CN112812996A - 微生物复合物及其制备方法和采用其治理污染水体的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种微生物复合物及其制备方法和采用其治理污染水体的方法，采用菌植共生的方法来治理污染水体，将筛选的微生物复合物和水生植物有效地结合在一起，水生植物及其发达的根系具有极高的生物亲和性，经过超大的表面积可大量吸附微生物，其中采用的微生物是专门针对性地对菌种进行筛选，采用不动杆菌、脱氮硫杆菌、假单胞菌、蜡状芽孢杆菌配合制成，将上述菌种复配在一起发挥微生物的协同作用和增效功能；这些微生物在水生植物表面及其根部形成附着型活性生物膜，通过自身的新陈代谢作用吸收、降解水体中的有机污染物和氮、磷等，净化水体，有效治理污染水体。

Description

微生物复合物及其制备方法和采用其治理污染水体的方法
技术领域
本发明涉及水处理技术领域，尤其涉及一种微生物复合物及其制备方法 和采用其治理污染水体的方法。
背景技术
水是生命之源，在人类的生产发展中起着重要的作用。但是，随着经济的 高速发展和城市化进程的加速，我国日趋严重的水环境污染问题对经济发展 和人们的生产生活产生了严重的制约。水环境污染的根源来自于工业排放的 废水、污水，城镇生活污水以及农业化肥、农药流失等。
污染水体的传统治理方法主要是物理方法和化学方法。物理方法如：①引 水换水，就是用“引水释污”方法对污染水体进行稀释，可以使水体污染指 标等有所下降。但对于蓄水量较大的水域，补水量太小起不到净化效果，而 提高补水量又造成水资源的大量浪费，且费用高昂。所以只是起到一个治标 不治本的暂缓效果。②底泥疏浚，也就是“清淤挖泥”，可减少河道内的大量 有机碳、氮、磷等营养物质，是减少内源性污染、减轻水体黑臭的有效途径 和措施。但是大规模清淤，可能会破坏原有的生物种群结构和生境，削弱其 自净功能。化学方法一般是使用化学絮凝剂，通过投加化学药剂去除水层污 染物，达到改善水质的目的，但是由于化学絮凝处理的效果容易受水体环境 变化的影响，持续性差，容易反复，且对生态系统有二次污染，对水生生物 有毒性。生物修复通常是指利用微生物的代谢活性降解有机污染物，目的是 去除环境中的污染物，使其浓度下降至环境标准规定的浓度，改善受污染的 环境，且不会造成二次污染，操作简单，费用低，又能很方便地与其它技术 组合综合处理污染，较之上述传统的方法，这些优点使其成为最具发展潜力 的修复方法。但是，单一的生物修复技术依然存在有缺陷，如营养消耗不完 全。
发明内容
基于现有技术的上述情况，本发明的目的在于提供一种菌植共生改善水 体污染的方法，能够更好地实现污染水体的治理，并且具有无毒、安全、高 效、无二次污染等特点。
为达到上述目的，根据本发明的一个方面，提供了一种微生物复合物，所 述微生物复合物包括不动杆菌、脱氮硫杆菌、假单胞菌和蜡状芽孢杆菌。
进一步的，所述微生物复合物中各菌种的菌数数量比为(0.8-1):(1.8- 2.2):(1.8-2.2):(1.8-2.2)。
进一步的，所述微生物复合物还包括氨基多糖螯合盐载体。
进一步的，所述微生物复合物中，所述菌种共占质量比为(70-80)％，所 述氨基多糖螯合盐占质量比为(20-30)％。
根据本发明的第二个方面，提供了一种治理污染水体的方法，包括步骤：
在水体中种植水生植物；
向所述水生植物投放如本发明第一个方面所述的微生物复合物，以使得微 生物在所述水生植物的表面以及根部形成菌植共生体。
进一步的，所述水生植物包括水葫芦。
