CN102550459B - 一种用于幼苗培育的育苗水体微生物群落调控方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种用于幼苗培育的小水体微生物群落调控方法，本方法适用于对虾、东风螺的海水经济动物的多性状家系选育过程中每一对亲本家系后代单独培育的小水体，小水体指容积为0.5～1m³的玻璃钢桶，调控方法是指，在小水体中主要通过控制水体的铵氮、亚硝氮、总碱度、氧化还原电位ORP以及可溶性的蛋白质类、氨基酸、糖类、维生素、正磷酸盐这些微生物营养因素来实现，本方法针对小水体育苗水质的理化特性，利用外源微生物及育苗水体的发酵培养基及其相关操作程序和技术，人为改变海水的理化因子，优势微生物种群和数量，构建防病、有利于虾苗生长，提高成活率的育苗水体。

Description

一种用于幼苗培育的育苗水体微生物群落调控方法

技术领域

本发明涉及一种用于幼苗培育的育苗水体微生物群落调控方法，具体涉及水产无脊椎动物家系选育中用于幼苗培育的育苗水体微生物群落调控技术，属于海水经济动物育苗技术领域。 

背景技术

南美白对虾作为南方主要养殖品种，南方每年需要生产4000亿-5000亿以上的虾苗。是对虾产业的关键支柱之一。同样东风螺苗需要量达到20亿粒以上。 

自20世纪30-40年代，虾苗培育成功，沿用的技术不断进步，剪（烫）眼柄，人工培育亲本，等技术不断开发，而这些技术，绝大部分来自于生产第一线的技术员。东风螺苗是在1980s，才开始全人工培育，其技术发展刚起步。近十多年来，随着沿海养殖的进行，水域环境改变，水质恶化，病原生物积累，对虾育苗变得困难了。 

 现代海水苗种培育产业分工已经十分细致，从亲本孵化到产卵，进一步进入无节幼体或面盘幼体期，为一个阶段，而幼体到幼苗（1cm大小）为一个阶段，可以由不同苗场操作。目前无节幼体或面盘幼体到幼苗制作于室内池，池大小为20-30立方，一般每池放苗无节幼体400-1000万尾（20-50万尾/立方）或面盘幼体100万尾。如虾苗培育技术过程包括：准备池子，作水，打底，入无节幼体，无节幼体期1-2d，蚤状幼体-投浮游硅藻1-2d，糠虾期-投开口饵料和浮游硅藻，仔虾期-饵料投喂。由于密度大，水体小，光照不足（1000；Lux；多数在200-500），温度高（无节-糠虾29-31，后期31-33），使苗池水体急剧变化，系统及其不稳定，由此带来高风险。 

 水体不携带病原问题。其中作为育苗风险的最大问题，还是病毒和细菌病原（如WSSV、TSV、IMNV、致病弧菌等）传入育苗体系中，而幼体对多数病原是敏感的。通过超滤-消毒处理使多数病毒被阻挡在体系外，但是，幼体体内携带的弧菌病原，早期投入藻类携带的弧菌，均将导致育苗过程的病害。 

 在幼体的早期培育（如无节幼体到糠虾幼体，东风螺面盘幼体期），残藻带来水体的污染，加上幼体开口后肠道生态系统重新构建，开口饵料摄入后肠道消化功能较差，体质减弱，易于感染病菌，常常导致开口时期的大量死亡。 

中后期水质败坏严重。苗池育苗，换水量少，早期（10d）基本不换水，投入的饵料均含高蛋白（不低于53%），富含氨基酸、糖类，各种维生素等高营养饵料，细菌种群可以爆发性生长，再急剧降低浓度，从而带来水质理化因素变化，如碱度、pH、氧化还原电位、含氮无机小分子物、磷酸盐等，使水体不适合于生物生存生长，进而使幼体或幼苗生活残余物不被溶解和分解，水体出现大量块状物，或者其他生物生长，出现粘性物。 

