CN112753629B - 南美白对虾养殖前期去除急性肝胰腺坏死病毒的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种南美白对虾养殖前期去除急性肝胰腺坏死病毒的方法，包括以下步骤养殖池塘消毒、幼虾选择、幼虾感染、幼虾检测、幼虾治疗、取样检测。本发明利用生物学原理，通过降低养殖水体的盐度到3‰，并使用蛭弧菌来杀死虾体及水体中的急性肝胰腺坏死病毒，经过治疗有效去除对虾体内的急性肝胰腺坏死病毒，并且存活率达到70％‑80％，对对虾选种和商业对虾养殖的成功率有重要作用。本发明精准性地调控养殖水体在盐度3‰时协同应用蛭弧菌来对急性肝胰腺坏死病毒进行处理，大大加强了消杀病毒的有效性，解决了南美白对虾在工厂化养殖前期易受急性肝胰腺坏死病毒感染和传播，克服了养殖失败的难题。
Description
技术领域
本发明涉及一种南美白对虾养殖前期去除急性肝胰腺坏死病毒的方法，属于杀灭威胁水产养殖安全的病毒的领域，尤其涉及控制养殖水体在特定的盐度3‰、同时应用蛭弧菌杀灭养殖南美白对虾的急性肝胰腺坏死病毒的方法。
背景技术
南美白对虾在中国养殖非常广泛，也是深受消费者欢迎的常见水产品类。在各沿海省区的南美白对虾养殖中，应用工厂化养殖模式(即工厂式室内水泥池养殖模式)越来越受到尤其是长江以北的养殖户的重视。
在工厂化养殖模式中，南美白对虾养殖尤其容易受到外源病菌带入，加之因放养密度、水质变化等因素引起的病害传播而导致养殖失败。急性肝胰腺坏死病毒是引起南美白对虾早期生长受阻和大量死亡的重要病害之一。在实际养殖操作中，常规方法(如单纯应用蛭弧菌等)无法有效杀灭该病毒，或者产生不良副作用。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种南美白对虾养殖前期去除急性肝胰腺坏死病毒的方法，用于灭杀养殖水体在特定的盐度3‰、同时应用蛭弧菌杀灭养殖南美白对虾的急性肝胰腺坏死病毒。
为解决上述技术问题，本发明的技术方案为：南美白对虾养殖前期去除急性肝胰腺坏死病毒的方法，其创新点在于包括以下步骤：
步骤A：养殖池消毒：养殖池打满淡水，用含量为30％的漂粉精按照50ppm即6.25kg的漂粉精化水，均匀泼洒到养殖池里，浸泡24小时后排掉；4天后再冲洗养殖池，接着对养殖池进行进水操作，养殖池所进的水为经过陶氏水处理器处理过的海水；
步骤B：幼虾选择：选择健康的幼虾放入准备好的养殖池，按照常规养殖管理暂养15天，水温控制在27℃，每天喂4餐，饲喂量为体重的5％，饲料选择常规南美白对虾饲料，每天换水20％，日常光照；
步骤C：幼虾感染：幼虾在养殖池暂养15天后摄食状态一切常规，接着开始投喂拌有急性肝胰腺坏死病毒液的饲料，每天投喂4餐，饲喂量喂体重的4％连续投喂5天；
步骤D：幼虾检测：持续投喂带肝胰腺坏死病毒饲料直至幼虾死亡率达到10％时，收集死亡幼虾和活虾的粪便进行PCR检测，证明为急性肝胰腺坏死病毒阳性。
步骤E：幼虾治疗：在确定幼虾已经感染急性肝胰腺坏死病毒后进行治疗，包括停止喂食淡化水体、多次无害化处理、喂食和无害化处理、水体PH值调节和蓄水池制备、优化水体和喂食、水体换水处理；
步骤F：取样检测：经过治疗，存活率为75.3％-80.6％，重复步骤E后，每隔一个星期取一次幼虾产生的粪便做PCR检测，当PCR检测5次后的结果均为急性肝胰腺坏死病毒阴性时南美白对虾即可进入常规养殖程序。