根据本发明的第三个方面，提供了一种微生物复合物的制备方法，所述微 生物复合物包括如本发明第一个方面所述的微生物复合物，该方法包括步骤：
采集受污染水体的水生植物根部附着物，置入预定比例的无菌水振荡并静 置，得到10-1稀释液；
将10-1稀释液连续稀释，制成10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、10-7、10-8的稀 释液；
从10-6、10-7、10-8稀释液中各取1mL，倒入熔化并冷却至(45-50)℃的牛 肉膏蛋白胨培养基并混合均匀；
冷却后倒置，于(28-30)℃培养(24-48)小时后观察，对分离出的菌株 进行筛选，获得分离纯化后的菌种纯培养体；
取所述分离纯化后的菌种，在缺磷的乙酸合成培养基中预培养后，令PH＝7, 在30℃140rpm的摇床上过夜培养；
将菌体细胞离心后洗涤、离心，重新悬浮于富磷培养基中，在30℃摇床 中进行扩大培养24h后，取10mL菌液，过滤后取澄清的无菌液体培养基，取 摄磷率高于92％的菌株重新接种于培养基中，以获得不动杆菌；
将优势细菌接种于硝酸盐培养基中，并与等量的甲溶液、乙溶液混合后加 入培养基内，经过反硝化作用后，获得脱氮硫杆菌、蜡状芽孢杆菌和假单胞 菌；
将所述不动杆菌、脱氮硫杆菌、假单胞菌和蜡状芽孢杆菌分别单株发酵， 并按比例混合，以氨基多糖螯合盐为载体，得到所述微生物复合物。
进一步的，所述将10-1稀释液连续稀释，制成10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、10-7、10-8的稀释液，包括步骤：
将所述10-1稀释液置入预定比例的无菌水，吸吹预定次数，混合菌液，得 到10-2的稀释液；
以此类推，连续稀释，制成10-3、10-4、10-5、10-6、10-7、10-8的稀释菌液。
进一步的，所述对分离出的菌株进行筛选，获得分离纯化后的菌种纯培养 体，包括步骤：
判断分离纯化的菌株是否为单菌落，若不是单菌落，则进一步进行分离纯 化直至得到单菌落菌株；
选取单菌落菌株做涂片检查，若纯度不满足要求，则挑取菌落进一步分离， 直至获得菌种纯培养体。
进一步的，所述甲溶液包括对氨基苯磺酸0.8g和5mol/L醋酸100ml；所 述乙溶液包括α-奈胺0.5g和5mol/L醋酸100ml。
综上所述，本发明提供了一种微生物复合物及其制备方法和采用其治理 污染水体的方法，采用菌植共生的方法来治理污染水体，将筛选的微生物复 合物和水生植物有效地结合在一起，水生植物及其发达的根系具有极高的生 物亲和性，经过超大的表面积可大量吸附微生物，其中采用的微生物是专门 针对性地对菌种进行筛选，采用不动杆菌、脱氮硫杆菌、假单胞菌、蜡状芽 孢杆菌配合制成，将上述菌种复配在一起发挥微生物的协同作用和增效功能； 这些微生物在水生植物表面及其根部形成附着型活性生物膜，通过自身的新 陈代谢作用吸收、降解水体中的有机污染物和氮、磷等，净化水体，有效治 理污染水体。
附图说明
图1是本发明微生物复合物的制备方法的流程图。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明了，下面结合具体实施方 式并参照附图，对本发明进一步详细说明。应该理解，这些描述只是示例性 的，而并非要限制本发明的范围。此外，在以下说明中，省略了对公知结构 和技术的描述，以避免不必要地混淆本发明的概念。