由此，导致幼苗死亡率高居不下，如对虾，除溞状幼体Z2期开始，开口摄食导致死亡高峰，糠虾幼体，也有高的死亡率，当进入仔虾期，多部分苗池已经存活率低于50%。 

 目前，有一些技术的提出，对解决以上问题提供了新的途径。如生态育苗，利用室外大池对后期苗继续培育，但是，剧烈的条件变化和室外相对恶劣的培育条件带来的高死亡率问题。也有人采用清水育苗技术，严格水处理，尽量控制和减少微生物的干扰，由于生态系统单一脆弱，这往往带来高的风险。 

专利（申请号：98110092.9）是虾苗育苗的设施控制系统，专利（申请号： 03145558.1）涉及一种虾苗培育水过滤，臭氧处理方法；专利（申请号：201010186226.7）涉及切断病毒WSSV和TSV传染途径的育苗方法；专利（申请号：200810158016.X）涉及强对虾苗种的免疫力的β- 葡聚糖和壳聚糖构成的药物浸浴液，营养强化的人工配合饲料培育虾苗；专利（申请号：200810198289.7）提供一种工厂化育苗设施设备和循环养殖模式；专利（申请号： 02135494.4）是一种消毒处理，卵子脱毒，代替卤虫的无WSSV对虾苗种生产技术；专利（申请号201010594085.2）利用消毒封闭式设施，生物活菌，控制饲料的虾苗生产技术；专利（申请号201110033585.3）培育轮虫为主要饵料的虾苗培育技术。以上所申报的专利技术不涉及本文申请的发明技术育苗水体发酵并维持的内容。 

目前水产育种如对虾、东风螺多采用多性状家系选育，生产培育中，多数要求每一对亲本的单独培育后代，苗种数量少，水体更难控制，变化起伏大，难以调理，幼体入池后1-2d中存活率低，开口期高死亡率，糠虾期饵料营养不足导致种苗质量差，后期水质易于恶化等问题。相对于目前广泛采用的工厂化培育幼苗技术，育苗水体的控制犹位困难，即使成功，也影响苗的后期生长，未见针对这一问题的同类技术。 

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于幼苗培育的育苗水体微生物群落调控方法，具体提供一种水产无脊椎动物家系选育中用于幼苗培育的育苗水体微生物群落调控技术。 

为了解决上述问题，本发明所采用的技术方案是： 

一种用于幼苗培育的育苗水体微生物群落调控方法，本方法适用于对虾、东风螺的多性状家系选育过程中每一对亲本家系后代单独培育的育苗水体，育苗水体是容积为0.5～1m³的玻璃钢桶，调控方法是指，在育苗水体中主要通过控制水体的铵氮、亚硝氮、总碱度、氧化还原电位ORP以及可溶性的蛋白质类、氨基酸、糖类、维生素、正磷酸盐这些微生物营养因素来实现，具体方法如下：

（1）在容积0.5～1m³的育苗水体中，用碳酸氢钠或其他重碳酸盐、碳酸盐及氢氧化物调整总碱度在2-3 mg/L，或通过换水保持育苗水体总碱度在2-3mg/L，同时水体pH在7.5-9.0这个范围；

（2）步骤（1）的调整方法每次调整总碱度的幅度为24h不超过0.1mg/L，以48h的间隔连续调整；

（3）育苗水体的氧化还原电位ORP，利用维生素C或其磷脂衍生物调整育苗水体较高的氧化还原电位ORP，利用碳酸氢钠或其他重碳酸盐、碳酸盐及氢氧化物调整较低的氧化还原电位ORP，保持育苗水体的氧化还原电位ORP在-10～+50mv之间；

（4）以可溶性鱼粉蛋白胨、酵母膏、复合氨基酸、葡萄糖保持育苗水体中可溶性蛋白为1～20mg/L，复合氨基酸浓度为0.1～1.2mg/L， 葡萄糖浓度为0.1～0.5mg/L，以磷酸二氢钠保持育苗水体正磷酸盐为0.1～0.5mg/L，以5～7d间隔定期投放复合B族维生素，投放量为50～100mg/L；

