CN112795575B

CN112795575B - 大麦HvPOD11基因及其用途

Info

Publication number: CN112795575B
Application number: CN202110128965.9A
Authority: CN
Inventors: 裘程炜; 邬飞波
Original assignee: Zhejiang University ZJU
Current assignee: Zhejiang University ZJU
Priority date: 2021-01-29
Filing date: 2021-01-29
Publication date: 2022-04-12
Anticipated expiration: 2041-01-29
Also published as: CN112795575A

Abstract

本发明公开了大麦HvPOD11基因及其在调控大麦对干旱胁迫耐受性中的用途，属于基因工程技术领域。所述大麦HvPOD11基因的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，本发明通过对大麦HvPOD11基因的克隆和分析，并结合BSMV‑VIGS技术在大麦XZ5上对该基因功能验证，发现沉默HvPOD11基因导致大麦植株对干旱胁迫的耐受性显著降低。本发明为大麦耐干旱胁迫育种与生产提供了理论依据和相关基因。

Description

大麦HvPOD11基因及其用途

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，具体涉及大麦HvPOD11基因的克隆和分析及其用途。

背景技术

干旱是限制作物产量的主要气象因子。培育耐旱作物品种提高作物的耐/抗旱能力是作物生产亟需解决的关键问题之一；而发掘耐旱种质，明确其耐性机制是培育耐旱作物品种和制订耐旱栽培措施的基础。大麦(Hordeum vulgare L.)是一种在世界范围内广泛种植的禾谷类作物，具有较强的耐旱性。其祖先之一青藏高原野生大麦拥有非常丰富的遗传多样性，是研究作物耐旱机理、开发耐旱基因的重要种质资源。

病毒诱导基因沉默(Virus-induced gene silencing,VIGS)技术利用病毒载体携带目的基因cDNA片段侵染植株，随病毒复制和转录而特异性地降解或甲基化序列同源基因mRNA，引起植株生理指标或表型变化，从而实现对基因功能的鉴定。整个过程不需要进行突变体筛选或遗传转化，具有速度快、操作简单、高通量、成本低等优点。大麦条纹花叶病毒(Barley stripe mosaic virus,BSMV)由α、β、γ三条短棒状RNA链组成，外源基因片段可插入γ链的γb中，形成重组载体，侵染植株时三条RNA链缺一不可。该载体的主要优点在于便于改造，体内复制效率高，并且可容纳较大的外源基因片段，寄主包括大麦、小麦、水稻和玉米等单子叶作物。

当植物受到外界逆境胁迫时，会引起细胞代谢紊乱，细胞内的平衡被打破，活性氧和自由基积累加剧，导致植株组织受到伤害，最终甚至引起植株死亡。植物细胞经过长期的进化过程，形成了一套防御活性氧和自由基的保护酶系统。过氧化物酶(POD)是能清除植物体内活性氧的主要酶之一，具有广泛的底物特异性，在植物抵御逆境胁迫的过程中具有重要作用。

发明内容

本发明的目的在于提供一种从大麦中克隆得到的具有耐干旱胁迫特性的基因，为大麦耐干旱胁迫育种与生产提供了理论依据和相关基因。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

本发明以课题组前期筛选到的青藏高原一年生野生大麦(Hordeum vulgareL.ssp.spontaneum)XZ5(耐干旱胁迫基因型)和国际上公认的耐旱大麦品种Tadmor为实验材料，进行全基因组重测序，全面揭示XZ5和Tadmor全基因组突变类型(SNP、InDel、SV、CNV)，鉴定到了受这些突变影响的基因，并结合XZ5和Tadmor响应干旱胁迫的转录组研究，进一步筛选、克隆了XZ5中特异性的耐旱候选基因，并进行了基因功能验证。

本发明从青藏高原一年生野生大麦XZ5中克隆得到具有耐干旱胁迫特性的基因HvPOD11，该基因的CDS区核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。

HvPOD11基因的克隆与分析：基于两个耐旱大麦基因型的全基因组重测序对比分析和干旱响应转录组研究，鉴定到了耐旱候选基因HORVU7Hr1G043040，该基因被注释为Peroxidase 11。从XZ5、Tadmor和Morex(栽培啤用大麦品种)中克隆了该基因的全长CDS序列，命名为HvPOD11。该基因CDS区全长1005bp，编码一个334aa的蛋白序列。