下面结合附图对本发明的技术方案进行详细说明。根据本发明的一个实施 例，提供了一种微生物复合物，所述微生物复合物包括不动杆菌、脱氮硫杆 菌、假单胞菌和蜡状芽孢杆菌。其中，不动杆菌、脱氮硫杆菌、假单胞菌和 蜡状芽孢杆菌的菌数数量比为(0.8-1):(1.8-2.2):(1.8-2.2):(1.8- 2.2)，总菌数可以达到100亿/g。取以上4种微生物的复合物(70-80)％， 辅以(20-30)％氨基多糖螯合盐为载体，制成微生物复合物。
根据本发明的另一个实施例，提供了一种采用该微生物复合物治理污染水 体的方法，包括步骤：
在水体中种植水生植物，该水生植物例如可以为水葫芦。水生植物通过植 物的吸收、吸附作用，富集氮、磷等元素，降解、富集其它有毒有害污染物， 同时由于水生植物生长对藻类的抑制作用，使水体中藻类数量降低，提高水 体透明度，达到净化水质的目的。除了上述利用水生植物直接吸收、固定、 分解污染物外，水生植物还可以通过对微生物的调控来进行环境修复。该水 生植物可以按水体的(20-30)％进行覆盖，优选覆盖量是30％。当水生植物覆 盖量少于20％时，无法取得有效改善的效果，当覆盖量超过30％时，会导致后 期维护难度加大。
向所述水生植物投放上述经过筛选的微生物复合物，以使得微生物在所述 水生植物的表面以及根部繁殖生长，在其表面和根部形成菌植共生体。所述 微生物复合物的使用量可以为(1-10)ppm，优选使用5ppm。当其用量少于 1ppm时，无法取得有效改善的效果，当用量超过10ppm时，会造成成本上的 浪费。
根据本发明的另一个实施例，提供了该微生物复合物的制备方法，该制备 方法的流程图如图1所示，包括如下步骤：
采集受污染水体的水生植物根部附着物，置入预定比例的无菌水振荡并静 置，该预定比例例如为附着物9倍体积的无菌水，得到10-1稀释液。例如取 1mL根部附着物放入装有9mL无菌水并放有玻璃珠的50mL三角瓶中，置摇床 上振荡20min使微生物细胞分散，静置30s即成10-1稀释液。
将10-1稀释液连续稀释，制成10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、10-7、10-8的稀 释液。取与10-1稀释液预定比例的无菌水，例如1：9的体积比，例如用1mL 无菌吸管吸取10-1稀释液1mL，移入装有9mL无菌水的试管中，吸吹3次， 混合菌液，即成10-2稀释液。以此类推，连续稀释，制成10-3、10-4、10-5、10-6、10-7、10-8一系列的稀释菌液。
从10-6、10-7、10-8稀释液中各取1mL于平板中，倒入熔化并冷却至(45- 50)℃的牛肉膏蛋白胨培养基(蛋白胨10g/L，牛肉膏3g/L，NaCl 5g/L，琼 脂20g/L，pH 7.2)，轻轻转动平板，使菌液与培养基混合均匀。
冷却后倒置，于(28-30)℃培养(24-48)小时后观察，从固体平板上分 离出来的菌株若不是单个菌繁殖而成，则进一步进行分离纯化；在平板上选 择生长较好的有代表性的菌落接种斜面，同时做涂片检查，若发现不纯，挑 取菌落进一步分离，直至获得纯培养体。
选取分离纯化后的菌种，首先在缺磷的乙酸合成培养基(CH3COONa 2g/L，Na2HPO4·2H2O 23mg/L，CaCl2·2H2O 11mg/L，NH4C1 152.8mg/L，MgSO4·7H2O 81.12mg/L，K2SO4 17.83mg/L，HEPES缓冲液7g/L，微量元素混合液2mL/L， pH7.2。