CN112791113A - 一种缓解眼疲劳的蓝莓叶黄素滴眼液及其制备方法 - Google Patents

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张晓元
张艳艳
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Abstract

本发明提供一种缓解眼疲劳的蓝莓叶黄素滴眼液及其制备方法，属于生物医药技术领域。通过研究发现，本发明制备得到的蓝莓提取物和叶黄素均具有缓解视疲劳的保健功效，可更好的缓解眼部干涩、酸胀、预防近视、增强视力，对于老年性视网膜黄斑区病变，具有明显改善的效果。二者复合使用具有协同增效的作用，同时通过合理添加相关辅料成分，最终制备得到含有蓝莓提取物的组合物滴眼液，经试验证明疗效显著著，因此具有良好的实际应用之价值。

Description

一种缓解眼疲劳的蓝莓叶黄素滴眼液及其制备方法
技术领域
本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种缓解眼疲劳的蓝莓叶黄素滴眼液及其制备方法。
背景技术
公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
随着电子化设备的普及和现代生活工作节奏的加快，视疲劳人群不断增加，具体表现为眼部干涩、酸胀、间歇性视觉模糊，视力下降等，严重时甚至会产生恶心、眩晕、头痛等症状，直接影响人们的工作与生活。
目前针对上述视疲劳等症状常用的药物手段包括抗组胺药(如0.1％的依美斯汀、0.05％的左卡巴斯汀)、肥大细胞稳定剂(如有色甘酸二钠及奈多罗米等)、非甾体类抗炎药、血管收缩剂、糖皮质激素以及免疫抑制剂等，然而，发明人发现，上述药物活性成分均以西药成分为主，制成滴眼液时往往对眼睛有一定的刺激作用，长期使用会产生一定的依赖性，同时滴眼液中通常加入抑菌剂和防腐剂，长期使用易对眼睛产生刺激。
发明内容
针对现有技术存在的问题，本发明提供一种缓解眼疲劳的蓝莓叶黄素滴眼液及其制备方法。通过研究发现，本发明制备得到的蓝莓提取物和叶黄素均具有缓解视疲劳的保健功效，二者复合使用具有协同增效的作用，同时通过合理添加相关辅料成分，最终制备得到含有蓝莓提取物的组合物滴眼液，经试验证明疗效显著，因此具有良好的实际应用之价值。
具体的，本发明涉及以下技术方案：
本发明的第一个方面，提供一种组合物，所述组合物包括蓝莓提取物和叶黄素。
本发明的第二个方面，提供上述组合物在制备滴眼液中的应用。
本发明的第三个方面，提供一种蓝莓叶黄素滴眼液，所述滴眼液其活性成分包含上述组合物。
进一步的，所述滴眼液还包含至少一种其它非药物活性成分；
其他非药物活性成分包括但不限于药学上可接受的稳定剂、渗透压调节剂、pH调节剂和/或稀释剂。
进一步的，所述稳定剂包括羟丙基β-环糊精和羟丙基甲基纤维素；优选的，所述羟丙基β-环糊精和羟丙基甲基纤维素的质量比为2～4:1～3，优选为3:2；
所述渗透压调节剂为等渗溶液，包括但不限于氯化钾、氯化钠或其混合物；
所述pH调节剂为硼酸盐缓冲溶液、磷酸缓冲液、盐酸或氢氧化钠，从而将所述滴眼液的pH调整至6.5-7.5；
所述稀释剂为纯水。
本发明的第四个方面，提供上述蓝莓叶黄素滴眼液的制备方法，所述制备方法包括：
将蓝莓提取物和叶黄素溶于溶液中，加入渗透压调节剂和pH调节剂即得。
其中所述溶液为含有稳定剂的水溶液。
更进一步的，所述溶液为含有羟丙基β-环糊精和羟丙基甲基纤维素的注射用水。
本发明的第五个方面，提供上述组合物和/或蓝莓叶黄素滴眼液在如下任意一种或多种中的应用：
1)缓解眼疲劳
2)防治干眼症；
3)防治近视；
4)防治老年性黄斑变性。
以上一个或多个技术方案的有益技术效果：
