CN112826835B - 一种蜂蜜中活性物质的提取方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及天然产物提纯技术领域，提供了一种蜂蜜中活性物质的提取方法，本发明利用双水相体系和超声提取协同作用，通过控制柠檬酸钠/乙醇双水相体系中各组分的用量，能够将蜂蜜中的活性物质充分萃取至上相，实现蜂蜜中活性物质的提取和富集；利用超声波空化作用可破坏蜂蜜细胞壁，使活性成分易于溶出，将双水相提取法与超声提取法协同使用有助于提高蜂蜜中黄酮类活性物质的提取率；通过静置能够将超声过程中混合的提取试剂实现分层，得到上相和下相，其中上相中为黄酮类活性物质，下相中为糖类、蛋白质等杂质。实验结果表明，本发明提供的提取方法能够将蜂蜜中的活性物质分离出来，活性物质提取效率达到了90.80％。

Description

一种蜂蜜中活性物质的提取方法
技术领域
本发明涉及天然产物提纯技术领域，尤其涉及一种蜂蜜中活性物质的提取方法。
背景技术
蜂蜜是蜜蜂采集植物的花蜜、分泌物或蜜露，与自身分泌物混合后，经巢脾转化、脱水、贮存酿造而形成的天然甜物质，含有约占65-80％糖类(葡萄糖与果糖)、18％水分和少量的蛋白质、多酚、黄酮类化合物、酶、游离氨基酸、色素、生物碱、维生素和香气化合物等，至少200多种物质，是一种药食两用的过饱和糖类混合物。在蜂蜜中，黄酮类化合物是最重要的活性组分。已有临床研究发现，黄酮类化合物可能在预防和治疗人类疾病中发挥重要作用。但是由于蜂蜜背景基质复杂，是糖类的过饱和溶液，活性物质种类繁多，且黄酮类化合物含量相对较低，需经过系列繁琐的步骤进行糖类、蛋白质、酶等干扰物质的分离。
目前常用的提取蜂蜜中活性物质的方法为超声提取、微波萃取和回流提取等，但是这些提取方法存在提取时间长、对目标成分提取率较低，并且在提取过程中使用大量的有毒试剂，对环境和操作人员造成危害，不符合“绿色化学”的理念。与超声提取、微波萃取和回流提取相比，分散微固萃取法虽然在提取蜂蜜中活性物质时具有较高的萃取效率。但是，分散微固萃取法在使用时需要先合成吸附剂，然后再进行萃取，而吸附剂的合成耗时长，成本高，并且需要消耗大量试剂，这使得分散微固萃取法成本较高，且不环保。
双水相萃取是一种新型的液-液萃取方法，与传统提取工艺相比，具有萃取条件温和、整体体积小、自行调整因素多、提取率高等特点，已被成功应用于生物医药、金属离子富集等方面。但是由于蜂蜜背景基质复杂，活性物质种类繁多同时又含量较少，目前，尚未报道在蜂蜜活性组分分离富集中的应用。
发明内容
本发明的目的在于提供一种蜂蜜中活性物质的提取方法，本发明提供的提取方法利用双水相体系对蜂蜜中黄酮类物质活性物质进行提取，提供了提取蜂蜜中活性物质的新方法，这种提取方法对于活性物质的提取率高，且不存在有机溶剂残留的问题。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了一种蜂蜜中活性物质的提取方法，包括以下步骤：
(1)提供柠檬酸钠/乙醇双水相体系；所述柠檬酸钠/乙醇双水相体系中柠檬酸钠的质量与水的体积和乙醇的体积之比为(0.88～1.32)g：(3.08～3.55)mL：(2.8～4.6)mL；
(2)将所述步骤(1)得到的柠檬酸钠/乙醇双水相体系与蜂蜜混合，依次进行超声和静置，得到上相和下相；
(3)将所述步骤(2)得到的上相和下相进行分离，得到活性物质溶液。
优选地，所述步骤(1)中的柠檬酸钠/乙醇双水相体系中柠檬酸钠的质量与水的体积和乙醇的体积之比为(1.0～1.15)g：(3.3～3.55)mL：(3.5～4.4)mL。
优选地，所述步骤(1)中的柠檬酸钠/乙醇双水相体系的pH值为3.0～8.0。
优选地，所述步骤(2)中的蜂蜜的质量与柠檬酸钠/乙醇双水相体系的体积比为(0.09～0.24)g：(7.8～9.6)mL。
优选地，所述步骤(2)中的超声的时间为10～30min。
