CN112813141A - 一种dapi复染液及其制备方法与应用 - Google Patents

一种dapi复染液及其制备方法与应用 Download PDF

Info

Publication number
CN112813141A
CN112813141A CN202011624010.4A CN202011624010A CN112813141A CN 112813141 A CN112813141 A CN 112813141A CN 202011624010 A CN202011624010 A CN 202011624010A CN 112813141 A CN112813141 A CN 112813141A
Authority
CN
China
Prior art keywords
dapi
solution
phenylenediamine
tritonx
formamide
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN202011624010.4A
Other languages
English (en)
Other versions
CN112813141B (zh
Inventor
胡娟
李三华
齐华
李贵喜
李艳敏
王少辉
霍清园
张绍敏
刘文弟
刘玲玲
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Henan Celnovtebio Biotechnology Inc
Original Assignee
Henan Celnovtebio Biotechnology Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Henan Celnovtebio Biotechnology Inc filed Critical Henan Celnovtebio Biotechnology Inc
Priority to CN202011624010.4A priority Critical patent/CN112813141B/zh
Publication of CN112813141A publication Critical patent/CN112813141A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN112813141B publication Critical patent/CN112813141B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6813—Hybridisation assays
    • C12Q1/6841—In situ hybridisation
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Abstract

本发明涉及一种DAPI复染液及其制备方法与应用。本发明提供的DAPI复染液主要由对苯二胺、TritonX‑100、甲酰胺、DAPI和甘油组成，按每1mL计，所述DAPI复染液包含对苯二胺10mg、pH＝9.0的PBS缓冲液100μL、TritonX‑100 0.1～1.5μL、甲酰胺10～150μL、DAPI250ng、甘油600‑800μL。本发明对现有DAPI复染液进行了改良，通过添加一定比例的1％Triton‑X‑100和甲酰胺降低信号背景，提高信噪比，便于临床判读。将该DAPI复染液应用于荧光原位杂交，能够获得更准确的实验结果，为临床医生提供更可靠的诊断依据。