(1)蓝莓中黄酮类化合物主要以糖苷形式存在，例如花青素，常与1个或多个葡萄糖、鼠李糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖等通过糖苷键连接形成花色苷，而糖苷类不能被吸收，只有游离的苷元才易于粘膜吸收，上述技术方案中提供的蓝莓提取物中，黄酮类化合物中糖苷键被糖苷酶断裂，形成可脂溶性的黄酮苷元，容易透皮吸收，起到作用。
(2)上述技术方案的滴眼液中叶黄素和蓝莓提取物均具有缓解视疲劳的保健功效，二者复合使用具有协同增效的作用，可更好的缓解眼部干涩、酸胀、预防近视、增强视力，对于老年性视网膜黄斑区病变，具有明显改善的效果。
(3)上述技术方案滴眼液中不含抑菌剂和防腐剂，作用温和，对眼睛无刺激，并且滴眼液溶解度好，溶液澄清，适合于临床应用。
(4)上述技术方案滴眼液为日抛滴眼液，一支装液量为500μL，避免染菌，降低了药品污染的风险，减少药品的浪费，延长了保质期，并便于携带，因此具有良好的实际应用之价值。
具体实施方式
应该指出，以下详细说明都是例示性的，旨在对本申请提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本申请所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。
需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本申请的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也意图包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作、器件、组件和/或它们的组合。
结合具体实例对本发明作进一步的说明，以下实例仅是为了解释本发明，并不对其内容进行限定。如果实施例中未注明的实验具体条件，通常按照常规条件，或按照销售公司所推荐的条件；实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可通过商业途径购买得到。
如前所述，上述药物活性成分均以西药成分为主，制成滴眼液时往往对眼睛有一定的刺激作用，长期使用会产生一定的依赖性，同时滴眼液中通常加入抑菌剂和防腐剂，长期使用易对眼睛产生刺激。
有鉴于此，本发明的一个典型具体实施方式中，提供一种含有蓝莓提取物的组合物，所述组合物包括蓝莓提取物和叶黄素。本发明通过研究发现，本发明提取制得的蓝莓提取物和叶黄素均具有缓解视疲劳的保健功效，二者复合使用具有协同增效的作用，可更好的缓解眼部干涩、酸胀、预防近视、增强视力，对于老年性视网膜黄斑区病变，具有明显改善的效果。
本发明的又一具体实施方式中，所述蓝莓提取物具体为将蓝莓通过复合糖苷酶酶解后获得，其富含黄酮苷元类化合物。
本发明的又一具体实施方式中，所述复合糖苷酶包括β-D-葡萄糖苷酶、α-L-鼠李糖苷酶、半乳糖苷酶、α-L-阿拉伯糖苷酶和β-木糖苷酶中的至少两种。
本发明的又一具体实施方式中，蓝莓提取物和叶黄素的质量比为1～5：1～7，优选为1：2。
本发明的又一具体实施方式中，提供上述组合物在制备滴眼液中的应用。
本发明的又一具体实施方式中，提供一种蓝莓叶黄素滴眼液，所述滴眼液其活性成分包含上述组合物。
本发明的又一具体实施方式中，所述滴眼液还包含至少一种其它非药物活性成分；
本发明的又一具体实施方式中，其他非药物活性成分包括但不限于药学上可接受的稳定剂、渗透压调节剂、pH调节剂和/或稀释剂。
本发明的又一具体实施方式中，所述稳定剂包括羟丙基β-环糊精和羟丙基甲基纤维素；优选的，所述羟丙基β-环糊精和羟丙基甲基纤维素的质量比为2～4:1～3，优选为3:2；
本发明的又一具体实施方式中，所述渗透压调节剂为等渗溶液，包括但不限于氯化钾、氯化钠或其混合物；
本发明的又一具体实施方式中，所述pH调节剂为硼酸盐缓冲溶液、磷酸缓冲液、盐酸或氢氧化钠，从而将所述滴眼液的pH调整至6.5-7.5；
本发明的又一具体实施方式中，所述稀释剂为纯水。