优选地，所述步骤(2)中超声和静置的温度独立地为35～50℃。
优选地，所述步骤(2)中静置的时间为10～60min。
优选地，所述步骤(2)中静置后还包括离心。
优选地，所述离心的时间为5～20min。
本发明提供了一种蜂蜜中活性物质的提取方法，包括以下步骤：提供柠檬酸钠/乙醇双水相体系；所述柠檬酸钠/乙醇双水相体系中柠檬酸钠的质量与水的体积和乙醇的体积之比为(0.88～1.32)g：(3.08～3.55)mL：(2.8～4.6)mL；将柠檬酸钠/乙醇双水相体系与蜂蜜混合，依次进行超声和静置，得到上相和下相；将上相和下相进行分离，得到活性物质溶液。本发明利用双水相体系和超声提取协同作用。在本发明中，双水相体系的组成为柠檬酸钠、水和乙醇组成的混合液，本发明通过控制柠檬酸钠/乙醇双水相体系中各组分的用量，能够将蜂蜜中的活性物质充分萃取至上相，实现蜂蜜中活性物质的提取和富集；利用超声波空化作用可破坏蜂蜜细胞壁，使活性成分易于溶出，将双水相提取法与超声提取法协同使用有助于提高蜂蜜中黄酮类活性物质的提取率；通过静置能够将超声过程中混合的提取试剂实现分层，得到上相和下相，其中上相中为黄酮类活性物质，下相中为糖类、蛋白质等杂质。实验结果表明，本发明提供的提取方法能够将蜂蜜中的活性物质分离出来，活性物质提取效率达到了90.80％。
本发明提供的提取方法中，柠檬酸钠/乙醇双水相体系的含水量可达到60％～70％(w/w)，萃取条件温和，操作简单，不存在有机溶剂残留等问题，不需要大量的有毒试剂，符合“绿色化学”的理念。
具体实施方式
本发明提供了一种蜂蜜中活性物质的提取方法，包括以下步骤：
(1)提供柠檬酸钠/乙醇双水相体系；所述柠檬酸钠/乙醇双水相体系中柠檬酸钠的质量与水的体积和乙醇的体积之比为(0.88～1.32)g：(3.08～3.55)mL：(2.8～4.6)mL；
(2)将所述步骤(1)得到的柠檬酸钠/乙醇双水相体系与蜂蜜混合，依次进行超声和静置，得到上相和下相；
(3)将所述步骤(2)得到的上相和下相进行分离，得到活性物质溶液。
本发明提供柠檬酸钠/乙醇双水相体系。在本发明中，所述柠檬酸钠/乙醇双水相体系中柠檬酸钠的质量与水的体积和乙醇的体积之比为(0.88～1.32)g：(3.08～3.55)mL：(2.8～4.6)mL，优选为(1.0～1.15)g：(3.3～3.55)mL：(3.5～4.4)mL。在本发明中，柠檬酸钠/乙醇双水相体系能够使蜂蜜中的活性物质与杂质在柠檬酸钠与乙醇中分配不同，从而达到分离的效果。在本发明中，当所述柠檬酸钠/乙醇双水相体系中柠檬酸钠的质量与水的体积和乙醇的体积之比为上述范围时，能够使蜂蜜中的黄酮类活性物质充分萃取至上相。
在本发明中，所述柠檬酸钠/乙醇双水相体系的pH值优选为3.0～8.0，更优选为3.0～6.0。在本发明中，所述柠檬酸钠/乙醇双水相体系的pH值为上述范围时，能够提高蜂蜜中黄酮类活性物质的提取率。本发明对调节所述柠檬酸钠/乙醇双水相体系的pH值所用的试剂没有特殊限定，采用本领域技术人员熟知的试剂，能够将所述柠檬酸钠/乙醇双水相体系的pH值调节为3.0～8.0即可。在本发明中，调节所述柠檬酸钠/乙醇双水相体系的pH值的试剂优选为磷酸盐缓冲试剂。
本发明对所述柠檬酸钠/乙醇双水相体系的制备方法没有特殊限定，采用本领域技术人员熟知的制备方法，能够保证所述柠檬酸钠/乙醇双水相体系中柠檬酸钠的质量与水的体积和乙醇的体积之比为上述范围即可。在本发明中，所述柠檬酸钠/乙醇双水相体系的制备方法优选为先配制柠檬酸钠水溶液，然后将所述柠檬酸钠水溶液和乙醇混合，然后再向所述混合液中添加pH调节剂调节混合液的pH值。
得到柠檬酸钠/乙醇双水相体系后，本发明将所述柠檬酸钠/乙醇双水相体系与蜂蜜混合，依次进行超声和静置，得到上相和下相。
本发明对所述蜂蜜的种类及来源没有特殊限定，本领域常见的蜂蜜均可采用本发明的方法进行提取。在本发明中，所述蜂蜜优选为洋槐蜂蜜。
