CN112806259A - 一种高抗病性黄精组培育苗方法 - Google Patents
一种高抗病性黄精组培育苗方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种高抗病性黄精组培育苗方法，1)取材，2)诱导，3)继代培养，4)分化培养，5)壮苗生根培养，6)移栽，选取生长健壮，生根良好的苗株，炼苗2～3d，然后移入种植圃，本发明提高了黄精的抗病性能，能有效的抵抗黄精的黑斑病与叶斑病侵扰，增强黄精抗病优势，有效提高了种植黄精的成活率。
Description
技术领域
本发明涉及种植技术领域，尤其涉及一种高抗病性黄精组培育苗方法。
背景技术
黄精是百合科黄精属草本植物，是常用中药黄精三种基原植物之一。黄精作为常用中药，在我国已有2000多年的用药历史，其性味甘平，入肺、脾、肾经。功效补中益气，润心肺，强筋骨。治虚损寒热，肺痨咯血，病后体虚食少，筋骨软弱，风湿疼痛，风癞癣疾，为补阴之品。近年来药理研究表明，除上述功效外，黄精还有抗菌作用，尤其是对结核杆菌和真菌有显著的效果，同时又有降低血压的作用。近期研究结果还表明黄精对增加冠状动脉血流量，减轻动脉粥样硬化程度，提高肝脏中超氧化物歧化酶(SOD)活性有明显的作用。长期以来，由于人工栽培量较小，黄精药材来源主要以野生采集为主。随着市场对药材黄精需求量的增加和野生资源的急剧减少，采集野生黄精不但不能满足市场需求，更破坏了生态环境和黄精野生资源。由于黄精种子在自然条件下发芽率较低，自然条件下，黄精种子要经历2个冬季休眠后，才能长出一片真叶，目前在黄精人工栽培中多采用块茎进行无性繁殖。繁殖周期长、繁殖系数低。
更为严重的是在人工繁育的过程中，苗的抗病性差，容易感染，造成损失。
发明内容
本发明的提供一种高抗病性黄精组培育苗方法。
本发明的方案是：
一种高抗病性黄精组培育苗方法，包括下列步骤：
1)取材，取黄精的根茎、地上嫩芽其中之一进行激活处理，处理后切段，在0.5～1cm，得到黄精段；
2)诱导，将黄精段进行消毒，1～3个黄精段移入基本培养基中，喷洒处理菌液，喷两次，间隔15h，第一次喷洒0.5～1ml,第二次喷洒1～2ml，培养室培养，光照周期起止时间早上8点至晚上8点，日温度20～22℃，夜温度17～18℃，光照强度2000～2400lux，湿度55～58％，培养12～15d；
3)继代培养，将诱导产生的生长状态良好的组织接种于增殖培养基中培养，先暗培养5～8d，温度20～23℃，在移入光照为3000lux的条件下培养6-8小时，然后光照调为2500lux培养23～28d；
4)分化培养，将继代培养产生的生长状态良好的组织转接到分化培养基中培养20～22d，每日温度20～25℃，光照12～14h，强光3000lux，湿度70-80％，培养10～12h；
5)壮苗生根培养，将分化好的芽进行筛选，将生长状态良好的芽转移到壮苗培养基中培养20d，然后再将生长健壮高的丛生苗超过2.0cm转入到生根培养皿中，培养30～50d；
6)移栽，选取生长健壮，生根良好的苗株，炼苗2～3d，然后移入种植圃。
作为优选的技术方案，所述步骤1)的激活处理包括冲刷、冷藏与浸泡，将其用冲洗液进行冲刷脱毒，放入酒精中浸泡10～12min，然后送入1～3℃的冰箱内的激活液中冷藏0～12h，然后取出进入12～18℃的浸泡液浸泡30～40min。
作为优选的技术方案，所述冲洗液包括无菌水、0.1％的次氯酸钠、浓度为0.1％升汞溶液、苍术提取液，其投量比为95：1:1:2。
作为优选的技术方案，所述激活液包括蚁酸、蜂毒、蒸馏水与水杨酸，其投料比为0.1:0.3:94:2～3。
作为优选的技术方案，所述浸泡液包括黄原胶、柠檬酸钾、改性聚乳酸、植物生长因子以及蒸馏水，其投料比为15～20：2～3：20～30:1～3:40～50。