本发明的又一具体实施方式中，在滴眼液中，
所述蓝莓提取物含量为0.1-0.5％(w/v)，优选为0.1％(w/v)；
所述叶黄素含量为0.1-0.7％(w/v)，优选为0.2％(w/v)；
所述蓝莓提取物与羟丙基-β-环糊精的比例为1:2-9，优选为1:3；
所述羟丙基甲基纤维素的添加量为0.1-3％(w/v)，优选为0.2％(w/v)。
本发明的又一具体实施方式中，提供上述滴眼液的制备方法，所述制备方法包括：
将蓝莓提取物和叶黄素溶于溶液中，加入渗透压调节剂和pH调节剂即得。
其中所述溶液为含有稳定剂的水溶液。
本发明的又一具体实施方式中，所述溶液为含有羟丙基β-环糊精和羟丙基甲基纤维素的注射用水。
本发明的又一具体实施方式中，使用渗透压调节剂调节溶液渗透压摩尔浓度为280mOsmol/L-320mOsmol/L；(等同于泪液渗透压)
本发明的又一具体实施方式中，使用pH调节剂调节溶液pH为6.5-7.5。
本发明的又一具体实施方式中，所述蓝莓提取物，其制备方法包括：
(1)将蓝莓与有机溶剂混合超声提取，蒸发后加水复溶得溶液I；
(2)向溶液I中加入复合糖苷酶进行酶解处理，纯化后即得。
本发明的又一具体实施方式中，所述步骤(1)中，
蓝莓为干燥粉碎后的蓝莓粉末，从而便于后续酶解；
所述有机溶剂为乙醇，乙醇浓度不做具体限定，在本发明的一个具体实施方式中，所述乙醇为70％乙醇；
蓝莓与乙醇的质量体积比为1g：10～50mL；优选为1g：25mL；
超声处理条件为在100～300W超声频率下超声处理10～60min，优选为在250W超声频率下超声处理40min；提取温度控制为40～80℃，优选为60℃；
步骤“蒸发后加水复溶得溶液I”具体方法为：蒸发干燥后加水复溶，控制剩余固体与水的质量比为1：1～10，优选为1：5，调节pH为3.0～8.0，优选为5.5；通过控制溶液pH，有利于后续酶解的进行。
本发明的又一具体实施方式中，所述步骤(2)中，
所述复合糖苷酶的添加量控制5000～10000U/g蓝莓；
所述复合糖苷酶包括β-D-葡萄糖苷酶、α-L-鼠李糖苷酶、半乳糖苷酶、α-L-阿拉伯糖苷酶和β-木糖苷酶中的至少两种；优选为β-D-葡萄糖苷酶与α-L-阿拉伯糖苷酶；二者的用量比例为1：2(以酶活计)；
酶解处理具体条件为：酶解温度20-60℃(优选为40℃)，酶解处理4-8h。
纯化步骤包括：过滤、蒸发、干燥粉碎即得蓝莓提取物。
本发明的又一具体实施方式中，所述滴眼液的制备方法还包括将加入渗透压调节剂和pH调节剂后的溶液过滤、灭菌、灌装后即得。
其中，所述灭菌处理可采用辐射灭菌、微波灭菌以及过滤灭菌中的任意一种，优选为微波灭菌。
所述灌装采用无菌灌装方式，灌装时可控制装液量，(如控制一支装液量为500μL)，使之成为日抛滴眼液，避免染菌。
本发明的又一具体实施方式中，提供上述组合物和/或蓝莓叶黄素滴眼液在如下任意一种或多种中的应用：
1)缓解眼疲劳
2)防治干眼症；
3)防治近视；
4)防治老年性黄斑变性。
以下通过实施例对本发明做进一步解释说明，但不构成对本发明的限制。应理解这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。
实施例1蓝莓提取物的制备及蓝莓提取物滴眼液的制备
(1)称取500g烘干粉碎的蓝莓粉末，加入12.5L 70％的乙醇，在250W超声频率下超声40min，提取温度60℃，旋转蒸发，干燥后按照1:5的比例加水，调至pH为5.5；
(2)按8000U/g蓝莓粉加入复合糖苷酶，酶解8h，酶解温度40℃，90℃灭酶15min；复合糖苷酶为β-D-葡萄糖苷酶与α-L-阿拉伯糖苷酶的混合物；β-D-葡萄糖苷酶与α-L-阿拉伯糖苷酶的用量比例为1：2(以酶活计)；
(3)过滤，旋转蒸发，干燥粉碎得蓝莓提取物A(4.977g)，具体成分见表1；
(4)蓝莓提取物滴眼液按照以下处方及其步骤制备