本发明提供了上述HvPOD11基因编码的蛋白质，其氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。

HvPOD11蛋白的分子量为36.37kDa，等电点pI＝4.82。将HvPOD11蛋白序列通过SMART(http://smart.embl-heidelberg.de/)网站和InterPro(http://www.ebi.ac.uk/interpro/)网站进行功能域预测分析，结果显示该蛋白含有1个功能域：Peroxidase功能域和一个信号肽。将HvPOD11蛋白序列进行进化树分析，结果显示该蛋白与黍(Panicummiliaceum)的PmPOD11位于同一进化枝上。

本发明还提供了一种BSMV:γ-HvPOD11重组载体，将SEQ ID No.3所示的428bp的HvPOD11基因片段连入BSMV:γ载体的NheI位点间，从而构建得到。用于构建载体的HvPOD11基因片段来源于XZ5。

BSMV:γ-HvPOD11重组载体构建：将一个428bp的HvPOD11基因片段通过单酶切连接的方式反向连入BSMV:γ载体的NheI位点间。对PCR验证阳性的反向插入克隆进行测序和酶切验证，确保重组载体的准确性。

进一步地，利用BSMV-VIGS系统在野生大麦XZ5上验证HvPOD11基因功能，结果显示，无论是对照条件还是干旱胁迫条件下，与接种空载体的植株相比，接种BSMV:HvPOD11植株中HvPOD11基因的表达量分别降低了68.55％和71.41％。在干旱胁迫下，接种BSMV:HvPOD11植株的长势显著弱于接种空载体的植株，株高、根长和生物量也显著低于接种空载体的植株，而在对照条件下，两者的长势没有明显差异。这些结果说明HvPOD11基因沉默后使大麦对干旱胁迫的耐受性显著降低。

本发明提供了所述大麦HvPOD11基因在调控大麦对干旱胁迫耐受性方面的用途。大麦HvPOD11基因可以增强大麦对干旱胁迫的耐受性，该基因沉默后使大麦对干旱胁迫的耐受性显著降低。

本发明具备的有益效果：

本发明通过对大麦HvPOD11基因的克隆和分析，并结合BSMV-VIGS技术在大麦XZ5上对该基因功能验证，发现沉默HvPOD11基因导致大麦植株对干旱胁迫的耐受性显著降低。本发明为大麦耐干旱胁迫育种与生产提供了理论依据和相关基因。

附图说明

图1为三个大麦基因型(XZ5、Tadmor和Morex)的序列比对：(A)HvPOD11基因的核苷酸序列比对；(B)HvPOD11蛋白的氨基酸序列对比。

图2为HvPOD11蛋白功能域预测图。

图3为HvPOD11与OsPOD11、AtPOD11的氨基酸序列对比图。

图4为HvPOD11与各植物物种中POD11蛋白的进化树分析。

图5为BSMV:HvPOD11病毒构建图。(A)BSMV:γ-HvPOD11载体示意图；(B)BSMV:γ-HvPOD11的酶切验证；(C)BSMV:α、β、γ、γ-HvPOD11的线性化；(D)BSMV:α、β、γ、γ-HvPOD11的体外转录。

图6是利用BSMV-VIGS方法在野生大麦XZ5上验证HvPOD11基因的功能。(A)HvPOD11沉默植株的表型鉴定，Vector-接种空载体的植株，VIGS-接种BSMV:HvPOD11的基因沉默植株；(B)qRT-PCR检测各处理植株中HvPOD11基因的相对表达量；(C)20％PEG-6000处理30d后，各处理植株的株高、根长、地上部干重、根系干重的差异。

具体实施方式

下面通过具体实施例，对本发明的技术方案作进一步的具体说明。应当理解，本发明的实施并不局限于下面的实施例，对本发明所做的任何形式上的变通和/或改变都将落入本发明保护范围。

在本发明中，若非特指，所有的份、百分比均为重量单位，所采用的设备和原料等均可从市场购得或是本领域常用的。下述实施例中的方法，如无特别说明，均为本领域的常规方法。

本发明以课题组前期筛选到的青藏高原一年生野生大麦耐干旱胁迫基因型XZ5、大麦品种Tadmor和Morex为主要材料，克隆大麦耐干旱胁迫相关基因HvPOD11，对阐明大麦响应干旱胁迫的分子机理和育种及生产具有重要意义。