Description

一种DAPI复染液及其制备方法与应用
技术领域
本发明属于分子病理诊断技术领域，具体涉及一种DAPI复染液及其制备方法与应用。
背景技术
荧光原位杂交(Fluorescence in situ hybridization,FISH)是20世纪80年代末期在原有的放射性原位杂交技术的基础上发展起来的一种非放射性原位杂交技术，其原理是根据DNA碱基对的互补性，将标记了荧光的单链DNA探针与待检样本中的DNA杂交后，通过荧光显微镜观察荧光信号在染色体上的位置反映相应染色体及基因的情况，实现对细胞、组织样本中的染色体或基因进行定性、定量分析。FISH技术具有操作简便、检测快速、易于观察、重复性好、灵敏度高等特点，目前这项技术已经广泛应用于动植物基因组结构研究、染色体精细结构变异分析、病毒感染分析、人类产前诊断、肿瘤遗传学和基因组进化研究待许多领域。
DAPI是一种能够与DNA强力结合的荧光染料，可以透过完整的细胞膜用于染色。由于肿瘤细胞核质比相较正常细胞偏大，同时也为了观察荧光信号是否在细胞核内，DAPI可协助确定细胞信号位置和区分肿瘤细胞，但是，目前市场不同厂家的DAPI复染液在FISH实验中会存在信噪比低，造成临床判读困难。
发明内容
本发明的目的在于提供一种改良的DAPI复染液。
本发明的另一目的在于提供包括上述DAPI复染液的制备方法。
本发明的第三个目的在于提供上述DAPI复染液在FISH中的应用。
为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：
本发明提供一种DAPI复染液，所述DAPI复染液主要由对苯二胺、TritonX-100、甲酰胺、DAPI和甘油组成，按每1mL计，所述DAPI复染液包含对苯二胺10mg、pH＝9.0的PBS缓冲液100μL、TritonX-100 0.1～1.5μL、甲酰胺10～150μL、DAPI 250ng、甘油600-800μL。
优选的，所述DAPI复染液按每1mL计，主要由对苯二胺10mg、pH＝9.0的PBS缓冲液100μL、TritonX-100 1.0μL、甲酰胺100μL、DAPI 250ng、甘油700μL组成。
本发明提供了上述DAPI复染液的制备方法，包含如下步骤：
1)分别配制对苯二胺溶液、1％TritonX-100溶液及DAPI贮存液；
2)将步骤1)中的成分与甲酰胺、甘油混匀，即得。
优选的，步骤1)中的对苯二胺溶液采用PH＝9.0的PBS缓冲液溶解配制。
本发明提供了上述DAPI复染液在荧光原位杂交(FISH)中的应用。
本发明的有益效果：
本发明对现有DAPI复染液进行了改良，本发明提供的DAPI复染液主要包含对苯二胺、TritonX-100、甲酰胺、DAPI及甘油，DAPI是一种能够与DNA强力结合的荧光染料，可以透过完整的细胞膜用于染色；对苯二胺适用于阻止荧光染料的光漂白现象，颜色黑咖啡色，不与免疫荧光有任何反应；Triton-X-100为非离子型的表面活性剂，用作去污剂或破膜剂；甲酰胺为离子化溶剂，不影响碱基组成和二级结构，可以得到完好的DNA或RNA单链。本发明通过添加一定比例的1％Triton-X-100和甲酰胺降低信号背景，提高信噪比，便于临床判读。将该DAPI复染液应用于荧光原位杂交，能够获得更准确的实验结果，为临床医生提供更可靠的诊断依据。
附图说明
图1是试验例4中18号染色体数目异常检测结果图；
图中，A-E分别为采用实施例1-5所提供的DAPI复染液1-5的结果图。
图2是试验例5中FKHR基因断裂检测结果图；
图中，A、C为采用对比例1所提供的DAPI复染液6的结果图；B、D为采用实施例2所提供的DAPI复染液2的结果图。
图3是试验例5中SYT(SS18)基因断裂检测结果图；
图中，A、C为采用对比例1所提供的DAPI复染液6的结果图；B、D为采用实施例2所提供的DAPI复染液2的结果图。
图4是试验例5中MDM2基因扩增检测结果图。
图中，A、C为采用对比例1所提供的DAPI复染液6的结果图；B、D为采用实施例2所提供的DAPI复染液2的结果图。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明作进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此：若未特别指明，实施例中所用的设备和试剂均常规市售可得。
本领域技术人员可以理解，尽管实施例配方中各组分重量单位是g或mL，但是也可以理解为重量份或体积份，即各组分之间满足比例即可。
实施例1DAPI复染液1及其制备方法
该实施例提供了DAPI复染液1，所述DAPI复染液A按每1mL计，主要由对苯二胺10mg、pH＝9.0的PBS缓冲液100μL、TritonX-100 0.1μL、甲酰胺100μL、DAPI 250ng、甘油790uL组成。
DAPI复染液1的制备方法，包含如下步骤：
1)分别配制对苯二胺溶液、1％TritonX-100溶液及DAPI贮存液；
2)将步骤1)中的成分与甲酰胺、甘油混匀，即得。
其中，步骤1)中的对苯二胺溶液采用PH＝9.0的PBS缓冲液溶解配制：称取10mg的对苯二胺溶于1ml的PBS溶液中；
