CN111454861A

CN111454861A - 一种高效净化污水的解淀粉芽孢杆菌、微生物菌剂及应用

Info

Publication number: CN111454861A
Application number: CN202010278541.6A
Authority: CN
Inventors: 韩斌; 王贻龙
Original assignee: Beijing Shenghe Zhengtai Environmental Protection Engineering Co ltd
Current assignee: Beijing Shenghe Zhengtai Environmental Protection Engineering Co ltd
Priority date: 2020-04-10
Filing date: 2020-04-10
Publication date: 2020-07-28

Abstract

本发明涉及一种高效净化污水的解淀粉芽孢杆菌、微生物菌剂及应用，具体公开了一种解淀粉芽孢杆菌北京2019‑1株菌株，以及该菌株在污水净化中的应用，该菌株已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.19325。本发明所述解淀粉芽孢杆菌菌株北京2019‑1株对污水中的氨氮值和化学需氧量(COD)值指标有较好的降低效果。由本发明所述菌株制备的微生物菌剂具有良好的污水净化性能，能够明显降低污水中的氨氮值和化学需氧量；此外，所述微生物菌剂对人、畜安全，不存在环境污染等问题，并且其制备方法简单、成本低，使用简单。

Description

一种高效净化污水的解淀粉芽孢杆菌、微生物菌剂及应用

技术领域

本发明属于微生物应用技术领域，具体涉及一种高效净化污水的解淀粉芽孢杆菌、微生物菌剂及应用。

背景技术

随着生活污水、工业污水排放量的增加，以及化肥、洗涤剂的广泛应用，污水中的含氮物质对环境的污染日益加重，现如今许多城市污水处理厂负荷率低，处理水平较差，导致不能有效进行大面积的污水处理。而且污水处理厂的建设需要的占地面积大，耗能高，需要的资金多，易导致资源的浪费。近年来，全国总共排放的废水量高达735.3亿吨，而且对比于往年仍旧呈现上升趋势，各种污水处理技术每年增加3亿多立方米的处理量，排放量的增量却高达24亿立方米/年，这些数据表明污水处理能力远无法赶上污水排放量的增加。未经处理的含有氨氮的生活污水、工业废水等排入环境中，会对环境造成各种不同程度的污染，其中富营养化是对水体最为突出的影响伴随水体富营养化，水中的部分植物也即将退化甚至消失，这个现象是普遍且严重的。氨氮消耗水中的氧气使水体中的溶解氧降低，导致水质黑臭鱼类死亡。有关研究实验数据表示，氮元素在土壤中的含量与农作物中硝酸盐的积累量成正相关关系，如果种植场中排入了大量的含氮污水，那么硝酸盐便会在农作物中聚积，导致含量过高，当人类食用这些农作物，便会危及身体健康。照此发展，水体污染将不断加重，水资源危机已经成为了不可避免的问题。我国是个注重生态环境的大国，虽然已有较多污水处理厂及处理措施，但不能完全满足绿色生态要求，高效且彻底净化污水，保障健康，拥有良好环境是人类一直以来的生活目标。

污水处理主要除去这些有害物质，其中最重要的就是除氮去磷，氨氮化合物含量过高的污水，流入湖泊等水体环境中，会导致水体富营养化，产生“赤潮”现象，破坏水体平衡，威胁各种生物和人类的健康。人类生产生活中产生的污水若要得到及时治理，只靠高投入、低收入、占地需求高的废水处理工厂的技术还远远不够，寻找成本较低、占地面积小且高效的污水净化方法成为面临的新问题。

发明内容

为了解决目前生产上存在的上述问题，本发明提供了一种高效净化污水的解淀粉芽孢杆菌、微生物菌剂及应用，所述解淀粉芽孢杆菌北京2019-1株具有高效降低污水氨氮值、化学需氧量(COD)且对环境无残留危害等特点，培养菌种简单易行，可以广泛应用于污水处理和环境保护中。