实施例1、HvPOD11基因CDS区的克隆与分析

1、大麦生长条件

耐干旱胁迫基因型XZ5为课题组前期筛选到的青藏高原一年生野生大麦基因型，发表于Zhao J,Sun H,Dai H,Zhang G,Wu FB(通讯作者).Difference in response todrought stress among Tibet wild barley genotypes.Euphytica 2010,172:395-403；He XY,Zeng JB,Cao FB,Ahmed IM,Zhang G,Vincze E,Wu FB(通讯作者).HvEXPB7,anovelβ-expansin gene revealed by the root hair transcriptome of Tibetan wildbarley,improves root hair growth under drought stress.Journal of ExperimentalBotany,2015,66(22):7405-7419。

Tadmor为国际公认耐旱大麦品种(Forster BP,Ellis RP,Moir J,Talame V,Sanguineti MC,Tuberosa R,This D,Teulat-Merah B,Ahmed I,Mariy S,Bahri H,ElOuahabi M,Zoumarou-Wallis N,El-Fellah M,Ben Salem M.Genotype and phenotypeassociations with drought tolerance in barley tested in North Africa.Ann ApplBiol 2004,144:157-168)；Qiu CW,Zhao J,Chen Q,Wu FB(通讯作者).Genome-widecharacterization of drought stress responsive long non-coding RNAs in Tibetanwild barley.Environmental and Experimental Botany,2019,164:124-134。

Morex为栽培啤用大麦品种。

大麦XZ5、Tadmor和Morex的种子用2％的H₂O₂消毒30min，随后用蒸馏水冲洗5-6次，将消毒过的种子置于湿润的沙床上，于生长室中进行暗培养(22℃/18℃，白天/夜间)，萌发之后进行补光。第7d时，选取长势一致的幼苗转移至1L盛有大麦基本培养液的黑色塑料桶中，用5孔塑料盖覆盖，每孔两株幼苗，使用海绵进行固定，在大麦培养室中进行培养，大麦基本培养液使用1/5Hogland配方。

2、HvPOD11基因CDS区序列的克隆

根据RNA提取试剂盒(Takara，日本)的说明书进行XZ5、XZ54和Tadmor叶片总RNA的提取，并用DNaseI去除总RNA中基因组DNA污染，将提取的总RNA反转录成cDNA。使用NCBI的Primer-BLAST进行特异性引物设计，具体引物序列为：

HvPOD11-CDS-F：5'-AAAGCCCATGCAGAACGAGA-3'(SEQ ID No.4)

HvPOD11-CDS-R：5'-GAAGGCGCAAACAAAGGTCC-3'(SEQ ID No.5)

将PCR扩增产物，连接到pMD18-T载体(Takara，日本)，转化大肠杆菌DH5α，挑取阳性克隆送公司测序，测序正确的分别进行提质粒和甘油保存，所得质粒命名为pMD18-T-HvPOD11。PCR引物合成工作和基因测序工作均由浙江尚亚生物技术有限公司完成。

大麦XZ5中HvPOD11基因的CDS区核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。XZ5、Tadmor和Morex中HvPOD11基因的CDS区核苷酸序列差异如图1所示。

3、HvPOD11蛋白序列分析

将HvPOD11蛋白的氨基酸序列通过UniProt(https://www.uniprot.org/)和InterPro(http://www.ebi.ac.uk/interpro/)网站进行蛋白功能域的预测和分析，结果显示该蛋白含有1个功能域和1个信号肽(图2、图3)。

通过MEGA-X软件将包含HvPOD11在内的多个植物物种POD11蛋白的氨基酸序列进行了对比分析，并构建系统发育树。结果显示，各物种中的POD11可以分为3类，大麦的HvPOD11与黍的PmPOD11亲缘关系最为接近，位于同一进化枝上(图4)。

实施例2、BSMV-VIGS方法在野生大麦XZ5中验证HvPOD11基因功能

1、BSMV:γ-HvPOD11载体构建

使用NCBI的Primer-BLAST进行特异性引物设计，以实施例1中所述的pMD18-T-HvPOD11质粒为模板，扩增428bp的HvPOD11基因片段。该片段的序列如SEQ ID No.3所示。

PCR扩增的反应体系如下：

扩增程序为：94℃2min，(98℃10s，60℃30s，68℃1min)35个循环。

引物序列为(下划线为酶切位点)：

HvPOD11-γ-F：5'-GTACGCTAGCCTGGAAGCTGAGTGTCCTGG-3'(SEQ ID No.6)

HvPOD11-γ-R：5'-GTACGCTAGCTCGAAGGTCGACGAAGTGTG-3'(SEQ ID No.7)