PH＝9.0的PBS缓冲液的配制：称取NaCl 8g，KCl 0.2g，Na2HPO4·12H2O 3.63g,KH2PO40.24g，溶于900ml双蒸水中，用盐酸调pH值至9.0，加水定容至1L，常温保存备用；
1％TritonX-100溶液的配制：1μL TritonX-100溶于99μL去离子水中；
DAPI贮存液的配制：称取0.25mg的DAPI粉末溶于1ml的去离子水中。
实施例2DAPI复染液2及其制备方法
该实施例提供了DAPI复染液2，所述DAPI复染液A按每1mL计，主要由对苯二胺10mg、pH＝9.0的PBS缓冲液100μL、TritonX-100 1.0μL、甲酰胺100μL、DAPI 250ng、甘油700uL组成。
DAPI复染液2的制备方法，包含如下步骤：
1)分别配制对苯二胺溶液、1％TritonX-100溶液及DAPI贮存液；
2)将步骤1)中的成分与甲酰胺、甘油混匀，即得。
其中，步骤1)中的对苯二胺溶液采用PH＝9.0的PBS缓冲液溶解配制：称取10mg的对苯二胺溶于1ml的PBS溶液中；
PH＝9.0的PBS缓冲液的配制：称取NaCl 8g，KCl 0.2g，Na2HPO4·12H2O 3.63g,KH2PO40.24g，溶于900ml双蒸水中，用盐酸调pH值至9.0，加水定容至1L，常温保存备用；
1％TritonX-100溶液的配制：1μL TritonX-100溶于99μL去离子水中；
DAPI贮存液的配制：称取0.25mg的DAPI粉末溶于1ml的去离子水中。
实施例3DAPI复染液3及其制备方法
该实施例提供了DAPI复染液3，所述DAPI复染液A按每1mL计，主要由对苯二胺10mg、pH＝9.0的PBS缓冲液100μL、TritonX-100 1.5μL、甲酰胺100μL、DAPI 250ng、甘油650uL组成。
DAPI复染液3的制备方法，包含如下步骤：
1)分别配制对苯二胺溶液、1％TritonX-100溶液及DAPI贮存液；
2)将步骤1)中的成分与甲酰胺、甘油混匀，即得。
其中，步骤1)中的对苯二胺溶液采用PH＝9.0的PBS缓冲液溶解配制：称取10mg的对苯二胺溶于1ml的PBS溶液中；
PH＝9.0的PBS缓冲液的配制：称取NaCl 8g，KCl 0.2g，Na2HPO4·12H2O 3.63g,KH2PO40.24g，溶于900ml双蒸水中，用盐酸调pH值至9.0，加水定容至1L，常温保存备用；
1％TritonX-100溶液的配制：1μL TritonX-100溶于99μL去离子水中；
DAPI贮存液的配制：称取0.25mg的DAPI粉末溶于1ml的去离子水中。
实施例4DAPI复染液4及其制备方法
该实施例提供了DAPI复染液4，所述DAPI复染液A按每1mL计，主要由对苯二胺10mg、pH＝9.0的PBS缓冲液100μL、TritonX-100 1.0μL、甲酰胺10μL、DAPI 250ng、甘油790uL组成。
DAPI复染液4的制备方法，包含如下步骤：
1)分别配制对苯二胺溶液、1％TritonX-100溶液及DAPI贮存液；
2)将步骤1)中的成分与甲酰胺、甘油混匀，即得。
其中，步骤1)中的对苯二胺溶液采用PH＝9.0的PBS缓冲液溶解配制：称取10mg的对苯二胺溶于1ml的PBS溶液中；
PH＝9.0的PBS缓冲液的配制：称取NaCl 8g，KCl 0.2g，Na2HPO4·12H2O 3.63g,KH2PO40.24g，溶于900ml双蒸水中，用盐酸调pH值至9.0，加水定容至1L，常温保存备用；
1％TritonX-100溶液的配制：1μL TritonX-100溶于99μL去离子水中；
DAPI贮存液的配制：称取0.25mg的DAPI粉末溶于1ml的去离子水中。
实施例5DAPI复染液5及其制备方法
该实施例提供了DAPI复染液5，所述DAPI复染液A按每1mL计，主要由对苯二胺10mg、pH＝9.0的PBS缓冲液100μL、TritonX-100 1.0μL、甲酰胺150μL、DAPI 250ng、甘油650uL组成。
DAPI复染液5的制备方法，包含如下步骤：
1)分别配制对苯二胺溶液、1％TritonX-100溶液及DAPI贮存液；
2)将步骤1)中的成分与甲酰胺、甘油混匀，即得。
其中，步骤1)中的对苯二胺溶液采用PH＝9.0的PBS缓冲液溶解配制：称取10mg的对苯二胺溶于1ml的PBS溶液中；
PH＝9.0的PBS缓冲液的配制：称取NaCl 8g，KCl 0.2g，Na2HPO4·12H2O 3.63g,KH2PO40.24g，溶于900ml双蒸水中，用盐酸调pH值至9.0，加水定容至1L，常温保存备用；
1％TritonX-100溶液的配制：1μL TritonX-100溶于99μL去离子水中；
DAPI贮存液的配制：称取0.25mg的DAPI粉末溶于1ml的去离子水中。
对比例1DAPI复染液6及其制备方法
该对比例根据公开号为CN105420397A的发明专利提供的配方配制了DAPI复染液6，其配方如下：10mg的对苯二胺溶于1ml的PBS中，调节pH为9.0，加入9ml甘油，反复震荡混匀，-20℃储存。取2.5μl的DAPI溶液(0.1mg/ml)溶于1ml抗褪色液中，避光条件下反复震荡混匀，-20℃避光密闭保存。