作为优选的技术方案，步骤1)中处理菌液为将刚刚感染黑斑病、叶斑病的黄精叶片，置于容器内，加入1倍病叶质量份数的质量分数为2％葡萄糖溶液，与30～35℃浸泡30～45min,过滤除杂，往滤液中添加水20倍稀释，然后加入1倍病叶质量份数的处理剂共同加热到48～51℃，保温20min，过滤得到菌液。
作为优选的技术方案，所述处理剂包括艾叶提取液、甘草提取液、竹叶提取液与蒸馏水。
作为优选的技术方案，所述叶提取液、甘草提取液、竹叶提取液与蒸馏水的投量比为2～3：1～2:2～5:90～95。
由于采用了上述技术方案，一种高抗病性黄精组培育苗方法，1)取材，取黄精的根茎、地上嫩芽其中之一进行激活处理，处理后切段，在0.5～1cm，得到黄精段；2)诱导，将黄精段进行消毒，1～3个黄精段移入基本培养基中，喷洒处理菌液，喷两次，间隔15h，第一次喷洒0.5～1ml,第二次喷洒1～2ml，培养室培养，光照周期起止时间早上8点至晚上8点，日温度20～22℃，夜温度17～18℃，光照强度2000～2400lux，湿度55～58％，培养12～15d；3)继代培养，将诱导产生的生长状态良好的组织接种于增殖培养基中培养，先暗培养5～8d，温度20～23℃，在移入光照为3000lux的条件下培养6-8小时，然后光照调为2500lux培养23～28d；4)分化培养，将继代培养产生的生长状态良好的组织转接到分化培养基中培养20～22d，每日温度20～25℃，光照12～14h，强光3000lux，湿度70-80％，培养10～12h；5)壮苗生根培养，将分化好的芽进行筛选，将生长状态良好的芽转移到壮苗培养基中培养20d，然后再将生长健壮高的丛生苗超过2.0cm转入到生根培养皿中，培养30～50d；6)移栽，选取生长健壮，生根良好的苗株，炼苗2～3d，然后移入种植圃。
本发明具有以下优点：
提高了黄精的抗病性能，能有效的抵抗黄精的黑斑病与叶斑病侵扰，增强黄精抗病优势，有效提高了种植的成活率。
解决了现有黄精繁殖时间长、出芽率低，以及现有组织培养激素多、出芽率低、成活率低等问题，将黄精从种子到出苗的时间有两年，降低到半年，并且黄精苗成活率在98％以上，有效的提高了黄精的繁育速度。
具体实施方式
为了弥补以上不足，本发明提供了一种高抗病性黄精组培育苗方法以解决上述背景技术中的问题。
一种高抗病性黄精组培育苗方法，包括下列步骤：
1)取材，取黄精的根茎、地上嫩芽其中之一进行激活处理，处理后切段，在0.5～1cm，得到黄精段；
2)诱导，将黄精段进行消毒，1～3个黄精段移入基本培养基中，喷洒处理菌液，喷两次，间隔15h，第一次喷洒0.5～1ml,第二次喷洒1～2ml，培养室培养，光照周期起止时间早上8点至晚上8点，日温度20～22℃，夜温度17～18℃，光照强度2000～2400lux，湿度55～58％，培养12～15d；
3)继代培养，将诱导产生的生长状态良好的组织接种于增殖培养基中培养，先暗培养5～8d，温度20～23℃，在移入光照为3000lux的条件下培养6-8小时，然后光照调为2500lux培养23～28d；
4)分化培养，将继代培养产生的生长状态良好的组织转接到分化培养基中培养20～22d，每日温度20～25℃，光照12～14h，强光3000lux，湿度70-80％，培养10～12h；
5)壮苗生根培养，将分化好的芽进行筛选，将生长状态良好的芽转移到壮苗培养基中培养20d，然后再将生长健壮高的丛生苗超过2.0cm转入到生根培养皿中，培养30～50d；
6)移栽，选取生长健壮，生根良好的苗株，炼苗2～3d，然后移入种植圃。
所述步骤1)的激活处理包括冲刷、冷藏与浸泡，将其用冲洗液进行冲刷脱毒，放入酒精中浸泡10～12min，然后送入1～3℃的冰箱内的激活液中冷藏0～12h，然后取出进入12～18℃的浸泡液浸泡30～40min。