（5）在硅藻培养液，培养饵料硅藻，收集浓缩藻类，并通过投放抗生素，清除杂菌，再稀释培养，在硅藻培养液中，加入光合细菌制剂，使光合细菌制剂终浓度达到10⁴～10⁵cfu/mL，并保持24-48h；

（6）在步骤（1）~（5）的基础上，当硅藻培养液中硅藻在进入对数生长期前8～12h，投放入步骤（4）的育苗水体，水体内硅藻的终浓度为10³～10⁴个/mL；

（7）在满足步骤（1）~（6）的基础上，开始投放对虾或东风螺的幼体，进行培育，保持300-500Lx的光照；

（8）在满足步骤（1）~（7）的基础上，当对虾或东风螺的幼体开口摄食人工饵料时，投放枯草芽孢杆菌制剂，在24h内使育苗水体内枯草芽孢杆菌终浓度为10⁵～10⁶cfu/mL，并长期保持育苗水体内枯草芽孢杆菌终浓度不低于10⁵cfu/mL；

（9）通过在育苗水体中加入氨基酸发泡剂，通气和祛除水面泡沫，或通过换水，维持育苗水体好氧异养菌浓度不高于10⁶cfu/mL；

（10）培育幼体后期，投放0.05～0.1%β-环糊精或0.1～0.2%壳聚糖于育苗水体中，强化残余物分解，控制育苗水体铵氮NH₄-N不超过0.5mg/L；

（11）培育幼体后期，通过交换海水使育苗水体亚硝氮NO₂-N为0.1mg/L；用于交换海水必须通过步骤（6）的处理，交换的比例不超过育苗水体的15%/d。

上述步骤（5）中所述的光合细菌制剂中的光合细菌是指红假单胞菌。步骤（6）所述的硅藻是指骨条藻、角毛藻的组合，步骤（9）所述的氨基酸发泡剂是指月桂酰基谷氨酸钠或酰化胶原肽；投放的浮游藻类、各种饵料必须做灭菌处理。 

在生产实际中，已经证实使用本技术至少可以提高虾苗生产的成活率20-30%。 

本发明针对育苗水体育苗水质的理化特性，利用外源微生物及育苗水体的发酵培养基及其相关操作程序和技术，人为改变海水的理化因子，优势微生物种群和数量，构建防病、有利于虾苗生长，提高成活率的育苗水体。 

具体实施方式

下面通过实施例对本发明做进一步详细说明，这些实施例仅用来说明本发明，并不限制本发明的范围。 

实施例1 

虾苗培育

用80目筛绢，60-80cm沙层（粗%。细%，中%）过滤海水，放置时间7d清除浮游动物及其休眠卵（二次萌发，敌百虫，0.75mg/L）。消毒水体，杀灭菌体、真菌。减少有机物和其他有害物质(ClO₂，1mg/L)；

用碳酸氢钠调整水体总碱度在2-3 mg/L，ORP不低于-10mv，投放可溶性蛋白胨、氨基酸、葡萄糖和磷酸二氢钠分别达到1～2mg/L 、0.1～0.2mg/L 、0.1～0.2mg/L 、0.1～0.2mg/L，加入适量复合B族维生素；

投放饵料硅藻、光合细菌、少量芽孢杆菌，使水体终浓度10³～10⁴个/mL，10⁴～10⁵cfu/mL，10³～10⁴ cfu/mL；

0.5m³水体投入单一亲本的凡纳滨对虾无节幼体，密度不超过20万/m³，光照200-500Lx，逐步增加光照，到仔虾为2000Lx，盐度22‰～26‰，充气量1％，使幼体不下沉为度。充气量逐步加大。幼体进入育苗池的水温为28.5℃，5个h升高到30℃，糠虾幼体M2期开始降至29℃，仔虾P2期降至28℃。无节幼体变态为蚤状幼体时，增加骨条藻达到10⁴～10⁵个/mL，Z2开始辅以高效微囊饵料，投喂配合饲料6次/d，每次0.5-1.2g/m³。Z1以200目的筛绢网过滤；Z2以150目的筛绢网过滤。Z3以120目筛绢过滤，投喂配合饲料和卤虫无节幼体，糠虾幼体投喂微囊饵料、虾片及适量轮虫。P1-P12投喂配合饲料6次/d，和卤虫无节幼体，微粒饵料二餐，以100目的筛绢网过滤，逐步过度到用40目的筛绢过滤，然后用120目的筛绢滤掉颗粒较小的饲料；