优选的，所述步骤A中养殖池为水泥池，长5m宽5m高1.5m，表层涂覆水产专有油漆，养殖池四周的左下角分别固定有微孔纳米增氧管，管的长度为1m；养殖池进入经过陶氏水处理器处理过的海水后水位1m，盐度为37‰，温度27℃，PH8.2-8.5，氨氮为0，亚硝酸盐为0，打开微孔纳米增氧管增氧确保溶氧保持在5mg/L以上。
优选的，所述步骤C中拌有急性肝胰腺坏死病毒液的饲料按照常规饲料、水、急性肝胰腺坏死病毒液按照100：5：1的比例均匀混合，且在投喂前半个小时混合好。
优选的，所述急性肝胰腺坏死病毒液制备方法为，在爆发急性肝胰腺坏死病的对虾的养殖池进行取样，该养殖池患急性肝胰腺坏死病症状明显，经PCR检测证明为急性肝胰腺坏死病毒阳性，取0.1g爆发急性肝胰腺坏死症的对虾粪便放入匀浆器中，加入1mL的LPBS缓冲液并浴研磨均匀，然后将急性肝胰腺坏死病毒液置入1.5mL的EP管中保持3000r/min且离心5min，取上清液200uL加入到1800uL的PBS缓冲液，用经高温消毒过的装有0.22uL孔目的过滤器过滤；取滤液500uL加入到49.5mL且PH7.4的PBS缓冲液混匀，温度控制在4℃保存备用，后续使用时需要用PBS缓冲液稀释1000倍。
优选的，所述步骤E中停止喂食淡化水体包括以下步骤，停止喂料并排去70％的原池水，往养殖池内慢慢加入提前备好的10％原池水量的淡水，该淡水为盐度为0，温度为27℃，PH6.8，氨氮为0，亚硝酸盐为0，加入淡水后水位在40cm，捞出继续死亡的幼虾并进行无害化处理。
优选的，所述步骤E中多次无害化处理包括以下步骤，
步骤1：停止喂食淡化水体的6个小时后，继续加入10cm的淡水，加淡水时称取50g小苏打粉和10g的蛭弧菌冻干粉化水均匀泼洒，捞出死虾并进行无害化处理；
步骤2：重复上述步骤1直到水位加到1m；
步骤3：静置6个小时后，把养殖池内的水排出60％，即排出60cm，缓慢加淡水20cm，加水时称取100g小苏打粉和20g蛭弧菌冻干粉化水均匀泼洒，并捞出死虾并进行无害化处理；
步骤4：静置6个小时后，缓慢加淡水20cm，加水时称取100g小苏打粉和20g蛭弧菌冻干粉化水均匀泼洒，并捞出死虾并进行无害化处理；
步骤5：重复上述步骤4直到水位加到1m。
优选的，所述步骤E中喂食和无害化处理在停止喂食淡化水体和多次无害化处理共耗时60小时后，对幼虾进行喂食，喂养的饲料为拌有10ppm蛭弧菌冻干粉并风干的饲料，每天4餐，每餐投喂跟幼虾摄食量控制在1个小时吃完；每天换水20％并加入淡水，加水时称取100g小苏打粉和20g蛭弧菌冻干粉，化水均匀泼洒，按照常规养殖进行管理维持6天，每天捞出死亡幼虾并进行无害化处理。
优选的，所述步骤E中水体PH值调节和蓄水池制备包括排水20cm并加入海水20cm，海水为经过陶氏水处理器处理过的海水，加水时称取20g蛭弧菌冻干粉化水均匀泼洒，此时水体水位1m，盐度为37‰，温度27℃，PH8.2-8.5，氨氮为0，亚硝酸盐为0；另外再配置蓄水池备用，蓄水池的水体盐度为3‰，温度27℃，PH8.0，氨氮为0，亚硝酸盐为0，且蓄水池的规格与养殖池规格一致。
优选的，所述步骤E中优化水体和喂食包括每天换水20％，该水为蓄水池中的水，加水时称取20g蛭弧菌冻干粉化水均匀泼洒，常规饲喂管理且喂养的饲料为拌有10ppm蛭弧菌冻干粉并风干的饲料，每天4餐，每餐投喂跟幼虾摄食量，控制在1个小时吃完并维持7天。
优选的，所述步骤E中水体换水处理包括每天换海水30％，该海水为经过陶氏水处理器处理过的海水，水体水位1m，盐度为37‰，温度27℃，PH8.2-8.5，氨氮为0，亚硝酸盐为0。换水过程中补充3ppmm的有益菌并按照常规养殖管理。