将HvPOD11基因片段连接到pMD18-T载体上，转化大肠杆菌DH5α，挑取阳性克隆送往公司测序，测序正确的单克隆进行摇菌提质粒和甘油保存。提取的质粒使用NheⅠ限制性内切酶进行酶切，分别与经过同样限制酶内切酶酶切并且去磷酸化的病毒载体BSMV:γ载体通过T4连接酶进行连接反应。连接之后的产物转化大肠杆菌DH5α，使用BSMV:γ载体上的引物γ-stain-F和HvPOD11基因的正向引物HvPOD11-γ-F验证反向插入，将反向插入的阳性克隆送到公司测序，测序正确的单克隆进行摇菌提质粒和甘油保存，提取的质粒进行酶切再次验证(图5B)，将该质粒命名为BSMV:γ-HvPOD11。

γ-stain-F：5'-CAACTGCCAATCGTGAGTAGG-3'(SEQ ID No.8)。

2、BSMV载体线性化和体外转录

使用MluⅠ限制性内切酶单酶切BSMV:α、BSMV:γ和BSMV:γ-HvPOD11，同时使用SpeⅠ限制性内切酶单酶切BSMV:β，分别使其线性化，对线性化产物进行琼脂糖凝胶电泳，并胶回收纯化(图5C)。将纯化后的一定浓度的BSMV:α、BSMV:β、BSMV:γ和BSMV:γ-HvPOD11按照RiboMAX^TMLargeScale RNA Production System-T7 kit和Ribo m⁷G Cap Analog kit试剂盒实验说明书进行反转录(Promega，美国)(图5D)，所有的操作需要保证无RNase的污染。

将体外转录后的RNAα、RNAβ和RNAγ/RNAγ-HvPOD11质粒按照1:1:1的体积比进行混合，加入三倍体积的RNase-free水稀释，随后在稀释产物中加入等体积的2×GKP缓冲液(1％bentonite、1％celite、50mM甘氨酸和30mM磷酸氢二钾pH 9.2)，混合均匀，用于随后的接种。所得产物命名为BSMV:HvPOD11。

3、BSMV接种前大麦幼苗培养

大麦XZ5种子用2％的H₂O₂消毒30min，随后用蒸馏水冲洗5-6次，将消毒过的种子置于湿润的沙床上，于生长室中进行暗培养(22℃/18℃，白天/夜间)，萌发之后进行补光。第7d时，选取长势一致的幼苗转移至1L盛有大麦基本培养液的黑色塑料桶中，用5孔塑料盖覆盖，每孔两株幼苗，使用海绵进行固定，在大麦培养室中进行培养，大麦基本培养液使用1/5Hogland配方。每3d更换一次培养液，培养液的pH用NaOH或HCl调至5.8±0.1，用气泵24h持续通气。

4、BSMV接种验证基因功能

选取两叶期的大麦第二片叶子在RNase-free环境下进行BSMV摩擦接种，每个植株使用10μL的上述混合物，接种后的植物随即喷施适量的DEPC水，并用透明的塑料罩保湿，保湿3d后，将玻璃罩取掉，在大麦生长培养室中继续培养(22℃/18℃，白天/夜间)，定时观察植株的表型。本实验共有4个处理：接种BSMV:HvPOD11并在基本培养液(BNS)中生长36d(处理1)，接种BSMV:Vector并在基本培养液(BNS)中生长36d(处理2)，接种BSMV:HvPOD11并在基本培养液(BNS)中生长6d，再进行20％PEG-6000处理30d(处理3)，接种BSMV:Vector并在基本培养液(BNS)中生长6d，再进行20％PEG-6000处理30d(处理4)。每个处理3个重复，每个重复8个植株。干旱处理30d后，观察各处理植株生长情况、测定相关生长性状指标。

结果显示，在干旱胁迫下，接种BSMV:HvPOD11植株(处理3)的长势显著弱于接种空载体的植株(处理4)，株高、根长和生物量也显著低于接种空载体的植株，而在对照条件下，两者的长势没有明显差异(图6)。这些结果说明HvPOD11基因沉默后使大麦对干旱胁迫的耐受性显著降低。

荧光定量PCR检测HvPOD11基因的表达量

用总RNA提取试剂盒(Takara，日本)分别提取不同处理样本的总RNA，并用DNaseI去除总RNA中基因组DNA污染，用PrimeScript^TM RT reagent Kit反转录试剂盒(Takara，日本)将各样本总RNA分别反转录成单链cDNA。用SYBR绿色荧光酶复合物(Takara，日本)和Light Cycler 480PCR仪(Roche，瑞士)对相应样本中HvPOD11基因的表达进行荧光定量PCR分析(qRT-PCR)，并用一个内参基因GAPDH对表达值进行矫正处理。

qRT-PCR体系为：

PCR的具体程序为：95℃30s，(95℃5s，60℃30s)40个循环。溶解曲线程序为：95℃5s，60℃1min，95℃，50℃30s降温。利用2^-ΔΔCq相对定量方法计算基因表达值变化。每组实验重复三次。qRT-PCR引物序列为：