在污水处理过程中微生物扮演着“大自然的清洁工”，许多微生物以“污染物为食”，通过生长代谢达到环境净化的效果。目前，芽孢杆菌、光合细菌、酵母菌、乳酸菌、放线菌等微生物都在污水的净化中得到了广泛的应用。利用它们净化水体可减少占地面积且不产生毒素，无副作用，有效改善水体污染状况，是一项有利于生态环境的新技术。

芽孢杆菌为革兰氏染色阳性菌，属于严格好氧或兼性厌氧菌，多属芽孢杆菌属，呈长杆状，多数运动，侧生鞭毛，可以产生芽孢，抵抗高渗、强碱、强酸、紫外线等恶劣环境，其来源广，易分离纯化，在土壤、空气、水及动物肠道内都被发现。芽孢杆菌包括很多特殊功能的菌种，它们广泛地应用于各个领域的科学研究中。芽孢杆菌可以显著降低污水中的氨氮、亚硝酸盐、硫化物的浓度，并且具有明显降解化学需氧量(COD)提高水体质量的能力；芽孢杆菌可以分解水体中的有机物，包括鱼的粪便、池底的淤泥、饲料残饵、藻类尸体等，并将有机物转化为单细胞藻类需要的营养物质；芽孢杆菌具有抑制蓝藻的繁殖，同时促进优质单细胞藻类的生长的作用，加快养殖环境的物质循环、水质净化；芽孢杆菌是体内多种酶的“催化剂”，它可以在产生多种酶类物质的同时，提高动物体内淀粉、蛋白、脂肪各类酶的活性，从而促进动物的消化吸收；有研究表明，芽孢杆菌还可以通过动物饲喂的方式，促进动物胸腺、脾脏等的生长和发育，从而提高动物的免疫力。就目前实验成果来看，芽孢杆菌的作用之多已经为科研工作和生产生活带来了各方面的助力，对于更多功能的探索仍具有重大意义。

生物样品保藏信息：

解淀粉芽孢杆菌北京2019-1株，分类名为解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)，于2020年1月9日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，菌种保藏号为CGMCC No.19325。

本发明所采用的技术方案为：

一种解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)菌株，已于2020年1月9日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.19325，该菌株命名为北京2019-1株；建议的分类命名为：解淀粉芽孢杆菌Bacillusamyloliquefaciens；拉丁学名为：Bacillus amyloliquefaciens北京2019-1株。

所述解淀粉芽孢杆菌菌株北京2019-1株在污水净化中的应用。

所述解淀粉芽孢杆菌菌株北京2019-1株在制备微生物菌剂中的应用。

利用所述解淀粉芽孢杆菌菌株北京2019-1株生产的微生物菌剂。

进一步地，所述微生物菌剂的剂型为液体制剂。

所述微生物菌剂的制备方法，包括以下步骤：

(1)将解淀粉芽孢杆菌菌株北京2019-1株在LB平板培养基上活化，挑取单菌落在LB斜面培养基上培养，得到培养后菌株；

(2)将所述培养后菌株接种至LB培养液中培养，获得解淀粉芽孢杆菌菌株北京2019-1株的种子菌液；

(3)将所述解淀粉芽孢杆菌菌株北京2019-1株的种子菌液在LB培养液中进行扩大发酵培养，得到所述微生物菌剂。

进一步地，步骤(1)中，所述LB平板培养基的pH值为7.3-7.5，所述LB平板培养基的组份包括：胰蛋白胨10g/L、酵母提取物5g/L、氯化钠10g/L、琼脂粉18g/L；所述活化温度为36-38℃，所述活化时间为22-26h；所述培养的时间为12-18h，所述培养温度为36-38℃。

进一步地，步骤(2)和(3)中，所述LB培养液的pH值为7.3-7.5，所述LB培养液的组份包括：胰蛋白胨10g/L、酵母提取物5g/L、氯化钠10g/L。

进一步地，步骤(2)中，所述培养为摇床震荡培养，所述摇床震荡速率为190-210rpm，所述培养温度为36-38℃，所述培养时间为10-14h。

进一步地，步骤(3)中，所述解淀粉芽孢杆菌菌株北京2019-1株的种子菌液与所述LB培养液的体积比为1:(90-110)；所述培养为摇床震荡培养，所述摇床震荡速率为190-210rpm，所述培养温度为36-38℃，所述培养时间为40～56h。