其中微量元素混合液为：FeSO4·7H20 40g/L，MnSO4·nH2O 10g/L，AlCl3·6H2O 10g/L，CoC12 4g/L，ZnSO4·7H2O2g/L，Na2MoO4·2H2O 2g/L，CuCl2·2H2O 1g/L，H3BO4 0.5g/L，溶解于5mol/L HC1溶液中)中进行预培养，用1mol/L 的氢氧化钠将pH值调到7，然后各培养物在30℃、140rpm的摇床上过夜培 养。菌体细胞以10000rpm离心出来，之后用无菌蒸馏水洗涤、离心，重新悬 浮于富磷培养基中(CH3COONa 2g/L，K2PO4 25mg/L，NH4Cl 305.52mg/L，MgSO4·7H2O 91.26mg/L，CaC12·2H2O 25.68mg/L，PIPES缓冲液8.5g/L，微量元素 混合液2mL/L，pH7.2)，然后在30℃摇床中进行扩大培养，培养24h后，每 组大约取10mL菌液，滤纸过滤取澄清的无菌液体培养基，利用钼锑抗分光光 度法测定接种后PO4 3--P含量的变化。取摄磷率高达92％的菌株重新接种于培 养基中，根据细菌的形态特征和生理生化特征对此菌进行鉴定，确定此菌种 为不动杆菌。
准备甲液(对氨基苯磺酸0.8g+5mol/L醋酸100ml)、乙液(α-奈胺 0.5g+5mol/L醋酸100ml)，将纯化的优势细菌接种于硝酸盐培养基(牛肉膏 3g/L，蛋白胨5g/L，KNO3 1g/L，pH 7.4)中，于35℃培养1-2天，将甲、 乙液等量混合后(约0.1ml)加入培养基内，观察结果。有三株出现红色阳性 反应，即硝酸盐被还原，说明具有反硝化作用。取此3株菌株重新接种于培 养基中，根据细菌的形态特征和生理生化特征对3菌株进行鉴定，确定为脱 氮硫杆菌、蜡状芽孢杆菌和假单胞菌。
将此4种菌均进行单菌株发酵，不动杆菌、脱氮硫杆菌、假单胞菌、蜡状 芽孢杆菌按比例混合，菌数数量比0.8-1∶1.8-2.2∶1.8-2.2∶1.8-2.2，总 菌数达到100亿/g。取以上4种微生物的复合物70-80％，辅以20-30％氨基 多糖螯合盐为载体，制成微生物复合物。
将上述物质进行组合配伍，对治理污染水体而言，明显优于缺少任何其中 一种的组合，也明显优于再添加其他物质(非指不可清除的杂质)后的组合 物。而且，当上述4种微生物的复合物少于70％或大于80％，氨基多糖螯合盐 少于20％或大于30％，均无法取得如本发明实施例在改善污染水体的优异效 果。根据本发明实施例提供的方案，不动杆菌能超量的将污水中的磷吸入体 内，使体内的含磷量超过一般细菌体内的含磷量的数倍，可被用于生物除磷。 脱氮硫杆菌，能利用一些无机物在氧化过程中释放出来的能量将硝酸盐还原， 发挥反硝化作用。假单胞菌在好氧和异养条件下都能进行反硝化作用，能将 铵态氮直接转化为氮气去除，可实现同步实现硝化反硝化的脱氮过程。蜡状 芽孢杆菌可在好氧条件下以NO3-作为氢受体高效的将NO3-转化为NO2-，具有较 强的反硝化能力，而且在降解过程中无NO2-的积累。氨基多糖螯合盐，可为 复合微生物提供无机能量源，促进微生物的快速生长，具有很好的比表面积， 促进复合微生物吸附于所种植水生植物叶片及根部，形成生物膜系统，且抗 外界冲击力较强。
以下提供具体实施例和对比例
实施例1