在本发明中，所述蜂蜜的质量与柠檬酸钠/乙醇双水相体系的体积比优选为(0.09～0.24)g：(7.8～9.6)mL，更优选为(0.1～0.2)g：(8.65～9.6)mL。在本发明中，当所述蜂蜜的质量与柠檬酸钠/乙醇双水相体系的体积为上述范围时，既能够充分提取蜂蜜中的黄酮类活性物质，又能够防止过量柠檬酸钠/乙醇双水相体系导致的浪费。
本发明对所述柠檬酸钠/乙醇双水相体系与蜂蜜混合的操作方式没有特殊限定，采用本领域技术人员熟知的混合方式即可。
本发明优选在所述柠檬酸钠/乙醇双水相体系与蜂蜜混合前对蜂蜜进行预处理，然后再与柠檬酸钠/乙醇双水相体系混合。
在本发明中，所述预处理优选为：将蜂蜜与乙醇溶液混合，得到蜂蜜溶液。在本发明中，所述乙醇溶液优选为体积之比为0.5：0.5的乙醇与水组成的混合溶液。本发明对所述蜂蜜的质量与乙醇溶液的体积之比没有特殊限定，根据实验需要进行调整即可。在本发明中，所述蜂蜜的质量与乙醇溶液的体积之比优选为3.0000g：10mL。
得到柠檬酸钠/乙醇双水相体系与蜂蜜的混合液后，本发明将所述混合液依次进行超声和静置，得到上相和下相。
在本发明中，所述超声的温度优选为35～50℃，更优选为40～50℃，最优选为40℃。在本发明中，所述超声的温度为上述范围时，有利于蜂蜜中的黄酮类活性物质溶出。
本发明对所述超声的功率没有特殊限定，采用本领域技术人员熟知的超声功率即可。在本发明中，所述超声的时间优选为10～60min，更优选为20～40min，最优选为20min。在本发明中，所述超声时间为上述范围时，能够使蜂蜜中的黄酮类活性物质充分溶出。
超声完成后，本发明将所述超声后得到的体系进行静置，得到上相和下相。在本发明中，所述静置能够将超声过程中混合的提取试剂实现分层。
在本发明中，所述静置的温度优选为35～50℃，更优选为40～50℃，最优选为40℃。在本发明中，当所述静置的温度为上述范围时，有利于柠檬酸钠与乙醇溶液分层。
本发明对所述静置的时间没有特殊限定，能够使柠檬酸钠/乙醇双水相体系出现清晰的分层界面即可。在本发明中，所述静置的时间优选为10～60min，更优选为20～40min，最优选为30min。在本发明中，所述静置的时间为上述范围时可使柠檬酸钠/乙醇双水相体系充分分层。
当所述静置不能使柠檬酸钠/乙醇双水相体系出现清晰的分层界面时，本发明优选在静置后对所述静置后的体系进行离心，得到上相和下相。在本发明中，所述离心有利于上下相的分离，使柠檬酸钠/乙醇双水相体系充分分层。
本发明对所述离心的速率和时间没有特殊限定，根据柠檬酸钠/乙醇双水相体系分层情况进行调整即可。在本发明中，所述离心的速率优选为(5000～15000)r/min，更优选为10000r/min；所述离心的时间优选为5～20min，更优选为10min。在本发明中，当所述离心的转速和时间为上述范围时，能够使柠檬酸钠/乙醇双水相体系充分分层。
得到上相和下相后，本发明将所述上相和下相进行分离，得到活性物质溶液。
在本发明中，所述黄酮类活性物质被萃取至上相，将上下相分离，能够得到黄酮类活性物质溶液。本发明对所述上相和下相进行分离的操作方式没有特殊限定，采用本领域技术人员熟知的分离方式即可。
本发明通过采用柠檬酸钠/乙醇双水相体系与超声法对蜂蜜进行提取，能够将蜂蜜中黄酮类活性物质充分提取，黄酮类活性物质的回收率较高。
得到黄酮类活性物质溶液后，本发明优选对所述黄酮类活性物质的溶液进行定量分析，得出所述黄酮类活性物质的溶液中黄酮类活性物质的回收率。
本发明对所述黄酮类活性物质的溶液进行定量分析的操作方式没有特殊限定，采用本领域技术人员熟知的定量分析的操作方式即可。在本发明中，所述定量分析的操作方式优选为：
1)配制梯度浓度的标准样品，然后采用紫外分光光度计对各标准样品进行测定，以吸光度(A)对浓度(C)作线性回归，得回归方程，即为标准曲线；
2)将黄酮类活性物质的溶液采用紫外分光光度计进行测定，得到所述黄酮类活性物质溶液的吸光度，将所述黄酮类活性物质溶液的吸光度带入标准曲线分别计算上相中活性物质的含量C1和下相中活性物质的含量C2，按照式(I)计算蜂蜜中活性物质的提取率：
