输出功率的升高,Fe3O4@SiC泡沫陶瓷吸波材料的温度迅速增大,未打开微波装置时,室温为27.1℃,微波装置的微波辐射功率为100W时,温度为87.0℃,微波装置的微波辐射功率为300W时,温度为160.7℃,微波装置的微波辐射功率为500W时,温度为259.7℃,微波装置的微波辐射功率为700W时,温度为327.3℃。随着微波辐射装置辐射功率逐渐增大,Fe3O4@SiC泡沫陶瓷吸波材料将微波高效转化为热能。
图2可以看出,Fe3O4@SiC泡沫陶瓷吸波材料温度增加,生物气溶胶中DNA的去除率逐渐增加,吸波材料温度为87.0℃,去除率约43.4%,温度升高至160.7℃,去除率约45.4%,温度为259.7℃,去除率约61.5%,温度达到327.3℃时,生物气溶胶中DNA去除率最大,约64.9%。吸波材料温度升高,生物气溶胶与其接触时,在高温作用下大肠杆菌细胞结构不断被破坏,细胞内容物释放,游离态DNA在高温下被降解,去除率逐渐提高。
图3中可得,随着Fe3O4@SiC泡沫陶瓷吸波材料温度的增大,气载抗性基因去除率呈升高的趋势。气载tetM在吸波材料温度为259.7℃时,去除率达到100%,气载tetG在吸波材料温度为327.3℃时,达到96.7%去除率,tetC在吸波材料温度为327.3℃时,去除率达到78.9%,tetO在吸波材料温度为87℃时,去除率便迅速达到100%。微波吸波材料温度随着微波能量升高而升高,此时生物气溶胶中大肠杆菌细胞形态受损,同时细胞释放DNA在高温作用下断裂降解。有图可见,Fe3O4@SiC泡沫陶瓷吸波材料温度为259.7℃时,气载tetM和tetO去除率均可达到95%,气载tetG和tetC去除率在温度为327.3℃时去除率最好,分别为96.7%和78.9%。
实施例2
步骤1,使用7μg/L四环素不断诱导培养大肠杆菌,使大肠杆菌含有四环素抗性基因,进而配置含有四环素抗性基因的大肠杆菌菌悬液;
步骤2,将生物气溶胶发生器出口和真空抽气泵排气口分别通过橡胶管与微波辐射装置进口连接,将K型热电偶接入微波辐射装置中的Fe3O4@SiC泡沫陶瓷吸波材料中,将生物气溶胶采样器和微波辐射装置出口连接,K型热电偶用于监测微波辐射装置吸波材料实时温度;
步骤3,将培养好的含有四环素抗性基因的大肠杆菌配制为菌悬液,装入生物气溶胶发生器;
步骤4,打开生物气溶胶发生器使生物气溶胶发生器中含有四环素抗性基因的大肠杆菌生物气溶胶菌悬液产生含有四环素抗性基因的大肠杆菌生物气溶胶,并且同时启动真空抽气泵,所述的含有四环素抗性基因的大肠杆菌生物气溶胶与真空抽气泵抽入的空气混合后通入微波辐射装置,使生物气溶胶在微波辐射装置中4、10、15和20s后进入空气液体撞击式采样器;
步骤5,打开微波辐射装置,将微波辐射装置的微波辐射输出功率为700W,装置中所述的吸波材料的温度实时监测,通过进入空气液体撞击式采样器;
步骤6,通过将采集的样品提取DNA后,使用qPCR定量检测tetM、tetG、tetC和tetO浓度,最后得出处理前后DNA和四种气载抗性基因的去除率。
具体实验结果与分析如下:以下分别通过温度对生物气溶胶处理效果的影响,对本技术方案进行详细陈述,在研究某对应关系时其他实验条件均保持一致。
随着微波辐射装置输出功率的升高,Fe3O4@SiC泡沫陶瓷吸波材料的温度迅速增大,未打开微波装置时,室温为27.1℃,微波装置的微波辐射功率为700W时,温度为327.3℃。
图4可以看出,微波设备中生物气溶胶辐射时间增加,气载抗性基因去除率呈升高的趋势。在辐射时间为20s时,气载tetM去除率达到100%,气载tetG达到91.8%去除率,tetC去除率达到78.9%,tetO在辐射时间为15s时,去除率便达到100%。在微波装置中,微波辐射功率为700W时,随着微波辐射时间增长,生物气溶胶去除效果不断增强,更加彻底。由图4可见,微波辐射时间为20s时,气载tetM和tetO去除率均可达到100%,气载tetG和tetC去除率去除率最好为91.8%和78.9%。
实施例3
步骤1,使用7μg/L四环素不断诱导培养大肠杆菌,使大肠杆菌含有四环素抗性基因,进而配置含有四环素抗性基因的大肠杆菌菌悬液;
步骤2,将生物气溶胶发生器出口和真空抽气泵排气口分别通过橡胶管与微波辐射装置进口连接,将K型热电偶接入微波辐射装置中的SiC泡沫陶瓷吸波材料中,将生物气溶胶采样器和微波辐射装置出口连接,K型热电偶用于监测微波辐射装置吸波材料实时温度;
步骤3,将培养好的含有四环素抗性基因的大肠杆菌配制为菌悬液,装入生物气溶胶发生器;
步骤4,打开生物气溶胶发生器使生物气溶胶发生器中含有四环素抗性基因的大肠杆菌生物气溶胶菌悬液产生含有四环素抗性基因的大肠杆菌生物气溶胶,并且同时启动真空抽气泵,所述的含有四环素抗性基因的大肠杆菌生物气溶胶与真空抽气泵抽入的空气混合后通入微波辐射装置,使生物气溶胶在微波辐射装置中20s后进入空气液体撞击式采样器;
步骤5,打开微波辐射装置,将微波辐射装置的微波辐射输出功率调整为100-700W,装置中所述的吸波材料的温度实时监测,通过进入空气液体撞击式采样器;
步骤6,通过将采集的样品提取DNA后,使用qPCR定量检测tetM、tetG、tetC和tetO浓度,最后得出处理前后DNA和四种气载抗性基因的去除率。
具体实验结果与分析如下:以下分别通过温度对生物气溶胶处理效果的影响,对本技术方案进行详细陈述,在研究某对应关系时其他实验条件均保持一致。