所述冲洗液包括无菌水、0.1％的次氯酸钠、浓度为0.1％升汞溶液、苍术提取液，其投量比为95：1:1:2。
所述激活液包括蚁酸、蜂毒、蒸馏水与水杨酸，其投料比为0.1:0.3:94:2～3。
所述浸泡液包括黄原胶、柠檬酸钾、改性聚乳酸、植物生长因子以及蒸馏水，其投料比为15～20：2～3：20～30:1～3:40～50。
步骤1)中处理菌液为将刚刚感染黑斑病、叶斑病的黄精叶片，置于容器内，加入1倍病叶质量份数的质量分数为2％葡萄糖溶液，与30～35℃浸泡30～45min,过滤除杂，往滤液中添加水20倍稀释，然后加入1倍病叶质量份数的处理剂共同加热到48～51℃，保温20min，过滤得到菌液。
所述处理剂包括艾叶提取液、甘草提取液、竹叶提取液与蒸馏水。
所述叶提取液、甘草提取液、竹叶提取液与蒸馏水的投量比为2～3：1～2:2～5:90～95。
为了使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。
实施例1：
1)取材，取黄精的根茎、地上嫩芽其中之一进行激活处理，处理后切段，在0.5～1cm，得到黄精段；
2)诱导，将黄精段进行消毒，1～3个黄精段移入基本培养基中，喷洒处理菌液，喷两次，间隔15h，第一次喷洒0.5～1ml,第二次喷洒1～2ml，培养室培养，光照周期起止时间早上8点至晚上8点，日温度20～22℃，夜温度17～18℃，光照强度2000～2400lux，湿度55～58％，培养12～15d；
3)继代培养，将诱导产生的生长状态良好的组织接种于增殖培养基中培养，先暗培养5～8d，温度20～23℃，在移入光照为3000lux的条件下培养6-8小时，然后光照调为2500lux培养23～28d；
4)分化培养，将继代培养产生的生长状态良好的组织转接到分化培养基中培养20～22d，每日温度20～25℃，光照12～14h，强光3000lux，湿度70-80％，培养10～12h；
5)壮苗生根培养，将分化好的芽进行筛选，将生长状态良好的芽转移到壮苗培养基中培养20d，然后再将生长健壮高的丛生苗超过2.0cm转入到生根培养皿中，培养30～50d；
6)移栽，选取生长健壮，生根良好的苗株，炼苗2～3d，然后移入种植圃。
所述步骤1)的激活处理包括冲刷、冷藏与浸泡，将其用冲洗液进行冲刷脱毒，放入酒精中浸泡10～12min，然后送入1～3℃的冰箱内的激活液中冷藏0～12h，然后取出进入12～18℃的浸泡液浸泡30～40min。
所述冲洗液包括无菌水、0.1％的次氯酸钠、浓度为0.1％升汞溶液、苍术提取液，其投量比为95：1:1:2。
所述激活液包括蚁酸、蜂毒、蒸馏水与水杨酸，其投料比为0.1:0.3:94:2～3。
所述浸泡液包括黄原胶、柠檬酸钾、改性聚乳酸、植物生长因子以及蒸馏水，其投料比为15：2：20:1:40。
步骤1)中处理菌液为将刚刚感染黑斑病、叶斑病的黄精叶片，置于容器内，加入1倍病叶质量份数的质量分数为2％葡萄糖溶液，与30～35℃浸泡30～45min,过滤除杂，往滤液中添加水20倍稀释，然后加入1倍病叶质量份数的处理剂共同加热到48～51℃，保温20min，过滤得到菌液。
所述处理剂包括艾叶提取液、甘草提取液、竹叶提取液与蒸馏水。
所述叶提取液、甘草提取液、竹叶提取液与蒸馏水的投量比为2：1:2:90。
实施例2：
1)取材，取黄精的根茎、地上嫩芽其中之一进行激活处理，处理后切段，在0.5～1cm，得到黄精段；
2)诱导，将黄精段进行消毒，1～3个黄精段移入基本培养基中，喷洒处理菌液，喷两次，间隔15h，第一次喷洒0.5～1ml,第二次喷洒1～2ml，培养室培养，光照周期起止时间早上8点至晚上8点，日温度20～22℃，夜温度17～18℃，光照强度2000～2400lux，湿度55～58％，培养12～15d；