本发明的有益效果为：本发明利用生物学原理，通过降低养殖水体的盐度到3‰，并使用蛭弧菌来杀死虾体及水体中的急性肝胰腺坏死病毒，经过治疗有效去除对虾体内的急性肝胰腺坏死病毒，并且存活率达到70％-80％，对对虾选种和商业对虾养殖的成功率有重要作用。本发明精准性地调控养殖水体在盐度3‰时协同应用蛭弧菌来对急性肝胰腺坏死病毒进行处理，大大加强了消杀病毒的有效性，解决了南美白对虾在工厂化养殖前期易受急性肝胰腺坏死病毒感染和传播，克服了养殖失败的难题。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述。
实施例1
1、养殖池消毒：养殖池为水泥池，长5m，宽5m，高1.5m，表层涂覆水产专有油漆，养殖池四周的左下角分别固定有微孔纳米增氧管，管的长度为1m。养殖池打满淡水，用含量为30％的漂粉精，按照50ppm即6.25kg的漂粉精化水，均匀泼洒到养殖池里，打开微孔纳米增氧管30分钟，使消毒剂分布均匀，浸泡24小时后排掉，经过4天后，再冲洗养殖池，进水60cm。养殖池所进的水为经过陶氏水处理器处理过的海水，水位1m，盐度为37‰，温度27℃，PH8.2，氨氮为0，亚硝酸盐为0.打开微孔纳米增氧管增氧，使溶氧保持在5mg/L以上。
2、幼虾选择：选择健康，体色透亮，四肢完整，体表光滑，肠道清晰，无感染病毒即SPF，肝脏健康的幼虾，体长5cm，体重1g，共计6000尾。放入准备好的养殖池，按照常规养殖管理，暂养15天。水温控制在27℃，每天喂4餐，饲喂量为体重的5％，饲料选择普通的南美白对虾饲料，每天换水20％，日常光照。
3、幼虾感染：幼虾在养殖池暂养15天后，摄食状态一切常规，开始投喂拌有急性肝胰腺坏死病毒液的饲料。该饲料为饲料、水、急性肝胰腺坏死病毒液按照100：5：1的比例均匀混合，在投喂前半个小时混合好。每天投喂4餐，饲喂量喂体重的4％，连续投喂5天，当幼虾死亡率达到10％时，停止投喂携带急性肝胰腺坏死病毒的饲料并进行PCR检测。
上述的急性肝胰腺坏事病毒液制备方法为：在爆发急性肝胰腺坏死病毒的养殖池进行取样，该养殖池患急性肝胰腺坏死病症状明显，经PCR检测证明为急性肝胰腺坏死病毒阳性。取0.1g爆发急性肝胰腺坏死症的对虾粪便放入匀浆器中，加入1mL的LPBS缓冲液并浴研磨均匀，然后将急性肝胰腺坏死病毒毒液置入1.5mL的EP管中3000r/min离心5min，取上清液200uL加入到1800uL的PBS缓冲液并用经高温消毒过的装有0.22uL孔目的过滤器过滤，取滤液500uL加入到49.5mL的PH7.4的PBS缓冲液混匀，共计50mL，4℃保存备用，使用时需要用PBS缓冲液稀释1000倍。
4、幼虾检测：投喂带肝胰腺坏死病毒的第2天开始，就可以观察到有个别幼虾出现感染症状，3天后开始出现死亡。每天认真观察对虾感染和发病情况，发现死虾及时捞出进行无害化处理。第5天早上，死亡率达到10％，收集死亡幼虾和活虾的粪便进行PCR检测，证明为急性肝胰腺坏死病毒阳性。
5、幼虾治疗：在确定幼虾已经感染急性肝胰腺坏死病毒后进行如下治疗方案；
①、立即停止喂料，排去70％的原池水，即排去70cm的原池水。往养殖池内慢慢加入提前备好的淡水，该淡水为盐度为0，温度为27℃，PH6.8，氨氮为0，亚硝酸盐为0。加入10公分，水位40cm，捞出继续死亡的幼虾并进行无害化处理。
②、6个小时后，再继续加入10cm的淡水，加淡水时称取50g小苏打粉和10g的蛭弧菌冻干粉，化水均匀泼洒。捞出死虾并进行无害化处理。