采集受污染严重水体的水葫芦根部附着物，取1mL放入装有9mL无菌水 并放有玻璃珠的50mL三角瓶中，置摇床上振荡20min使微生物细胞分散，静 置30s即成10-1稀释液；用1mL无菌吸管吸取10-1稀释液1mL，移入装有9mL 无菌水的试管中，吸吹3次，混合菌液，即成10-2稀释液。以此类推，连续 稀释，制成10-3、10-4、10-5、10-6、10-7、10-8一系列的稀释菌液。从0-6、10-7、10-8稀释菌液中各取1mL于平板中，倒入熔化并冷却至45℃的牛肉膏蛋白 胨培养基(蛋白胨10g/L，牛肉膏3g/L，NaCl 5g/L，琼脂20g/L，pH 7.2)， 轻轻转动平板，使菌液与培养基混合均匀；冷却后倒置，于28℃培养48小 时后观察；从固体平板上分离出来的菌株若不是单个菌繁殖而成，则进一步 进行分离纯化；在平板上选择生长较好的有代表性的菌落接种斜面，同时做 涂片检查，若发现不纯，挑取菌落进一步分离，直至获得纯培养体。
选取分离纯化后的菌种，首先在缺磷的乙酸合成培养基(CH3COONa 2g/L，Na2HPO4·2H2O 23mg/L，CaCl2·2H2O 11mg/L，NH4C1 152.8mg/L，MgSO4·7H2O 81.12mg/L，K2SO4 17.83mg/L，HEPES缓冲液7g/L，微量元素混合液2mL/L， pH7.2。其中微量元素混合液为：FeSO4·7H20 40g/L，MnSO4·nH2O 10g/L，AlCl3·6H2O 10g/L，CoC12 4g/L，ZnSO4·7H2O2g/L，Na2MoO4·2H2O 2g/L，CuCl2·2H2O 1g/L，H3BO4 0.5g/L，溶解于5mol/L HC1溶液中)中进行预培养，用1mol/L 的氢氧化钠将pH值调到7，然后各培养物在30℃、140rpm的摇床上过夜培 养。菌体细胞以10000rpm离心出来，之后用无菌蒸馏水洗涤、离心，重新悬 浮于富磷培养基中(CH3COONa 2g/L，K2PO4 25mg/L，NH4Cl 305.52mg/L，MgSO4·7H2O 91.26mg/L，CaC12·2H2O 25.68mg/L，PIPES缓冲液8.5g/L，微量元素 混合液2mL/L，pH7.2)，然后在30℃摇床中进行扩大培养，培养24h后，每 组大约取10mL菌液，滤纸过滤取澄清的无菌液体培养基，利用钼锑抗分光光 度法测定接种后PO4 3--P含量的变化。取摄磷率高达92％的菌株重新接种于培 养基中，根据细菌的形态特征和生理生化特征对此菌进行鉴定，确定此菌种 为不动杆菌。
准备甲液(对氨基苯磺酸0.8g+5mol/L醋酸100ml)、乙液(α-奈胺 0.5g+5mol/L醋酸100ml)，将纯化的优势细菌接种于硝酸盐培养基(牛肉膏 3g/L，蛋白胨5g/L，KNO3 1g/L，pH 7.4)中，于35℃培养1-2天，将甲、 乙液等量混合后(约0.1ml)加入培养基内，观察结果。有三株出现红色阳性 反应，即硝酸盐被还原，说明具有反硝化作用。取此3株菌株重新接种于培 养基中，根据细菌的形态特征和生理生化特征对3菌株进行鉴定，确定为脱 氮硫杆菌、蜡状芽孢杆菌和假单胞菌。
按照如下菌数数量配比的组分：不动杆菌、脱氮硫杆菌、假单胞菌、蜡状 芽孢杆菌，菌数数量比为0.8∶2.2∶2.2∶1.8，取以上4种微生物的复合物 70％，辅以30％氨基多糖螯合盐为载体，制成微生物复合物1。种植水葫芦， 向所种水葫芦处投放微生物复合物1，使微生物在其表面及根部繁殖生长， 在其表面和根部形成菌植共生体。
实施例2
各菌种的制备过程同实施例1，按照如下菌数数量配比的组分：不动杆菌、 脱氮硫杆菌、假单胞菌、蜡状芽孢杆菌，菌数数量比为1∶1.8∶1.8∶2.2， 取以上4种微生物的复合物75％，辅以25％氨基多糖螯合盐为载体，制成微生 物复合物2。种植水葫芦，向所种水葫芦处投放微生物复合物2，使微生物在 其表面及根部繁殖生长，在其表面和根部形成菌植共生体。
实施例3