Figure BDA0002935370010000061
所述式(I)中Y为提取效率％；C1：上相活性物质的含量；C2：下相活性物质的含量；V1：上相的体积；V2：下相的体积。
下面将结合本发明中的实施例，对本发明中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
(1)将2.80mL质量浓度为40％的柠檬酸钠溶液和3.98mL的无水乙醇混合，得到柠檬酸钠/乙醇双水相体系；所述柠檬酸钠/乙醇双水相体系中柠檬酸钠的质量与水的体积和乙醇的体积之比为1.12g：3.55mL：3.98mL。
(2)将所述步骤(1)得到的柠檬酸钠/乙醇双水相体系8.65mL与0.3mL蜂蜜溶液混合，依次进行超声和静置，得到上相和下相；其中，蜂蜜溶液中蜂蜜的质量与柠檬酸钠/乙醇双水相体系的体积之比为0.09g：8.65mL。
蜂蜜溶液的配置方法为：准确称取3.0000g蜂蜜，用乙醇水溶液[乙醇：水＝0.5/0.5(v/v)]溶解后，定容到10mL的容量瓶中，40℃下超声20min，混合均匀，得到蜂蜜溶液。
(3)将所述步骤(2)得到的上相和下相进行分离，得到活性物质溶液。
实施例2
与实施例1不同之处在于步骤(2)中蜂蜜溶液的体积为0.4mL，其余步骤与实施例1相同。
实施例3
与实施例1不同之处在于步骤(2)中蜂蜜溶液的体积为0.5mL，其余步骤与实施例1相同。
实施例4
与实施例1不同之处在于步骤(2)中蜂蜜溶液的体积为0.6mL，其余步骤与实施例1相同。
实施例5
与实施例1不同之处在于步骤(2)中蜂蜜溶液的体积为0.7mL，其余步骤与实施例1相同。
实施例6
与实施例1不同之处在于步骤(2)中蜂蜜溶液的体积为0.8mL，其余步骤与实施例1相同。
测试例1
对实施例1～6得到活性物质溶液测定吸光度，计算其最佳提取效率。其结果如表1所示。
所述提取率的计算方法包括以下步骤：
(1)标准曲线的绘制
准确称取没食子酸标准品25.00mg，用25mL无水乙醇定容，得到没食子酸母液。分别准确吸取0.0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7和0.8mL没食子酸母液至10mL棕色容量瓶中，加入2.5mL福林酚试剂，混合均匀，反应5min加入2.0mLNa2CO3溶液，高纯水定容至10mL，黑暗处放置2小时，在760nm波长处测定其吸光度，以吸光度(A)对浓度(C)作线性回归，得回归方程(即标准曲线)为A＝0.0136C-0.0344，相关系数r＝0.9965，可见多酚化合物在0～0.08mg/mL的浓度范围内线性关系良好。
(2)提取率的计算
将实施例1～6得到活性物质溶液和下相溶液分别在760nm波长处测定其吸光度，带入标准曲线方程分别计算上相中活性物质的含量C1和下相中活性物质的含量C2，按照式(I)计算蜂蜜中活性物质的提取率如表1所示：
表1：实施例1～6得到的活性物质溶液的提取率测试结果
样品号 蜂蜜处理液(mL) 柠檬酸钠溶液浓度(％) 乙醇(mL) 提取率(％)
实施例1 0.3 24％ 3.98 84.60
实施例2 0.4 24％ 3.98 87.45
实施例3 0.5 24％ 3.98 88.28
实施例4 0.6 24％ 3.98 88.86
实施例5 0.7 24％ 3.98 78.01
实施例6 0.8 24％ 3.98 76.00
从表1可以看出，实施例1～6的蜂蜜处理液中黄酮类活性物质提取率在76％以上，当蜂蜜处理液添加量为0.6mL时，提取率最高，为88.86％。
实施例7
(1)将4.4mL质量浓度为20％的柠檬酸钠溶液和4.0mL的无水乙醇混合，得到柠檬酸钠/乙醇双水相体系；所述柠檬酸钠/乙醇双水相体系中柠檬酸钠的质量与水的体积和乙醇的体积之比为0.88g：3.52mL：4.0mL；