试验例
试验例分别将实施例1-5以及对比例1所提供的DAPI复染液1-6应用于FISH荧光原位杂交，采用多种不同的试剂盒对其作用效果进行评估。试验例中涉及的荧光原位原位杂交试剂盒如下：18号染色体数目异常检测试剂盒、MDM2基因扩增检测试剂盒、FKHR基因断裂检测试剂盒、SYT(SS18)基因断裂检测试剂盒，均为河南赛诺特生物技术有限公司产品。
试验例1石蜡样本处理
一、样本收集及玻片制备：
1、样本于常温下在10％中性福尔马林缓冲液中固定6～48小时，为了达到最佳的和均匀的固定与石蜡包埋效果，样本大小不宜超过0.5cm3。
2、标准操作和石蜡包埋，使用高质量的石蜡。渗透和包埋应在低于65℃下进行。
3、切成3μm厚的切片。
4、切片捞于有氢化硅涂层玻片或黏性玻片并在50～60℃环境中固定2～16小时。
二、玻片预处理程序：
1. 56-65℃左右烤片过夜(至少3小时以上)。
2.提前预热胃蛋白酶处理液(2mg/ml，10mM HCl)，使其温度达到37℃保温备用。
3.二甲苯中室温放置切片10分钟，重复该步骤两次。
4.100％乙醇中室温放置切片5分钟，重复该步骤一次。
5.依次85％、70％乙醇中室温放置切片3分钟。
6.去离子水洗涤三次。
7.用微波炉将适量的预处理缓冲液煮沸后，然后使其处于保温状态，放入切片修复20分钟，或是在高压锅内加入适量的预处理缓冲液，高压修复5分钟。
8.取出玻片，用去离子水洗涤三次。将切片直接放入胃蛋白酶消化液中，消化15±10分钟。
9.去离子水清洗2分钟，两次。
试验例2血液(骨髓)样本处理
玻片预处理程序如下：
1. 56-65℃左右烤片3小时。
2.去离子水清洗2分钟，两次。
3.脱水：70％，85％，100％乙醇溶液中依次放置2分钟，空气干燥切片。
试验例3石蜡和血液样本片子的FISH操作步骤
警告和预防：荧光基团遇强光会产生光漂白现象。将含有荧光基团的试剂与玻片置于暗处有助于减少此效应。所有不需光照的步骤(例如：孵育、洗涤等)均在暗处进行。
(一)标本变性与杂交
1.将探针的杂交液从冰箱取出，瞬时离心，用移液器吸10μl至各个样本。均匀滴加探针到整个目标区域；或者加探针到盖玻片中央，再将目标区域反扣到盖玻片上。
2.样本盖上盖玻片(20mm×20mm)，避免气泡；封片胶封片。
3.将玻片放入杂交仪中反应，83℃(±2℃)变性6分钟，40℃过夜杂交。
注意：杂交期间片子绝对不能干！
(二)杂交后的处理
1、小心除去封片胶。
2、将切片置于洗涤缓冲液II溶液中，孵育10分钟，除去盖玻片。
3、将切片置于洗涤缓冲液I洗液(提前30分钟水浴加热到71±1℃)中，上下提拉切片1-3s，放置2分钟。
4、室温条件下，将切片置于洗涤缓冲液II洗液中，上下提拉1-3s，处理切片3分钟。
5、在70％、85％的乙醇溶液中依次处理切片2分钟。
6.避光晾干样本。
注：洗液缸中每次最好同时处理4张切片，当最后一张玻片放入考普林缸时开始计时。
(三)观察
1.滴加10μL DAPI复染液到切片组织上，盖上盖玻片，暗处-20℃孵育30分钟。
2.荧光显微镜下观察。如需长期保存需置于-20℃避光储存。
试验例4
该试验例通过18号染色体数目异常检测试剂盒对实施例1-5所提供的DAPI复染液1-5的作用效果进行评估。检测样本为正常人外周血培养的淋巴细胞制成的分裂相，具体方法步骤参照试验例1-3，试验结果如图1所示。
由图1可知信噪比实施例2＞实施例4＞实施例5＞实施例1＞实施例3，通过加入一定量的TritonX-100和甲酰胺，其作为细胞膜的通透剂和离子化溶剂可在一定程度上降低信噪比，并且对信号本身的存在无影响，使观察者在显微镜下更加明显的观察信号，判读更加容易。
试验例5
该试验例分别通过MDM2基因扩增检测试剂盒、SYT(SS18)基因断裂检测试剂盒、FKHR基因断裂检测试剂盒对实施例2与对比例1所提供的DAPI复染液2和DAPI复染液6的作用效果进行评估。检测样本为纤维肉瘤，具体方法步骤参照试验例1-3，试验结果如图2-图4所示。
图2是FKHR基因断裂检测结果图；图中，A、C为采用对比例1所提供的DAPI复染液6的结果图；B、D为采用实施例2所提供的DAPI复染液2的结果图。由图2可知实施例2的DAPI复染液可明显降低FKHR红绿信号的背景，而且对样本的阴阳性结果不造成影响，观察者在显微镜下更加明显的观察信号，判读更加容易。
图3是SYT(SS18)基因断裂检测结果图；图中，A、C为采用对比例1所提供的DAPI复染液6的结果图；B、D为采用实施例2所提供的DAPI复染液2的结果图。由图3可知实施例2的DAPI复染液可明显降低SYT红绿信号的背景，而且对样本的阴阳性结果不造成影响，观察者在显微镜下更加明显的观察信号，判读更加容易。
图4是MDM2基因扩增检测结果图；图中，A、C为采用对比例1所提供的DAPI复染液6的结果图；B、D为采用实施例2所提供的DAPI复染液2的结果图。由图4可知实施例2的DAPI复染液可明显降低MDM2红绿信号的背景，而且对样本的阴阳性结果不造成影响，观察者在显微镜下更加明显的观察信号，判读更加容易。