当育苗水体幼体开口摄食人工饵料时，投放枯草芽孢杆菌制剂，在24h内使水体终浓度为10⁶～10⁷cfu/mL，并长期保持育苗水体枯草芽孢杆菌不低于10⁶cfu/mL。通过加入氨基酸发泡剂（如月桂酰基谷氨酸钠、，酰化胶原肽），通气和祛除水面泡沫，或通过换水，维持水体好氧异养菌浓度不高于10⁶cfu/mL；

培育幼体后期，投放0.05～0.1%β-环糊精或0.1～0.2%壳聚糖于育苗水体，强化残余物分解，控制水体铵氮（NH₄-N）不超过0.5mg/ L；

培育幼体后期，通过交换海水使育苗水体亚硝氮(NO₂-N)不超过为0.1mg/L。

实施例2 

东风螺苗的培育

用80目筛绢，60-80cm沙层（粗%。细%，中%）过滤海水，放置时间7d清除浮游动物及其休眠卵（二次萌发，敌百虫，0.75mg/L）。消毒水体，杀灭菌体、真菌。减少有机物和其他有害物质(ClO₂，1mg/L)；

用碳酸氢钠调整水体总碱度在2-3 mg/L，ORP不低于-10mv，投放可溶性蛋白胨、氨基酸、葡萄糖和磷酸二氢钠分别达到1～2mg/L 、0.1～0.2mg/L 、0.1～0.2mg/L 、0.1～0.2mg/L，加入适量复合B族维生素；

投放饵料硅藻、光合细菌、少量芽孢杆菌，使水体终浓度10⁴～10⁵个/mL，10⁴～10⁵cfu/mL，10³～10⁴ cfu/mL；

东风螺苗的幼虫的分期：分别是早期面盘幼体阶段、后期面盘幼体、具变态能力的面盘幼体、变态后的稚螺。目前无节幼体或面盘幼体到幼苗制作于室内池，池大小为20-30m³，一般投放面盘幼体8万～10万尾/m³。亲本选育时使用0.5m³水体，每一个亲本单独所产卵袋培育，当面盘幼虫达到布幼密度时，将卵囊移至另一个育苗池继续孵化；

幼体入池时，应先消毒，将幼体移入手抄网(200目筛绢)，在200ppm福尔马林溶液或20ppm聚维酮碘溶液中浸泡30-60s，取出用干净海水冲洗，然后移入池中；

方斑东风螺卵囊孵化和幼虫发育适宜水温27~30℃;适宜盐度30~38，其适宜和最适盐度下限分别为30和32。光照强度：300～500Lx，连续充气；pH值：7.9～8.5；

前4天不换水，以添加藻水为主。东风螺卵囊孵出的面盘幼虫就开始摄食亚心形扁藻和角毛藻。维持水中藻类浓度1.5～2.0×10⁴个/mL；4天后开始换水，每天换水量为50%，逐步到幼体培育日换水量200%。浮游期前期用100目筛网，根据幼体大小更换不同的网目。后期幼虫较大，使用80目网兜，变态后改用60目网进行换水；

东风螺幼虫阶段营滤食性摄食方式。方斑东风螺浮游期为植食性，以活藻为主。主要品种有巴夫藻、扁藻、角毛藻、金藻。投喂的饵料以处于指数期的活藻为佳，老化或被原生动物、细菌污染的饵料不能投喂；