HvPOD11-qRT-PCR-F：5'-CCTATGAAGCACAGGTACACTA-3'(SEQ ID No.9)；

HvPOD11-qRT-PCR-R：5'-CCACTGCGATTATGGTTATCAG-3'(SEQ ID No.10)；

GAPDH-F：5'-AAGCATGAAGATACAGGGAGTGTG-3'(SEQ ID No.11)；

GAPDH-R：5'-AAATTTATTCTCGGAAGAGGTTGTACA-3'(SEQ ID No.12)。

所得结果为：对于接种BSMV:HvPOD11植株来说，无论是在对照还是干旱处理条件下，与接种空载体的植株相比，HvPOD11基因的表达量分别被抑制了68.6％和71.4％(处理1vs.2，处理3vs.4)(图6B)。

综上所述，通过对大麦HvPOD11的克隆和分析，并结合BSMV-VIGS技术在青藏高原一年生野生大麦XZ5上对该基因进行功能验证发现，沉默HvPOD11基因后的XZ5植株对干旱胁迫的耐受性显著降低。

最后，还需要注意的是，以上列举的仅是本发明的若干个具体实施例。显然，本发明不限于以上实施例，还可以有许多变形。本领域的普通技术人员能从本发明公开的内容直接导出或联想到的所有变形，均应认为是本发明的保护范围。

序列表

<110> 浙江大学

<120> 大麦HvPOD11基因及其用途

<160> 12

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 1005

<212> DNA

<213> 青藏高原一年生野生大麦(Hordeumvulgare L. ssp. spontaneum)

<400> 1

atggctacag ctgcattgtg cttcagggcg tctgctctct ccatggcctg ttttctcctg 60

gccgtgccat tgttgatggc acaggaccct tcgaacctga gcctggagca ctactccaag 120

acatgcccga atgcggagca tgtggtccgt gccgagatgg agtgcgcggt gcgtgacgaa 180

ccacgcaatg ccgctttgat gctccgcctc cattttcacg actgttttgt gcagggctgt 240

gatggatcgg tgctgcttga cgacactgcg accatgatcg gagagaagca ggcagaccag 300

aatgtgaact cgctgaaagg atttgaggtg gttgacaaaa tcaaggcaaa gctggaagct 360

gagtgtcctg gaacagtttc ctgtgctgac ttgcttgcca ttgcagccag ggacgcagtt 420

gtcttggttg gtgggcctta ctgggatgtt ccagtaggaa gattggactc caaggaggca 480

agtcttgacc tagcaaacaa ggatatcccc accgctgagc agggtctcgt cacccttatt 540

tccaagtttt gggagaaggg ccttgatgcc actgacatgg tggcccttgt cggatcccac 600

acgattggat tcgcccggtg tgcgaacttc cgggacagga tatacggcga cttcgagatg 660

acatccaagt acaaccctgc ttctgcgacc tacctcagca agctcaagga gatctgcccc 720

atggatggtg gcgatgacaa catcagcgcc atggacagcc acacttcgtc gaccttcgac 780

aacgcctatt ttgagacgct catcaagggc gagggcctcc tcaactctga ccaggagatg 840

tggtccagca tcgccgggta ctcaacggct gacacggtca acaagtattg ggctgaccct 900

gcgctgttct tcaagcagtt ttcggactcc atggtcaaga tgggcaacat caccaaccct 960

gcaggtggtg aggtcaggaa gacctgcaga ttcgtgaaca cataa 1005

<210> 2

<211> 334

<212> PRT

<213> 青藏高原一年生野生大麦(Hordeumvulgare L. ssp. spontaneum)