3)继代培养，将诱导产生的生长状态良好的组织接种于增殖培养基中培养，先暗培养5～8d，温度20～23℃，在移入光照为3000lux的条件下培养6-8小时，然后光照调为2500lux培养23～28d；
4)分化培养，将继代培养产生的生长状态良好的组织转接到分化培养基中培养20～22d，每日温度20～25℃，光照12～14h，强光3000lux，湿度70-80％，培养10～12h；
5)壮苗生根培养，将分化好的芽进行筛选，将生长状态良好的芽转移到壮苗培养基中培养20d，然后再将生长健壮高的丛生苗超过2.0cm转入到生根培养皿中，培养30～50d；
6)移栽，选取生长健壮，生根良好的苗株，炼苗2～3d，然后移入种植圃。
所述步骤1)的激活处理包括冲刷、冷藏与浸泡，将其用冲洗液进行冲刷脱毒，放入酒精中浸泡10～12min，然后送入1～3℃的冰箱内的激活液中冷藏0～12h，然后取出进入12～18℃的浸泡液浸泡30～40min。
所述冲洗液包括无菌水、0.1％的次氯酸钠、浓度为0.1％升汞溶液、苍术提取液，其投量比为95：1:1:2。
所述激活液包括蚁酸、蜂毒、蒸馏水与水杨酸，其投料比为0.1:0.3:94:2～3。
所述浸泡液包括黄原胶、柠檬酸钾、改性聚乳酸、植物生长因子以及蒸馏水，其投料比为20：3：30:3:50。
步骤1)中处理菌液为将刚刚感染黑斑病、叶斑病的黄精叶片，置于容器内，加入1倍病叶质量份数的质量分数为2％葡萄糖溶液，与30～35℃浸泡30～45min,过滤除杂，往滤液中添加水20倍稀释，然后加入1倍病叶质量份数的处理剂共同加热到48～51℃，保温20min，过滤得到菌液。
所述处理剂包括艾叶提取液、甘草提取液、竹叶提取液与蒸馏水。
所述叶提取液、甘草提取液、竹叶提取液与蒸馏水的投量比为3：2:5:95。
实施例3：
1)取材，取黄精的根茎、地上嫩芽其中之一进行激活处理，处理后切段，在0.5～1cm，得到黄精段；
2)诱导，将黄精段进行消毒，1～3个黄精段移入基本培养基中，喷洒处理菌液，喷两次，间隔15h，第一次喷洒0.5～1ml,第二次喷洒1～2ml，培养室培养，光照周期起止时间早上8点至晚上8点，日温度20～22℃，夜温度17～18℃，光照强度2000～2400lux，湿度55～58％，培养12～15d；
3)继代培养，将诱导产生的生长状态良好的组织接种于增殖培养基中培养，先暗培养5～8d，温度20～23℃，在移入光照为3000lux的条件下培养6-8小时，然后光照调为2500lux培养23～28d；
4)分化培养，将继代培养产生的生长状态良好的组织转接到分化培养基中培养20～22d，每日温度20～25℃，光照12～14h，强光3000lux，湿度70-80％，培养10～12h；
5)壮苗生根培养，将分化好的芽进行筛选，将生长状态良好的芽转移到壮苗培养基中培养20d，然后再将生长健壮高的丛生苗超过2.0cm转入到生根培养皿中，培养30～50d；
6)移栽，选取生长健壮，生根良好的苗株，炼苗2～3d，然后移入种植圃。
所述步骤1)的激活处理包括冲刷、冷藏与浸泡，将其用冲洗液进行冲刷脱毒，放入酒精中浸泡10～12min，然后送入1～3℃的冰箱内的激活液中冷藏0～12h，然后取出进入12～18℃的浸泡液浸泡30～40min。
所述冲洗液包括无菌水、0.1％的次氯酸钠、浓度为0.1％升汞溶液、苍术提取液，其投量比为95：1:1:2。
所述激活液包括蚁酸、蜂毒、蒸馏水与水杨酸，其投料比为0.1:0.3:94:2～3。
所述浸泡液包括黄原胶、柠檬酸钾、改性聚乳酸、植物生长因子以及蒸馏水，其投料比为18：2：25:2:47。
步骤1)中处理菌液为将刚刚感染黑斑病、叶斑病的黄精叶片，置于容器内，加入1倍病叶质量份数的质量分数为2％葡萄糖溶液，与30～35℃浸泡30～45min,过滤除杂，往滤液中添加水20倍稀释，然后加入1倍病叶质量份数的处理剂共同加热到48～51℃，保温20min，过滤得到菌液。
