CN112770778A - 含有非层状液晶形成脂质的外用剂 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种外用剂，其可以良好保持在生物体表面上，并且能够使药物透过性增加，特别是涉及一种含有非层状液晶形成脂质和药物的外用剂。

Description

含有非层状液晶形成脂质的外用剂

技术领域

本发明涉及一种含有非层状液晶形成脂质的外用剂。

背景技术

贴附于皮肤而使用的经皮吸收型制剂具有给药的简便性和缓释性等优点，并且不仅为了各种药物的局部给药，而且为了全身给药而使用该制剂的情况也在增加。但是，皮肤作为生物体屏障具有限制物质透过的功能，因此，已知经皮吸收型制剂中的药物吸收性基本上较低。因此，为了促进药物皮肤透过，经皮吸收型制剂中使用了各种经皮吸收促进剂，但得到的经皮吸收促进效果未必充分。

脂质体等溶致液晶作为模仿生物体的药物递送系统(DDS)载体，自DDS概念的倡导时期起就有很多有用性的报告。近年来，对于作为溶致液晶其中一种的非层状液晶(NLLC)，报告了与既往的DDS载体相比，具有较高的药物含有率、制备容易性，而且在高分子药物中高稳定性等优点。

各种液晶形成化合物在化妆品领域、药物领域等各种用途中得到利用。近年来，开发出在低温(低于6℃)也显示出高稳定性的立方形成液晶的脂质化合物，报告了在缓释性制剂中该液晶的利用(专利文献1)。但是，这些脂质化合物粘度高，不能通过细注射器针头(例如30Gage)，因此难以用于注射剂。从而，作为注射剂的基剂，开发了能够稳定形成非层状液晶且更低粘度的脂质化合物(专利文献2)。专利文献3虽然公开了含有该低粘度的脂质化合物所形成的液晶的皮肤外用剂，但其主要剂型是洗剂和乳液，皮肤保持性不高。此外，专利文献3并未记载该外用剂应用于皮肤以外的组织。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：国际公布第2006/043705号

专利文献2：国际公布第2011/078383号

专利文献3：日本特开2012-17318号公报

发明内容

发明所要解决的问题

本发明所要解决的问题是提供一种可以良好保持在生物体表面上，并且能够使药物透过性增加的外用剂。

解决问题的技术方案

本发明人为了解决上述问题而进行了深入研究，发现在使用非层状液晶形成脂质来制造橡胶贴膏(テープ剤)等的贴剂、气溶胶剂、液晶前体制剂等制剂时，结果能够实现在生物体表面良好的制剂保持性和药物透过性的增加，此外这样的制剂不仅应用于皮肤，也应用于粘膜，从而完成了本发明。

即，本发明包括以下内容：

[1]一种外用剂，其含有非层状液晶形成脂质和药物。

[2]根据上述[1]所述的外用剂，其是下述通式(I)所表示的两亲化合物或其盐，

[化1]

式中，X和Y各自表示氢原子或一起表示氧原子，n表示0～2的整数，m表示1或2，

表示单键或双键，R表示具有2个以上羟基的亲水基团。

[3]根据上述[2]所述的外用剂，其中，所述式中的R表示由选自甘油、赤藓糖醇、季戊四醇、双甘油、甘油酸、三聚甘油、木糖、山梨糖醇、抗坏血酸、葡萄糖、半乳糖、甘露糖、二季戊四醇、麦芽糖、甘露醇和木糖醇中的任一个去掉1个羟基所得的亲水基团。

[4]根据上述[1]～[3]中任一项所述的外用剂，其中，非层状液晶形成脂质是单-O-(5,9,13,17-四甲基十八碳-4-烯酰基)甘油或单-O-(5,9,13-三甲基十四碳-4-烯酰基)甘油。

[5]根据上述[1]所述的外用剂，其中，非层状液晶形成脂质是甘油单油酸酯或植烷三醇。

[6]根据上述[1]～[5]中任一项所述的外用剂，其被制剂化为贴剂的剂型。

[7]根据上述[6]所述的外用剂，其中，贴剂是橡胶贴膏。

[8]根据上述[6]或[7]所述的外用剂，其含有70w/w％以上的胶粘剂。

[9]根据上述[1]～[5]中任一项所述的外用剂，其被制剂化为气溶胶剂的剂型。

[10]根据上述[1]～[9]中任一项所述的外用剂，其中，非层状液晶形成脂质在外用剂中不形成液晶。

[11]根据上述[1]～[10]中任一项所述的外用剂，其应用于粘膜。

[12]根据上述[1]～[11]中任一项所述的外用剂，其还含有水溶性高分子和/或油性成分。

[13]根据上述[12]所述的外用剂，其中，水溶性高分子是羟丙基纤维素。

[14]根据上述[1]～[13]中任一项所述的外用剂，其还含有乙醇。

[15]根据上述[1]～[5]中任一项所述的外用剂，其含有微粒子，所述微粒子含有所述非层状液晶形成脂质和所述药物。

[16]根据上述[1]～[15]中任一项所述的外用剂，其用于脑内的药物递送。

本说明书包含作为本申请的优先权基础的日本专利申请2018-168365号所公开的内容。

发明效果

根据本发明，可以提供一种外用剂，其可以良好保持在生物体表面上，并且能够使药物皮肤透过性增加。此外根据本发明，可以提供一种外用剂，其能够应用于粘膜并具有较高的药物粘膜透过性。

附图说明

图1是显示偏光显微镜观察图像的照片。A：1号制剂；B：2号制剂；C：3号制剂；D：4号制剂；E：5号制剂；F：19号制剂；G：25号制剂；H：26号制剂。

图2是显示小角X射线衍射的结果的图。A：1号制剂；B：2号制剂；C：3号制剂；D：13号制剂、E：25号制剂；F：26号制剂；G：27号制剂。

图3是显示小角X射线衍射的结果的图。A：37号制剂；B：45号制剂；C：46号制剂；D：47号制剂；E：48号制剂；F：49号制剂。

图4是垂直扩散单元结构的示意图。

图5是显示来自液晶前体制剂的FL-Na的皮肤透过行为的图。

图6是显示小角X射线衍射的结果的图。A：52号制剂(添加水)、B：53号制剂(添加水)、C：56号制剂(添加水)、D：57号制剂(添加水)、E：56号制剂(未添加水)。

图7是显示来自喷剂的FL-Na的皮肤透过行为的图。各值是平均±标准误差(S.E.)。

图8是显示胶粘层在背衬上延展的示意图。箭头表示胶粘层的延展方向。

图9是显示橡胶贴膏制剂的胶粘层表面的相位图的照片。A：73号制剂，观察视野1μm×1μm；B：63号制剂，观察视野1μm×1μm；C：73号制剂，观察视野0.5μm×0.5μm；D：63号制剂，观察视野0.5μm×0.5μm。

图10是水平扩散单元结构的示意图。

图11是显示来自橡胶贴膏制剂的FL-Na的释放行为的图。

图12是显示来自橡胶贴膏制剂的FL-Na的皮肤透过行为的图。

图13是显示小角X射线衍射的结果的图。A：75号制剂；B：76号制剂；C：77号制剂。

图14是显示应用后8小时内的来自各制剂的曲尼司特(Tranilast)的释放行为的图。各值表示平均±标准误差(S.E.)。白方块表示75号制剂；黑方块表示76号制剂；白三角表示78号制剂。

图15是显示鼻腔内给药后8小时内的血浆中曲尼司特浓度的随时间变化的图。各值表示平均±标准误差(S.E.)。白方块表示75号制剂；黑方块表示76号制剂；白圆圈表示77号制剂；白三角表示78号制剂。

图16是显示鼻腔内给药后8小时内的脑内曲尼司特浓度的随时间变化的图。各值表示平均±标准误差(S.E.)。白方块表示75号制剂；黑方块表示76号制剂；白圆圈表示77号制剂；白三角表示78号制剂。

图17是显示鼻腔内给药2小时、4小时和8小时后的脑内不同区域中的曲尼司特浓度的图。A：中脑；B：皮质；C：小脑；D：海马。

图18是显示鼻腔内给药2小时、4小时和8小时后的脑内不同区域中的曲尼司特浓度的图。A：脊髓；B：嗅球。

具体实施方式

下面，详细说明本发明。

本发明涉及一种含有非层状液晶形成脂质和药物的外用剂。本发明中，外用剂是指以给予药物为目的而应用于生物体表面(皮肤或粘膜等)的药物。所述外用剂可以是药物组合物。本发明的外用剂具有生物体表面附着性，优选为稳定地保持在生物体表面。如果本发明的外用剂应用于生物体表面，则药物从外用剂中的由非层状液晶形成脂质形成的液晶中被释放，该药物有效地透过皮肤和粘膜等而被体内吸收(给药)。本发明的外用剂能够显著促进药物透过皮肤和粘膜等。

1.非层状液晶形成脂质

在本发明中，可以将能够形成非层状液晶的脂质(非层状液晶形成脂质)用作液晶形成脂质。本发明中使用的非层状液晶形成脂质优选为低分子的两亲化合物。这里，“低分子”是指具有约20～10,000的分子量。本发明中使用的非层状液晶形成脂质的分子量优选为50～5,000，更优选为100～2,500，进一步优选为200～1,000。

在一实施方式中，可以将下述通式(I)所表示的两亲化合物或其盐用作非层状液晶形成脂质。

[化2]

通式(I)中，X和Y各自表示氢原子或一起表示氧原子。通式(I)中，n表示0～2的整数(优选为1或2)，m表示1或2。在通式(I)所表示的两亲化合物中，n与m的组合任选以下之一：n＝0、m＝1；n＝0、m＝2；n＝1、m＝1；n＝1、m＝2；n＝2、m＝1；或n＝2、m＝2。

式中的：

表示单键或双键。

通式(I)中的R表示具有2个以上羟基的亲水基团，并不限定于以下，但例如可举出：由选自甘油、赤藓糖醇、季戊四醇、双甘油(diglycerol)、甘油酸、三聚甘油(triglycerol)、木糖、山梨糖醇、抗坏血酸、葡萄糖、半乳糖、甘露糖、二季戊四醇、麦芽糖、甘露醇和木糖醇中的任一个去掉1个羟基(OH)所得的亲水基团。通式(I)中的R更优选为由甘油、季戊四醇、赤藓糖醇、双甘油、甘油酸或木糖去掉1个羟基(OH)所得的亲水基团，特别优选为由甘油去掉1个羟基(OH)所得的亲水基团。予以说明，由甘油酸去掉1个羟基(OH)所得的亲水基团可以是甘油酸的羧基中所含的OH(羟基)被去掉所得的亲水基团。

予以说明，本发明中，通式(I)中的表述：

表示该两亲化合物是几何异构体的E体(顺式体)或者Z体(反式体)或它们的混合物。该表述的含义在后述的通式(II)和(III)中也相同。

作为通式(I)所表示的两亲化合物的示例，可举出下述通式(II)所表示的两亲化合物。

[化3]

通式(II)中，X和Y各自表示氢原子或一起表示氧原子，n表示0～2的整数(0、1或2)，m表示1或2。

通式(II)中的R表示由选自甘油、赤藓糖醇、季戊四醇、双甘油、甘油酸、三聚甘油、木糖、山梨糖醇、抗坏血酸、葡萄糖、半乳糖、甘露糖、二季戊四醇、麦芽糖、甘露醇和木糖醇中的任一个去掉1个羟基(OH)所得的亲水基团。R的优选示例是由选自甘油、季戊四醇、赤藓糖醇、双甘油、甘油酸和木糖中的任一个去掉1个羟基(OH)所得的亲水基团，进一步优选为由甘油去掉1个羟基(OH)所得的亲水基团。由甘油酸去掉1个羟基(OH)所得的亲水基团可以是甘油酸的羧基中所含的OH(羟基)被去掉所得的亲水基团。

作为通式(I)所表示的两亲化合物的其他示例，可举出下述通式(III)所表示的两亲化合物。

[化4]

通式(III)中，X和Y各自表示氢原子或一起表示氧原子，n表示0～2的整数(优选为1或2)，m表示1或2。

通式(III)中的R表示具有2个以上羟基的亲水基团，并不限定于以下，但例如可举出：由选自甘油、赤藓糖醇、季戊四醇、双甘油、甘油酸、三聚甘油、木糖、山梨糖醇、抗坏血酸、葡萄糖、半乳糖、甘露糖、二季戊四醇、麦芽糖、甘露醇和木糖醇中的任一个去掉1个羟基(OH)所得的亲水基团。R的优选示例是由选自甘油、季戊四醇、赤藓糖醇、双甘油、甘油酸和木糖中的任一个去掉1个羟基(OH)所得的亲水基团，进一步优选为由甘油去掉1个羟基(OH)所得的亲水基团。由甘油酸去掉1个羟基(OH)所得的亲水基团可以是甘油酸的羧基中所含的OH(羟基)被去掉所得的亲水基团。

作为通式(I)所表示的两亲化合物的另外其他示例，可举出下述通式(IV)所表示的两亲化合物。

[化5]

通式(IV)中，X和Y各自表示氢原子或一起表示氧原子，n表示0～2的整数(优选为1或2)，m表示1或2。

通式(IV)中的R表示具有2个以上羟基的亲水基团，并不限定于以下，但例如可举出：由甘油、赤藓糖醇、季戊四醇、双甘油、甘油酸、三聚甘油、木糖、山梨糖醇、抗坏血酸、葡萄糖、半乳糖、甘露糖、二季戊四醇、麦芽糖、甘露醇和木糖醇中的任一个去掉1个羟基(OH)所得的亲水基团。R的优选示例是由选自甘油、季戊四醇、赤藓糖醇、双甘油、甘油酸和木糖中的任一个去掉1个羟基(OH)所得的亲水基团，进一步优选为由甘油去掉1个羟基(OH)所得的亲水基团。由甘油酸去掉1个羟基(OH)所得的亲水基团可以是甘油酸的羧基中所含的OH(羟基)被去掉所得的亲水基团。

作为通式(I)所表示的两亲化合物的优选示例，可举出：

单-O-(5,9,13-三甲基十四碳-4-烯酰基)甘油、

单-O-(5,9,13-三甲基十四碳酰基)甘油、

单-O-(5,9,13-三甲基十四碳-4,8.12-三烯酰基)甘油、

单-O-(5,9,13,17-四甲基十八碳-4-烯酰基)甘油、

单-O-(5,9,13,17-四甲基十八碳酰基)甘油，以及

单-O-(5,9,13,17-四甲基十八碳-4,8,12,16-四烯酰基)甘油，

但并不限定于这些。

作为进一步优选示例，可举出：单-O-(5,9,13-三甲基十四碳-4-烯酰基)甘油和单-O-(5,9,13,17-四甲基十八碳-4-烯酰基)甘油。

本发明中使用的通式(I)所表示的两亲化合物在宽泛环境条件下显示出高稳定性。例如，通式(I)所表示的两亲化合物的特征在于，具有类异戊二烯链作为疏水性基团，这与具有油酸等直链脂肪链作为疏水性基团的两亲化合物不同，对于水解的耐性高，氧化稳定性也较高。此外，通式(I)所表示的两亲化合物的获得液晶的温度范围大，克拉夫特温度低，即使在低温(6℃以下，优选为0℃或0℃以下)也能够稳定形成液晶。