<400> 2

Met Ala Thr Ala Ala Leu Cys Phe Arg Ala Ser Ala Leu Ser Met Ala

1 5 10 15

Cys Phe Leu Leu Ala Val Pro Leu Leu Met Ala Gln Asp Pro Ser Asn

20 25 30

Leu Ser Leu Glu His Tyr Ser Lys Thr Cys Pro Asn Ala Glu His Val

35 40 45

Val Arg Ala Glu Met Glu Cys Ala Val Arg Asp Glu Pro Arg Asn Ala

50 55 60

Ala Leu Met Leu Arg Leu His Phe His Asp Cys Phe Val Gln Gly Cys

65 70 75 80

Asp Gly Ser Val Leu Leu Asp Asp Thr Ala Thr Met Ile Gly Glu Lys

85 90 95

Gln Ala Asp Gln Asn Val Asn Ser Leu Lys Gly Phe Glu Val Val Asp

100 105 110

Lys Ile Lys Ala Lys Leu Glu Ala Glu Cys Pro Gly Thr Val Ser Cys

115 120 125

Ala Asp Leu Leu Ala Ile Ala Ala Arg Asp Ala Val Val Leu Val Gly

130 135 140

Gly Pro Tyr Trp Asp Val Pro Val Gly Arg Leu Asp Ser Lys Glu Ala

145 150 155 160

Ser Leu Asp Leu Ala Asn Lys Asp Ile Pro Thr Ala Glu Gln Gly Leu

165 170 175

Val Thr Leu Ile Ser Lys Phe Trp Glu Lys Gly Leu Asp Ala Thr Asp

180 185 190

Met Val Ala Leu Val Gly Ser His Thr Ile Gly Phe Ala Arg Cys Ala

195 200 205

Asn Phe Arg Asp Arg Ile Tyr Gly Asp Phe Glu Met Thr Ser Lys Tyr

210 215 220

Asn Pro Ala Ser Ala Thr Tyr Leu Ser Lys Leu Lys Glu Ile Cys Pro

225 230 235 240

Met Asp Gly Gly Asp Asp Asn Ile Ser Ala Met Asp Ser His Thr Ser

245 250 255

Ser Thr Phe Asp Asn Ala Tyr Phe Glu Thr Leu Ile Lys Gly Glu Gly

260 265 270

Leu Leu Asn Ser Asp Gln Glu Met Trp Ser Ser Ile Ala Gly Tyr Ser

275 280 285

Thr Ala Asp Thr Val Asn Lys Tyr Trp Ala Asp Pro Ala Leu Phe Phe

290 295 300

Lys Gln Phe Ser Asp Ser Met Val Lys Met Gly Asn Ile Thr Asn Pro

305 310 315 320

Ala Gly Gly Glu Val Arg Lys Thr Cys Arg Phe Val Asn Thr

325 330

<210> 3

<211> 428

<212> DNA

<213> 青藏高原一年生野生大麦(Hordeumvulgare L. ssp. spontaneum)

<400> 3

ctggaagctg agtgtcctgg aacagtttcc tgtgctgact tgcttgccat tgcagccagg 60

gacgcagttg tcttggttgg tgggccttac tgggatgttc cagtaggaag attggactcc 120

aaggaggcaa gtcttgacct agcaaacaag gatatcccca ccgctgagca gggtctcgtc 180

acccttattt ccaagttttg ggagaagggc cttgatgcca ctgacatggt ggcccttgtc 240

ggatcccaca cgattggatt cgcccggtgt gcgaacttcc gggacaggat atacggcgac 300

ttcgagatga catccaagta caaccctgct tctgcgacct acctcagcaa gctcaaggag 360

atctgcccca tggatggtgg cgatgacaac atcagcgcca tggacagcca cacttcgtcg 420

accttcga 428

<210> 4

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 4

aaagcccatg cagaacgaga 20

<210> 5

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 5

gaaggcgcaa acaaaggtcc 20

<210> 6

<211> 30

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 6

gtacgctagc ctggaagctg agtgtcctgg 30

<210> 7

<211> 30

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 7

gtacgctagc tcgaaggtcg acgaagtgtg 30

<210> 8

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 8

caactgccaa tcgtgagtag g 21

<210> 9

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 9

cctatgaagc acaggtacac ta 22

<210> 10

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 10

ccactgcgat tatggttatc ag 22

<210> 11

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 11

aagcatgaag atacagggag tgtg 24

<210> 12

<211> 27

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 12

aaatttattc tcggaagagg ttgtaca 27

Claims

1.CDS区核苷酸序列如SEQ ID No.1所示的大麦HvPOD11基因在调控大麦对干旱胁迫耐受性方面的用途，其特征在于，该基因沉默后使大麦对干旱胁迫的耐受性显著降低。

2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述大麦HvPOD11基因编码的蛋白质的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。

3.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述大麦为青藏高原一年生野生大麦(Hordeum vulgare L.ssp.spontaneum)XZ5。