进一步地，所述微生物菌剂的有效成分为解淀粉芽孢杆菌北京2019-1株菌体和/或其代谢产物。

进一步地，所述微生物菌剂中解淀粉芽孢杆菌北京2019-1株的活菌的浓度为0.2-1.5×10⁸CFU/mL。

利用所述解淀粉芽孢杆菌菌株北京2019-1株生产的所述微生物菌剂在污水净化中的应用。

本发明的有益效果为：

(1)本发明所述解淀粉芽孢杆菌北京2019-1株分离自污水中，具有有效降低水体氨氮含量及化学耗氧量(COD)的能力，且对环境无残留危害，可在污水处理和环境保护中广泛应用。

(2)本发明得到的解淀粉芽孢杆菌，培养条件容易获得，商业化潜力巨大，具有很好的开发应用前景。

(3)本发明涉及的解淀粉芽孢杆菌菌株北京2019-1株制备的微生物菌剂，是专门针对污水净化开发的生物制剂，因此完全没有因化学制剂的使用所带来的一系列问题，因而有利于环境保护，降低成本，提高效益。

(4)本发明利用所述解淀粉芽孢杆菌菌株北京2019-1株制备的微生物菌剂，制备方法简单、成本低、生物安全性高、适宜工业化生产。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1是解淀粉芽孢杆菌北京2019-1株在LB平板培养基上的菌落形态图；

图2是解淀粉芽孢杆菌北京2019-1株经过革兰氏染色后的结果图；

图3-6是解淀粉芽孢杆菌北京2019-1株与其它代表性序列的同源性分析图；

图7是解淀粉芽孢杆菌北京2019-1株序列进化树图。

具体实施方式

为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明的技术方案进行详细的描述。显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所得到的所有其它实施方式，都属于本发明所保护的范围。

实施例1

本实施例提供一种解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)菌株，已于2020年1月9日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.19325，该菌株命名为北京2019-1株。

实施例2

本实施例提供一种pH值为7.3的LB培养液：组份包含有胰蛋白胨10g/L、酵母提取物5g/L、氯化钠10g/L、琼脂粉18g/L；

还提供了一种pH值为7.3的LB培养液：组份包含有胰蛋白胨10g/L、酵母提取物5g/L、氯化钠10g/L。

本实施例还提供一种微生物菌剂的制备方法，具体步骤包括：

(1)将解淀粉芽孢杆菌菌株北京2019-1株在LB平板培养基上于36℃下活化26h，挑取单菌落在LB斜面培养基上于36℃下培养18h，得到培养后菌株；

(2)将所述培养后菌株接种至LB培养液中在36℃下，并且以速率为190rpm进行摇床震荡培养14h，获得解淀粉芽孢杆菌菌株北京2019-1株的种子菌液；

(3)将所述解淀粉芽孢杆菌菌株北京2019-1株的种子菌液以体积比为1:90接种于LB培养液中，36-38℃下以速率为190rpm进行摇床震荡扩大发酵培养，培养40h后得到所述微生物菌剂，活菌的浓度为2×10⁷CFU/mL。

实施例3

本实施例提供一种pH值为7.5的LB培养液：组份包含有胰蛋白胨10g/L、酵母提取物5g/L、氯化钠10g/L、琼脂粉18g/L；

还提供了一种pH值为7.5的LB培养液：组份包含有胰蛋白胨10g/L、酵母提取物5g/L、氯化钠10g/L。

(1)将解淀粉芽孢杆菌菌株北京2019-1株在LB平板培养基上于38℃下活化22h，挑取单菌落在LB斜面培养基上于38℃下培养12h，得到培养后菌株；

(2)将所述培养后菌株接种至LB培养液中在38℃下，并且以速率为210rpm进行摇床震荡培养10h，获得解淀粉芽孢杆菌菌株北京2019-1株的种子菌液；

(3)将所述解淀粉芽孢杆菌菌株北京2019-1株的种子菌液以体积比为1:110接种于LB培养液中，38℃下以速率为190rpm进行摇床震荡扩大发酵培养，培养56h后得到所述微生物菌剂，活菌的浓度为1.5×10⁸CFU/mL。