处方
蓝莓提取物A 1g
叶黄素 2g
羟丙基β-环糊精 3g
羟丙基甲基纤维素 2g
氯化钠适量
pH调节剂适量
注射用水补至1000mL
按照以下步骤配置
(1)按照处方称取滴眼液各原料；
(2)将羟丙基β-环糊精和羟丙基甲基纤维素溶于注射用水中；
(3)将蓝莓提取物A和叶黄素溶于(2)中；
(4)使用氯化钠调节溶液渗透压摩尔浓度为300mOsmol/L；
(5)使用pH调节剂调节溶液pH为7.0；
(6)过滤后，蒸汽灭菌，无菌灌装。
实施例2蓝莓提取物的制备及蓝莓提取物滴眼液的制备
(1)称取500g烘干粉碎的蓝莓粉末，加入15L 70％的乙醇，在200W超声频率下超声50min，提取温度60℃，旋转蒸发，干燥后按照1:5的比例加水，调至pH为5.5；
(2)加入复合糖苷酶9000U/g，酶解6h，酶解温度40℃，90℃灭酶15min；所述复合糖苷酶为β-D-葡萄糖苷酶与α-L-阿拉伯糖苷酶，二者酶活比例为1:2。
(3)过滤，旋转蒸发，干燥粉碎得蓝莓提取物A；
(4)蓝莓提取物滴眼液按照以下处方及其步骤制备
处方
蓝莓提取物A 1g
叶黄素 2g
羟丙基β-环糊精 4g
羟丙基甲基纤维素 2g
氯化钠适量
pH调节剂适量
注射用水补至1000mL
按照以下步骤配置
(2)按照处方称取滴眼液各原料；
(2)将羟丙基β-环糊精和羟丙基甲基纤维素溶于注射用水中；
(3)将蓝莓提取物A和叶黄素溶于(2)中；
(4)使用氯化钠调节溶液渗透压摩尔浓度为320mOsmol/L；
(5)使用pH调节剂调节溶液pH为6.8；
(6)过滤后，蒸汽灭菌，无菌灌装。
实施例3蓝莓提取物的制备及蓝莓提取物滴眼液的制备
(1)称取500g烘干粉碎的蓝莓粉末，加入10L 70％的乙醇，在300W超声频率下超声15min，提取温度50℃，旋转蒸发，干燥后按照1:6的比例加水，调至pH为5.0；
(2)加入复合糖苷酶6000U/g，酶解8h，酶解温度40℃，90℃灭酶15min；所述复合糖苷酶为β-D-葡萄糖苷酶与α-L-阿拉伯糖苷酶，二者酶活比例为1:2。
(3)过滤，旋转蒸发，干燥粉碎得蓝莓提取物A；
(4)蓝莓提取物滴眼液按照以下处方及其步骤制备
处方
蓝莓提取物A 1g
叶黄素 2g
羟丙基β-环糊精 3g
羟丙基甲基纤维素 3g
氯化钠适量
pH调节剂适量
注射用水补至1000mL
按照以下步骤配置
(3)按照处方称取滴眼液各原料
(2)将羟丙基β-环糊精和羟丙基甲基纤维素溶于注射用水中；
(3)将蓝莓提取物A和叶黄素溶于(2)中；
(4)使用氯化钠调节溶液渗透压摩尔浓度为280mOsmol/L；
(5)使用pH调节剂调节溶液pH为7.2；
(6)过滤后，蒸汽灭菌，无菌灌装。
实施例4蓝莓提取物的制备及蓝莓提取物滴眼液的制备
(1)称取500g烘干粉碎的蓝莓粉末，加入20L 70％的乙醇，在300W超声频率下超声50min，提取温度60℃，旋转蒸发，干燥后按照1:4的比例加水，调至pH为6.0；
(2)加入复合糖苷酶10000U/g，酶解5h，酶解温度40℃，90℃灭酶15min；所述复合糖苷酶为β-D-葡萄糖苷酶与α-L-阿拉伯糖苷酶，二者酶活比例为1:2。
(3)过滤，旋转蒸发，干燥粉碎得蓝莓提取物A；
(4)蓝莓提取物滴眼液按照以下处方及其步骤制备
处方
蓝莓提取物A 1g
叶黄素 2g
羟丙基β-环糊精 2g
羟丙基甲基纤维素 2g
氯化钠适量
pH调节剂适量
注射用水补至1000mL
按照以下步骤配置
(4)按照处方称取滴眼液各原料
(2)将羟丙基β-环糊精和羟丙基甲基纤维素溶于注射用水中；
(3)将蓝莓提取物A和叶黄素溶于(2)中；
(4)使用氯化钠调节溶液渗透压摩尔浓度为300mOsmol/L；
(5)使用pH调节剂调节溶液pH为7.0；
(6)过滤后，蒸汽灭菌，无菌灌装。
对比例1蓝莓提取物及蓝莓提取物滴眼液的制备
(1)称取500g烘干粉碎的蓝莓粉末，加入12.5L 70％的乙醇，在250W超声频率下超声40min，提取温度60℃；