③、重复步骤②，直到水位加到1m。
④、6个小时后，再把水排出60％，即排出60cm，缓慢加淡水20cm，加水时称取100g小苏打粉和20g蛭弧菌冻干粉，化水均匀泼洒。捞出死虾并进行无害化处理。
⑤、6个小时后，缓慢加淡水20cm，加水时称取100g小苏打粉和20g蛭弧菌冻干粉，化水均匀泼洒。捞出死虾并进行无害化处理。
⑥、重复步骤⑤，直到水位加到1m。
⑦、以上处理步骤共计用时60个小时，处理后明显看到幼虾死亡数量明显下降。开始对幼虾进行喂食，喂养的饲料为拌有10ppm蛭弧菌冻干粉并风干的饲料。每天4餐，每餐投喂跟幼虾摄食量，控制在1个小时吃完。每天换水20％，加入淡水。加水时称取100g小苏打粉和20g蛭弧菌冻干粉，化水均匀泼洒。按照常规养殖进行管理，维持6天，每天捞出死亡幼虾并进行无害化处理。
⑧、6天后，排水20cm，再加入海水20cm，海水为经过陶氏水处理器处理过的海水。加水时称取20g蛭弧菌冻干粉，化水均匀泼洒。水位1m，盐度为37‰，温度27℃，PH8.2，氨氮为0，亚硝酸盐为0。另外再蓄水池配好一口水，水盐度为3‰，温度27℃，PH8.0，氨氮为0，亚硝酸盐为0。蓄水池的规格与养殖池一致。
⑨、完成⑧步骤后，每天换水20％，该水为蓄水池配好的水，水盐度为3‰，温度27℃，PH8.0，氨氮为0，亚硝酸盐为0。加水时称取20g蛭弧菌冻干粉，化水均匀泼洒。常规饲喂管理，喂养的饲料为拌有10ppm蛭弧菌冻干粉并风干的饲料。每天4餐，每餐投喂跟幼虾摄食量，控制在1个小时吃完。维持7天。
⑩、完成步骤⑨后，每天换水30％，该海水为经过陶氏水处理器处理过的海水，水位1m，盐度为37‰，温度27℃，PH8.2，氨氮为0，亚硝酸盐为0，补充3ppmm的有益菌，按照常规养殖管理。
6、取样检测：经过治疗，总共剩余健康的幼虾4840尾，存活率为80.6％。再完整步骤⑩之后，每隔一个星期取一次幼虾产生的粪便，做PCR检测，共计检测5次，结果均为急性肝胰腺坏死病毒阴性，即可进入常规的养殖程序。
实施例2
1、养殖池消毒：养殖池为水泥池，长5m，宽5m，高1.5m，表层涂覆水产专有油漆，养殖池四周的左下角分别固定有微孔纳米增氧管，管的长度为1m。养殖池打满淡水，用含量为30％的漂粉精，按照50ppm即6.25kg的漂粉精化水，均匀泼洒到养殖池里，打开微孔纳米增氧管30分钟，使消毒剂分布均匀，浸泡24小时后排掉。经过4天后，再冲洗养殖池，进水60cm。养殖池所进的水为经过陶氏水处理器处理过的海水，水位1m，盐度为37‰，温度27℃，PH8.4，氨氮为0，亚硝酸盐为0.打开微孔纳米增氧管增氧，使溶氧保持在5mg/L以上。
2、幼虾选择：选择健康，体色透亮，四肢完整，体表光滑，肠道清晰，无感染病毒即SPF，肝脏健康的幼虾，体长4.5cm，体重0.6g，共计7000尾。放入准备好的养殖池，按照常规养殖管理，暂养15天。水温控制在27℃，每天喂4餐，饲喂量为体重的5％，饲料选择普通的南美白对虾饲料，每天换水20％，日常光照。
3、幼虾感染：幼虾在养殖池暂养15天后，摄食状态一切常规。开始投喂拌有急性肝胰腺坏死病毒液的饲料。该饲料为饲料、水、急性肝胰腺坏死病毒液按照100：5：1的比例均匀混合，在投喂前半个小时混合好。每天投喂4餐，饲喂量喂体重的4％，连续投喂5天，当幼虾死亡率达到10％时，停止投喂携带急性肝胰腺坏死病毒的饲料并进行PCR检测。