(2)将所述步骤(1)得到的柠檬酸钠/乙醇双水相体系8.4mL与0.6mL蜂蜜溶液混合，依次进行超声和静置，得到上相和下相；其中，蜂蜜溶液中蜂蜜的质量与柠檬酸钠/乙醇双水相体系的体积之比为0.18g：8.4mL，其中，蜂蜜溶液的配置方法与实施例1相同。
(3)将所述步骤(2)得到的上相和下相进行分离，得到活性物质溶液。
实施例8
与实施例7不同之处在于步骤(1)中的柠檬酸钠溶液质量浓度为22％，其余步骤与实施例7相同。
实施例9
与实施例7不同之处在于步骤(1)中的柠檬酸钠溶液质量浓度为24％，其余步骤与实施例7相同。
实施例10
与实施例7不同之处在于步骤(1)中的柠檬酸钠溶液质量浓度为26％，其余步骤与实施例7相同。
实施例11
与实施例7不同之处在于步骤(1)中的柠檬酸钠溶液质量浓度为28％，其余步骤与实施例7相同。
实施例12
与实施例7不同之处在于步骤(1)中的柠檬酸钠溶液质量浓度为30％，其余步骤与实施例7相同。
测试例2
将实施例7～12得到活性物质溶液测定吸光度，计算其最佳提取率。其结果如表2所示。所述提取率的计算方法同测试例1。
表2：实施例7～12得到的活性物质溶液的提取率测试结果
Figure BDA0002935370010000091
从表2可以看出，采用实施例7～12的方法对蜂蜜进行提取，能够有效提取出其中的活性物质，且当柠檬酸钠溶液的浓度为24％时，提取效率最高，为89.35％。
实施例13
(1)将4.4mL质量浓度为24％的柠檬酸钠溶液和3.40mL的无水乙醇混合，得到柠檬酸钠/乙醇双水相体系；所述柠檬酸钠/乙醇双水相体系中柠檬酸钠的质量与水的体积和乙醇的体积之比为1.056g：3.344mL：3.4mL；即醇的体积分数为柠檬酸钠溶液、蜂蜜溶液和醇的总体积的40％。
(2)将所述步骤(1)得到的柠檬酸钠/乙醇双水相体系8.4mL与0.6mL蜂蜜溶液混合，依次进行超声和静置，得到上相和下相；其中，蜂蜜溶液中蜂蜜的质量与柠檬酸钠/乙醇双水相体系的体积之比为0.18g：8.4mL。其中，蜂蜜溶液的配置方法与实施例1相同。
(3)将所述步骤(2)得到的上相和下相进行分离，得到活性物质溶液。
实施例14
与实施例13不同之处在于步骤(1)中的无水乙醇的体积为3.70mL，其余步骤与实施例13相同。即醇的体积分数为柠檬酸钠溶液、蜂蜜溶液和醇的总体积的42％。
实施例15
与实施例13不同之处在于步骤(1)中的无水乙醇的体积为4.00mL，其余步骤与实施例13相同。即醇的体积分数为柠檬酸钠溶液、蜂蜜溶液和醇的总体积的44％。
实施例16
与实施例13不同之处在于步骤(1)中的无水乙醇的体积为4.30mL，其余步骤与实施例13相同。即醇的体积分数为柠檬酸钠溶液、蜂蜜溶液和醇的总体积的46％。
实施例17
与实施例13不同之处在于步骤(1)中的无水乙醇的体积为4.45mL，其余步骤与实施例13相同。即醇的体积分数为柠檬酸钠溶液、蜂蜜溶液和醇的总体积的47％。
实施例18
与实施例13不同之处在于步骤(1)中的无水乙醇的体积为4.60mL，其余步骤与实施例13相同。即醇的体积分数为柠檬酸钠溶液、蜂蜜溶液和醇的总体积的48％。
对实施例13～18得到的活性物质溶液测定吸光度，计算其最佳提取效率。其结果如表3所示。
表3：实施例13～18得到的活性物质溶液的提取率测试结果
Figure BDA0002935370010000101
Figure BDA0002935370010000111
从表3可以看出，分别控制醇占柠檬酸钠溶液、蜂蜜溶液和醇的总体积的40％、42％、44％、46％、47％、48％时均能够充分提取蜂蜜溶液中的黄酮类活性物质，且当醇的体积分数为46％时，提取效率最高，为90.30％。
实施例19
(1)将4.4mL质量浓度为24％的柠檬酸钠溶液和4.30mL的无水乙醇混合，得到柠檬酸钠/乙醇双水相体系；加入磷酸盐缓冲试剂控制柠檬酸钠/乙醇双水相体系的pH值为3.0，所述柠檬酸钠/乙醇双水相体系中柠檬酸钠的质量与水的体积和乙醇的体积之比为1.056g：3.344mL：4.3mL。