实施例4

本实施例提供一种pH值为7.4的LB培养液：组份包含有胰蛋白胨10g/L、酵母提取物5g/L、氯化钠10g/L、琼脂粉18g/L；

还提供了一种pH值为7.4的LB培养液：组份包含有胰蛋白胨10g/L、酵母提取物5g/L、氯化钠10g/L。

(1)将解淀粉芽孢杆菌菌株北京2019-1株在LB平板培养基上于37℃下活化24h，挑取单菌落在LB斜面培养基上于36-38℃下培养15h，得到培养后菌株；

(2)将所述培养后菌株接种至LB培养液中在37℃下，并且以速率为200rpm进行摇床震荡培养12h，获得解淀粉芽孢杆菌菌株北京2019-1株的种子菌液；

(3)将所述解淀粉芽孢杆菌菌株北京2019-1株的种子菌液以体积比为1:100接种于LB培养液中，37℃下以速率为200rpm进行摇床震荡扩大发酵培养，培养48h后得到所述微生物菌剂，活菌的浓度为1×10⁸CFU/mL。

实验例

一、解淀粉芽孢杆菌菌株北京2019-1株的筛选、鉴定和污水净化能力检测

1、解淀粉芽孢杆菌菌株北京2019-1株的筛选

在排污口污泥中取少量样品，加生理盐水稀释后，涂布于高压过的LB琼脂培养基中，置于37℃恒温培养箱中培养24h后，挑取菌落进行划线纯化培养，经过多次纯化培养后，取目标菌落，接种到高压过的LB肉汤培养基中，在37℃、200r/min恒温摇床中培养12h，制成菌悬液。

2、解淀粉芽孢杆菌菌株北京2019-1株的鉴定

(1)菌种形态观察

将得到的分离纯化的菌种于超净工作台中划线，培养于LB固体培养基中，放置于37℃恒温培养箱中培养12h，12h后取出，观察菌落在培养基中的形态、颜色、边缘轮廓等，并记录。将观察好的菌落进行革兰氏染色后用显微镜镜检进行形态的观察。

(2)分子生物学鉴定

PCR扩增采用针对细菌16s rDNA的通用引物进行PCR鉴定

正向引物：27F(5’AGAGTTTGATCCTGGCTCAG3’)

反向引物：1492R(5’GGTTACCTTGTTACGACTT3’)

正向引物和反向引物分别取1μL加入无菌水8μL混合均匀制备混合引物。PCR反应体系(50μL)：2μL混合引物、4μL DNTP、5μL Buffer2缓冲液、1μL聚合酶、4μL DNA样品、34μL无菌水。

PCR反应条件：

PCR产物扩增后经过凝胶电泳，使用凝胶成像分析仪对结果进行观察并保存图像，将PCR产物测定基因序列，得到序列结果后在NCBI数据库进行BLAST比对分析，下载与本菌种亲缘关系近的序列，生成基因进化树，确定菌种分类地位。

3、菌种种子液的制备

在超净工作台中，挑取已进行分离鉴定的纯化菌种中的单菌落，并将其接种于高压过的LB肉汤培养基，用封口膜在37℃、200r/min的恒温摇床中培养12h，即可得到测定用菌液。

4、测定菌种数量与菌液OD值(600nm)的关系

取100μL种子液，向其中加入900μL的无菌蒸馏水稀释，制备10-1的稀释液，取已稀释好的10^-1稀释液100μL，向其中加入900μL无菌水制备10^-2的稀释液，以此10倍稀释法稀释成10^-3、10^-4、10^-5、10^-6、10^-7、10^-8、10^-9不同梯度的稀释液，测定600nm条件下不同稀释度的菌液的OD值并记录，吸取不同稀释度的稀释液100μL分别均匀涂布于LB培养基平板上，置于37℃恒温培养箱中培养12h后，挑选可用的平板进行菌落计数，确定OD值(600nm)与菌落数的关系。