上述的急性肝胰腺坏事病毒液制备方法为：在爆发急性肝胰腺坏死病毒的养殖池进行取样，该养殖池患急性肝胰腺坏死病症状明显，经PCR检测证明为急性肝胰腺坏死病毒阳性。取0.1g爆发急性肝胰腺坏死症的对虾粪便放入匀浆器中，加入1mL的LPBS缓冲液并浴研磨均匀，然后将急性肝胰腺坏死病毒毒液置入1.5mL的EP管中3000r/min离心5min，取上清液200uL加入到1800uL的PBS缓冲液并用经高温消毒过的装有0.22uL孔目的过滤器过滤。取滤液500uL加入到49.5mL的PH7.4的PBS缓冲液混匀，共计50mL，4℃保存备用，使用时需要用PBS缓冲液稀释1000倍。
4、幼虾检测：投喂带肝胰腺坏死病毒的第2天开始，就可以观察到有个别幼虾出现感染症状，3天后开始出现死亡。每天认真观察对虾感染和发病情况，发现死虾及时捞出进行无害化处理。第5天早上，死亡率达到10％，收集死亡幼虾和活虾的粪便进行PCR检测，证明为急性肝胰腺坏死病毒阳性。
5、幼虾治疗：在确定幼虾已经感染急性肝胰腺坏死病毒后进行如下治疗方案：
①、立即停止喂料，排去70％的原池水，即排去70cm的原池水。往养殖池内慢慢加入提前备好的淡水，该淡水为盐度为0，温度为27℃，PH6.8，氨氮为0，亚硝酸盐为0。加入10公分，水位40cm，捞出继续死亡的幼虾并进行无害化处理。
②、6个小时后，再继续加入10cm的淡水，加淡水时称取50g小苏打粉和10g的蛭弧菌冻干粉，化水均匀泼洒。捞出死虾并进行无害化处理。
③、重复步骤②，直到水位加到1m。
④、6个小时后，再把水排出60％，即排出60cm，缓慢加淡水20cm，加水时称取100g小苏打粉和20g蛭弧菌冻干粉，化水均匀泼洒。捞出死虾并进行无害化处理。
⑤、6个小时后，缓慢加淡水20cm，加水时称取100g小苏打粉和20g蛭弧菌冻干粉，化水均匀泼洒。捞出死虾并进行无害化处理。
⑥、重复步骤⑤，直到水位加到1m。
⑦、以上处理步骤共计用时60个小时，处理后明显看到幼虾死亡数量明显下降。开始对幼虾进行喂食，喂养的饲料为拌有10ppm蛭弧菌冻干粉并风干的饲料。每天4餐，每餐投喂跟幼虾摄食量，控制在1个小时吃完。每天换水20％，加入淡水。加水时称取100g小苏打粉和20g蛭弧菌冻干粉，化水均匀泼洒。按照常规养殖进行管理，维持6天，每天捞出死亡幼虾并进行无害化处理。
⑧、6天后，排水20cm，再加入海水20cm，海水为经过陶氏水处理器处理过的海水。加水时称取20g蛭弧菌冻干粉，化水均匀泼洒。水位1m，盐度为37‰，温度27℃，PH8.4，氨氮为0，亚硝酸盐为0。另外再蓄水池配好一口水，水盐度为3‰，温度27℃，PH8.0，氨氮为0，亚硝酸盐为0。蓄水池的规格与养殖池一致。
⑨、完成⑧步骤后，每天换水20％，该水为蓄水池配好的水，水盐度为3‰，温度27℃，PH8.0，氨氮为0，亚硝酸盐为0。加水时称取20g蛭弧菌冻干粉，化水均匀泼洒。常规饲喂管理，喂养的饲料为拌有10ppm蛭弧菌冻干粉并风干的饲料。每天4餐，每餐投喂跟幼虾摄食量，控制在1个小时吃完。维持7天。
⑩、完成步骤⑨后，每天换水30％，该海水为经过陶氏水处理器处理过的海水，水位1m，盐度为37‰，温度27℃，PH8.4，氨氮为0，亚硝酸盐为0。补充3ppmm的有益菌，按照常规养殖管理。
6、取样检测：经过治疗，总共剩余健康的幼虾5465尾，存活率为78.1％。再完整步骤⑩之后，每隔一个星期取一次幼虾产生的粪便做PCR检测，共计检测5次，结果均为急性肝胰腺坏死病毒阴性，即可进入常规的养殖程序。
实施例3