Claims (5)

1.一种DAPI复染液，其特征在于，所述DAPI复染液主要由对苯二胺、TritonX-100、甲酰胺、DAPI、甘油组成，按每1mL计，所述DAPI复染液包含对苯二胺10mg、pH＝9.0的PBS缓冲液100μL、TritonX-100 0.1～1.5μL、甲酰胺10～150μL、DAPI 250ng、甘油600-800μL。
2.根据权利要求1所述的DAPI复染液，其特征在于，所述DAPI复染液按每1mL计，主要由对苯二胺10mg、pH＝9.0的PBS缓冲液100μL、TritonX-100 1.0μL、甲酰胺100μL、DAPI250ng、甘油700μL组成。
3.权利要求1或2所述的DAPI复染液的制备方法，其特征在于，包含如下步骤：
1)分别配制对苯二胺溶液、1％TritonX-100溶液及DAPI贮存液；
2)将步骤1)中的成分与甲酰胺、甘油混匀，即得。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤1)中的对苯二胺溶液采用PH＝9.0的PBS缓冲液溶解配制。
5.权利要求1或2所述的DAPI复染液在荧光原位杂交中的应用。
CN202011624010.4A 2020-12-31 2020-12-31 一种dapi复染液及其制备方法与应用 Active CN112813141B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202011624010.4A CN112813141B (zh) 2020-12-31 2020-12-31 一种dapi复染液及其制备方法与应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202011624010.4A CN112813141B (zh) 2020-12-31 2020-12-31 一种dapi复染液及其制备方法与应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN112813141A true CN112813141A (zh) 2021-05-18
CN112813141B CN112813141B (zh) 2024-03-12

Family

ID=75854792

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202011624010.4A Active CN112813141B (zh) 2020-12-31 2020-12-31 一种dapi复染液及其制备方法与应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN112813141B (zh)