5、菌种对污水的净化能力

在与外界相通的具有氧气泵的容器中加入污水10L，分次加入50mL、40mL、30mL、20mL、10mL种子液，并在每次加入前测定OD值(600nm)，每24h使用DR900水质检测仪，测定氨氮值及化学需氧量(COD)值并记录。

二、结果

1、菌落的形态

菌落在37℃恒温培养箱中培养12h后，菌落形态如图1所示：菌落呈现边缘不规则，表面较粗糙，有隆起，颜色为淡黄色不透明。

2、菌体形态

经过革兰氏染色后的结果如图2所示，解淀粉芽孢杆菌为杆状的革兰氏染色阳性菌，呈紫色，两端钝圆。

3、PCR扩增结果与序列对比，本分离菌命名为北京2019-1株，测序结果如SEQ IDNO:1所示。

4、与其它代表性细菌的亲缘关系

与其它代表性序列的同源性分析和系统进化树显示(图3-图7)，分离的北京2019-1株与NCBI登录的标准序列均不相同，其中与登录号为EF506944.1(一株解淀粉酶芽孢杆菌)的菌株亲缘关系最近(同源率为94.8％)，因此通过分子生物的方法鉴定此菌为解淀粉酶芽孢杆菌。

5、北京2019-1株菌的保存

北京2019-1株菌经过分离鉴定后，保存于中国普通微生物菌种保藏管理中心(CGMCC)，菌种保藏号为CGMCC19325。

6、菌液OD值确定细菌浓度

不同稀释度的100μL的稀释液分别涂布于LB平板上于37℃恒温培养箱中培养12h后，稀释后进行细菌计数。确定OD值与细菌浓度的关系，最终确定1OD₆₀₀约为1×10⁷个细菌/ml。

7、菌株污水净化能力

分次在10L医用污水中加入的细菌数量分别为1.40×10⁸、1.44×10⁸、1.27×10⁸、3.86×10⁷、1.69×10⁷个细菌，用DR900水质检测仪检测氨氮值、COD含量(单位均为mg/L)

表1-氨氮和COD的降解

注：+++代表数值超出仪器检测最大值

本发明从污水中分离筛选出菌株后，通过菌落和菌体的形态观察以及分子生物学技术的鉴定进行测序、绘制基因进化树后确定菌株为一株解淀粉芽孢杆菌。并且用解淀粉芽孢杆菌进行初步的污水处理实验，探究对污水中的氨氮、化学需氧量(COD)的降解能力，不同氨氮初始值的实验组中，菌种数量分别达到1.4×10⁸、1.44×10⁸、1.27×10⁸、3.86×10⁷、1.69×10⁷时，均可以使氨氮值在5d后降为0。在COD初始值不高于112，且菌种数量达到1.27×10⁸、3.86×10⁷、1.69×10⁷时，均可在5天内使COD值降为0，尤其是当在COD初始值为83，且菌种数量为1.27×10⁸时，1d即可使COD值降为0。实验证明本细菌分离株对污水中的氨氮值和COD值指标有较好的降低效果。