另外，本发明中使用的通式(I)所表示的两亲化合物其本身显示出低粘度。具体地，通式(I)所表示的两亲化合物本身在25℃的测定值中优选具有15.0Pa·s以下，更优选为11.0Pa·s以下，进一步优选为6.0Pa·s以下的粘度。该粘度例如可以在温度25℃使用粘度/粘弹性测量装置(Gemini II，Malvern公司)进行测定。

本发明的外用剂可以含有通式(I)所表示的两亲化合物的盐。本发明的通式(I)所表示的两亲化合物的盐可以是任意的盐，可举出：钠、钾、钙、镁等碱金属或碱土金属等的盐，优选为钠盐、钾盐。本发明的通式(I)所表示的两亲化合物的盐可以是药学上可接受的盐，也可以是化妆品制造上可接受的盐。

本发明并不限定于使用通式(I)所表示的两亲化合物或其盐的外用剂，可以使用任意其他非层状液晶形成脂质。

本发明中使用的非层状液晶形成脂质例如，可以是甘油脂肪酸单酯。作为构成甘油脂肪酸单酯的脂肪酸，优选为碳原子数为8～24的饱和或不饱和的脂肪酸。作为甘油脂肪酸单酯的其他示例，可举出：甘油单油酸酯(GMO；别名也称为：单油酸甘油酯)、甘油单异硬脂酸酯、甘油单反油酸酯(グリセリルモノエライジレート)等，但并不限于这些。或者作为非层状液晶形成脂质，也可以使用甘油单烷基醚。作为甘油单烷基醚，具体地，可举出：甘油单油基醚(别名也称为：油酸甘油酯)、甘油单异硬脂基醚(别名也称为：异硬脂酸甘油酯)、甘油单反油酸醚(グリセリンモノエライジルエーテル)等，但并不限于这些。而且，作为其他的非层状液晶形成脂质，可以使用植烷三醇(PHY)等。

本发明中使用的非层状液晶形成脂质还含有通过混合形成非层状液晶的两种以上脂质的组合、通过与油性成分等成分的组合形成非层状液晶的脂质。这样的非层状液晶形成脂质是本领域技术人员已知的。

通过在本发明中使用的非层状液晶形成脂质中加入油性成分等一种以上的预定成分，有能够使所形成的液晶结构发生变化的情况。外用剂含有非层状液晶形成脂质和这样的成分，与不含该成分的情况相比，即使液晶结构发生变化时，只要在液晶结构发生变化后也形成非层状液晶，则该外用剂和该外用剂中所用的非层状液晶形成脂质也分别包含在本发明中的“外用剂”和“非层状液晶形成脂质”的范围中。

本发明中使用的非层状液晶形成脂质可以在水性介质(水相)中形成非层状液晶。予以说明，关于本发明，有时将含有非层状液晶形成脂质的水性介质称为“非层状液晶形成脂质/水性体系”或“两亲化合物/水性体系”。

本发明的外用剂中所含的非层状液晶形成脂质在外用剂中形成非层状液晶，或在应用于生物体表面时因周围的水存在而在生物体表面上形成非层状液晶，或在应用于生物体表面时因挥发成分(乙醇那样的溶剂、喷射剂等)挥发而在生物体表面上形成非层状液晶。本发明的外用剂中所含的非层状液晶形成脂质所形成的非层状液晶优选为使疏水基团向外侧取向的II型(油包水型)液晶，更优选为立方液晶、反相六角相液晶，或者它们的混合体系，但并不限于这些。

由非层状液晶形成脂质形成的液晶结构的分析可以通过使用偏光显微镜的观察或小角X射线散射(SAXS)测定等常规方法来进行。

例如，为了确认液晶形成，也可以通过小角X射线散射(SAXS)法，研究所具有的各种液晶结构。通常，首先将预定浓度的非层状液晶形成脂质/水性体系样品加入到例如石英制X射线毛细管中，然后用氧气燃烧器密封毛细管，供于SAXS测定即可。

通过确认SAXS测定的结果、各自的液晶结构中是否呈现出特有的以下散射峰的比值(峰间隔)，可以进行液晶形成的确认。

Pn3m立方液晶的比值：

Ia3d立方液晶的比值：

Im3m立方液晶的比值：

Fd3m立方液晶的比值：

反相六角相液晶所特有的比值：

按照本领域技术人员所周知的方法，如果由SAXS数据计算峰值，进而求出它们倒数的比值，则能够容易地确定空间群和晶格常数。

用于本发明外用剂的通式(I)所表示的两亲化合物可以参照后述实施例的记载或可以按照国际公布WO2014/178256中记载的合成方法来合成。或者通式(III)所表示的两亲化合物例如可以按照国际公布WO2011/078383中记载的合成方法来合成。而且，通式(IV)所表示的两亲化合物例如可以按照国际公布WO2006/043705中记载的合成方法来合成。

对于所合成的化合物，优选通过核磁共振(NMR)测定等常规方法，预先确认得到目标化合物。

另外，各种其他非层状液晶脂质可以商购获得。甘油单油酸酯(GMO)和植烷三醇(PHY)可以从东京化成工业株式会社、花王株式会社、理研维他命株式会社(均为日本)等商购获得。油酸甘油酯例如作为商品名NIKKOL Selachyl Alcohol V可以从日光化学株式会社(日本)商购获得。异硬脂酸甘油酯例如作为商品名Penetol GE-IS可以从花王株式会社(日本)商购获得。

本发明的外用剂含有有效量的非层状液晶形成脂质。本发明的外用剂中所含的非层状液晶形成脂质的量并不限定于以下，但相对于外用剂的总重量，通常可以为0.1w/w％以上、0.5w/w％以上，例如为3w/w％以上、5w/w％以上、0.5w/w％～99.8w/w％、1w/w％～99.5w/w％、5w/w％～99w/w％、10w/w％～99.8w/w％、40w/w％～99.8w/w％、60w/w％以上、70w/w％以上、60w/w％～99.8w/w％、65w/w％～99.8w/w％、68w/w％～99w/w％、70w/w％～99.5w/w％、70w/w％～90w/w％、10w/w％～30w/w％、10w/w％～25w/w％、13w/w％～15w/w％、3w/w％～20w/w％、3w/w％～15w/w％、3w/w％～10w/w％或5w/w％～9w/w％。

这里所说的“外用剂的总重量”是指用作外用剂的至少含有非层状液晶形成脂质和药物的组合物(优选为混合或分散组合物)的总重量，承载该组合物的支撑体和容纳该组合物的容器等其他构成部件的重量不包含在“总重量”中。

2.药物

本发明的外用剂中混配的药物通过将该外用剂应用于生物体表面，从而释放至生物体表面，透过皮肤和粘膜等被体内吸收。药物可以是应给予生物体的任意物质(有效成分)。但药物不是非层状液晶形成脂质其本身。药物可以是有机化合物，也可以是无机化合物。药物可以是水溶性药物，也可以是脂溶性(亲油性、水不溶性或水难溶性)药物。药物可以是生理活性物质。药物例如可以是蛋白质、肽、氨基酸、核酸等，但并不限于这些。药物例如可以是抗癌剂、免疫抑制剂、镇痛剂(例如，非阿片类镇痛药、吗啡等阿片类镇痛药)、抗炎剂、抗过敏剂(曲尼司特(Tranilast)等)、类固醇药(曲安奈德等)、抗肥胖药、抗糖尿病药、抗生素、抗真菌剂、抗病毒剂、血管扩张药、麻醉药、戒烟辅助药(烟碱等)、抗精神病药、降血压药、强心剂、β阻断剂、抗贫血剂、抗高脂血症剂、支气管扩张剂、痴呆症治疗药、针对阿尔茨海默病、帕金森病、脑血管障碍或脑肿瘤等的脑中枢神经系统疾病治疗药、慢性阻塞性肺疾病(COPD)治疗药、青光眼治疗药、白内障治疗药、老年性黄斑变性治疗药、膀胱过度活动治疗药、注意缺陷与多动性障碍治疗药、激素剂、疫苗等，但并不限于这些。

3.外用剂的剂型和组成

本发明的外用剂可以用于全身给药，也可以用于局部给药。本发明的外用剂可以制剂化为任意的剂型。本发明的外用剂并不限定于以下，但可以具有：贴剂，例如橡胶贴膏(也称为：硬膏剂)、凝胶贴膏等；喷剂，例如气溶胶剂、泵式喷剂(手动式或动力式喷雾)等；软膏剂、霜剂、口腔剂、经鼻剂、栓剂、阴道剂等剂型。喷剂是指通过由手动、动力、喷射剂(气体)或其他任意方式施加压力，从而使药物喷出的剂型的药物制剂。本发明的外用剂可以含有微粒子，所述微粒子含有非层状液晶形成脂质和药物(例如，微粒子或纳米粒子)。本发明的外用剂也可以是分散体(dispersion)，例如可以是含有该微粒子(例如，微粒子或纳米粒子)的分散液。本发明还提供含有本发明外用剂的这些任意剂型的制剂。

本发明的外用剂可以用于生物体表面，优选应用于皮肤(皮肤表面)。或者本发明的外用剂用于应用于粘膜(粘膜表面)。本发明的外用剂能够促进药物透过皮肤或粘膜。本发明的外用剂不仅应用于皮肤，也应用于粘膜。

作为其他成分，本发明的外用剂可以含有水性介质。作为水性介质，并不限定于以下，但可以是灭菌水、纯化水、蒸馏水、离子交换水、超纯水等水；生理盐水、氯化钠水溶液、氯化钙水溶液、氯化镁水溶液、硫酸钠水溶液、硫酸钾水溶液、碳酸钠水溶液、乙酸钠水溶液等电解质水溶液；磷酸缓冲液或Tris-盐酸缓冲液等缓冲液等。水性介质优选为生理学上可接受的水或水溶液。水性介质例如可以是通过溶解、分散或悬浮等含有药物等外用剂的成分。

作为其他成分，本发明的外用剂可以含有水溶性高分子。作为水溶性高分子，可举出：羟丙基纤维素(HPC)、羟乙基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、炭黑、卡拉胶、壳聚糖、硫酸软骨素、黄原胶、透明质酸盐(透明质酸钠等)、海藻酸盐(海藻酸钠等)、明胶、葡聚糖等，但并不限于这些。作为羟丙基纤维素(HPC)，例如可举出：由日本曹达株式会社(日本)销售的HPC-SSL(分子量约40,000，粘度2～2.9mPa·s)、HPC-SL(分子量约100,000，粘度3～5.9mPa·s)、HPC-L(分子量约140,000，粘度6～10mPa·s)、HPC-M(分子量约620,000，粘度150～400mPa·s)和HPC-H(分子量约910,000，粘度1000～4000mPa·s)这5种级别的HPC。在一实施方式中，羟丙基纤维素分子量可以为1000,000以下或800,000以下，例如为10,000～700,000或10,000～80,000。

本发明的外用剂中所含的药物的量并不限定于以下，但相对于外用剂的总重量，一般可以为0.0001w/w％以上，例如为0.0001w/w％～10w/w％、0.0005w/w％～5w/w％、0.0005w/w％～1w/w％、0.001w/w％～5w/w％、0.001w/w％～1w/w％、0.001w/w％～0.1w/w％、0.001w/w％～0.05w/w％、0.001w/w％～0.01w/w％、0.01w/w％～5w/w％、0.01w/w％～1w/w％、0.01w/w％～0.1w/w％、0.05w/w％～1w/w％或0.1w/w％～0.5w/w％。“外用剂的总重量”的含义如上所述。予以说明，关于本发明，w/w％是指重量/重量％，可以与质量/质量％互换使用。

作为其他成分，本发明的外用剂可以含有油性成分。作为油性成分，并不限定于以下，但例如可举出：烃油、酯油；以及植物油和动物油等油脂；山萮醇、硬脂醇等高级醇；硬脂酸、棕榈酸等高级脂肪酸；脂溶性维生素等。作为油性成分的具体示例，例如可举出：角鲨烯、角鲨烷、肉豆蔻酸异丙酯、辛基十二醇肉豆蔻酸酯、蓖麻油、橄榄油、生育酚和醋酸生育酚等，但并不限于这些。

作为其他成分，本发明的外用剂可以含有表面活性剂。作为本发明中使用的表面活性剂的示例，可举出：以亲水性的环氧乙烷与疏水性的环氧丙烷形成的嵌段共聚物(聚氧乙烯聚氧丙烯二醇)、聚氧乙烯烷基醚、聚氧乙烯烷基酯、聚氧乙烯氢化蓖麻油为代表的非离子性表面活性剂。作为非离子性表面活性剂，更优选分子量为1000以上(更优选为5000以上)。作为环氧乙烷与环氧丙烷形成的嵌段共聚物，可举出：聚氧乙烯(200)聚氧丙烯(70)二醇、聚氧乙烯(196)聚氧丙烯(67)二醇、聚氧乙烯(160)聚氧丙烯(30)二醇、聚氧乙烯(120)聚氧丙烯(40)二醇等。这些环氧乙烷与环氧丙烷形成的嵌段共聚物以Pluronic^(R)、Poloxamer^(R)、UNILUBE^(R)、PLONON^(R)等各种名称正在市售。作为表面活性剂的特别优选示例，可举出：聚氧乙烯(200)聚氧丙烯(70)二醇、聚氧乙烯(196)聚氧丙烯(67)二醇(别名：Pluronic^(R)F127；UNILUBE 70DP-950B、Poloxamer^(R)407)等，但并不限于这些。予以说明，本发明中，本发明中使用的非层状液晶形成脂质不包含在表面活性剂的范围内。本发明的外用剂可以含有一种或两种以上的这样的表面活性剂。

相对于外用剂的总重量，本发明的外用剂的表面活性剂一般可以含有0.001w/w％以上，例如为0.01w/w％以上，优选为0.05w/w％以上，更优选为0.1w/w％以上，例如为0.01w/w％～10w/w％、0.1w/w％～5w/w％、0.3w/w％以上、0.3w/w％～2w/w％、0.3w/w％～1.5w/w％、0.3w/w％～1w/w％或0.55w/w％～0.9w/w％。

作为其他成分，本发明的外用剂可以含有乙醇(关于本发明，除非另有说明，否则是指无水乙醇)。予以说明，乙醇(无水乙醇)不是水性介质。

作为其他成分，本发明的外用剂可以含有丙二醇、甘油、乙二醇、丁二醇等药学上可接受的水溶性有机化合物。

作为其他成分，本发明的外用剂可以含有药学上可接受的其他添加剂。作为添加剂，可举出：载体、赋形剂、稳定剂、缓冲剂、防腐剂、着色剂、赋香剂、pH调节剂、分散剂等，但并不限于这些。

在本发明的外用剂中，非层状液晶形成脂质可以形成或不形成液晶(特别是非层状液晶)。非层状液晶形成脂质在外用剂中不形成液晶时，该外用剂也称为液晶前体制剂。在不含水性介质或不含足够量水性介质的本发明的外用剂中，由于非层状液晶形成脂质不形成液晶，因此该外用剂是液晶前体制剂。