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108823289A (zh) * 2018-06-08 2018-11-16 中国海洋大学 一种不依赖荧光检测杂交信号的鱼类染色体原位杂交液
CN110484610A (zh) * 2019-08-26 2019-11-22 河南赛诺特生物技术有限公司 一种促进荧光原位杂交的组合物及杂交液，荧光原位杂交探针工作液、荧光原位杂交方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108823289A (zh) * 2018-06-08 2018-11-16 中国海洋大学 一种不依赖荧光检测杂交信号的鱼类染色体原位杂交液
CN110484610A (zh) * 2019-08-26 2019-11-22 河南赛诺特生物技术有限公司 一种促进荧光原位杂交的组合物及杂交液，荧光原位杂交探针工作液、荧光原位杂交方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
P. VERGNE等: "Rapid assessment of microspore and pollen development stage in wheat and maize using dapi and memerane permeablilization", 《STAIN TECHNOLOGY》, vol. 62, no. 5, pages 299 - 304 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN112813141B (zh) 2024-03-12

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP5132557B2 (ja) 外来微粒子の細胞透過性を向上させる方法
KR102021680B1 (ko) 세포 보존액 및 그 이용, 및 세포 보존액의 제조 방법
JPH11503026A (ja) インジツーハイブリダイゼーション溶液及び方法
CN110484610B (zh) 一种促进荧光原位杂交的组合物及杂交液，荧光原位杂交探针工作液、荧光原位杂交方法
CN102260737A (zh) 一组引物及其在家蚕微孢子虫的快速检测方面的应用
Yu et al. Amphioxus whole-mount in situ hybridization
CN111269983A (zh) 一种膀胱癌基因扩增的fish检测方法、探针及试剂盒
CN105441541B (zh) 一种肺癌检测质控品及其制备方法
CN113151588B (zh) 一种ebv感染组织的检测用eber探针及检测试剂盒
CN109946278A (zh) 荧光染料dapi对细胞dna进行染色定量的癌症筛查和诊断方法
WO2024017393A1 (zh) 检测牛源dna的引物及检测方法
WO2024017382A1 (zh) 检测猪源dna的引物及检测方法
WO2009051776A2 (en) Methods for detecting and differentiating mycobacterium genus and mycobacterium avium complex in a sample or culture
Mead et al. Expression analysis by RNAscope™ in situ hybridization
CN112575066A (zh) 一种用于骨髓涂片fish检测的处理方法
CN112813141A (zh) 一种dapi复染液及其制备方法与应用
WO2017114011A1 (zh) Her-2基因和/或top2a基因检测探针及其制备方法和试剂盒
CN109295174B (zh) 一种用于检测真菌感染的试剂组、试剂盒以及检测方法
US20040241734A1 (en) Methods for in situ hybridization without the need for competitior DNA
CN105483256A (zh) Bcr基因和abl基因检测探针及其制备方法和试剂盒
Lopes et al. In situ Hybridization of miRNAs in Human Embryonic Kidney and Human Pluripotent Stem Cell-derived Kidney Organoids
CN117887820B (zh) 一种同时原位荧光检测人类rna、dna、蛋白质的方法
Church et al. Non-isotopic in situ hybridization to detect chick Sox gene mRNA in plastic-embedded tissue
CN111057790B (zh) miRNA在制备用于检测KSHV潜伏感染的试剂盒中的用途
CN107312838A (zh) 细胞荧光原位杂交方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
CB03 Change of inventor or designer information
CB03 Change of inventor or designer information

Inventor after: Hu Juan

Inventor after: Li Sanhua

Inventor after: Qi Hua

Inventor after: Li Guixi

Inventor after: Li Yanmin

Inventor after: Wang Shaohui

Inventor after: Huo Qingyuan

Inventor after: Liu Lingling

Inventor before: Hu Juan

Inventor before: Liu Lingling

Inventor before: Li Sanhua

Inventor before: Qi Hua

Inventor before: Li Guixi

Inventor before: Li Yanmin

Inventor before: Wang Shaohui

Inventor before: Huo Qingyuan

Inventor before: Zhang Shaomin

Inventor before: Liu Wendi

GR01 Patent grant
GR01 Patent grant