1、养殖池消毒：养殖池为水泥池，长5m，宽5m，高1.5m，表层涂覆水产专有油漆，养殖池四周的左下角分别固定有微孔纳米增氧管，管的长度为1m。养殖池打满淡水，用含量为30％的漂粉精，按照50ppm即6.25kg的漂粉精化水，均匀泼洒到养殖池里，打开微孔纳米增氧管30分钟，使消毒剂分布均匀，浸泡24小时后排掉。经过4天后，再冲洗养殖池，进水60cm。养殖池所进的水为经过陶氏水处理器处理过的海水，水位1m，盐度为37‰，温度27℃，PH8..5，氨氮为0，亚硝酸盐为0.打开微孔纳米增氧管增氧，使溶氧保持在5mg/L以上。
2、幼虾选择：选择健康，体色透亮，四肢完整，体表光滑，肠道清晰，无感染病毒即SPF，肝脏健康的幼虾，体长5.5cm，体重1.3，共计7000尾。放入准备好的养殖池，按照常规养殖管理，暂养15天。水温控制在27℃，每天喂4餐，饲喂量为体重的5％，饲料选择普通的南美白对虾饲料，每天换水20％，日常光照。
3、幼虾感染：幼虾在养殖池暂养15天后，摄食状态一切常规。开始投喂拌有急性肝胰腺坏死病毒液的饲料。该饲料为饲料、水、急性肝胰腺坏死病毒液按照100：5：1的比例均匀混合，在投喂前半个小时混合好。每天投喂4餐，饲喂量喂体重的4％，连续投喂5天，当幼虾死亡率达到10％时，停止投喂携带急性肝胰腺坏死病毒的饲料并进行PCR检测。
上述的急性肝胰腺坏事病毒液制备方法为：在爆发急性肝胰腺坏死病毒的养殖池进行取样，该养殖池患急性肝胰腺坏死病症状明显，经PCR检测证明为急性肝胰腺坏死病毒阳性。取0.1g爆发急性肝胰腺坏死症的对虾粪便放入匀浆器中，加入1mL的LPBS缓冲液并浴研磨均匀，然后将急性肝胰腺坏死病毒毒液置入1.5mL的EP管中3000r/min离心5min，取上清液200uL加入到1800uL的PBS缓冲液并用经高温消毒过的装有0.22uL孔目的过滤器过滤。取滤液500uL加入到49.5mL的PH7.4的PBS缓冲液混匀，共计50mL，4℃保存备用，使用时需要用PBS缓冲液稀释1000倍。
4、幼虾检测：投喂带肝胰腺坏死病毒的第2天开始，就可以观察到有个别幼虾出现感染症状，3天后开始出现死亡。每天认真观察对虾感染和发病情况，发现死虾及时捞出进行无害化处理。第5天早上，死亡率达到10％，收集死亡幼虾和活虾的粪便进行PCR检测，证明为急性肝胰腺坏死病毒阳性。
5、幼虾治疗：在确定幼虾已经感染急性肝胰腺坏死病毒后进行如下治疗方案：
①、立即停止喂料，排去70％的原池水，即排去70cm的原池水。往养殖池内慢慢加入提前备好的淡水，该淡水为盐度为0，温度为27℃，PH6.8，氨氮为0，亚硝酸盐为0。加入10公分，水位40cm，捞出继续死亡的幼虾并进行无害化处理。
②、6个小时后，再继续加入10cm的淡水，加淡水时称取50g小苏打粉和10g的蛭弧菌冻干粉，化水均匀泼洒。捞出死虾并进行无害化处理。
③、重复步骤②，直到水位加到1m。
④、6个小时后，再把水排出60％，即排出60cm，缓慢加淡水20cm，加水时称取100g小苏打粉和20g蛭弧菌冻干粉，化水均匀泼洒。捞出死虾并进行无害化处理。
⑤、6个小时后，缓慢加淡水20cm，加水时称取100g小苏打粉和20g蛭弧菌冻干粉，化水均匀泼洒。捞出死虾并进行无害化处理。
⑥、重复步骤⑤，直到水位加到1m。
⑦、以上处理步骤共计用时60个小时，处理后明显看到幼虾死亡数量明显下降。开始对幼虾进行喂食，喂养的饲料为拌有10ppm蛭弧菌冻干粉并风干的饲料。每天4餐，每餐投喂跟幼虾摄食量，控制在1个小时吃完。每天换水20％，加入淡水。加水时称取100g小苏打粉和20g蛭弧菌冻干粉，化水均匀泼洒。按照常规养殖进行管理，维持6天，每天捞出死亡幼虾并进行无害化处理。