(2)过滤，旋转蒸发，干燥粉碎得蓝莓提取物B(5.0342g)，具体成分见表1；
(3)蓝莓提取物滴眼液按照以下处方及其步骤制备
处方
蓝莓提取物B 1g
叶黄素 2g
羟丙基β-环糊精 3g
羟丙基甲基纤维素 2g
氯化钠适量
pH调节剂适量
注射用水补至1000mL
按照以下步骤配置
(1)按照处方称取滴眼液各原料
(2)将羟丙基-β-环糊精和羟丙基甲基纤维素溶于注射用水中；
(3)将蓝莓提取物B和叶黄素溶于(2)中；
(4)使用氯化钠调节溶液渗透压摩尔浓度为300mOsmol/L；
(5)使用pH调节剂调节溶液pH为7.0；
(6)过滤后，蒸汽灭菌，无菌灌装。
对比例2蓝莓提取物滴眼液的制备
处方
蓝莓提取物A(同实施例1) 1g
羟丙基β-环糊精 3g
羟丙基甲基纤维素 2g
氯化钠适量
pH调节剂适量
注射用水补至1000mL
按照以下步骤配置
(1)按照处方称取滴眼液各原料
(2)将羟丙基β-环糊精和羟丙基甲基纤维素溶于注射用水中；
(3)将蓝莓提取物A溶于(2)中；
(4)使用氯化钠调节溶液渗透压摩尔浓度为300mOsmol/L；
(5)使用pH调节剂调节溶液pH为7.0；
(6)过滤后，蒸汽灭菌，无菌灌装。
对比例3叶黄素滴眼液的制备
处方
叶黄素 2g
羟丙基β-环糊精 3g
羟丙基甲基纤维素 2g
氯化钠适量
pH调节剂适量
注射用水补至1000mL
按照以下步骤配置
(1)按照处方称取滴眼液各原料
(2)将羟丙基β-环糊精和羟丙基甲基纤维素溶于注射用水中；
(3)将叶黄素溶于(2)中；
(4)使用氯化钠调节溶液渗透压摩尔浓度为300mOsmol/L；
(5)使用pH调节剂调节溶液pH为7.0；
(6)过滤后，蒸汽灭菌，无菌灌装。
槲皮素和槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖测定方法：将槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖对照品和槲皮素对照品配置成浓度分别为0.1568g/L和0.0176g/L的混合对照液，蓝莓提取物配置成浓度为1g/L，进行HPLC检测，检测条件：色谱柱为C18；流动相A为0.05％磷酸水溶液；流动相B为甲醇；梯度洗脱：0～10min，45％B，10～30min，60％B；检测波长为258nm；流速为1mL/min；柱温为25℃；进样体积10μL。
矢车菊和矢车菊素-3-O-β-D-葡萄糖测定方法：将槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖对照品和槲皮素对照品配置成浓度分别为25mg/L和25mg/L的混合对照液，蓝莓提取物配置成浓度为0.1g/L，C18色谱柱，流动相A：乙腈；流动相B：1％磷酸水溶液；梯度洗脱:0～5min30％B；5～15min70％B；15～20min90％B；流速1mL/min；检测波长525nm；柱温为30℃；进样体积10μL。
表1蓝莓提取物主要组分
Figure BDA0002868485250000161
效果例1对维生素A缺乏造成干眼症的影响
选用1个月龄新西兰白兔60只，体重500±200g，随机分为实验组和正常对照组,每组10只。实验组喂养维生素A缺乏饲料,对照组喂以正常饲料,含维生素A 1200μg·kg-1。实验前进行Schirmer试验，确定泪腺分泌情况，6个月后再进行Schirmer试验，Schirmer试验:用5mm×35mm的号滤纸条,折出5mm置于下穹窿结膜囊内的外1/3处,其余部分突出眼外。5min后测量滤纸湿润长度。造模成功的新西兰兔，随机分为六组，每组10只，具体为空白组、模型组、实施例1组、对比例1组、对比例2组、对比例3组，空白对照组和模型组滴加0.9％生理盐水，实施例1组、对比例1组、对比例2组和对比例3组分别滴用相应滴眼液，每天滴用3次，连续给药20天，再次进行Schirmer试验，具体实验结果见表2。