以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应以所述权利要求的保护范围为准。

SEQUENCE LISTING

<110> 北京盛合正泰环保工程有限公司

<120> 一种高效净化污水的解淀粉芽孢杆菌、微生物菌剂及应用

<130> 2010

<160> 1

<170> PatentIn version 3.3

<210> 1

<211> 1440

<212> DNA

<213> 未知

<400> 1

cgggcggcgt gctatactgc aagtcgagcg gacagatggg agcttgctcc ctgatgttag 60

cggcggacgg gtgagtaaca cgtgggtaac ctgcctgtaa gactgggata actccgggaa 120

accggggcta ataccggatg gttgtctgaa ccgcatggtt cagacataaa aggtggcttc 180

ggctaccact tacagatgga cccgcggcgc attagctagt tggtgaggta acggctcacc 240

aaggcgacga tgcgtagccg acctgagagg gtgatcggcc acactgggac tgagacacgg 300

cccagactcc tacgggaggc agcagtaggg aatcttccgc aatggacgaa agtctgacgg 360

agcaacgccg cgtgagtgat gaaggttttc ggatcgtaaa gctctgttgt tagggaagaa 420

caagtgccgt tcaaataggg cggcaccttg acggtaccta accagaaagc cacggctaac 480

tacgtgccag cagccgcggt aatacgtagg tggcaagcgt tgtccggaat tattgggcgt 540

aaagggctcg caggcggttt cttaagtctg atgtgaaagc ccccggctca accggggagg 600

gtcattggaa actggggaac ttgagtgcag aagaggagag tggaattcca cgtgtagcgg 660

tgaaatgcgt agagatgtgg aggaacacca gtggcgaagg cgactctctg gtctgtaact 720

gacgctgagg agcgaaagcg tggggagcga acaggattag ataccctggt agtccacgcc 780

gtaaacgatg agtgctaagt gttagggggt ttccgcccct tagtgctgca gctaacgcat 840

taagcactcc gcctggggag tacggtcgca agactgaaac tcaaaggaat tgacgggggc 900

ccgcacaagc ggtggagcat gtggtttaat tcgaagcaac gcgaagaacc ttaccaggtc 960

ttgacatcct ctgacaatcc tagagatagg acgtcccctt cgggggcaga gtgacaggtg 1020

gtgcatggtt gtcgtcagct cgtgtcgtga gatgttgggt taagtcccgc aacgagcgca 1080

acccttgatc ttagttgcca gcattcagtt gggcactcta aggtgactgc cggtgacaaa 1140

ccggaggaag gtggggatga cgtcaaatca tcatgcccct tatgacctgg gctacacacg 1200

tgctacaatg gacagaacaa agggcagcga aaccgcgagg ttaagccaat cccacaaatc 1260

tgttctcagt tcggatcgca gtctgcaact cgactgcgtg aagctggaat cgctagtaat 1320

cgcggatcag catgccgcgg tgaatacgtt cccgggcctt gtacacaccg cccgtcacac 1380

cacgagagtt tgtaacaccc gaagtcggtg aggtaacctt tatggagcca gccgcctaag 1440

Claims

1.一种解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)菌株，已于2020年1月9日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.19325，该菌株命名为北京2019-1株。

2.权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌菌株在污水净化中的应用。

3.权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌菌株在制备微生物菌剂中的应用。

4.一种利用权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌菌株生产的微生物菌剂。

5.根据权利要求4所述的微生物菌剂，其特征在于，所述剂型为液体制剂。

6.一种制备权利要求5所述的微生物菌剂的方法，其特征在于，包括以下步骤：

7.根据权利要求6所述的微生物菌剂的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述LB平板培养基的pH值为7.3-7.5，所述LB平板培养基的组份包括：胰蛋白胨10g/L、酵母提取物5g/L、氯化钠10g/L、琼脂粉18g/L；所述活化温度为36-38℃，所述活化时间为22-26h；所述培养的时间为12-18h，所述培养温度为36-38℃；

步骤(2)和(3)中，所述LB培养液的pH值为7.3-7.5，所述LB培养液的组份包括：胰蛋白胨10g/L、酵母提取物5g/L、氯化钠10g/L。

8.根据权利要求6所述的微生物菌剂的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述培养为摇床震荡培养，所述摇床震荡速率为190-210rpm，所述培养温度为36-38℃，所述培养时间为10-14h；

步骤(3)中，所述解淀粉芽孢杆菌菌株北京2019-1株的种子菌液与所述LB培养液的体积比为1:(90-110)；所述培养为摇床震荡培养，所述摇床震荡速率为190-210rpm，所述培养温度为36-38℃，所述培养时间为40-56h。

9.根据权利要求6所述的微生物菌剂的制备方法，其特征在于，所述微生物菌剂的有效成分为解淀粉芽孢杆菌北京2019-1株菌体和/或其代谢产物，所述微生物菌剂中解淀粉芽孢杆菌北京2019-1株的活菌的浓度为0.2-1.5×10⁸CFU/mL。

10.权利要求4或5所述的微生物菌剂在污水净化中的应用。