通过将本发明的外用剂应用于生物体表面，优选应用于皮肤或粘膜，可以将外用剂中所含的药物给予至生物体。本发明还提供一种药物递送方法或药物给药方法，该方法包括将本发明的外用剂应用于生物体表面，优选应用于皮肤或粘膜。本发明的外用剂的应用对象没有特别限制，但一般是动物，优选为包括人等灵长类；家畜；狗、猫、兔等宠物、实验动物等在内的哺乳动物或鸟类。

下面，对优选的剂型的外用剂进行详细说明。

4.贴剂

本发明的外用剂可以制剂化为贴剂的剂型。本发明还提供含有本发明外用剂的贴剂。本发明中贴剂是指附着于皮肤或粘膜而使用的以经皮或经粘膜吸收药物为目的的药物制剂。贴剂可以是局部作用型，也可以是全身作用型。贴剂具有胶粘层。贴剂的胶粘层优选为含有胶粘剂(更优选为脂溶性胶粘剂)的组合物，除胶粘剂之外还优选含有非层状液晶形成脂质和药物。作为贴剂(patches)，并不限定于以下，但可举出：橡胶贴膏(也称为：硬膏剂)、凝胶贴膏(cataplasms)等。

橡胶贴膏是具有将压敏胶粘剂用作基剂而成的胶粘层的制剂。该胶粘层优选为含有压敏胶粘剂、非层状液晶形成脂质和药物的组合物。在一实施方式中，橡胶贴膏具备胶粘层和支撑体，所述胶粘层含有压敏胶粘剂、非层状液晶形成脂质和药物。在优选的一实施方式中，橡胶贴膏是具备胶粘层、背衬(剥离片)和支撑体的所谓的基质型制剂，所述胶粘层含有压敏胶粘剂、非层状液晶形成脂质和药物。用于橡胶贴膏的压敏胶粘剂优选为脂溶性高分子。作为压敏胶粘剂，并不限定于以下，但可举出：丙烯酸类、氨基甲酸乙酯类、橡胶类、或有机硅类胶粘剂。作为丙烯酸类胶粘剂，并不限定于以下，但可举出DURO-TAK^(R)(汉高公司)，例如DURO-TAK^(R)387-2516。

支撑体可以是能够在贴剂中使用的任意形状，但优选为片状基材。作为支撑体，例如可以使用公知的支撑体。支撑体例如可以是适合作为贴剂的支撑体的任意材料，例如可以是聚合物膜等膜、无纺布或织布等布、纸等。支撑体例如可以由聚酯、聚乙烯(聚对苯二甲酸乙二酯、聚萘二甲酸乙二酯、聚对苯二甲酸丁二醇酯等)、聚烯烃(聚乙烯、聚丙烯等)、纤维素酯等纤维素衍生物、聚氨酯、聚酰胺等构成。支撑体的厚度并不限定于以下，但一般为5μm～500μm，优选为10～300μm，例如为10～200μm、10～100μm、25～100μm、50μm～300μm或60μm～200μm。

作为剥离片，可以使用能够在贴剂中使用的任意剥离片，例如可以使用公知的剥离膜。剥离片例如可以由如下构成：在与胶粘层的接触面具有氟树脂、有机硅树脂等层的聚酯(聚对苯二甲酸乙二酯、聚萘二甲酸乙二酯、聚对苯二甲酸丁二醇酯等)、聚烯烃(聚乙烯、聚丙烯等)、聚氯乙烯、聚偏氯乙烯等聚合物膜、纤维素酯等纤维素衍生物，或者纸等，或者使用这些多种材料的层压膜等。剥离片的厚度并不限定于以下，但一般为5～500μm，优选为10～300μm，例如为10～200μm、25～100μm、50μm～300μm或60μm～200μm。

贴剂中的胶粘层的厚度并不限定于以下，但一般为5μm～1mm，优选为5～500μm，例如为5～200μm、10～100μm或20～50μm。

关于非层状液晶形成脂质和药物，如上所述。

在一实施方式中，在贴剂例如橡胶贴膏的胶粘层中的非层状液晶形成脂质的量优选为形成液晶的量。关于非层状液晶形成脂质，如上所述。更具体地，胶粘层中的非层状液晶形成脂质的量并不限定于以下，但相对于胶粘层的总重量，通常为0.1w/w％以上，优选为5w/w％以上，例如为1w/w％～20w/w％、1w/w％～10w/w％、5w/w％～20w/w％、5w/w％～10w/w％、10w/w％～30w/w％、10w/w％～25w/w％或13w/w％～15w/w％。

胶粘层中的药物的量并不限定于以下，但相对于胶粘层的总重量，通常为0.0001w/w％以上，优选为0.0005w/w％～5w/w％，更优选为0.001w/w％～5w/w％，例如为0.001w/w％～1w/w％、0.01w/w％～1w/w％、0.05w/w％～1w/w％或0.1～0.5w/w％。

胶粘层中的胶粘剂(例如，压敏胶粘剂)的量并不限定于以下，但相对于胶粘层的总重量，一般为70w/w％以上，优选为75w/w％以上，更优选为75w/w％～90w/w％、75w/w％～85w/w％、80w/w％～95w/w％或85w/w％～95w/w％、85w/w％～90w/w％，例如为80w/w％或90w/w％。

在一实施方式中，在贴剂例如橡胶贴膏的胶粘层中的非层状液晶形成脂质与胶粘剂的量并不限定于以下，但相对于胶粘层的总重量，可以分别为1w/w％～20w/w％、75w/w％～90w/w％。在另一实施方式中，在贴剂例如橡胶贴膏的胶粘层中的非层状液晶形成脂质与胶粘剂的量并不限定于以下，但相对于胶粘层的总重量，可以分别为1w/w％～10w/w％、85w/w％～95w/w％。在另一实施方式中，在贴剂例如橡胶贴膏的胶粘层中的非层状液晶形成脂质与胶粘剂的量并不限定于以下，但相对于胶粘层的总重量，可以分别为10w/w％～15w/w％、75w/w％～85w/w％。在另一实施方式中，在贴剂例如橡胶贴膏的胶粘层中的非层状液晶形成脂质与胶粘剂的量并不限定于以下，但相对于胶粘层的总重量，可以分别为13w/w％～15w/w％、75w/w％～85w/w％。

贴剂例如橡胶贴膏的胶粘层含有非层状液晶形成脂质和药物的同时，优选含有水性介质(例如，水)。通过含有水性介质，非层状液晶形成脂质在贴剂中形成液晶，药物被包封于液晶中。关于水性介质，如上所述。或者，贴剂本身可以不含有水性介质，这种情况下，在贴剂应用于生物体表面时由于周围存在水而在生物体表面上非层状液晶形成脂质形成液晶，药物也可以被包封于该液晶中。在一实施方式中，水性介质作为含有药物或其他成分的液体，可以混配在胶粘层组合物中。胶粘层中的水性介质的量并不限定于以下，但相对于胶粘层的总重量，通常为0.1w/w％以上，优选为0.5w/w％以上，更优选为1w/w％以上，例如为5w/w％以上、3w/w％～30w/w％、5w/w％～10w/w％、10w/w％～30w/w％、10w/w％～25w/w％或13w/w％～15w/w％。在一实施方式中，胶粘层中的非层状液晶形成脂质与水性介质的重量比可以优选为1:5～5:1，例如可以为1:1～10:1、1:1～5:1、1:1～3:1、1.5:1～10:1、2:1～5:1，在优选示例中为2:1～3:1。胶粘层中的非层状液晶形成脂质与胶粘剂的重量比例如可以为1:2～1:20，优选为1:2～1:15、1:3～1:10、1:3～1:8或1:5～1:7。

胶粘层还可以含有其他成分。关于其他成分，如以上关于本发明的外用剂所述。

贴剂例如橡胶贴膏的制造使用本领域技术人员所公知的技术即可。在一实施方式中，通过将非层状液晶形成脂质、药物和水性介质，以及根据情况其他成分均匀地混合来制备液晶凝胶，然后混合胶粘剂来制备胶粘层组合物，将该胶粘层组合物在背衬上延展，使胶粘层干燥，将胶粘层压接并固定在支撑体，并根据需要切割出一定尺寸，由此可以制造贴剂例如橡胶贴膏。或者，也可以如上所述地制备液晶凝胶，然后混合胶粘剂来制备胶粘层组合物，将该胶粘层组合物涂布在支撑体上，使胶粘层干燥，然后将背衬贴合到胶粘层，并根据需要切割出一定尺寸，由此来制造贴剂例如橡胶贴膏。贴剂例如橡胶贴膏可以以适于贴附于患部的尺寸和/或形状来制作，也可以以预定尺寸和/或形状来制作，在在使用时切割成适当的尺寸和/或形状来使用。

在这样的贴剂例如橡胶贴膏中，药物被引入到由非层状液晶形成脂质形成的液晶中，如果贴剂应用于皮肤和粘膜等生物体表面，则会起到增加皮肤和粘膜中的药物透过性的作用。

通过将本发明的贴剂例如橡胶贴膏应用于对象(例如，哺乳动物)的生物体表面，优选应用于皮肤或粘膜(贴附)，可以将贴剂中所含的药物经皮或经粘膜给予到对象。关于对象，如上所述。本发明还提供这样的药物的给药方法或递送方法。

5.气溶胶剂

本发明的外用剂可以制剂化为气溶胶剂的剂型。本发明还提供含有本发明外用剂的气溶胶剂。本发明中气溶胶剂是指通过在同一容器内与药物一起填充的喷射剂的压力使药物喷出的剂型的药物制剂。制剂化为气溶胶剂的剂型的本发明的外用剂由含有非层状液晶形成脂质和药物的组合物与喷射剂组成。作为喷射剂的示例，可举出：液化气和/或压缩气体。作为液化气，例如可举出：液化石油气(LPG)、二甲醚(DME)等。作为压缩气体，可举出：二氧化碳、氮气、空气等。在本发明的气溶胶剂中，作为喷射剂更优选为液化气，进一步优选为LPG。

本发明的气溶胶剂优选在容器中填充有含有非层状液晶形成脂质和药物的组合物与喷射剂。含有非层状液晶形成脂质和药物的组合物优选为液体，优选为水性。换句话说，制剂化为气溶胶剂的剂型的本发明的外用剂除了含有非层状液晶形成脂质、药物和喷射剂之外，还优选含有水性介质。通过含有水性介质，非层状液晶形成脂质形成液晶，药物被包封于该液晶内。或者，制剂化为气溶胶剂的剂型的本发明的外用剂可以含有水性介质，但这种情况下，外用剂中的非层状液晶形成脂质通过存在于应用部位的水性介质(例如，体内的水分或添加的水等外来水分)形成非层状液晶，药物被包封于该液晶内。如果本发明的气溶胶剂应用于生物体表面，则气溶胶剂中的挥发成分(乙醇那样的溶剂、喷射剂等)挥发，能够在在生物体表面上形成非层状液晶。在本发明的气溶胶剂中，含有非层状液晶形成脂质和药物的组合物与喷射剂可以在容器内混合，也可以分离成多个相。关于非层状液晶形成脂质、药物、水性介质，如上所述。

在一实施方式中，气溶胶剂中使用的非层状液晶形成脂质的量并不限定于以下，但相对于填充于容器中的气溶胶原料的总重量，一般为含有非层状液晶形成脂质和药物的组合物与喷射剂合计的总重量(外用剂的总重量；以下相同)，通常为0.1w/w％以上，优选为0.5w/w％以上，更优选为1w/w％以上，例如为1w/w％～40w/w％、3w/w％以上、3w/w％～40w/w％、3w/w％～20w/w％、3w/w％～15w/w％、3w/w％～10w/w％、10w/w％～30w/w％或5w/w％～9w/w％。

在一实施方式中，气溶胶剂中使用的药物的量并不限定于以下，但相对于在容器中填充的气溶胶原料的总重量，一般为含有非层状液晶形成脂质和药物的组合物与喷射剂合计的总重量，通常为0.0001w/w％以上，优选为0.0005w/w％～5w/w％，例如为0.0005w/w％～1w/w％、0.001w/w％～5w/w％、0.001w/w％～10w/w％、0.001w/w％～1w/w％、0.001w/w％～0.1w/w％、0.001w/w％～0.05w/w％、0.001w/w％～0.01w/w％、0.01w/w％～0.1w/w％、0.1w/w％～3w/w％或0.1w/w％～1w/w％。

在一实施方式中，气溶胶剂中使用的喷射剂的量并不限定于以下，但相对于在容器中填充的气溶胶原料的总重量，一般为含有非层状液晶形成脂质和药物的组合物与喷射剂合计的总重量，通常为40w/w％以上，优选为50w/w％以上，例如为50w/w％～90w/w％、50w/w％～85w/w％、50w/w％～80w/w％、60w/w％～85w/w％、60w/w％～80w/w％、60w/w％～70w/w％或65w/w％～75w/w％。

在一实施方式中，气溶胶剂中使用的水性介质的量并不限定于以下，但相对于填充于容器中的气溶胶原料的总重量，一般为含有非层状液晶形成脂质和药物的组合物与喷射剂的重量合计，通常为0.1w/w％以上，优选为0.5w/w％以上，更优选为1w/w％以上，例如为3w/w％以上、5w/w％以上、0.1w/w％～30w/w％、1w/w％～30w/w％、3w/w％～30w/w％、3w/w％～20w/w％、3w/w％～15w/w％、1w/w％～10w/w％、3w/w％～10w/w％、5w/w％～10w/w％或5w/w％～9w/w％。

在一实施方式中，非层状液晶形成脂质与水性介质的重量比可以优选为1:5～5:1、1:2～2:1、1:1.5～1.5:1，例如可以为1:1.3～1.3:1、1:1.1～1.1:1，在优选的一例中为1:1。或者，非层状液晶形成脂质与水性介质的重量比可以为1:1～10:1或1.5:1～5:1，例如为1:1、1.5:1、2:1、3:1、4:1或5:1。

制剂化为气溶胶剂的剂型的本发明的外用剂还可以含有或不含表面活性剂。在一实施方式中，含有非层状液晶形成脂质和药物的组合物含有表面活性剂。关于表面活性剂，如上所述。作为气溶胶剂中使用的表面活性剂的优选示例，可举出聚氧乙烯(196)聚氧丙烯(67)二醇(别名：Pluronic^(R)F127，但并不限定于此。在一实施方式中，气溶胶剂中使用的表面活性剂的量并不限定于以下，但相对于填充于容器中的气溶胶原料的总重量，一般为含有非层状液晶形成脂质和药物的组合物与喷射剂的重量合计，通常为0.01w/w％以上，优选为0.05w/w％以上，更优选为0.1w/w％以上，例如为0.05w/w％～15w/w％、0.1w/w％～5w/w％、0.3w/w％以上、0.3w/w％～10w/w％、0.3w/w％～2w/w％、0.3w/w％～1.5w/w％、0.3w/w％～1w/w％或0.55w/w％～0.9w/w％。

在一实施方式中，气溶胶剂中的非层状液晶形成脂质与表面活性剂的重量比可以优选为3:1～20:1、或5:1～20:1，例如可以为3:1～11:1、7:1～17:1或8:1～15:1、8:1～13:1、9:1～11:1，在优选的一例中为10:1。