⑧、6天后，排水20cm，再加入海水20cm，海水为经过陶氏水处理器处理过的海水。加水时称取20g蛭弧菌冻干粉，化水均匀泼洒。水位1m，盐度为37‰，温度27℃，PH8.5，氨氮为0，亚硝酸盐为0。另外再蓄水池配好一口水，水盐度为3‰，温度27℃，PH8.0，氨氮为0，亚硝酸盐为0。蓄水池的规格与养殖池一致。
⑨、完成⑧步骤后，每天换水20％，该水为蓄水池配好的水，水盐度为3‰，温度27℃，PH8.0，氨氮为0，亚硝酸盐为0。加水时称取20g蛭弧菌冻干粉，化水均匀泼洒。常规饲喂管理，喂养的饲料为拌有10ppm蛭弧菌冻干粉并风干的饲料。每天4餐，每餐投喂跟幼虾摄食量，控制在1个小时吃完。维持7天。
⑩、完成步骤⑨后，每天换水30％，该海水为经过陶氏水处理器处理过的海水，水位1m，盐度为37‰，温度27℃，PH8.5，氨氮为0，亚硝酸盐为0。补充3ppmm的有益菌，按照常规养殖管理。
6、取样检测：经过治疗，总共剩余健康的幼虾5271尾，存活率为75.3％。再完整步骤⑩之后，每隔一个星期取一次幼虾产生的粪便做PCR检测，共计检测5次，结果均为急性肝胰腺坏死病毒阴性，即可进入常规的养殖程序。
以上所述，仅为本发明专利的具体实施方式，但本发明专利的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明专利所公开的范围内，根据本发明专利的技术方案及其构思加以等同替换或改变，都属于本发明专利的保护范围。
Claims (4)
1.南美白对虾养殖前期去除急性肝胰腺坏死病毒的方法，其特征在于包括以下步骤：
步骤A：养殖池消毒：养殖池打满淡水，用含量为30％的漂粉精按照50ppm的漂粉精化水，均匀泼洒到养殖池里，浸泡24小时后排掉；4天后再冲洗养殖池，接着对养殖池进行进水操作，养殖池所进的水为经过陶氏水处理器处理过的海水；
步骤B：幼虾选择：选择健康的幼虾放入准备好的养殖池，按照常规养殖管理暂养15天，水温控制在27℃，每天喂4餐，饲喂量为体重的5％，饲料选择常规南美白对虾饲料，每天换水20％，日常光照；
步骤C：幼虾感染：幼虾在养殖池暂养15天后摄食状态一切常规，接着开始投喂拌有急性肝胰腺坏死病毒液的饲料，每天投喂4餐，饲喂量喂体重的4％连续投喂5天；
步骤D：幼虾检测：持续投喂带肝胰腺坏死病毒饲料直至幼虾死亡率达到10％时，收集死亡幼虾和活虾的粪便进行PCR检测，证明为急性肝胰腺坏死病毒阳性；
步骤E：幼虾治疗：在确定幼虾已经感染急性肝胰腺坏死病毒后进行治疗，包括停止喂食淡化水体、多次无害化处理、喂食和无害化处理、水体PH值调节和蓄水池制备、优化水体和喂食、水体换水处理；
步骤F：取样检测：经过治疗，存活率为75.3％-80.6％，重复步骤E后，每隔一个星期取一次幼虾产生的粪便做PCR检测，当PCR检测5次后的结果均为急性肝胰腺坏死病毒阴性时南美白对虾即可进入常规养殖程序；
其中，所述步骤E中停止喂食淡化水体包括以下步骤，停止喂料并排去70％的原池水，往养殖池内慢慢加入提前备好的10％原池水量的淡水，该淡水为盐度为0，温度为27℃，PH6.8，氨氮为0，亚硝酸盐为0，加入淡水后水位在40cm，捞出继续死亡的幼虾并进行无害化处理；