所述处理剂包括艾叶提取液、甘草提取液、竹叶提取液与蒸馏水。
所述叶提取液、甘草提取液、竹叶提取液与蒸馏水的投量比为2：1:3:93。
鉴定植物的抗病性：
将实施例3的黄精苗株60株作为试验组、通过常规得到黄精苗株60株作为对照组，试验组与对照组的各三十株其对黑斑病接种，试验组与对照组的各三十株其对叶斑病接种，继续种植培养。
后期观察发病情况，试验组的黑斑病得发病率在6％，叶斑病的发病率在5％，而对照组的黑斑病的发病率在45％，叶斑病的发病率在48％。
以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征及本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。
Claims (8)
1.一种高抗病性黄精组培育苗方法，其特征在于，包括下列步骤：
1)取材，取黄精的根茎、地上嫩芽其中之一进行激活处理，处理后切段，在0.5～1cm，得到黄精段；
2)诱导，将黄精段进行消毒，1～3个黄精段移入基本培养基中，喷洒处理菌液，喷两次，间隔15h，第一次喷洒0.5～1ml,第二次喷洒1～2ml，培养室培养，光照周期起止时间早上8点至晚上8点，日温度20～22℃，夜温度17～18℃，光照强度2000～2400lux，湿度55～58％，培养12～15d；
3)继代培养，将诱导产生的生长状态良好的组织接种于增殖培养基中培养，先暗培养5～8d，温度20～23℃，在移入光照为3000lux的条件下培养6-8小时，然后光照调为2500lux培养23～28d；
4)分化培养，将继代培养产生的生长状态良好的组织转接到分化培养基中培养20～22d，每日温度20～25℃，光照12～14h，强光3000lux，湿度70-80％，培养10～12h；
5)壮苗生根培养，将分化好的芽进行筛选，将生长状态良好的芽转移到壮苗培养基中培养20d，然后再将生长健壮高的丛生苗超过2.0cm转入到生根培养皿中，培养30～50d；
6)移栽，选取生长健壮，生根良好的苗株，炼苗2～3d，然后移入种植圃。
2.如权利要求1所述的一种高抗病性黄精组培育苗方法，其特征在于：所述步骤1)的激活处理包括冲刷、冷藏与浸泡，将其用冲洗液进行冲刷脱毒，放入酒精中浸泡10～12min，然后送入1～3℃的冰箱内的激活液中冷藏0～12h，然后取出进入12～18℃的浸泡液浸泡30～40min。
3.如权利要求2所述的一种高抗病性黄精组培育苗方法，其特征在于：所述冲洗液包括无菌水、0.1％的次氯酸钠、浓度为0.1％升汞溶液、苍术提取液，其投量比为95：1:1:2。
4.如权利要求2所述的一种高抗病性黄精组培育苗方法，其特征在于：所述激活液包括蚁酸、蜂毒、蒸馏水与水杨酸，其投料比为0.1:0.3:94:2～3。
5.如权利要求2所述的一种高抗病性黄精组培育苗方法，其特征在于：所述浸泡液包括黄原胶、柠檬酸钾、改性聚乳酸、植物生长因子以及蒸馏水，其投料比为15～20：2～3：20～30:1～3:40～50。
6.如权利要求1所述的一种高抗病性黄精组培育苗方法，其特征在于：步骤1)中处理菌液为将刚刚感染黑斑病、叶斑病的黄精叶片，置于容器内，加入1倍病叶质量份数的质量分数为2％葡萄糖溶液，与30～35℃浸泡30～45min,过滤除杂，往滤液中添加水20倍稀释，然后加入1倍病叶质量份数的处理剂共同加热到48～51℃，保温20min，过滤得到菌液。
7.如权利要求6所述的一种高抗病性黄精组培育苗方法，其特征在于：所述处理剂包括艾叶提取液、甘草提取液、竹叶提取液与蒸馏水。
8.如权利要求7所述的一种高抗病性黄精组培育苗方法，其特征在于：所述叶提取液、甘草提取液、竹叶提取液与蒸馏水的投量比为2～3：1～2:2～5:90～95。
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