制剂化为气溶胶剂的剂型的本发明的外用剂还优选含有乙醇。含有非层状液晶形成脂质和药物的组合物含有乙醇。通过混配乙醇，药物皮肤透过性进一步增加。

在一实施方式中，气溶胶剂中使用的乙醇的量并不限定于以下，但相对于填充于容器中的气溶胶原料的总重量，一般为含有非层状液晶形成脂质和药物的组合物与喷射剂的重量合计，可以为1w/w％以上，优选为3w/w％以上，例如为5w/w％以上、7w/w％以上、1w/w％～30w/w％、1w/w％～20w/w％、5w/w％～60w/w％、5w/w％～30w/w％、5w/w％～25w/w％、7w/w％～20w/w％、10w/w％～20w/w％、13w/w％～50w/w％、13w/w％～20w/w％或15w/w％～18w/w％。

在一实施方式中，相对于含有非层状液晶形成脂质和药物的组合物的总重量(不含喷射剂)，乙醇的量并不限定于以下，但例如可以为20w/w％～60w/w％或30w/w％～50w/w％。

在一实施方式中，制剂化为气溶胶剂的剂型的本发明的外用剂可以含有药物、非层状液晶形成脂质(例如，通式(I)所表示的两亲化合物或甘油脂肪酸单酯，优选为单-O-(5,9,13-三甲基十四碳-4-烯酰基)甘油或单-O-(5,9,13,17-四甲基十八碳-4-烯酰基)甘油)、表面活性剂(优选为Pluronic^(R)F127)、乙醇和喷射剂(优选为LPG)。这种情况下，相对于填充于容器中的气溶胶原料的总重量，一般为含有非层状液晶形成脂质和药物的组合物与喷射剂的重量合计，乙醇的量可以如上所述，但优选为5w/w％～25w/w％、13w/w％～20w/w％或15w/w％～18w/w％。这种情况下，相对于填充于容器中的气溶胶原料的总重量，一般为含有非层状液晶形成脂质和药物的组合物与喷射剂的重量合计，喷射剂的量优选为50w/w％～85w/w％、60w/w％～80w/w％或60w/w％～70w/w％。在一实施方式中，相对于填充于容器中的气溶胶原料的总重量，一般为含有非层状液晶形成脂质和药物的组合物与喷射剂的重量合计，乙醇的量可以为5w/w％～25w/w％，喷射剂的量可以为60w/w％～80w/w％。在一实施方式中，相对于填充于容器中的气溶胶原料的总重量，一般为含有非层状液晶形成脂质和药物的组合物与喷射剂的重量合计，乙醇的量可以为15w/w％～18w/w％，喷射剂的量可以为60w/w％～70w/w％。

制剂化为气溶胶剂的剂型的本发明的外用剂还可以含有其他成分。这样的其他成分基本上包含在含有非层状液晶形成脂质和药物的组合物中。关于其他成分，如以上关于本发明的外用剂所述。

气溶胶剂的制造使用本领域技术人员所公知的技术即可。在一实施方式中，通过将非层状液晶形成脂质、药物、水性介质，以及根据情况表面活性剂和其他成分均匀地混合，进一步根据需要添加乙醇并混合来制备组合物，作为气溶胶原液放入容器，接着通过使用充气阀等向该容器内填充喷射剂，从而可以制造气溶胶剂。在另一实施方式中，也可以通过将非层状液晶形成脂质、药物，以及根据情况表面活性剂和其他成分均匀地混合，进一步根据需要添加乙醇混合来制备组合物，作为气溶胶原液。

通过使用这样的气溶胶剂的喷雾，稳定地形成并附着于生物体表面的应用部位的包封药物的液晶具有优异的药物透过性。

通过将本发明的气溶胶剂应用于对象(例如，哺乳动物)的生物体表面，优选应用于皮肤或粘膜(喷雾)，可以将气溶胶剂中所含的药物经皮或经粘膜给予到对象。关于对象，如上所述。本发明还提供这样的药物的给药方法或递送方法。

6.液晶前体制剂

本发明的外用剂的非层状液晶形成脂质可以在该外用剂中不形成液晶(非层状液晶)。本发明的外用剂在不含水性介质或者在非层状液晶形成脂质不含足以形成液晶的量的水性介质时，非层状液晶形成脂质在该外用剂中不形成液晶。但是，如果将这样的外用剂在水的存在下应用于生物体表面，则非层状液晶形成脂质在生物体表面上形成液晶，稳定地附着于生物体表面。本发明还提供非层状液晶形成脂质不形成液晶的本发明的外用剂，即液晶前体制剂。

作为液晶前体制剂的本申请发明的外用剂优选为含有非层状液晶形成脂质和药物而不含水性介质或不含足够量水性介质的组合物。关于非层状液晶形成脂质、药物和水性介质，如上所述。

在一实施方式中，液晶前体制剂中使用的非层状液晶形成脂质的量并不限定于以下，但相对于液晶前体制剂(外用剂)的总重量，可以为10w/w％以上，优选为30w/w％以上或者50w/w％以上，更优选为60w/w％以上，例如为70w/w％以上、50w/w％～99.8w/w％以上、60w/w％～99.8w/w％以上、65w/w％～99.8w/w％、65w/w％～99.5w/w％、68w/w％～99w/w％、70w/w％～99.5w/w％或50w/w％～90w/w％或者70w/w％～90w/w％。

在一实施方式中，液晶前体制剂中使用的药物的量并不限定于以下，但相对于液晶前体制剂(外用剂)的总重量，通常为0.0001w/w％以上，优选为0.0001w/w％～10w/w％，例如为0.0005w/w％～5w/w％、0.0005w/w％～1w/w％、0.001w/w％～5w/w％、0.001w/w％～1w/w％或0.001w/w％～0.1w/w％。

作为液晶前体制剂的本发明的外用剂优选还含有水溶性高分子。关于水溶性高分子，如上所述。作为水溶性高分子的优选示例，可举出：羟丙基纤维素(HPC)，例如HPC-SSL、HPC-SL、HPC-L、HPC-M和HPC-H，但并不限于这些。

在一实施方式中，液晶前体制剂中的水溶性高分子的量并不限定于以下，但相对于液晶前体制剂(外用剂)的总重量，例如为0.01w/w％以上，优选为0.1w/w％以上，例如为0.1w/w％～10w/w％、1w/w％～5w/w％或0.5w/w％～2w/w％。

作为液晶前体制剂的本发明的外用剂还可以含有或不含乙醇。在一实施方式中，液晶前体制剂中的乙醇的量并不限定于以下，但相对于液晶前体制剂(外用剂)的总重量，可以为1w/w％以上，优选为4w/w％以上，例如为5w/w％～40w/w％、5w/w％～30w/w％、10w/w％～30w/w％。

作为液晶前体制剂的本发明的外用剂还可以含有或不含油性成分。关于油性成分，如上所述。作为油性成分的优选示例，可举出：角鲨烯、角鲨烷、肉豆蔻酸异丙酯、生育酚等，但并不限于这些。在一实施方式中，液晶前体制剂中的油性成分的量并不限定于以下，但相对于液晶前体制剂(外用剂)的总重量，例如为0.01w/w％以上，例如为0.01w/w％～60w/w％、0.1w/w％～40w/w％、1w/w％～30w/w％、1w/w％～10w/w％或1w/w％～8w/w％。

在一实施方式中，作为液晶前体制剂的本发明的外用剂可以含有药物、非层状液晶形成脂质(例如，通式(I)所表示的两亲化合物或甘油脂肪酸单酯、优选为单-O-(5,9,13-三甲基十四碳-4-烯酰基)甘油或单-O-(5,9,13,17-四甲基十八碳-4-烯酰基)甘油)、水溶性高分子(优选为羟丙基纤维素)和乙醇。

作为液晶前体制剂的本发明的外用剂还可以含有其他成分。关于其他成分，如以上关于本发明的外用剂所述。

液晶前体制剂的制造使用本领域技术人员所公知的技术即可。液晶前体制剂可以通过充分混合上述原料来制造。在一实施方式中，可以通过在非层状液晶形成脂质中将水溶性高分子、乙醇，以及根据情况油性成分等充分混合，向其中添加药物并充分混合来制造液晶前体制剂。或者，也可以通过将药物、乙醇，以及根据情况水溶性高分子和油性成分等充分混合，向其中添加非层状液晶形成脂质并混合来制造液晶前体制剂。此外，还可以只通过将非层状液晶形成脂质、药剂、水溶性高分子、油性成分等充分混合来制造液晶前体制剂。

这样的液晶前体制剂在应用于生物体表面时，在水的存在下，形成包封药物的液晶，稳定地附着于应用部位，具有优异的药物透过性。

本发明的液晶前体制剂也可以应用于皮肤，但更优选应用于粘膜。通过将本发明的液晶前体制剂应用于粘膜，使非层状液晶形成脂质与来自生物体的水接触，在粘膜表面发生由非层状液晶形成脂质形成的液晶(非层状液晶)的自形成。由此，包封药物的液晶稳定地附着于粘膜，具有优异的药物粘膜透过性。因此，本发明不仅提供应用于皮肤的制剂，还提供应用于粘膜的制剂。作为液晶前体制剂的本发明的外用剂特别优选应用于粘膜。

通过将本发明的液晶前体制剂应用于对象(例如，哺乳动物)的生物体表面，优选应用于粘膜或皮肤(例如，喷雾、涂布、滴加等)，可以将液晶前体制剂中所含的药物经粘膜的或经皮给予到对象。在将本发明的液晶前体制剂应用于皮肤时，优选应用于预先用水性介质润湿的皮肤或制剂应用皮肤后向制剂添加水性介质。关于对象和水性介质，如上所述。本发明还提供这样的药物的给药方法或递送方法。

7.含有微粒子的外用剂

本发明还提供含有微粒子的外用剂，所述微粒子含有上述非层状液晶形成脂质和上述药物。本发明的外用剂可以是分散液(乳剂)等分散体。本发明的外用剂还可以含有微粒子的分散体，例如分散液(微粒子分散液)，所述微粒子含有非层状液晶形成脂质和药物。分散体例如分散液优选在分散介质例如水等水性介质中含有上述非层状液晶形成脂质和上述药物，还优选含有表面活性剂等分散剂。分散体例如分散液根据情况还可以含有乙醇等溶剂和/或油性成分。

本发明中“微粒子”是指具有平均粒径小于1mm的粒子。本发明的“微粒子”可以是微粒子或纳米粒子。本发明中“微粒子”是指具有平均粒径1μm以上且小于1mm的粒子。本发明中“纳米粒子”是指具有平均粒径1nm以上且小于1μm的粒子。本发明中“分散体”是指在任意的分散介质中以分散状态含有微粒子。本发明中“微粒子分散液”是指以分散状态含有微粒子的液体介质(例如，水、或生理盐水等生理学上可接受的水溶液那样的水性介质)。“微粒子分散液”和“纳米粒子分散液”是指分别以分散状态含有微粒子或纳米粒子的液体介质(例如，水、或生理盐水等生理学上可接受的水溶液那样的水性介质)。本发明的微粒子例如微粒子或纳米粒子以非层状液晶形成脂质作为主要成分而构成，可以在其内部含有药物。微粒子例如微粒子或纳米粒子可以通过使液晶相分散来制备。在一实施方式中，微粒子例如微粒子或纳米粒子可以制备为如下得到的分散液(乳剂)，所述分散液(乳剂)是通过高压分散、超声波处理等使含有非层状液晶形成脂质、药物、水性介质、表面活性剂等分散剂和根据需要其他成分的悬浮液分散而得到的。

在微粒子制备中使用的非层状液晶形成脂质可以是上述任意的非层状液晶形成脂质。在一实施方式中，非层状液晶形成脂质可以是通式(I)所表示的两亲化合物，例如可以是单-O-(5,9,13-三甲基十四碳-4-烯酰基)甘油。在另一实施方式中，非层状液晶形成脂质可以是甘油脂肪酸单酯，例如甘油单油酸酯。

微粒子可以含有上述任意的药物，但在一实施方式中，可以说脂溶性(亲油性)药物。

本发明的“微粒子”并不限定于以下，但优选具有1nm以上小于1mm的平均粒径，例如可以为1nm～500μm、10nm～500μm、50nm～500μm、10nm～1μm或50nm～50μm的平均粒径。本发明的纳米粒子并不限定于以下，但优选具有1nm～500nm的平均粒径，例如可以为50nm～500nm、100nm～400nm或100nm～300nm的平均粒径。

上述的微粒子分散体例如纳米粒子分散液等微粒子分散液除了含有非层状液晶形成脂质和药物之外，还可以含有上述任意其他成分。在一实施方式中，微粒子分散体例如纳米粒子分散液等微粒子分散液也优选含有上述任意的表面活性剂，例如，聚氧乙烯(196)聚氧丙烯(67)二醇(别名：Pluronic^(R)F127)等环氧乙烷与环氧丙烷形成的嵌段共聚物。在一实施方式中，微粒子分散体例如纳米粒子分散液等微粒子分散液可以含有乙醇等溶剂。在一实施方式中，微粒子分散体例如纳米粒子分散液等微粒子分散液可以含有表面活性剂和乙醇。在一实施方式中，微粒子分散体例如纳米粒子分散液等微粒子分散液可以含有上述的油性成分、上述的水溶性有机化合物和/或药学上可接受的其他添加剂。

在一实施方式中，微粒子分散体例如纳米粒子分散液等微粒子分散液中的非层状液晶形成脂质与分散剂的重量比并不限定于以下，但优选为非层状液晶形成脂质:分散剂＝1:1～100:1，例如可以为3:1～50:1、3:1～10:1、5:1～40:1、10:1～30:1、10:1～25:1或15:1～25:1。

在一实施方式中，在微粒子分散体例如纳米粒子分散液等微粒子分散液中使用乙醇等溶剂时，相对于非层状液晶形成脂质，乙醇等溶剂的重量比并不限定于以下，但优选为非层状液晶形成脂质:溶剂(例如，乙醇)＝1:10～10:1，例如可以为1:1～10:1、1.5:1～5:1、2:1～10:1或5:1～10:1。

在一实施方式中，非层状液晶形成脂质、药物、分散剂(表面活性剂等)和溶剂(乙醇等)的量相对于微粒子分散体例如纳米粒子分散液等微粒子分散液的总重量，例如可以分别为1w/w％～40w/w％、0.001w/w％～10w/w％、0.05w/w％～15w/w％和1w/w％～30w/w％。在另一实施方式中，非层状液晶形成脂质、药物、分散剂(表面活性剂等)和溶剂(乙醇等)的量相对于微粒子分散体例如纳米粒子分散液等微粒子分散液的总重量，例如可以分别为10w/w％～30w/w％、0.1w/w％～3w/w％、0.3w/w％～10w/w％和1w/w％～20w/w％。

在一实施方式中，非层状液晶形成脂质、药物和分散剂(表面活性剂等)的量相对于微粒子分散体例如纳米粒子分散液等微粒子分散液的总重量，例如可以分别为1w/w％～40w/w％、0.001w/w％～10w/w％和0.05w/w％～15w/w％。在另一实施方式中，非层状液晶形成脂质、药物和分散剂(表面活性剂等)的量相对于微粒子分散体例如纳米粒子分散液等微粒子分散液的总重量，例如可以分别为10w/w％～30w/w％、0.1w/w％～3w/w％和0.3w/w％～10w/w％。