所述步骤E中多次无害化处理包括以下步骤，步骤1：停止喂食淡化水体的6个小时后，继续加入10cm的淡水，加淡水时称取50g小苏打粉和10g的蛭弧菌冻干粉化水均匀泼洒，捞出死虾并进行无害化处理；步骤2：重复上述步骤1 直到水位加到1m；步骤3：静置6个小时后，把养殖池内的水排出60％，即排出60cm，缓慢加淡水20cm，加水时称取100g小苏打粉和20g蛭弧菌冻干粉化水均匀泼洒，并捞出死虾并进行无害化处理；步骤4：静置6个小时后，缓慢加淡水20cm，加水时称取100g小苏打粉和20g蛭弧菌冻干粉化水均匀泼洒，并捞出死虾并进行无害化处理；步骤5：重复上述步骤4直到水位加到1m；
所述步骤E中喂食和无害化处理在停止喂食淡化水体和多次无害化处理共耗时60小时后，对幼虾进行喂食，喂养的饲料为拌有10ppm蛭弧菌冻干粉并风干的饲料，每天4餐，每餐投喂幼虾摄食量控制在1个小时吃完；每天换水20％并加入淡水，加水时称取100g小苏打粉和20g蛭弧菌冻干粉，化水均匀泼洒，按照常规养殖进行管理维持6天，每天捞出死亡幼虾并进行无害化处理；
所述步骤E中水体PH值调节和蓄水池制备包括排水20cm并加入海水20cm，海水为经过陶氏水处理器处理过的海水，加水时称取20g蛭弧菌冻干粉化水均匀泼洒，此时水体水位1m，盐度为37‰，温度27℃，PH8.2-8.5，氨氮为0，亚硝酸盐为0；另外再配置蓄水池备用，蓄水池的水体盐度为3‰，温度27℃，PH8.0，氨氮为0，亚硝酸盐为0，且蓄水池的规格与养殖池规格一致；
所述步骤E中优化水体和喂食包括每天换水20％，该水为蓄水池中的水，加水时称取20g蛭弧菌冻干粉化水均匀泼洒，常规饲喂管理且喂养的饲料为拌有10ppm蛭弧菌冻干粉并风干的饲料，养殖前期每天4餐，每餐投喂幼虾摄食量，控制在1个小时吃完并维持7天；
所述步骤E中水体换水处理包括每天换海水30％，该海水为经过陶氏水处理器处理过的海水，水体水位1m，盐度为37‰，温度27℃，PH8.2-8.5，氨氮为0，亚硝酸盐为0；换水过程中补充3ppmm的有益菌并按照常规养殖管理。
2.如权利要求1所述的南美白对虾养殖前期去除急性肝胰腺坏死病毒的方法，其特征在于：所述步骤A中养殖池为水泥池，长5m宽5m高1.5m，表层涂覆水产专有油漆，养殖池四周的左下角分别固定有微孔纳米增氧管，管的长度为1m；养殖池进入经过陶氏水处理器处理过的海水后水位1m，盐度为37‰，温度27℃，PH8.2-8.5，氨氮为0，亚硝酸盐为0，打开微孔纳米增氧管增氧确保溶氧保持在5mg/L以上。
3.如权利要求1所述的南美白对虾养殖前期去除急性肝胰腺坏死病毒的方法，其特征在于：所述步骤C中拌有急性肝胰腺坏死病毒液的饲料按照常规饲料、水、急性肝胰腺坏死病毒液按照100：5：1的比例均匀混合，且在投喂前半个小时混合好。
4.如权利要求3所述的南美白对虾养殖前期去除急性肝胰腺坏死病毒的方法，其特征在于：所述急性肝胰腺坏死病毒液制备方法为，在爆发急性肝胰腺坏死病的对虾的养殖池进行取样，该养殖池患急性肝胰腺坏死病症状明显，经PCR检测证明为急性肝胰腺坏死病毒阳性，取0.1g爆发急性肝胰腺坏死症的对虾粪便放入匀浆器中，加入1mL的LPBS缓冲液并浴研磨均匀，然后将急性肝胰腺坏死病毒液置入1.5mL的EP管中保持3000r/min且离心5min，取上清液200uL加入到1800uL的PBS缓冲液，用经高温消毒过的装有0.22uL孔目的过滤器过滤；取滤液500uL加入到49.5mL且PH7.4的PBS缓冲液混匀，温度控制在4℃保存备用，后续使用时需要用PBS缓冲液稀释1000倍。
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