CN112795522B - 不动杆菌属新物种及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了不动杆菌属新物种及其应用。本发明提供了一种不动杆菌属新物种，具体为不动杆菌(Acinetobacter sp.)SYA3，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏号为CGMCC No.21793。本发明所提供的不动杆菌(Acinetobacter sp.)SYA3能够异养硝化和除磷，是一株功能性的不动杆菌属新物种，在环境治理等方面将具有广泛的应用前景。

Description

不动杆菌属新物种及其应用
技术领域
本发明涉及微生物领域，具体涉及不动杆菌属新物种及其应用。
背景技术
不动杆菌属(Acinetobacter)创建于1954年，Ezbiocloud数据库显示目前有67个有效发表的模式株，还有84个非模式株，是个种类比较庞大的属。
随着社会经济的发展，含氮、磷等营养物质的污废水排放量大幅增加。过量的营养物质导致水体出现富营养现象，水生态系统遭到破坏，如何有效控制水体中的氮、磷元素已成为环境保护与社会可持续发展亟待解决的问题。
氨氮能够消耗大量的水体中溶解氧，造成水体缺氧，同时也可能引起水体富营养化。传统的硝化细菌为自养菌，所要求的生长环境严格，生长速度慢，难于大量培养，造成应用受到限制。异养硝化细菌能够直接利用水体中有机质营养进行生长的同时降解氨氮，适应性强，生长速度快，可同时去除COD和氨氮。
发明内容
本发明的目的是提供一种不动杆菌属新物种及其应用。
第一方面，本发明要求保护一种不动杆菌属新物种。
本发明所要求保护的不动杆菌(Acinetobacter sp.)SYA3，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏号为CGMCC No.21793。
第二方面，本发明要求保护一种菌剂。
本发明要求保护的菌剂，其活性成分为前文所述的不动杆菌(Acinetobactersp.)SYA3。
进一步地，上述菌剂中，所述菌剂还可以包括载体。
更进一步地，所述载体可为固体载体或液体载体。
更加具体地，所述固体载体可为矿物材料、植物材料或高分子化合物；所述矿物材料可为粘土、滑石、高岭土、蒙脱石、白碳、沸石、硅石和硅藻土中的至少一种；所述植物材料可为玉米粉、豆粉和淀粉中的至少一种；所述高分子化合物可为聚乙烯醇和/或聚二醇。
更加具体地，所述液体载体可为有机溶剂、植物油、矿物油或水；所述有机溶剂可为癸烷和/或十二烷。
进一步地，所述菌剂中，所述活性成分可以以被培养的活细胞、活细胞的发酵液、细胞培养物的滤液或细胞与滤液的混合物的形式存在。
进一步地，所述菌剂剂型可为多种剂型，如液剂、乳剂、悬浮剂、粉剂、颗粒剂、可湿性粉剂或水分散粒剂。
根据需要，所述菌剂中还可添加表面活性剂(如吐温20、吐温80等)、粘合剂、稳定剂(如抗氧化剂)、pH调节剂等。
第三方面，本发明要求保护前文所述的不动杆菌(Acinetobacter sp.)SYA3或前文所述的菌剂在异养硝化和/或除磷中的应用。
其中，所述磷可为总磷。
第四方面，本发明要求保护前文所述的不动杆菌(Acinetobacter sp.)SYA3或前文所述的菌剂在将铵态氮还原为亚硝酸氮中的应用。
第五方面，本发明要求保护前文所述的不动杆菌(Acinetobacter sp.)SYA3或前文所述的菌剂在降解氨氮中的应用。
第六方面，本发明要求保护前文所述的不动杆菌(Acinetobacter sp.)SYA3或前文所述的菌剂在环境治理中的应用。
本发明所提供的不动杆菌(Acinetobacter sp.)SYA3能够异养硝化和除磷，是一株功能性的不动杆菌属新物种，在环境治理等方面将具有广泛的应用前景。
保藏说明
建议的分类命名：不动杆菌(Acinetobacter sp.)
参椐的生物材料(株)：SYA3
保藏机构：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心
保藏机构简称：CGMCC
地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号
保藏日期：2021年2月1日
保藏中心登记入册编号：CGMCC No.21793
附图说明
图1为NCBI比对结果。
图2为SYA3系统发育树。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。以下提供的实施例可作为本技术领域普通技术人员进行进一步改进的指南，并不以任何方式构成对本发明的限制。
下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1、菌株SYA3的分离与鉴定
一、菌株SYA3的分离筛选
本发明菌株SYA3于2020年6月分离自黑龙江大庆油泥砂。具体操作如下：配制100ml富集无机盐培养基(配方：磷酸氢二钾1g/L、磷酸二氢铵1g/L、硫酸铵1g/L、硫酸镁0.2g/L、硝酸钾3g/L)灭菌后加入10％油泥砂，30℃、150rpm振荡15d后取培养液稀释103-105倍涂布在分离培养基(配方：磷酸氢二钾1g/L、磷酸二氢铵1g/L、硫酸铵1g/L、硫酸镁0.2g/L、硝酸钾3g/L、酵母粉0.5g/L、蛋白胨0.5g/L、酪蛋白水解物0.5g/L、葡萄糖0.5g/L、可溶性淀粉0.5g/L、丙酮酸钠0.3g/L)中，30℃静置提取单菌落纯化获得菌株。
二、菌株SYA3的鉴定
1、形态学和生理生化特性鉴定
菌株SYA3在LB(配方：10g/L NaCl、10g/L蛋白胨、5g/L酵母粉，pH 7-8)固体培养基上形成圆形规则略透明浅青色菌落，不产蛋白酶、纤维素酶、脂肪酶和淀粉酶。
2、16S rDNA序列鉴定