含有上述的微粒子或微粒子分散体的本发明的外用剂可以是上述任意的剂型。在一实施方式中，含有微粒子或微粒子分散体的本发明的外用剂可以应用于对象(例如，哺乳动物)的生物体表面，优选应用于皮肤或粘膜。在一实施方式中，含有微粒子或微粒子分散体的本发明的外用剂可以用于应用于粘膜(粘膜表面)，例如可以是经鼻剂。在另一实施方式中，含有微粒子分散体或微粒子分散体的本发明的外用剂，可以是气溶胶剂等喷剂。

8.脑内递送

本发明的外用剂特别能够有利地用于向脑内递送药物。在一实施方式中，用于脑内药物递送的本发明的外用剂，可以是含有上述的微粒子或微粒子分散体的外用剂。在一实施方式中，用于应用于粘膜(粘膜表面)的本发明的外用剂，例如作为经鼻剂的本发明的外用剂，特别适合用于向脑内递送药物。这样的本发明的外用剂可以是含有上述的微粒子或微粒子分散体的本发明的外用剂，还可以是上述的贴剂、气溶胶剂、或液晶前体制剂。本发明的外用剂通过经皮给药或经粘膜给药，例如鼻腔内给药，可以有效地将药物递送至脑内。本发明的外用剂可以极大地提高向脑内(特别是包括嗅球、皮质、脑干、小脑、中脑和/或海马)的药物递送效率。

因此，本发明还提供向脑内递送药物的方法，所述方法包括将本发明的外用剂向人等上述任意的对象经皮给药或经粘膜给药，例如鼻腔内给药。经皮给药并不限定于以下，但也可以使用贴剂、喷剂(气溶胶剂等)、软膏剂或霜剂等来进行。经粘膜给药也可以使用贴剂、喷剂(气溶胶剂等)、经鼻剂、口腔剂、栓剂或阴道剂等来进行。

用于向脑内递送药物的本发明的外用剂的给药量可以由本领域技术人员根据药物来适当地设定。例如，本发明的外用剂的每次给药量以每公斤对象的体重计为1ng～10g，例如可以为10ng～100mg。例如，含有微粒子分散体的本发明的外用剂的每次给药量以每公斤对象的体重计，以微粒子分散体的量计优选为1μL～500μL，例如可以为10μL～100μL。

用于脑内的药物递送外用剂中所含的药物可以是期望向脑内递送的任意的药物，可以是有机化合物，也可以是无机化合物，还可以是蛋白质、肽、氨基酸、核酸等。药物可以选自上述的药物。作为药物，例如可举出对于阿尔茨海默病、帕金森病、脑血管障碍、脑肿瘤等的脑中枢神经系统疾病治疗药、抗精神病药、麻醉药等，但并不限于这些。

实施例

下面，利用实施例对本发明作进一步具体地说明。但本发明的技术范围并不限定于这些实施例。

[实施例1]单-O-(5,9,13-三甲基十四碳-4-烯酰基)甘油的合成

[化6]

在80℃向甘油0.65g(7.1mmol)和碳酸钾0.59g(4.3mmol)的无水N,N-二甲基甲酰胺(3.5mL)溶液中缓慢滴加5,9,13-三甲基十四碳-4-烯酸甲酯(四氢法尼基乙酸甲酯)1.0g(3.5mmol)。在100℃搅拌18小时，然后在反应液中添加1M盐酸，用醚萃取。依次用饱和碳酸氢钠水溶液、饱和盐水洗涤萃取液，用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。利用硅胶柱色谱法(乙酸乙酯/己烷混液)纯化所得到的残余物，从而得到标题化合物，为无色透明液体。

对于所得到的化合物，进行¹H-NMR测定和粘度测定，结果如下所示。

¹H-NMR谱图(300MHz，CDCl₃，TMS)δ：0.80-0.90(m，9H)，1.00-1.70(m，15H)，1.97(td，J＝7.8，17.0Hz，2H)，2.13(t，J＝6.1Hz，1H，OH)，2.25-2.45(m，4H)，2.55(d，J＝5.2Hz，1H，OH)，3.50-4.00(m，3H)，4.10-4.25(m，2H)，5.08(t，J＝6.7Hz，1H)粘度：0.48Pa·s(剪切速率92 1/s)

所合成的单-O-(5,9,13-三甲基十四碳-4-烯酰基)甘油也称为C17MGE、或C17甘油酯。

[实施例2]单-O-(5,9,13-三甲基十四碳酰基)甘油的合成

[化7]

向5,9,13-三甲基十四碳酸甲酯50.3g(177mmol)中添加2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-甲醇70g(0.53mol)和碳酸钾36.7g(266mmol)，在200mmHg～250mmHg的减压下，在85℃搅拌3小时。在此期间，蒸馏除去反应中生成的甲醇。减压浓缩(50℃→210℃、1.4kPa→0.38kPa)所得到的反应溶液，然后利用硅胶柱色谱法(己烷/乙酸乙酯)进行纯化，从而得到5,9,13-三甲基十四碳酸(2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-基)甲酯43.0g(产率63％)。

在室温向5,9,13-三甲基十四碳酸(2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-基)甲酯32.7g(85.0mmol)的四氢呋喃(340mL)溶液添加3M盐酸85mL，在同一温度搅拌5小时。将该反应溶液加入到乙酸乙酯(300mL)、饱和碳酸氢钠水溶液(400mL)中进行分液。用饱和盐水洗涤得到的有机层，然后用硫酸镁干燥。通过过滤后浓缩得到残余物，利用硅胶柱色谱法(己烷/乙酸乙酯)纯化该残余物，从而得到标题化合物28.7g(产率98％)，为无色透明液体。对于得到的化合物，测定¹H-NMR的结果如下所示。

¹H-NMR谱图(270MHz，CDCl₃，TMS)δ：0.7-0.9(m，12H)，0.95-1.45(m，16H)，1.45-1.75(m，3H)，2.34(t，J＝7.4Hz，2H)，3.60(dd，J＝5.8，11.5Hz，1H)，3.70(dd，J＝4.0，11.5Hz，1H)，3.94(m，1H)，4.15(dd，J＝5.9，11.7Hz，1H)，4.21(dd，J＝4.7，11.7Hz，1H)

所合成的单-O-(5,9,13-三甲基十四碳酰基)甘油也称为饱和C17甘油酯。

[实施例3]单-O-(5,9,13-三甲基十四碳-4,8.12-三烯酰基)甘油的合成

[化8]

在200mmHg～250mmHg的减压下，在85℃向甘油9.2g(0.10mol)和碳酸钾0.28g(2.0mmol)的无水N,N-二甲基甲酰胺(20mL)溶液缓慢滴加5,9,13-三甲基十四碳-4,8.12-三烯酸甲酯(法尼基乙酸甲酯)13.9g(50.0mmol)，在同一温度搅拌3小时。在此期间，蒸馏除去反应中生成的甲醇。用乙酸乙酯/己烷混合溶剂(1:1，150mL)稀释得到的反应溶液，再用水、饱和碳酸氢钠水溶液、饱和盐水(2次)洗涤，然后用硫酸镁干燥。通过过滤后浓缩得到残余物，利用硅胶柱色谱法(己烷/乙酸乙酯＝100:0～0:100)纯化该残余物，从而得到标题化合物8.22g(产率49％)，为无色透明液体。对于所得到的化合物，进行¹H-NMR测定和粘度测定，结果如下所示。

¹H-NMR谱图(270MHz，CDCl₃，TMS)δ：1.5-1.8(m，12H)，1.9-2.1(m，8H)，2.1(brs，1H，OH)，2.25-2.45(m，4H)，2.56(brs，1H，OH)，3.59(dd，J＝5.6，11.2Hz，1H)，3.68(dd，J＝3.6，11.2Hz，1H)，3.92(m，1H)，4.14(dd，J＝6.0，11.6Hz，1H)，4.21(dd，J＝4.8，11.6Hz，1H)，5.02-5.16(m，3H)

粘度：0.26Pa·s(剪切速率92 1/s)

所合成的单-O-(5,9,13-三甲基十四碳-4,8.12-三烯酰基)甘油也称为法尼基乙酸甘油酯。

[实施例4]单-O-(5,9,13,17-四甲基十八碳-4-烯酰基)甘油的合成

[化9]

在60mmHg～70mmHg的减压且氮气流下，在80℃向甘油23.5g(255mmol)和碳酸钾0.55g(4.0mmol)的无水N,N-二甲基甲酰胺(48mL)溶液缓慢滴加5,9,13,17-四甲基十八碳-4-烯酸甲酯28.2g(80.0mmol)，在同一温度搅拌3小时。用乙酸乙酯/己烷混合溶剂(1:1，200mL)稀释得到的反应溶液，再用水、饱和碳酸氢钠水溶液、饱和盐水(2次)洗涤，然后用硫酸镁干燥。通过过滤后浓缩得到残余物，利用硅胶柱色谱法(己烷/乙酸乙酯＝100:0～30:70)纯化该残余物，从而得到标题化合物13.3g(产率40％)，为微黄色透明液体。对于所得到的化合物，进行¹H-NMR测定，结果如下所示。

¹H-NMR谱图(300MHz，CDCl₃，TMS)δ：0.80-0.95(m，12H)，1.00-1.70(m，22H)，1.85-2.15(m，2H)，2.15-2.55(m，4H)，3.53-3.78(m，3H)，3.80-4.00(m，1H)，4.10-4.25(m，2H)，5.08(dd，J＝6.9Hz，J＝6.9Hz，1H)

所合成的单-O-(5,9,13,17-四甲基十八碳-4-烯酰基)甘油也称为C22MGE或C22甘油酯。

[实施例5]单-O-(5,9,13,17-四甲基十八碳酰基)甘油的合成

[化10]

在氮气气氛下，向单-O-(5,9,13,17-四甲基十八碳-4-烯酰基)甘油20.6g(50.0mmol)的乙酸乙酯(62mL)溶液添加5％钯碳2.5g。用氢气置换反应体系内的氮气，然后在常压氢气气氛下，在室温搅拌42小时。用氮气置换反应体系内的氢气，然后过滤出5％钯碳。利用硅胶柱色谱法(乙酸乙酯)纯化滤液，从而得到标题化合物20.2g(产率98％)，为无色透明液体。对于所得到的化合物，进行¹H-NMR测定，结果如下所示。

¹H-NMR谱图(300MHz，CDCl₃，TMS)δ：0.7-0.9(m，15H)，0.95-1.75(m，26H)，2.13(t，J＝6.0Hz，OH)，2.34(t，J＝7.7Hz，2H)，2.56(d，J＝5.1Hz，OH)，3.55-3.75(m，2H)，3.94(m，1H)，4.15(dd，J＝6.0，11.7Hz，1H)，4.20(dd，J＝4.7，11.7Hz，1H)

所合成的单-O-(5,9,13,17-四甲基十八碳酰基)甘油也称为饱和C22甘油酯。

[实施例6]单-O-(5,9,13,17-四甲基十八碳-4,8,12,16-四烯酰基)甘油的合成

(1)5,9,13,17-四甲基十八碳-4,8,12,16-四烯酸甲酯(香叶基香叶基乙酸甲酯)的合成

在氮气气氛下，在135℃向3,7,11,15-四甲基十六碳-1,6,10,14-四烯-3-醇(香叶基芳樟醇)58.1g(200mmol)、原乙酸三甲酯19mL(0.15mol)的溶液用8小时滴加原乙酸三甲酯53mL(0.42mol)和正己酸5.0mL(40mmol)的溶液。在同一温度搅拌6小时，然后，进一步滴加原乙酸三甲酯5.3mL(42mmol)和正己酸0.5mL(4mmol)的溶液，进一步在同一温度搅拌2小时。用乙酸乙酯/己烷混合溶剂(3:1，300mL)稀释得到的反应溶液，再用饱和碳酸氢钠水溶液(2次)、饱和盐水洗涤，然后用硫酸镁干燥。通过过滤后浓缩，得到5,9,13,17-四甲基十八碳-4,8,12,16-四烯酸甲酯(香叶基香叶基乙酸甲酯)67.24g，为粗产物的液体。将该粗产物直接用于下一步反应中。

(2)单-O-(5,9,13,17-四甲基十八碳-4,8,12,16-四烯酰基)甘油的合成

[化11]

在200mmHg～250mmHg的减压下，在85℃向甘油7.4g(80mmol)和碳酸钾5.5g(40mmol)的无水N,N-二甲基甲酰胺(16mL)溶液缓慢滴加5,9,13,17-四甲基十八碳-4,8,12,16-四烯酸甲酯(香叶基香叶基乙酸甲酯)13.9g(40.0mmol)，在同一温度搅拌6小时。在此期间，蒸馏除去反应中生成的甲醇。用乙酸乙酯/己烷混合溶剂(1:1，200mL)稀释得到的反应溶液，再用水、饱和碳酸氢钠水溶液、饱和盐水(2次)洗涤，然后用硫酸镁干燥。通过过滤后浓缩得到残余物，利用硅胶柱色谱法(己烷/乙酸乙酯＝100:0～0:100)纯化该残余物，从而得到标题化合物5.44g(产率33％)，为透明液体。对于所得到的化合物，进行¹H-NMR测定和粘度测定，结果如下所示。

¹H-NMR谱图(270MHz，CDCl₃，TMS)δ：1.55-1.72(m，15H)，1.9-2.2(m，13H)，2.27-2.45(m，4H)，2.53(brs，1H，OH)，3.59(dd，J＝5.4，11.4Hz，1H)，3.68(dd，J＝3，11.4Hz，1H)，3.92(m，1H)，4.15(dd，J＝6.0，11.6Hz，1H)，4.21(dd，J＝4.8，11.6Hz，1H)，5.05-5.15(m，4H)

粘度：0.37Pa·s(剪切速率92 1/s)

所合成的单-O-(5,9,13,17-四甲基十八碳-4,8,12,16-四烯酰基)甘油也称为香叶基香叶基乙酸甘油酯。

[实施例7]液晶前体制剂的制备

1.试剂

罗丹明B(RB)和曲安奈德(tA)购自和光纯药工业株式会社(大阪，日本)，羟丙基纤维素(HPC)购自日本曹达株式会社(东京，日本)。表1中示出TA的结构式和物理化学的参数。作为疏水性指标的ClogP利用Chem Draw Ultra 10.0^(R)(PerkinElmer Informatics，Cambridge，MA，U.S.A.)进行计算。

[表1]

已知HPC的粘度随每个纤维素的被取代的羟基(羟基丙氧基)的平均个数(取代度)增加而相应地增加，取代度为0.2％～0.4％的HPC被称为低取代度，取代度为53.4％～77.5％的HPC被称为高取代度。使用低取代度的SSL、SL和L、高取代度的M和H这5种级别的HPC。这5种HPC的粘度(20℃，2％水溶液)中，SSL为2～2.9mPa·s，SL为3～5.9mPa·s，L为6～10mPa·s，M为150～400mPa·s，H为1000～4000mPa·s。

2.液晶前体制剂的制备(1)

含有RB或TA作为药物的制剂，按照如下进行制备。

首先，在加入乙醇的小药瓶中每次少量添加HPC。然后，将小药瓶放入设定为60℃的温水浴中，搅拌过夜，使小药瓶中的HPC完全溶解，得到含HPC的乙醇溶液。

将C17MGE与上述中得到的含HPC的乙醇溶液以7:3的重量比进行混合，用1小时充分搅拌。此外，将C17MGE和乙醇加入小药瓶中并混合，充分搅拌，也制备不含HPC的溶液。