各菌种的制备过程同实施例1，按照如下菌数数量配比的组分：不动杆菌、 脱氮硫杆菌、假单胞菌、蜡状芽孢杆菌，菌数数量比为0.9∶2∶2∶2，取以 上4种微生物的复合物80％，辅以20％氨基多糖螯合盐为载体，制成微生物复 合物3。种植水葫芦，向所种水葫芦处投放微生物复合物3，使微生物在其表 面及根部繁殖生长，在其表面和根部形成菌植共生体。
对比例1
按照如下菌数数量配比的组分：脱氮硫杆菌、假单胞菌、蜡状芽孢杆菌， 菌数数量比为1∶1∶1，取以上3种微生物的复合物75％，辅以25％氨基多糖 螯合盐为载体，制成微生物复合物4。种植水葫芦，向所种水葫芦处投放微 生物复合物4，使微生物在其表面及根部繁殖生长，在其表面和根部形成菌 植共生体。
对比例2
按照如下菌数数量配比的组分：不动杆菌、假单胞菌、蜡状芽孢杆菌，菌 数数量比为1∶2∶2，取以上3种微生物的复合物70％，辅以30％氨基多糖螯 合盐为载体，制成微生物复合物5。种植水葫芦，向所种水葫芦处投放微生 物复合物5，使微生物在其表面及根部繁殖生长，在其表面和根部形成菌植 共生体。
对比例3
按照如下菌数数量配比的组分：不动杆菌、脱氮硫杆菌、蜡状芽孢杆菌， 菌数数量比为1∶2∶2，取以上3种微生物的复合物70％，辅以30％氨基多糖 螯合盐为载体，制成微生物复合物6。种植水葫芦，向所种水葫芦处投放微 生物复合物6，使微生物在其表面及根部繁殖生长，在其表面和根部形成菌 植共生体。
对比例4
按照如下菌数数量配比的组分：不动杆菌、脱氮硫杆菌、假单胞菌，菌数 数量比为1∶2∶2，取以上3种微生物的复合物75％，辅以25％氨基多糖螯合 盐为载体，制成微生物复合物7。种植水葫芦，向所种水葫芦处投放微生物 复合物7，使微生物在其表面及根部繁殖生长，在其表面和根部形成菌植共 生体。
对比例5
按照如下菌数数量配比的组分：不动杆菌、脱氮硫杆菌、假单胞菌、蜡状 芽孢杆菌，菌数数量比为1∶2∶2：2，取以上4种微生物的复合物65％，辅 以35％氨基多糖螯合盐为载体，制成微生物复合物8。种植水葫芦，向所种水 葫芦处投放微生物复合物8，使微生物在其表面及根部繁殖生长，在其表面 和根部形成菌植共生体。
对比例6
仅向污染水体投放本发明所筛选的微生物，所述微生物包括如下菌数数量 配比的组分：不动杆菌、脱氮硫杆菌、假单胞菌、蜡状芽孢杆菌，菌数数量 比为1∶2∶2∶2，取以上4种微生物的复合物70％，辅以30％氨基多糖螯合 盐为载体，制成微生物复合物9。
对比例7
仅种植水葫芦。
试验例1：河北石家庄某污染水体
(1)设置三个组：空白组、对照组、本发明组。本发明的试验均是在7- 8月份完成，平均水温在28-30℃之间。
空白组不投放任何处理剂；
对照组1-7分别按照对比例1-7投放；
本发明组1-3分别按实施例1-3投放。
水葫芦按水体的30％进行覆盖，微生物复合物的使用量为5ppm。
(2)结果：本发明组的氨氮、总磷、COD的去除率明显高于空白组和对照 组，具体数值如表1所示。
表1试验例1氨氮、总磷、COD的去除率(指标去除率％)
Figure BDA0002892580780000111
Figure BDA0002892580780000121
其中，COD测定采用重铬酸钾法；氨氮测定采用纳氏试剂分光光度法；总 磷测定采用钼酸铵分光光度法。
试验例2：天津某污染水体一
(1)设置三个组：空白组、对照组、本发明组。本发明的试验均是在7- 8月份完成，平均水温在28-30℃之间。
空白组不投放任何处理剂；
对照组1-7分别按照对比例1-7投放；
本发明组1-3分别按实施例1-3投放。