泪液分泌增长率＝(给药后湿润长度-给药前湿润长度)/给药前湿润长度×100％
表2对维生素A缺乏导致的干眼症泪腺分泌的影响
Figure BDA0002868485250000171
※P<0.05，与空白组相比；#P<0.05，与给药前相比
由表2可知，给药前泪腺湿润度长度，模型组与空白组相比(P<0.05)，表明喂养维生素A缺乏饲料6个月后，新西兰白兔的泪液分泌量明显减少，本申请干眼症造模成功，模型组仅使用生理盐水，停用后泪眼分泌长度出现了一定程度的减少，施用实施例1包含花青素、叶黄素的滴眼液的实施例1组，停药后给药后湿润长度远远大于比给药前湿润长度(P<0.05)，说明施用蓝莓提取物滴眼液新西兰兔的泪腺分泌量明显增加，从而表明本发明滴眼液在缓解眼睛干涩症状的同时对干眼症也具有一定的治疗效果；对比例1组中蓝莓提取物未用复合糖苷酶处理，停药后给药后湿润长度与给药前湿润长度无显著变化；对比例2组，蓝莓提取物未与叶黄素组合施用，停药后给药后湿润长度也大于比给药前湿润长度(P<0.05)，但是湿润长度增长率小于蓝莓提取物与叶黄素组合施用，对比例3为叶黄素滴眼液，停药后给药后湿润长度与给药前湿润长度无显著变化；该实验说明使用复合糖苷酶酶解蓝莓提取物得到的黄酮苷元可缓解眼睛干涩的症状，且黄酮苷元与叶黄素的组合具有协同增加新西兰兔泪腺分泌的作用。
效果例2蓝莓提取物滴眼液对豚鼠形觉剥夺性近视的影响
选用健康3周龄豚鼠50只，体重150g－200g，随机分为A、B、C、D、E 4组，每组10只，从实验第一天开始，A组为右眼半透明眼罩遮盖+实验眼滴入(0.1mL/眼)生理盐水；B组为右眼半透明眼罩遮盖+实验眼滴入(0.1mL/眼)实施例1蓝莓提取物滴眼液；C组为右眼半透明眼罩遮盖+起实验眼滴入(0.1mL/眼)对比例1蓝莓提取物滴眼液；D组为右眼半透明眼罩遮盖+起实验眼滴入(0.1mL/眼)对比例2蓝莓提取物滴眼液；E组为单纯右眼半透明眼罩遮盖+实验眼滴入(0.1mL/眼)对比例3叶黄素滴眼液，每日三次，早中晚各一次。豚鼠饲养于白光照明环境中，照明周期为12h︰12h，饲养温度保持在23℃-26℃实验第1天、第14天及实验第28天所有豚鼠分别进行双眼眼轴及屈光度测量，具体实验结果见表3-1，3-2，3-3。
表3-1第1天各组眼轴及屈光度测量值
Figure BDA0002868485250000191
表3-1可知，各组实验第1天遮盖眼与自身对照眼眼轴长度、屈光度均无显著差异(P>0.05)，各组间的眼轴长度、屈光度均无显著差异(P>0.05)。
表3-2第14天各组眼轴及屈光度测量值
Figure BDA0002868485250000192
表3-2可知，实验第14天测量，A组、C组和E组与自身左眼对照眼眼轴和屈光度相比，遮盖眼眼轴长度均高于自身对照眼，遮盖眼屈光度均高于自身对照组，具有著性差异(P<0.05)；B组遮盖眼眼轴长度和屈光度低于A组、C组和E组(P<0.05)，D组遮盖眼眼轴长度和屈光度低于A组、C组和E组(P<0.05)，A组、B组、C组、D组和E组左眼对照眼眼轴长度和左眼屈光度差异无统计学意义(P>0.05)。
表3-3第28天各组眼轴及屈光度测量值
Figure BDA0002868485250000201
表3-3可知，实验第28天测量，A组、B组、C组、D组和E组左眼对照眼的眼轴长度及左眼屈光度并无明显差异(P>0.05)；A组和C组遮光眼与自身左眼对照眼相比，遮盖眼眼轴均高于自身对照眼，遮盖眼屈光度均高于自身对照组。具有显著性差异(P<0.05)；B组遮盖眼眼轴长度短于A组、C组和E组(P<0.05)，屈光度低于A组、C组和E组(P<0.05)，B组遮盖眼眼轴长度和屈光度与自身对照眼相比，并无明显差异(P>0.05)；D组遮盖眼眼轴长度与自身对照眼相比，并无明显差异(P>0.05)，但是D组遮盖眼屈光度明显高于自身对照眼(P<0.05)，E组遮盖眼眼轴长度长于自身对照眼(P<0.05)，遮盖眼屈光度与自身对照眼相比，无显著性差异(P>0.05)。