在如上所述地制备的溶液中，以终浓度为0.001％地加入RB，由此制备含RB的1号～6号制剂，以终浓度为0.1％地加入TA，由此制备含TA的7号～12号制剂。予以说明，这些制剂也可以将药物加入预先含HPC的乙醇溶液或乙醇中，再与C17MGE混合来制备。

另外，在不存在乙醇的条件下，通过在C17MGE中加入药物和HPC并搅拌，制备不含乙醇但含有C17MGE的13号～18号制剂。

如上所述地制备的1号～18号制剂是不含水的液晶前体制剂。

而且，作为对比对照，代替C17MGE，使用水与乙醇、药物、HPC一起混合并搅拌，从而制备不含C17MGE的19号～23号制剂。此外，制备24号TA的水溶液。

将制备的1号～24号制剂的组成比(重量比)示于表2中。

[表2]

3.液晶前体制剂的制备(2)

使用甘油单油酸酯(GMO)来代替所述2.的C17MGE，依据表3的组成比(重量比)，并按照与所述2.相同的操作步骤，制备含有RB或TA的25号～36号制剂。此外，在不存在乙醇的条件下，通过在GMO中加入药物和HPC并加热搅拌，制备不含乙醇但含有GMO的37号、38号制剂。

[表3]

4.液晶前体制剂的制备(3)

使用油性成分(角鲨烯)+C17MGE、C22MGE，或者油性成分(IPM或生育酚)+C22MGE，依据表4的组成比(重量比)，并按照与所述2.相同的操作步骤，制备含RB或TA的39号～49号和79号～81号制剂。

[表4]

[实施例8]制剂的特性试验

1.喷出喷雾试验

将实施例7中制备的1号～5号、13号、19号～23号和46号制剂加入5mL喷药瓶(2号，株式会社Maruemu，日本)中，向用水润湿的Kimwipe擦拭纸，从距离3cm处垂直向下喷雾1次。使用的喷药瓶在纯化水时，能够手动式按一次喷射约60μL。测定制剂喷雾在Kimwipe擦拭纸上的面积(喷雾面积)的直径。如果可以喷出喷雾，喷雾面积的直径为1cm以上，则判定为雾状喷雾，如果小于1cm，则判定为棒状喷雾。如果从喷药瓶的喷射口不能喷雾时，则判定为不能喷雾。

结果是在使用上述喷药瓶时，任何制剂均可以喷出喷雾。1号、19号、20号制剂为雾状喷雾，2号～5号、13号、21号～23号、46号制剂为棒状喷雾。

2.液晶结构形成试验

与喷出喷雾试验相同地使用5mL喷药瓶，将实施例2中制备的1号～5号、19号、25号和26号制剂向在玻璃底培养皿(松浪硝子工业株式会社，日本)中滴加的150μL纯化水，从距离培养皿底面起15cm处垂直向下喷雾1次。为了判定有无液晶形成，使用数码显微镜VHX-5000(株式会社KEYENCE，日本)，在偏光显微镜模式下观察培养皿内与水接触的制剂。

图1中示出偏光显微镜的观察结果。在含有C17MGE或GMO的1号～5号、25号、26号制剂的全部中，能够确认到显示液晶结构的偏光图像(图1A～E、G、H)。而在含有HPC但不含C17MGE的19号制剂中，未能确认到显示液晶结构的偏光图像(图1F)。表示含有C17MGE的制剂在喷雾的水中形成液晶结构。此外，越是使用了取代度更低的HPC的制剂，越能确认到清晰的偏光图像。

而且，关于C17MGE和GMO，对比从喷雾后到液晶形成(形成偏光图像)的时间，结果发现在不含HPC的条件下，C17MGE 1号制剂在5秒以内，GMO25号制剂在10秒以内，此外在混配相同级别SSL的HPC的条件下，C17MGE 2号制剂在20秒以内，GMO26号制剂在90秒以内，含有C17MGE的制剂(1号、2号)的液晶形成明显更迅速。含有C17MGE和GMO任一的制剂在喷雾后也迅速地固定在粘膜表面，但含有C17MGE的制剂与含有GMO的制剂相比在喷雾后更快地更容易地固定在粘膜表面，认为还更容易获得促进有效成分释放及吸收的效果。

3.小角X射线散射衍射

在使用含有C17MGE或C22MGE的1号～3号、13号、45号～49号制剂和含有GMO的25号～27号、37号制剂进行上述的液晶结构形成试验时，向水中喷雾的制剂形成凝胶状物质。对于该凝胶状物质，使用小角X射线散射(SAXS)装置(株式会社理学制造，Nano-Viewer)进行小角X射线散射衍射测定，从而对非层状液晶结构进行判定。

在含有1号、13号、37号、45号～47号制剂的凝胶状物质的小角X射线散射衍射(图2A和D，以及图3A～D)中，观察到至少3个散射峰，峰的比值呈现出反相六角相液晶所特有的比值

由此，确认这些制剂形成反相六角相液晶。

另外，在含有2号、3号、25号～27号制剂的凝胶状物质的小角X射线散射衍射(图2B、C和E～G)中，观察到至少6个散射峰，峰的比值呈现出属于晶体学空间群Pn3m的立方液晶所特有的比值

和反相六角相液晶所特有的比值

由此，确认在使用这些制剂时，属于晶体学空间群Pn3m的立方液晶和反相六角相液晶混合而形成。

在含有48号、49号制剂的凝胶状物质的小角X射线散射衍射(图3E、F)中，观察到至少8个散射峰，峰的比值呈现出属于晶体学空间群Fd3m的反立方液晶所特有的比值

由此，确认这些制剂形成属于晶体学空间群Fd3m的反立方液晶。

[实施例9]粘膜上的制剂保持试验

向WBN/ILA-Ht系雄性无毛大鼠(体重200～250g，8周龄)腹腔内给予3种混合麻醉药(盐酸美托咪啶0.15mg/kg、咪达唑仑2mg/kg、酒石酸布托啡诺2.5mg/kg)，切出背部皮肤。利用胶带剥皮处理去除该大鼠背部切出皮肤(3cm×3cm)的角质层(角质层)，将得到的角质层剥离皮肤(表皮露出皮肤)用作粘膜模型。

向固定在用铝箔覆盖的板的粘膜模型，将实施例7中制备的1号～6号、13号～17号、19号～23号、25号～28号、30号、39号～41号、45号和46号制剂从距离3cm处垂直向下用喷药瓶喷雾1次。喷雾后，立即测定附着于粘膜模型上的制剂的面积(＝刚喷雾后面积)。喷雾15秒后，从水平倾斜45°角度的粘膜模型上使37℃的水以流速200mL/分连续流过1小时，然后测定附着于粘膜模型上的制剂的面积(＝流水试验后面积)。予以说明，刚喷雾后面积和流水试验后面积的测定中，使用具备手动XY测定系统VH-M100的体视显微镜模式的数码显微镜VHX-5000(株式会社KEYENCE，日本)。

流水试验后的制剂附着面积的减少率依据下式进行计算。

减少率(％)＝(流水试验后面积-刚喷雾后面积)/刚喷雾后面积×100

当该减少率(％)≦-50％时，则判断为制剂的试样从粘膜模型上剥离。

对于各制剂进行3次以上的流水试验，按照下述标准分成4组，由此判定各制剂的制剂保持性。

s：无剥离的试样；

a：剥离的试样数占全部试样数的40％以下；

b：剥离的试样数大于全部试样数的40％且少于70％；

c：剥离的试样数占全部试样数的70％以上。

为了进行对比，代替实施例7中制备的制剂，将市售的口腔粘膜附着制剂Aftach^(R)(帝人制药株式会社，日本)1片或口腔粘膜软膏制剂KENALOG^(R)(百时美施贵宝公司，美国)60mg分别附着或涂布于粘膜模型，进行相同的流水试验。结果示于表5中。

[表5]

如表5所示，使用C17MGE或C22MGE的制剂在1小时的流水试验后仍保持良好，显示出较高的粘膜附着性。特别是，含有HPC和C17MGE或C22MGE的制剂显示出非常高的粘膜附着性(保持性)，与市售的制剂相比具有较高的粘膜附着性。予以说明，含有未使用液晶形成脂质的HPC的乙醇溶液在流水试验中全部剥离。

[实施例10]皮肤上的制剂保持试验

使用2号制剂和46号制剂，代替粘膜模型(角质层剥离皮肤)，将胶带剥皮处理前的大鼠背部切出皮肤用作皮肤模型，除此以外与实施例9相同地进行流水试验。

结果是2号制剂和46号制剂虽然均在流水试验开始就从皮肤暂时剥离，但是剥落的凝胶重新附着于皮肤上并固定。认为通过制剂全部与水接触，促进在皮肤表面重新附着。该结果表明本发明的制剂在水分少的皮肤上(油性表面)形成液晶而表现出生物体附着性之前容易剥离，但在水分充足的皮肤上表现出较高的生物体附着性。

[实施例11]体外(Invitro)释放性试验

向如图4所示的垂直扩散单元(单元容积：6.0mL，有效扩散面积：1.77cm²；小林硝子株式会社)的接收单元加入20％乙醇水溶液6.0mL，设置透析膜(纤维素管24/32，和光纯药株式会社，日本)。向透析膜上(供应单元侧)加入人工唾液Saliveht^(R)(帝人制药株式会社，日本)200μL，然后应用制剂，开始制剂的体外释放性试验。

作为制剂，使用含有TA 0.2mg作为有效成分的实施例7中制备的7号～12号、18号、24号、31号～36号、38号、79号、80号和81号制剂(各200mg)、KENALOG^(R)软膏制剂(200mg)和Aftach^(R)制剂1片。予以说明，KENALOG^(R)软膏制剂按照使用方法，在擦拭掉透析膜上的人工唾液后进行应用。

为了测定来自制剂的TA的释放量，随时间经过分别以500μL取样接收单元内的水溶液，每次补充相同量的20％乙醇水溶液。单元内保持37℃，用磁力搅拌器在接收单元内一直搅拌。在试验期间，垂直扩散单元设置在使用加湿器保持在湿度90％以上的高湿度的环境下。

随时间经过向采集的各样品液中以1:1(v/v)的比例加入乙腈，搅拌后，进行离心分离(21,500×g，5分钟，4℃)，回收上清。利用高效液相色谱法(HPLC)测定该上清，求出TA浓度。本测定中使用的HPLC系统和条件示于表6和表7中。

[表6]

HPLC系统(株式会社岛津制作所，京都，日本)

系统控制器	SCL-10A
		泵	LC-10AD
自动进样器	SIL-10A
		柱温箱	CTO-10AC
UV检测器	SPD-10AV
		分析软件	LC solution
脱气装置	DGU-12A3

[表7]

HPLC测定条件

表8中示出了基于由TA浓度的测定值计算的单元有效扩散面积(1.77cm²)，应用制剂4小时后的每单位有效释放面积的TA累计释放量(μg/cm²，3次以上试验的平均值)，以及与KENALOG^(R)软膏制剂相比的相对释放量。

[表8]

含有C17MGE、GMO或C22MGE的制剂显示出与市售的KENALOG^(R)软膏制剂基本相同的TA释放性。此外，在含有C17MGE的制剂中，显示出含有HPC的制剂(8号～12号、18号)的TA释放性趋于比不含HPC的制剂(7号)高。

[实施例12]体外粘膜透过性试验

与实施例11相同地向垂直扩散单元(单元容积：6.0mL，有效扩散面积：1.77cm²)(图4)的接收单元加入pH6.75的磷酸缓冲生理盐水(PBS)6.0mL，代替实施例11中使用的透析膜，设置仓鼠口腔粘膜(叙利亚系(雄性，8周龄)，三协实验室服务株式会社)。在口腔粘膜上(供应单元侧)加入人工唾液Saliveht^(R)(帝人制药株式会社，日本)200μL，然后应用制剂开始测定。

作为制剂，使用含有TA 0.2mg作为有效成分的实施例7中制备的7号、8号、24号、31号～33号、38号和80号制剂(各200mg)、KENALOG^(R)软膏制剂(200mg)和Aftach^(R)制剂1片。予以说明，KENALOG^(R)软膏制剂按照使用方法，在擦拭掉口腔粘膜上的人工唾液后进行应用。

为了测定来自制剂的TA的粘膜透过量，随时间经过分别以500μL取样接收单元内的水溶液，每次补充相同量的PBS。单元内保持37℃，用磁力搅拌器在接收单元内一直搅拌。垂直扩散单元设置在使用加湿器保持在湿度90％以上的高湿度的环境下，进行试验。

随时间经过向采集的各样品液中以1:1(v/v)的比例加入乙腈，搅拌后，进行离心分离(21,500×g，5分钟，4℃)，回收上清。利用高效液相色谱法(HPLC)测定该上清，求出TA浓度。本测定中使用的HPLC系统和条件示于表6和表7中。

图5中示出了各评价来自制剂的TA的粘膜透过行为。图的纵轴表示由TA浓度的测定值而计算的，基于单元有效扩散面积(1.77cm²)的每单位有效透过面积的TA累计粘膜透过量(μg/cm²)的平均值(3次以上试验的平均值)。

表9中示出了应用制剂4小时后和8小时后的每单位有效透过面积的TA累计粘膜透过量和与KENALOG^(R)软膏制剂相比的相对透过量。

[表9]

制剂7、8、31～33、38和80均显示出较高的粘膜透过性。特别是含有C17MGE或C22MGE和HPC的8号和80号制剂与应用市售的粘膜制剂(Aftach^(R)、KENALOG^(R))相比也显示出显著高的粘膜透过性，显示出大幅提高了有效成分的粘膜吸收性。

另外，8号和80号制剂中在4小时后的相对透过量多于8小时后的相对透过量，能够在短时间内更有效地递送药物。

由该结果可知，含有本申请发明的液晶形成脂质和HPC这样的水溶性高分子的制剂不仅显示出较高的粘膜附着性和皮肤附着性，而且具有较高的药物粘膜透过性，能够显著提高药物粘膜吸收性。

[实施例13]喷剂的制备

将作为液晶形成脂质的C17MGE与Pluronic F-127混合，用旋涡混合器混合5分钟。然后，添加浓度为790μg/g的荧光素钠(FL-Na)水溶液，使用高速分散机(POLYTRON PT-3100，KINEMATICA公司，瑞士)进行均质化(8000rpm，5分钟)，制备液晶凝胶(58号制剂)。58号制剂的组成中的液晶形成脂质:Pluronic F-127:FL-Na水溶液＝1:0.1:1(重量比)。58号制剂中的FL-Na浓度为376μg/g。

向58号制剂中以58号制剂:乙醇＝1:0.5或1:1(重量比)添加乙醇，用旋涡混合器混合5分钟得到的溶液，将该溶液填充在手动式的5mL喷药瓶(2号，株式会社Maruemu，日本)中，从而分别制备50号和51号泵式喷剂。

另外，向气溶胶用容器(株式会社大造，日本)中加入50号制剂或51号制剂(溶液)，安装液化石油气(LPG)填充用阀，向该容器填充作为喷射剂的LPG，从而制备52号和53号气溶胶剂。52号制剂的组成中的50号制剂:LPG＝1.5:4(重量比)。53号制剂的组成中的51号制剂:LPG＝1:2(重量比)。