水葫芦按水体的30％进行覆盖，微生物复合物的使用量为5ppm。
(2)结果：本发明组的氨氮、总磷、COD的去除率明显高于空白组和对照 组，具体数值如表2所示。
表2试验例2氨氮、总磷、COD的去除率(指标去除率％)
Figure BDA0002892580780000122
Figure BDA0002892580780000131
其中，COD测定采用重铬酸钾法；氨氮测定采用纳氏试剂分光光度法；总 磷测定采用钼酸铵分光光度法。
试验例3：天津某污染水体二
(1)设置三个组：空白组、对照组、本发明组。本发明的试验均是在7- 8月份完成，平均水温在28-30℃之间。
空白组不投放任何处理剂；
对照组1-7分别按照对比例1-7投放；
本发明组1-3分别按实施例1-3投放。
水葫芦按水体的30％进行覆盖，微生物复合物的使用量为5ppm。
(2)结果：本发明组的氨氮、总磷、COD的去除率明显高于空白组和对照 组，具体数值如表3所示。
表3试验例3氨氮、总磷、COD的去除率(指标去除率％)
氨氮 总磷 COD
空白组 5.53 4.48 4.26
对照组1 33.58 10.24 32.59
对照组2 32.29 9.15 33.12
对照组3 34.14 10.63 30.41
对照组4 35.57 10.95 31.24
对照组5 38.95 12.15 35.58
对照组6 37.24 12.66 35.52
对照组7 25.22 9.95 21.37
本发明组1 75.67 34.37 76.49
本发明组2 74.25 33.28 77.20
本发明组3 75.04 33.49 76.35
其中，COD测定采用重铬酸钾法；氨氮测定采用纳氏试剂分光光度法；总 磷测定采用钼酸铵分光光度法。
从以上各试验例的结果可以看出，本发明实施例提供的技术方案是将筛 选的微生物复合物和水生植物有效地结合在一起，水生植物及其发达的根系 具有极高的生物亲和性，经过超大的表面积可大量吸附本发明筛选的复合微 生物，这些微生物在水生植物表面及其根部形成附着型活性生物膜，通过自 身的新陈代谢作用，改善水体污染指标，吸收、降解水体中的氮、磷等，净 化水体，能够达到非常好的治理效果。
综上所述，本发明涉及一种微生物复合物及其制备方法和采用其治理污染 水体的方法，采用菌植共生的方法来治理污染水体，将筛选的微生物复合物 和水生植物有效地结合在一起，水生植物及其发达的根系具有极高的生物亲 和性，经过超大的表面积可大量吸附微生物，其中采用的微生物是专门针对 性地对菌种进行筛选，采用不动杆菌、脱氮硫杆菌、假单胞菌、蜡状芽孢杆 菌配合制成，将上述菌种复配在一起发挥微生物的协同作用和增效功能；这 些微生物在水生植物表面及其根部形成附着型活性生物膜，通过自身的新陈 代谢作用吸收、降解水体中的有机污染物和氮、磷等，净化水体，有效治理 污染水体。
应当理解的是，本发明的上述具体实施方式仅仅用于示例性说明或解释 本发明的原理，而不构成对本发明的限制。因此，在不偏离本发明的精神和 范围的情况下所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保 护范围之内。此外，本发明所附权利要求旨在涵盖落入所附权利要求范围和 边界、或者这种范围和边界的等同形式内的全部变化和修改例。

Claims (10)

1.一种微生物复合物，其特征在于，所述微生物复合物包括不动杆菌、脱氮硫杆菌、假单胞菌和蜡状芽孢杆菌。