由表3-1、3-2、3-3中数据表明，B组可以有效抑制豚鼠眼轴的增长和屈光度的变大，这说明本申请发明的滴眼液可以有效抑制形觉剥夺性近视豚鼠的眼轴增长，减缓屈光度的负向漂移，对豚鼠形觉剥夺性近视具有防治作用；C组在施用28天后，没有起到抑制豚鼠的眼轴增长和减缓屈光度的负向漂移的作用，说明经糖苷酶水解后的苷元更好的被粘膜吸收，起到预防近视的作用；D组在施用28天后，也出现了抑制豚鼠眼轴增长的趋势，但是屈光度还是向负向漂移，E组在施用28天后，没有起到抑制豚鼠的眼轴增长和减缓屈光度的负向漂移的作用，说明蓝莓提取物和叶黄素组合物可以起到协助作用，可以更好地抑制形觉剥夺性近视豚鼠的眼轴增长，减缓屈光度的负向漂移。
效果例3蓝莓提取物滴眼液对激光诱导大鼠眼底新生血管(CNV)形成的影响
黄酮对激光诱导大鼠眼底新生血管(CNV)形成的影响
选用50只健康大鼠，随机分为模型组、实施例1组、对比例1组、对比例2和对比例3组5个小组，通过肌肉注射氯胺酮(35mg/kg)和甲苯噻嗪(5mg/kg)对大鼠进行麻醉，用阿托品(10g/L)和去氧肾上腺素(25g/L)各一滴扩张瞳孔。每只大鼠实验眼滴1％甲基纤维素滴眼液后,眼前放置盖玻片作为接触镜,进行激光照射,使用Nd∶YAG激光器，氪激光532nm，光斑直径50μm，0.15秒曝光和150-200mw功率，每只眼10个点，距视盘边界个1个视乳头直径距离围绕视乳头进行视网膜光凝，每周5个点，以光凝局部有气泡产生为准,表示激光打穿布鲁赫膜，无气泡产生或失败被剔除。
进行激光造模第一天开始,模型组，实验眼滴入生理盐水(0.1mL/眼)；实施例1组大鼠实验眼滴入(0.1mL/眼)实施例1蓝莓提取物滴眼液；对比例1组大鼠实验眼滴入(0.1mL/眼)对比例1蓝莓提取物滴眼液；对比例2组大鼠实验眼滴入(0.1mL/眼)对比例2蓝莓提取物滴眼液；对比例3组大鼠实验眼滴入(0.1mL/眼)对比例3叶黄素滴眼液，每日三次早中晚各一次，28天后，通过舌下静脉注射100g/L荧光素钠盐(0.5mL/kg)，捕获荧光素早期(2分钟以下)和晚期(7分钟以上)，20分钟完成拍摄，选择最清晰的图像，用Image ProPlus6.0软件分析光斑CNV的渗漏面积，具体实验结果见表4。
表4大鼠光凝28天后CNV渗漏面积
Figure BDA0002868485250000221
※P<0.05，与模型组相比；#P<0.05，与对比例1组、对比例2组和对比例3组相比
由表4可知，实施例1组和对比例2组与模型组相比，CNV的渗漏面积显著性变小(P<0.05)，说明蓝莓提取物滴眼液可以抑制激光诱导大鼠产生的CNV；实施例1与对比例1相比，CNV的渗漏面积显著性变小(P<0.05)，说明蓝莓提取物中黄酮化合物经复合糖苷酶水解后得到的黄酮苷元对激光诱导大鼠产生的CNV抑制性比较强；实施例1与对比例2组和对比例3组相比，CNV的渗漏面积显著性变小(P<0.05)，说明黄酮苷元与叶黄素的组合具有协同抑制光诱导大鼠产生的CNV的作用，因此，蓝莓提取物滴眼液在一定程度上可预老年性黄斑变性。
最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种组合物，其特征在于，所述组合物包括蓝莓提取物和叶黄素。
2.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述蓝莓提取物具体为将蓝莓通过复合糖苷酶酶解后获得；
所述复合糖苷酶包括β-D-葡萄糖苷酶、α-L-鼠李糖苷酶、半乳糖苷酶、α-L-阿拉伯糖苷酶和β-木糖苷酶中的至少两种。