另外，使用C22MGE来代替C17MGE，除此之外，按照与50号～53号制剂相同的组成和相同的方法制备54号～57号喷剂。

予以说明，50号～57号制剂中的FL-Na浓度设定为在喷出后乙醇和LPG全部挥发时与58号制剂相同地为376μg/g。

作为对比对照，制备将FL-Na水溶液和乙醇以重量比1:1进行混合的59号制剂(FL-Na浓度376μg/g)，以及1mM的作为FL-Na水溶液的60号制剂(FL-Na浓度376μg/g)。

50号～60号制剂的组成比(重量比)示于表10中。

[表10]

[实施例14]喷剂的特性试验

1.喷出喷雾试验

将在实施例13中制备的52号、53号、56号、57号气溶胶剂在即将喷雾之前振荡5回，然后对着玻璃表面，从距离10cm处垂直向下喷雾。

对于这些气溶胶剂，在经1～5秒钟内以每秒计算各喷雾时间的喷雾量，结果是每秒的喷雾量(g/秒)表示为近似值，52号制剂为0.723g/秒，53号制剂为0.868g/秒，56号制剂为0.726g/秒，57号制剂为0.711g/秒。

52号、53号、56号、57号制剂均喷雾为非常细的雾状。由此，乙醇瞬间挥发，分别喷雾1秒钟并在60秒后使玻璃表面倾斜45度，被喷雾的制剂均在玻璃表面上不流下而固定。

然而，将不含LPG的50号、51号、54号、55号泵式喷剂分别喷雾0.19g、0.29g、0.19g、0.24g时，当在60秒后使玻璃表面倾斜45度时，被喷雾的4种制剂全部在玻璃表面上流下。

本发明的气溶胶剂显示出刚喷雾后也不从应用部位流下，能够非常有效地应用制剂。

2.粒径分布的测定

本发明的喷剂可以在刚喷雾后形成纳米微粒子。

将50号～57号喷剂分别向烧杯喷雾1秒钟得到的组合物，用蒸馏水将该组合物稀释约1000倍作为测定样品，使用Zetasizer Nano-ZS(Malvern制造)，并利用动态光散射法，测定粒径分布和表示粒子表面电荷的ζ电位。

表11示出了作为3次测定的平均值得到的平均粒径(nm)(Z-average)、PdI(多分散系数)和ζ电位(mV)。显示出均为良好状态的乳剂。

[表11]

3.小角X射线衍射

将52号、53号、56号、57号气溶胶剂分别向离心管喷雾3秒钟，然后加入纯化水5mL得到的组合物，将该组合物封装在标记管中，使用小角X射线散射(SAXS)装置(株式会社理学制造，Nano-Viewer)进行小角X射线散射衍射测定，从而对非层状液晶结构进行判定。

在将52号、56号、57号制剂喷雾而得到的组合物的小角X射线散射衍射(图6A、C、D)中，观察到至少3个散射峰，峰的比值呈现出反相六角相液晶所特有的比值

由此，确认这些样品形成反相六角相液晶。

另外，在将53号制剂喷雾而得到的组合物的小角X射线散射衍射(图6B)中，观察到至少8个散射峰，峰的比值呈现出属于晶体学空间群Pn3m的立方液晶所特有的比值

和反相六角相液晶所特有的比值

由此，确认该样品属于晶体学空间群Pn3m的立方液晶和反相六角相液晶混合而形成。

而且，将56号制剂向培养皿喷雾1秒钟，然后放置约3分钟得到的白色样品，将该样品直接嵌入针孔狭缝中，相同地进行小角X射线散射衍射测定，从而判定非层状液晶结构。结果是观察到至少3个散射峰，峰的比值呈现出反相六角相液晶所特有的比值

(图6E)。由此，确认该样品形成反相六角相液晶。

这些气溶胶剂显示出能够形成非层状液晶结构，在喷雾后无论是否另外加水都能够形成非层状液晶结构。

[实施例15]体外皮肤透过性试验

向WBN/ILA-Ht系雄性无毛大鼠(体重200～250g，8周龄)腹腔内给予3种混合麻醉药(盐酸美托咪啶0.15mg/kg、咪达唑仑2mg/kg、酒石酸布托啡诺2.5mg/kg)，对腹部皮肤剃毛处理后，以正中线为中心切出左右合计4枚(各2cm×2cm)，用剪刀仔细分别去掉真皮侧的皮下脂肪和血液，从而准备好大鼠腹部皮肤。

与实施例11相同地向垂直扩散单元(单元容积：6.0mL，有效扩散面积：1.77cm²)(图4)的接收单元加入pH7.4的磷酸缓冲液(PB)6.0mL，代替实施例11中使用的透析膜，设置上述大鼠腹部皮肤。向角质层上(供应单元侧)加入PB 1.0mL并水合1小时，然后，应用制剂开始测定。

作为制剂，使用实施例13中制备的50号～53号和56～60号制剂。关于制剂的应用量，50号制剂为0.218g(含有FL-Na 54μg)、51号制剂为0.290g(含有FL-Na 54μg)、52号制剂喷雾1秒为0.723g(含有FL-Na 49μg)、53号制剂喷雾1秒为0.868g(含有FL-Na 54μg)、56号制剂喷雾1秒为0.726g(含有FL-Na 49μg)、57号制剂喷雾1秒为0.711g(含有FL-Na 44μg)、58号制剂为0.145g(含有FL-Na 54μg)、59号制剂为1mL(含有FL-Na376μg)、60号制剂为1mL(含有FL-Na 376μg)。

为了测定来自制剂的FL-Na的皮肤透过量，随时间经过分别以500μL取样接收单元内的水溶液，每次补充相同量的PB。单元内保持32℃，用磁力搅拌器在接收单元内一直搅拌。

将随时间经过采集的各样品溶液离心分离(21,500×g，5分钟，4℃)，然后，使用荧光分光光度计(RF-5300PC：株式会社岛津制作所，日本)测定该上清(激发波长：485nm、荧光波长：535nm)，求出样品溶液中的FL-Na浓度。

图7示出了来自各制剂的FL-Na的皮肤透过行为。图的纵轴表示由FL-Na浓度的测定值而计算的，基于单元有效扩散面积(1.77cm²)的每单位有效透过面积的FL-Na累计皮肤透过量(μg/cm²)的平均值(3次或4次试验值的平均值)，。

表12中示出了应用制剂4小时后和8小时后的每单位有效透过面积的FL-Na累计皮肤透过量和与60号制剂(对照)相比的相对透过量。

[表12]

喷剂50号～53号、56号和57号制剂与FL-Na水溶液(60号制剂)、进一步与液晶凝胶(58号制剂)、50％乙醇水溶液(59号制剂)相比，均显示出显著高的皮肤透过性。50号、51号泵式喷剂在应用4小时后的FL-Na累计皮肤透过量与60号制剂相比分别显示出27倍、184倍的高值。而且，52号、53号、56号、57号气溶胶剂在4小时后的FL-Na累计皮肤透过量与60号制剂相比分别显示出104倍、345倍、33倍、138倍的进一步高值。此外，应用8小时后的FL-Na累计皮肤透过量也显示出相同趋势的高值。

52号、53号、56号、57号气溶胶剂如实施例14所示的刚喷雾后也不从应用部位流下，比不含LPG的50号和51号泵式喷剂更能够有效地应用制剂，如果同时考虑上述，则表明能够进一步用作极为有用的皮肤透过促进制剂。

[实施例16]橡胶贴膏制剂的制备

将作为液晶形成脂质的C17MGE、植烷三醇(PHY、东京化成工业株式会社，日本)或C22MGE和在pH7.4的磷酸缓冲液(PB)中溶解FL-Na的FL-Na水溶液分别以重量比1:1、2:1、3:1填充到气密注射器(mS-GAN025，株式会社伊藤制作所，日本)内，均匀地混合得到液晶凝胶。FL-Na水溶液的FL-Na浓度设定为使后述的最终胶粘层的FL-Na浓度为10mM。予以说明，由于PHY在常温为半固体，用加热搅拌器(100℃，30分钟)使其融解后使用。

在液晶凝胶中加入丙烯酸类胶粘剂DURO-TAK^(R)(387-2516，德国汉高公司)使相对于胶粘层整体为重量比80％，使用磁力搅拌器进行混合(500rpm，5分钟)。该混合物放在经有机硅加工的聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)膜的背衬(FILMBYNA^(R)75E-0010BD，藤森工业株式会社，日本)的左端(0％)，使用设定涂膜的厚度1miL(25.4μm)的510号BAKER式涂膜器(株式会社安田精机制作所，日本)，从左端(0％)向右端(100％)延展(图8)。延展的胶粘层在温度20±2℃、湿度20±5％的室内干燥30分钟，进一步在温度32℃、湿度20±2％的培养箱内干燥30分钟。对于干燥后的胶粘层，使用SN-版画橡胶辊3号(株式会社谷口松雄堂，日本)压接厚度75μm的PET膜支撑体(FILMBYNA^(R)，藤森工业株式会社，日本)，由此制备橡胶贴膏制剂(61号～69号制剂)。

61号～69号制剂的胶粘层中最终的组成比(重量比)示于表13中。

[表13]

另外，通过与上述相同的方法，并依据表14所示的组成比(重量比)，制备将液晶形成脂质(C17MGE)和重量比为90％、70％、20％的上述丙烯酸类胶粘剂(压敏接着剂)DURO-TAK^(R)混配而得的橡胶贴膏70号～72号制剂，以及制备不混配液晶形成脂质而混配重量比90％的上述丙烯酸类胶粘剂DURO-TAK^(R)而得的橡胶贴膏73号制剂。

[表14]

制剂编号	70	71	72	73
					代号	T-D90M5	T-D70M15	T-D20M40	T-D90M0
C17MGE	5	15	40
					PHY
C22MGE
					DURO-TAK	90	70	20	90
FL-Na水溶液	5	15	40	10
					合计	100	100	100	100

[实施例17]橡胶贴膏制剂的特性试验

1.图像分析

对于实施例16中胶粘层干燥后、PET膜支撑体压接前的橡胶贴膏61号～73号制剂，通常进行拍摄和荧光显微镜的图像分析。

通常拍摄的图像是使用数码相机(D5300，株式会社尼康，日本)，从20cm上方拍摄各橡胶贴膏制剂全部而得到的。

荧光显微镜的图像是使用荧光显微镜(BZ-X700，株式会社KEYENCE，日本)，通过拍摄从橡胶贴膏制剂的左端中心起25％(图8的位置1)、50％(图8的位置2)、75％(图8的位置3)的3处而得到的。荧光显微镜的拍摄条件设为如下：物镜CFI Plan Apoλ2x、荧光滤光片GFP(OP-87763 BZ-X滤光片)、激发波长470/40nm、吸收波长525/50nm、二向色镜波长495nm、增益+6dB。予以说明，曝光时间在含有液晶形成脂质而成的制剂设为1/175s，在不含液晶形成脂质的制剂设为1/5s。

混配重量比80％和90％的DURO-TAK^(R)而成的橡胶贴膏61号～70号制剂的胶粘层均均匀地延展。然而，混配重量比70％的DURO-TAK^(R)而成的橡胶贴膏71号制剂的胶粘层与61号～70号制剂相比均匀稍差。而且，混配重量比20％的DURO-TAK^(R)而成的橡胶贴膏72号制剂和不混配液晶形成脂质而混配重量比90％的DURO-TAK^(R)而成的橡胶贴膏73号制剂的胶粘层均未均匀地延展。

由该结果可知，显示出通过混配一定的重量比以上的DURO-TAK^(R)(优选为70％以上，更优选为80％以上)和本申请发明的液晶形成脂质，可以制备均匀的橡胶贴膏制剂。

2.胶粘层的厚度

使用Hand Clipper(测厚仪，株式会社Teclock，日本)测定橡胶贴膏制剂全部的厚度，从该测定值减去支撑体(20μm)和背衬(80μm)的厚度，由此计算出橡胶贴膏制剂的胶粘层的厚度。

从63号、66号、69号制剂的左端中心(图8)至25％(图8的位置1)、50％(图8的位置2)、75％(图8的位置)的3处胶粘层的厚度均为15±5μm(6次测定的平均值)。

由此，确认上述橡胶贴膏制剂的胶粘层的厚度均匀。

3.相位图的分析

对于橡胶贴膏制剂，使用扫描探针显微镜(SPM-9700HT，株式会社岛津制作所，日本)，以观察视野1μm×1μm和0.5μm×0.5μm进行形状观察，然后进行位相观察。

对于63号和73号制剂，进行形状观察，结果均观察到平滑的表面形状。而且，对于这些制剂，进行位相观察，结果如图9所示，在73号制剂中未观察到相位图，而在63号制剂中观察到特征性的相位图。

由该结果可知，胶粘层表面的物理性质因有无混配液晶形成脂质而不同，混配液晶形成脂质和DURO-TAK^(R)而成的橡胶贴膏制剂在具有一定规则性的结构体上具有特征性的表面特性。

[实施例18]体外释放性试验

向如图10所示的水平扩散单元(单元容积：3.0mL，有效扩散面积：0.95cm²；小林硝子株式会社)的接收单元加入PB3.0mL，将制剂贴附于供应单元侧，开始制剂的体外释放性试验。作为制剂，使用61号～69号和73号制剂。

为了测定来自制剂的FL-Na的释放量，随时间经过分别以500μL取样接收单元内的水溶液，每次补充相同量的PB。单元内保持32℃，用磁力搅拌器在接收单元内一直搅拌。

将随时间经过采集的各样品溶液离心分离(21,500×g，5分钟，4℃)，然后，使用荧光分光光度计(RF-5300PC：株式会社岛津制作所，日本)测定该上清(激发波长：485nm、荧光波长：535nm)，求出样品溶液中的FL-Na浓度。

图11中示出了来自各制剂的FL-Na的释放行为。图的纵轴表示由FL-Na浓度的测定值而计算的，基于萃取试验的FL-Na累计释放率(％)的平均值(3次或4次试验值的平均值)。

表15中示出了应用制剂1小时后和4小时后的FL-Na累计释放率(％)。FL-Na累计释放率(％)依据下式进行计算。

FL-Na累计释放率(％)＝FL-Na累计释放量÷FL-Na应用量×100

[表15]

从61号～69号制剂均随时间且迅速地释放FL-Na。特别是62、63、65、66号制剂在应用1小时后显示出更高的累计释放率，在应用4小时后到达接近100％的释放率。尤其是62号和63在应用1小时后已经达到接近100％的释放率，非常迅速地释放FL-Na。

然而，从未混配液晶形成脂质的橡胶贴膏73号制剂缓慢释放FL-Na，在应用4小时后达到约25％的释放率，之后未观察到FL-Na的释放。由此，显示出如果不混配液晶形成脂质，则不能有效地释放包封的药物。

[实施例19]体外皮肤透过性试验

依据实施例15中所述的方法，对设置在垂直扩散单元(图4)的大鼠腹部皮肤的角质层上(供应单元侧)贴附作为制剂的61～69号制剂，进行体外皮肤透过性试验。此外，作为对比对照，使用在PB中溶解FL-Na而成的10mM的FL-Na水溶液74号。