2.根据权利要求1所述的微生物复合物，其特征在于，所述微生物复合物中各菌种的菌数数量比为(0.8-1):(1.8-2.2):(1.8-2.2):(1.8-2.2)。
3.根据权利要求2所述的微生物复合物，其特征在于，所述微生物复合物还包括氨基多糖螯合盐载体。
4.根据权利要求3所述的微生物复合物，其特征在于，所述微生物复合物中，所述菌种共占质量比为(70-80)％，所述氨基多糖螯合盐占质量比为(20-30)％。
5.一种治理污染水体的方法，其特征在于，包括步骤：
在水体中种植水生植物；
向所述水生植物投放如权利要求1-4中任意一项所述的微生物复合物，以使得微生物在所述水生植物的表面以及根部形成菌植共生体。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述水生植物包括水葫芦。
7.一种微生物复合物的制备方法，其特征在于，所述微生物复合物包括如权利要求1-4中任意一项所述的微生物复合物，该方法包括步骤：
采集受污染水体的水生植物根部附着物，置入预定比例的无菌水振荡并静置，得到10-1稀释液；
将10-1稀释液连续稀释，制成10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、10-7、10-8的稀释液；
从10-6、10-7、10-8稀释液中各取1mL，倒入熔化并冷却至(45-50)℃的牛肉膏蛋白胨培养基并混合均匀；
冷却后倒置，于(28-30)℃培养(24-48)小时后观察，对分离出的菌株进行筛选，获得分离纯化后的菌种纯培养体；
取所述分离纯化后的菌种，在缺磷的乙酸合成培养基中预培养后，令PH＝7,在30℃140rpm的摇床上过夜培养；
将菌体细胞离心后洗涤、离心，重新悬浮于富磷培养基中，在30℃摇床中进行扩大培养24h后，取10mL菌液，过滤后取澄清的无菌液体培养基，取摄磷率高于92％的菌株重新接种于培养基中，以获得不动杆菌；
将优势细菌接种于硝酸盐培养基中，并与等量的甲溶液、乙溶液混合后加入培养基内，经过反硝化作用后，获得脱氮硫杆菌、蜡状芽孢杆菌和假单胞菌；
将所述不动杆菌、脱氮硫杆菌、假单胞菌和蜡状芽孢杆菌分别单株发酵，并按比例混合，以氨基多糖螯合盐为载体，得到所述微生物复合物。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述将10-1稀释液连续稀释，制成10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、10-7、10-8的稀释液，包括步骤：
将所述10-1稀释液置入预定比例的无菌水，吸吹预定次数，混合菌液，得到10-2的稀释液；
以此类推，连续稀释，制成10-3、10-4、10-5、10-6、10-7、10-8的稀释菌液。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述对分离出的菌株进行筛选，获得分离纯化后的菌种纯培养体，包括步骤：
判断分离纯化的菌株是否为单菌落，若不是单菌落，则进一步进行分离纯化直至得到单菌落菌株；
选取单菌落菌株做涂片检查，若纯度不满足要求，则挑取菌落进一步分离，直至获得菌种纯培养体。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述甲溶液包括对氨基苯磺酸0.8g和5mol/L醋酸100ml；所述乙溶液包括α-奈胺0.5g和5mol/L醋酸100ml。
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