3.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，蓝莓提取物和叶黄素的质量比为1～5：1～7，优选为1：2。
4.权利要求1-3任一项所述组合物在制备滴眼液中的应用。
5.一种蓝莓叶黄素滴眼液，其特征在于，所述滴眼液其活性成分包含权利要求1-3任一项所述组合物。
6.如权利要求5所述蓝莓叶黄素滴眼液，其特征在于，所述滴眼液还包含至少一种其它非药物活性成分；
优选的，其他非药物活性成分包括药学上可接受的稳定剂、渗透压调节剂、pH调节剂和/或稀释剂；
优选的，所述稳定剂包括羟丙基β-环糊精和羟丙基甲基纤维素；所述羟丙基β-环糊精和羟丙基甲基纤维素的质量比为2～4:1～3，优选为3:2；
优选的，所述渗透压调节剂为等渗溶液，包括氯化钾、氯化钠或其混合物；
优选的，所述pH调节剂为硼酸盐缓冲溶液、磷酸缓冲液、盐酸或氢氧化钠；
优选的，所述稀释剂为纯水；
优选的，在滴眼液中，
所述蓝莓提取物含量为0.1-0.5％(w/v)，优选为0.1％(w/v)；
所述叶黄素含量为0.1-0.7％(w/v)，优选为0.2％(w/v)；
所述蓝莓提取物与羟丙基-β-环糊精的比例为1:2-9，优选为1:3；
所述羟丙基甲基纤维素的添加量为0.1-3％(w/v)，优选为0.2％(w/v)。
7.权利要求5或6所述蓝莓叶黄素滴眼液的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：
将蓝莓提取物和叶黄素溶于溶液中，加入渗透压调节剂和pH调节剂即得；
其中所述溶液为含有稳定剂的水溶液；
优选的，所述溶液为含有羟丙基β-环糊精和羟丙基甲基纤维素的注射用水；
优选的，使用渗透压调节剂调节溶液渗透压摩尔浓度为280mOsmol/L-320mOsmol/L；
优选的，使用pH调节剂调节溶液pH为6.5-7.5。
8.如权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述蓝莓提取物，其制备方法包括：
(1)将蓝莓与有机溶剂混合超声提取，蒸发后加水复溶得溶液I；
(2)向溶液I中加入复合糖苷酶进行酶解处理，纯化后即得；
优选的，所述步骤(1)中，
蓝莓为干燥粉碎后的蓝莓粉末；
所述有机溶剂为乙醇；优选的，所述乙醇为70％乙醇；
蓝莓与乙醇的质量体积比为1g：10～50mL；优选为1g：25mL；
超声处理条件为在100～300W超声频率下超声处理10～60min，优选为在250W超声频率下超声处理40min；提取温度控制为40～80℃，优选为60℃；
步骤“蒸发后加水复溶得溶液I”具体方法为：蒸发干燥后加水复溶，控制剩余固体与水的质量比为1：1～10，优选为1：5，调节pH为3.0～8.0，优选为5.5；
优选的，所述步骤(2)中，
所述复合糖苷酶的添加量控制5000～10000U/g蓝莓；
所述复合糖苷酶包括β-D-葡萄糖苷酶、α-L-鼠李糖苷酶、半乳糖苷酶、α-L-阿拉伯糖苷酶和β-木糖苷酶中的至少两种；优选为β-D-葡萄糖苷酶与α-L-阿拉伯糖苷酶；二者的用量比例为1：2，以酶活计；
酶解处理具体条件为：酶解温度20-60℃，优选为40℃，酶解处理4-8h；
纯化步骤包括：过滤、蒸发、干燥粉碎即得蓝莓提取物。
9.如权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述滴眼液的制备方法还包括将加入渗透压调节剂和pH调节剂后的溶液过滤、灭菌、灌装后即得；
优选的，所述灭菌处理为辐射灭菌、微波灭菌以及过滤灭菌中的任意一种，优选为微波灭菌；
优选的，所述灌装采用无菌灌装方式。
10.权利要求1-3任一项所述组合物和/或权利要求5或6所述蓝莓叶黄素滴眼液在如下任意一种或多种中的应用：
1)缓解眼疲劳；
2)防治干眼症；
3)防治近视；
4)防治老年性黄斑变性。
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