图5中可得,随着SiC泡沫陶瓷吸波材料温度的增大,气载抗性基因去除率呈升高的趋势。气载tetM在吸波材料温度为297.7℃时,去除率达到100%,气载tetG达到82.4%去除率,tetC去除率达到78.8%,tetO在吸波材料温度为100.3℃时,去除率便达到100%。随着SiC泡沫陶瓷吸波材料温度升高,此时生物气溶胶中大肠杆菌的抗性基因在高温作用下断裂降解。
以上对本发明做了示例性的描述,应该说明的是,在不脱离本发明的核心的情况下,任何简单的变形、修改或者其他本领域技术人员能够不花费创造性劳动的等同替换均落入本发明的保护范围。
Claims (10)
1.生物气溶胶中四环素抗性基因的微波辐射处理方法,其特征在于:含有四环素抗性基因的大肠杆菌生物气溶胶样品进入微波辐射装置,保持微波辐射装置关闭,上述样品进入空气液体撞击式采样器,然后,开启微波辐射装置,调整微波辐射装置的微波辐射输出功率并对气体样品进行加热,同时对吸波材料的温度进行实时监测与记录,微波辐射后的气体样品进入空气液体撞击式采样器。
2.根据权利要求1所述的生物气溶胶中四环素抗性基因的微波辐射处理方法,其特征在于:微波辐射装置内的热电偶采用K型热电偶,微波辐射装置内的吸波材料采用Fe3O4@SiC泡沫陶瓷吸波材料。
3.根据权利要求1所述的生物气溶胶中四环素抗性基因的微波辐射处理方法,其特征在于:微波辐射装置的微波辐射输出功率为100-700W,气体样品的微波加热的时间为10-30s,吸波材料的温度为27-330℃。
4.根据权利要求3所述的生物气溶胶中四环素抗性基因的微波辐射处理方法,其特征在于:微波辐射装置的微波辐射输出功率为700W,气体样品的微波加热的时间为20s,吸波材料的温度为327.3℃。
5.根据权利要求1所述的生物气溶胶中四环素抗性基因的微波辐射处理方法,其特征在于:空气液体撞击式采样器采用AGI-30空气液体撞击式采样器。
6.根据权利要求1所述的生物气溶胶中四环素抗性基因的微波辐射处理方法,其特征在于:DNA的去除率为43-65%,tetM的去除率为95-100%,tetG的去除率为94-97%,tetC的去除率为77-79%,tetO的去除率为95-100%。
7.如权利要求1-6任一所述的生物气溶胶中四环素抗性基因的微波辐射处理方法在生物气溶胶胞内四环素抗性基因处理中的应用。
8.根据权利要求7所述的,其特征在于:微波辐射输出功率为100-700W,微波辐射温度为27-330时,DNA的去除率为43-65%,优选的,微波辐射输出功率为700W,微波辐射温度为327.3时,DNA的去除率为64.9%。
9.根据权利要求7所述的,其特征在于:微波辐射输出功率为100-700W,微波辐射温度为27-330时,tetM的去除率为95-100%,tetG的去除率为94-97%,tetC的去除率为77-79%,tetO的去除率为95-100%。
10.根据权利要求9所述的,其特征在于:微波辐射输出功率为700W,微波辐射温度为259.7℃时,tetM和tetO去除率分别为95%,微波辐射温度为327.3℃时,tetG和tetC去除率分别为96.7%和78.9%。
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CN201911168489.2A CN112831493A (zh) | 2019-11-25 | 2019-11-25 | 生物气溶胶中四环素抗性基因的微波辐射处理方法 |
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CN103121768A (zh) * | 2013-03-19 | 2013-05-29 | 中国科学院城市环境研究所 | 一种使用微波辐射技术去除水体中抗生素抗性基因的方法 |
CN107715160A (zh) * | 2017-09-11 | 2018-02-23 | 天津大学 | 实验室尾气生物气溶胶中气载内毒素的微波辐射处理方法 |
CN107789643A (zh) * | 2017-09-11 | 2018-03-13 | 天津大学 | 一种实验室尾气生物气溶胶的微波辐射处理方法 |
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-
2019
- 2019-11-25 CN CN201911168489.2A patent/CN112831493A/zh active Pending
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CN103121768A (zh) * | 2013-03-19 | 2013-05-29 | 中国科学院城市环境研究所 | 一种使用微波辐射技术去除水体中抗生素抗性基因的方法 |
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Non-Patent Citations (1)
Title |
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薛银刚等: "气溶胶中抗生素抗性基因研究进展:以养殖场和医院为例", 《生态毒理学报》 * |
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