将活化的菌株SYA3接种在液体LB培养基中，30℃、150rpm振荡培养72h。取1ml新鲜培养菌液4℃、8000rpm离心5min，收集菌体于2ml离心管中，采用DNA提取试剂盒提取DNA。电泳检测后，采用通用引物8F(5’-AGAGTTTGATCMTGGCTCAG-3’)/1492R(5’-GGTTACCTTGTTACGACTT-3’)进行PCR扩增。
PCR产物电泳检测后，测定16S rDNA基因序列，具体序列如SEQ ID No.1所示。
基于上述鉴定结果，并经序列比对后确定菌株SYA3属于不动杆菌属(Acinetobacter sp.)，但跟已有菌株的相似性较低。菌株SYA3与Ezbiocloud数据库——国际权威细菌分类学分析数据库(http://www.ezbiocloud.net/)中的同属菌株包括模式株和非模式株的相似性都在97％以下(最高只有96.79％)。进一步的与NCBI数据进行比对，排除克隆子序列(Uncultured bacterium clone)外，相似最高的序列MK165144.1也只有98.17％，且查询覆盖度(Query Cover)只有97％(如图1)；构建系统发育树，菌株SYA3明显处于单独一分支(如图2)。因此综上显示SYA3是一株跟有公开文献报道都不同的新发现新种。
以上数据充分证明了本发明菌株SYA3代表了不动杆菌属的一个新物种，不动杆菌(Acinetobacter sp.)SYA3已经于2021年2月1日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，其保藏编号为CGMCC No.21793。
实施例2、不动杆菌(Acinetobacter sp.)SYA3异养硝化和除磷功能检测
将活化的不动杆菌(Acinetobacter sp.)SYA3接种在液体LB培养基(配方：10g/L氯化钠、10g/L蛋白胨、5g/L酵母粉，pH 7-8)中，30℃、150rpm振荡培养72h。取新鲜培养菌液4℃、8000rpm离心5min，收集菌体然后用等体积的无菌水悬浮成菌悬液(菌悬液的浓度108-1010CFU/ml)。
按5％(v/v)将SYA3菌悬液接种在异养硝化培养基(配方：葡萄糖0.4g/L、乙酸钠0.25g/L、氯化钠0.05g/L、七水硫酸镁0.15g/L、三水磷酸氢二钾0.07g/L、氯化铵0.18g/L)中，并有未接菌对照，30℃、150rpm振荡培养5d。使用格里斯氏(Griess)试剂检测接菌培养液中出现亚硝酸盐氮，说明铵态氮有被菌株SYA3还原成亚硝酸氮，使用标准HJ 535-2009水质氨氮的测定纳氏试剂分光光度法测定接菌培养液和未接菌对照的氨氮含量，按氨氮降解率＝(不接菌对照氨氮浓度-接菌培养液氨氮浓度)/不接菌对照氨氮浓度×100％计算氨氮降解率为43.2％，显示菌株SYA3有异养硝化功能。同时进一步使用GB/T 11893-89水质总磷的测定钼酸铵分光光度法测定接菌培养液和未接菌对照的总磷含量，按(不接菌对照总磷浓度-接菌培养液总磷浓度)/不接菌对照总磷浓度×100％计算总磷降解率为29.3％，显示菌株SYA3有除磷功能。上述定量试验结果为三次以上重复的均值。
以上对本发明进行了详述。对于本领域技术人员来说，在不脱离本发明的宗旨和范围，以及无需进行不必要的实验情况下，可在等同参数、浓度和条件下，在较宽范围内实施本发明。虽然本发明给出了特殊的实施例，应该理解为，可以对本发明作进一步的改进。总之，按本发明的原理，本申请欲包括任何变更、用途或对本发明的改进，包括脱离了本申请中已公开范围，而用本领域已知的常规技术进行的改变。按以下附带的权利要求的范围，可以进行一些基本特征的应用。
<110> 微米环创生物科技（北京）有限公司
<120> 不动杆菌属新物种及其应用
<130> GNCLN210636
<160> 1
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 1403
<212> DNA
<213> Acinetobacter sp.
<400> 1
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gcttaggaat ctgcctatta gtgggggaca acattccgaa agggatgcta ataccgcata 120
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actcgactcc atgaagtcgg aatcgctagt aatcgcggat cagaatgccg cggtgaatac 1320
gttcccgggc cttgtacaca ccgcccgtca caccatggga gtttgttgca ccagaagtgg 1380
gtagtctaac cttagggagg acg 1403

Claims (6)

1.不动杆菌(Acinetobacter sp.)SYA3，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏号为CGMCC No.21793。
2.一种菌剂，其活性成分为权利要求1所述的不动杆菌(Acinetobacter sp.)SYA3。
3.权利要求1所述的不动杆菌(Acinetobacter sp.)SYA3或权利要求2所述的菌剂在异养硝化和/或除磷中的应用。
4.权利要求1所述的不动杆菌(Acinetobacter sp.)SYA3或权利要求2所述的菌剂在将铵态氮还原为亚硝酸氮中的应用。
5.权利要求1所述的不动杆菌(Acinetobacter sp.)SYA3或权利要求2所述的菌剂在降解氨氮中的应用。
6.权利要求1所述的不动杆菌(Acinetobacter sp.)SYA3或权利要求2所述的菌剂在环境治理中的应用。
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