图12中示出了来自各制剂的FL-Na的皮肤透过行为。图的纵轴表示由FL-Na浓度的测定值而计算的，基于萃取试验的FL-Na累计皮肤透过率(％)的平均值(3次或4次试验值的平均值)。

表16中示出了应用制剂1小时后和4小时后的FL-Na累计皮肤透过率(％)。FL-Na累计释放率(％)依据下式进行计算。

FL-Na累计释放率(％)＝FL-Na累计透过量÷FL-Na应用量×100

[表16]

橡胶贴膏61号～69号制剂与FL-Na水溶液74号制剂相比，皮肤透过性均显著提高。而且与含有PHY的橡胶贴膏64号～66号制剂相比，含有C17MGE的61号～63号制剂的皮肤透过性非常高。考虑到在实施例18中含有C17MGE或C22MGE的橡胶贴膏制剂与含有PHY的橡胶贴膏制剂之间体外释放性差异不大，则含有C17MGE或C22MGE的橡胶贴膏制剂所显示出的高皮肤透过性是令人意想不到的结果。而且，62号～63号制剂在应用4小时后及4小时以后，与61号制剂相比，皮肤透过性在根据液晶形成脂质的含有比例所预期的以上得到提高(图12)。

[实施例20]乳剂的制备

依据表17所示的混配比(重量比)，将作为液晶形成脂质的C17MGE或甘油单油酸酯(GMO，RIKEMAL XO-100，日油)、作为药物的曲尼司特(东京化成工业株式会社，日本)和乙醇(仅76号)进行混合，然后在80℃的的热水浴中溶解。对于所得到的脂质混合液，将Pluronic^(R)F127(UNILUBE^(R)70DP-950B，日油，或者Aldrich P2443)溶解于纯化水而成的水溶液，添加该水溶液后，用药匙或旋涡混合器搅拌，制成悬浮液。而且，对该悬浮液使用超声波分散机(Sonics Vibra-Cell VCX-750、Sonics&Materials,Inc.制)以振幅20％进行5分钟的超声波处理，从而制备含有微粒子的白色75号～77号乳剂。这些乳剂分别制备10g的量。予以说明，曲尼司特已知是抗过敏剂，但也研究了对神经系统疾病的治疗效果(US 2011/0112187 A1)。

予以说明，在脂质20％的乳剂中，C17MGE可以在1％量的Pluronic^(R)F127中分散，但GMO不能被分散。因此，GMO在5％量的Pluronic^(R)F127中分散(77号)。作为对比对照，制备将曲尼司特以0.5％添加在生理盐水中而成的78号制剂(表17)。

[表17]

[实施例21]乳剂的物理性质评价

测定实施例20中制备的75号～77号乳剂的粒径分布和小角X射线散射衍射，以及75号、76号乳剂的粘度和曲尼司特的包封效率。

粒径分布是使用Zetasizer Nano-ZS(Malvern制造)，并利用动态光散射法进行测定的。测定样品是通过在蒸馏水中将各乳剂稀释1000倍来制备的。对于各测定样品，作为3次测定的平均值，将得到的平均粒径(nm)(Z-average)、PdI(多分散系数)和ζ电位(mV)示于表18中。

各乳剂均稳定，通过实验没有可见的凝聚物。这被适度的平均粒径、PdI和ζ电位所证实。

小角X射线散射衍射是将各乳剂封装在标记管中，使用小角X射线散射(SAXS)装置(株式会社理学制，Nano-Viewer)进行测定的。

在75号乳剂的小角X射线散射衍射(图13A)中，观察到至少3个散射峰，峰的比值呈现出反相六角相液晶所特有的比值

由此，显示出本乳剂是反相六角相液晶的微粒子分散于水相而成的液晶乳剂(六角晶(hexosome))。

另外，在76号乳剂的小角X射线散射衍射(图13B)中，观察到至少4个散射峰，峰的比值呈现出属于晶体学空间群Pn3m的立方液晶所特有的比值

由此，显示出本乳剂是属于晶体学空间群Pn3m的立方液晶的微粒子分散于水相而成的液晶乳剂(立方晶(cubosome))。

另外，在77号乳剂的小角X射线散射衍射(图13C)中，观察到至少3个散射峰，峰的比值呈现出属于晶体学空间群Im3m的立方液晶所特有的比值

由此，显示出本乳剂是属于晶体学空间群Im3m的立方液晶的微粒子分散于水相而成的液晶乳剂(立方晶(cubosome))。

关于粘度，使用了粘度计(RE215H；锥板式0.8°xR24，东机产业株式会社)。对于各乳剂，在温度25℃，以转速50rpm测定的粘度(mPa·s)，将该粘度(mPa·s)示于表18中。这些粘度均在可喷出的范围内。

为了计算包封效率，将各乳剂离心分离(21,500×g，15分钟，4℃)，然后，取出得到的上清，用乙腈稀释10倍，利用液体色谱串联质谱法(LC-MS/MS)对曲尼司特进行定量。包封效率根据下式计算。

[数1]

上述式中，％EE、TL_总、TL_游离分别表示包封效率、乳剂中的总曲尼司特浓度、上清中的曲尼司特浓度。

如表18所示，各乳剂的包封效率均高，显示出曲尼司特向微粒子内部的液晶结构中的高吸收能力。

[表18]

[实施例22]体外释放性试验

向如图4所示的垂直扩散单元(单元容积：6.0mL，有效扩散面积：1.77cm²；小林硝子株式会社)的接收单元加入磷酸缓冲生理盐水(PBS；pH7.4)6.0mL，设置预先浸水的透析膜(截留分子量＝12,000～14,000Da，三光纯药株式会社，日本)。在透析膜上(供应单元侧)应用制剂，开始制剂的体外释放性试验。作为制剂，分别以1mL使用乳剂75号、76号制剂和对比对照78号制剂。

为了测定来自制剂的曲尼司特的释放量，随时间经过分别以500μL取样接收单元内的水溶液，每次补充相同量的PBS。单元内保持32℃，用磁力搅拌器在接收单元内一直搅拌。

随时间经过向采集的各样品液中以1:1(v/v)的比例加入乙腈，搅拌后，进行离心分离(21,500×g，5分钟，4℃)，回收上清。将该上清10μL注入到LC/MS/MS系统中，对曲尼司特进行定量。

本测定中使用的LC/MS/MS系统构成如下：系统控制器(CBM-20A，岛津制作所)、泵(LC-20AD，岛津制作所)、自动进样器(SIL-20ACHT，岛津制作所)、柱温箱(CTO-20A，岛津制作所)、质谱装置(4000QTRAP，AB SCIEX公司)，以及分析软件(Analyst(注册商标)1.4.2版，岛津制作所)。

LC/MS/MS的测定条件如下所述：色谱柱(Shodex ODP2HPG-2A2.0mm×10mm，昭和电工株式会社)保持在40℃。流动相是乙腈:含0.05％甲酸的5mM乙酸铵水溶液＝80:20。流速保持在0.2mL/分。在多反应监测(MRM)模式下进行质谱定量化，以碰撞能量36eV监测从m/z328.0至m/z191.2的过渡离子。

图14中示出了应用后8小时内的来自各制剂的曲尼司特的释放行为。图的纵轴表示曲尼司特的累计释放量(μmol/cm²)的平均值(4次试验值的平均值)。

来自各制剂的曲尼司特的释放行为与Higuchi方程(Higuchi T.,J.Pharm.Sci.,52,1145-1148(1963))密切相关。根据图14计算的曲尼司特的释放速度(μmol/cm²/h^0.5)在76号制剂为0.17的高值，在75号和78号制剂中均为0.05。而且，根据图14计算的应用制剂8小时后的累计曲尼司特释放率(％)在75号、76号和78号中分别为1.82、3.67、2.35。在液晶结构中具有包封的曲尼司特的75号、76号制剂显示出明确的释放性。

[实施例23]鼻腔内给药的药代动力学评价

使用Sprague-Dawley大鼠(雄性7周龄，体重230g±10g)进行75号～78号制剂的鼻腔内给药的药代动力学评价。首先，向大鼠腹腔内给予3种混合麻醉药(盐酸美托咪啶0.375mg/kg、酒石酸布托啡诺2.5mg/kg、咪达唑仑2mg/kg)，实施全身麻醉。向保持仰卧位的大鼠鼻孔中插入微量加液器前端0.5cm，滴加制剂10μL，由此进行鼻腔内给药。

在预定时间点(给药0.17小时、0.5小时、1小时、2小时、4小时和8小时后)从大鼠颈静脉采集约200μL的血液，直接转移到肝素化管中，立刻进行离心分离(21,500×g，10分钟，4℃)，得到血浆。每次采集血液，通过尾静脉向大鼠注射等量的生理盐水。在一部分大鼠中，在给药2小时、4小时或8小时后，采集血液后再腹腔内给予3种混合麻醉药，实施全身麻醉，用冷PBS进行心肺灌流，切出大鼠大脑。切出的大脑在冰上解剖特定的区域(嗅球、皮质、脑干、小脑、中脑、海马)。还从死亡的大鼠中采集脊髓。称量采集的脑样品，接着用剪刀剪断，加入乙腈0.5mL，使用分散机(POLYTRON PT1200E，KINEMATICA公司，瑞士)，在4℃以12,000rpm均质化5分钟。将脑匀浆离心分离(21,500×g，5分钟，4℃)，回收上清。由血浆和脑匀浆得到的上清在分析前保存在-30℃。

向由血浆或脑匀浆得到的上清50μL中以1:1(v/v)的比例加入乙腈，搅拌后，进行离心分离(21,500×g，5分钟，4℃)，回收上清。通过与实施例22相同的方法，将得到的上清10μL注入到LC/MS/MS系统中，对曲尼司特进行定量。

图15和图16中示出了各制剂的鼻腔内给药后8小时内的血浆中和脑内曲尼司特浓度的随时间变化。图的纵轴表示曲尼司特浓度(ng/mL或ng/g)的平均值(3～5次试验值的平均值)。

基于图15、图16所示的结果，作为在各制剂的鼻腔内给药后8小时内的血浆中和脑内曲尼司特所相关的药代动力学的参数，求出最大浓度到达时间(Tmax)、最大浓度(Cmax)和药物浓度-时间曲线下面积(AUC_0-8)。将这些数值示于表19中。

[表19]

*对于血浆为ng/mL，对于脑为ng/g

**对于血浆为ng.h/mL，对于脑为ng.h/g

血浆中的Tmax是75号～77号乳剂和对比对照78号制剂的均在鼻腔内给药后首次采血时的0.17小时后，显示出迅速的全身吸收性。脑内的Tmax是在对比对照78号制剂中鼻腔内给药后首次采血时的2小时后，而在75号～77号乳剂中均在鼻腔内给药8小时以后。

在血浆中，Cmax在使用C17MGE的75号、76号乳剂和对比对照78号制剂中差异不大，但75号、76号的AUC_0-8与78号相比为3倍以上的高值。此外，在脑内，与78号相比，75号、76号的Cmax约为8倍的高值，75号、76号的AUC_0-8约为15倍的高值。然而，使用GMO的77号乳剂与对比对照78号制剂相比，虽然在血浆中Cmax与AUC_0-8均较低，但在脑内Cmax、AUC_0-8均约为5倍的高值。

如上所述，在使用C17MGE的75号、76号乳剂中，血浆中、脑内均以高浓度检测到曲尼司特，高于在使用GMO的77号乳剂中所显示的浓度。此外，特别值得注意的是脑内曲尼司特浓度在75号、76号乳剂中与78号相比显著增加。由此，可知使用C17MGE的乳剂在通过鼻腔内给药向脑内递送药物方面优异。

图17和图18中示出了各制剂的鼻腔内给药2小时、4小时和8小时后的脑内不同区域中的曲尼司特浓度。图的纵轴表示曲尼司特浓度(ng/g)的平均值(3～5次试验值的平均值)。

75号～77号乳剂和对比对照78号制剂均显示出在所有脑区域中首次切出时的2小时后起吸收曲尼司特。在所有脑区域中，嗅球和脊髓中的来自这些制剂的曲尼司特浓度通常高于其他脑区域(图17、18)。由于嗅球与鼻腔邻接，且脊髓是是全身传导通路的大脑入口，因此该结果表明曲尼司特的脑内移行是经由嗅觉传导通路与全身传导通路这两者来进行的。

在所有脑区域中，来自使用C17MGE的75号、76号乳剂的曲尼司特浓度与使用GMO的77号乳剂和对比对照78号制剂相比，通常在鼻腔内给药后8小时内较高，在鼻腔内给药8小时后显著更高(图17、18)。由此可知，与77号乳剂和对比对照78号制剂相比，75号、76号乳剂中的高浓度的曲尼司特长时间地蓄积于整个脑区域。

工业实用性

根据本发明，可以提供一种在生物体的药物吸收性方面优异的外用剂。

在本说明书中引用的全部刊物、专利和专利申请直接作为参考并入本说明书中。

Claims (16)

1.一种外用剂，其含有非层状液晶形成脂质和药物。

2.根据权利要求1所述的外用剂，其中，非层状液晶形成脂质是下述通式(I)所表示的两亲化合物或其盐，

[化1]

式中，X和Y各自表示氢原子或一起表示氧原子，n表示0～2的整数，m表示1或2，

表示单键或双键，R表示具有2个以上羟基的亲水基团。

3.根据权利要求2所述的外用剂，其中，所述式中的R表示由选自甘油、赤藓糖醇、季戊四醇、双甘油、甘油酸、三聚甘油、木糖、山梨糖醇、抗坏血酸、葡萄糖、半乳糖、甘露糖、二季戊四醇、麦芽糖、甘露醇和木糖醇中的任一个去掉1个羟基所得的亲水基团。

4.根据权利要求1～3中任一项所述的外用剂，其中，非层状液晶形成脂质是单-O-(5,9,13,17-四甲基十八碳-4-烯酰基)甘油或单-O-(5,9,13-三甲基十四碳-4-烯酰基)甘油。

5.根据权利要求1所述的外用剂，其中，非层状液晶形成脂质是甘油单油酸酯或植烷三醇。

6.根据权利要求1～5中任一项所述的外用剂，其被制剂化为贴剂的剂型。

7.根据权利要求6所述的外用剂，其中，贴剂是橡胶贴膏。

8.根据权利要求6或7所述的外用剂，其含有70w/w％以上的胶粘剂。

9.根据权利要求1～5中任一项所述的外用剂，其被制剂化为气溶胶剂的剂型。

10.根据权利要求1～9中任一项所述的外用剂，其中，非层状液晶形成脂质在外用剂中不形成液晶。

11.根据权利要求1～10中任一项所述的外用剂，其应用于粘膜。

12.根据权利要求1～11中任一项所述的外用剂，其还含有水溶性高分子和/或油性成分。

13.根据权利要求12所述的外用剂，其中，水溶性高分子是羟丙基纤维素。

14.根据权利要求1～13中任一项所述的外用剂，其还含有乙醇。

15.根据权利要求1～5中任一项所述的外用剂，其含有微粒子，所述微粒子含有所述非层状液晶形成脂质和所述药物。

16.根据权利要求1～15中任一项所述的外用剂，其用于脑内的药物递送。

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