(2)将所述步骤(1)得到的柠檬酸钠/乙醇双水相体系8.4mL与0.6mL蜂蜜溶液混合，依次进行超声和静置，得到上相和下相；其中，蜂蜜溶液中蜂蜜的质量与柠檬酸钠/乙醇双水相体系的体积之比为0.18g：8.4mL。其中，蜂蜜溶液的配置方法与实施例1相同。
(3)将所述步骤(2)得到的上相和下相进行分离，得到活性物质溶液。
实施例20
与实施例19不同之处在于步骤(1)中柠檬酸钠/乙醇双水相体系的pH值为4.0，其余步骤与实施例19相同。
实施例21
与实施例19不同之处在于步骤(1)中柠檬酸钠/乙醇双水相体系的pH值为5.0，其余步骤与实施例19相同。
实施例22
与实施例19不同之处在于步骤(1)中柠檬酸钠/乙醇双水相体系的pH值为6.0，其余步骤与实施例19相同。
实施例23
与实施例19不同之处在于步骤(1)中柠檬酸钠/乙醇双水相体系的pH值为7.0，其余步骤与实施例19相同。
实施例24
与实施例19不同之处在于步骤(1)中柠檬酸钠/乙醇双水相体系的pH值为8.0，其余步骤与实施例19相同。
测试例3
对实施例19～24得到活性物质溶液测定吸光度，计算其最佳提取效率。所述提取率的计算方法同测试例1。其结果如表3所示。
表3：实施例19～24得到的活性物质溶液的提取率测试结果
Figure BDA0002935370010000121
从表3可以看出，当柠檬酸钠/乙醇双水相体系的pH值为3～8时，均能够充分提取蜂蜜溶液中的黄酮类活性物质，且当pH值为4时，提取效率最高，为90.34％。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (9)

1.一种蜂蜜中黄酮类活性物质的提取方法，包括以下步骤：
(1)提供柠檬酸钠/乙醇双水相体系；所述柠檬酸钠/乙醇双水相体系中柠檬酸钠的质量与水的体积和乙醇的体积之比为(0.88～1.32)g：(3.08～3.55)mL：(2.8～4.6)mL；
(2)将所述步骤(1)得到的柠檬酸钠/乙醇双水相体系与蜂蜜混合，依次进行超声和静置，得到上相和下相；
(3)将所述步骤(2)得到的上相和下相进行分离，得到黄酮类活性物质溶液。
2.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述步骤(1)中的柠檬酸钠/乙醇双水相体系中柠檬酸钠的质量与水的体积和乙醇的体积之比为(1.0～1.15)g：(3.3～3.55)mL：(3.5～4.4)mL。
3.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述步骤(1)中的柠檬酸钠/乙醇双水相体系的pH值为3.0～8.0。
4.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述步骤(2)中的蜂蜜的质量与柠檬酸钠/乙醇双水相体系的体积比为(0.09～0.24)g：(7.8～9.6)mL。
5.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述步骤(2)中的超声的时间为10～30min。
6.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述步骤(2)中超声和静置的温度独立地为35～50℃。
7.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述步骤(2)中静置的时间为10～60min。
8.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述步骤(2)中静置后还包括离心。
9.根据权利要求8所述的提取方法，其特征在于，所述离心的时间为5～20min。
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