幼虫变态后改投鱼肉、蟹浆；蟹浆和螺旋藻粉用200目网揉搓后投喂。投饵量以2h摄食完为宜，此时水中藻类浓度维持在2～2.5×10⁴个/mL；

当育苗水体幼体开口摄食人工饵料时，投放枯草芽孢杆菌制剂，在24h内使水体终浓度为10⁶～10⁷cfu/mL，并长期保持育苗水体枯草芽孢杆菌不低于10⁶cfu/mL。通过加入氨基酸发泡剂（如月桂酰基谷氨酸钠、酰化胶原肽），通气和祛除水面泡沫，或通过换水，维持水体好氧异养菌浓度不高于10⁶cfu/mL；

培育幼体后期，投放0.05～0.1%β-环糊精或0.1～0.2%壳聚糖于育苗水体，强化残余物分解，控制水体铵氮（NH₄-N）不超过0.5mg/L。每日中午配合投喂小球藻5.0×10⁴cells.ml-1；

培育幼体后期，通过交换海水使育苗水体亚硝氮(NO₂-N)不超过为0.1mg/L；

幼虫变态期，13天后大部分幼虫变态为稚螺，出现足与吸管，开始营底栖生活。此时将幼虫收集转移到稚螺池进行培育。幼虫食性由滤食浮游藻类转化为摄食鱼、虾、蟹肉。仍继续投喂活藻，浓度维持在5万～10万细胞/毫升，再投喂少量蟹肉和蟹浆。稚螺有爬壁习性，在池内壁贴海绵10厘米至水位线，每天淋湿海绵3次，防止稚螺干燥死亡；

按照上述方法，稚螺产量提高25%～35%，品质优良。

Claims (4)

1. 一种用于幼苗培育的育苗水体微生物群落调控方法，其特征在于：本方法适用于对虾、东风螺的多性状家系选育过程中每一对亲本家系后代单独培育的育苗水体，育苗水体是容积为0.5～1m³的玻璃钢桶，调控方法是指，在育苗水体中主要通过控制水体的铵氮、亚硝氮、总碱度、氧化还原电位ORP以及可溶性的蛋白质类、氨基酸、糖类、维生素、正磷酸盐这些微生物营养因素来实现，具体方法如下：

（1）在容积0.5～1m³的育苗水体中，用碳酸氢钠或其他重碳酸盐、碳酸盐及氢氧化物调整总碱度在2-3 mg/L，或通过换水保持育苗水体总碱度在2-3mg/L，同时水体pH在7.5-9.0这个范围；

（2）步骤（1）的调整方法每次调整总碱度的幅度为24h不超过0.1mg/L，以48h的间隔连续调整；

（3）育苗水体的氧化还原电位ORP，利用维生素C或其磷脂衍生物调整育苗水体较高的氧化还原电位ORP，利用碳酸氢钠或其他重碳酸盐、碳酸盐及氢氧化物调整较低的氧化还原电位ORP，保持育苗水体的氧化还原电位ORP在-10～+50mv之间；

（4）以可溶性鱼粉蛋白胨、酵母膏、复合氨基酸、葡萄糖保持育苗水体中可溶性蛋白为1～20mg/L，复合氨基酸浓度为0.1～1.2mg/L， 葡萄糖浓度为0.1～0.5mg/L，以磷酸二氢钠保持育苗水体正磷酸盐为0.1～0.5mg/L，以5～7d间隔定期投放复合B族维生素，投放量为50～100mg/L；

（5）在硅藻培养液，培养饵料硅藻，收集浓缩藻类，并通过投放抗生素，清除杂菌，再稀释培养，在硅藻培养液中，加入光合细菌制剂，使光合细菌制剂终浓度达到10⁴～10⁵cfu/mL，并保持24-48h；

（6）在步骤（1）~（5）的基础上，当硅藻培养液中硅藻在进入对数生长期前8～12h，投放入步骤（4）的育苗水体，水体内硅藻的终浓度为10³～10⁴个/mL；

（7）在满足步骤（1）~（6）的基础上，开始投放对虾或东风螺的幼体，进行培育，保持300-500Lx的光照；

（8）在满足步骤（1）~（7）的基础上，当对虾或东风螺的幼体开口摄食人工饵料时，投放枯草芽孢杆菌制剂，在24h内使育苗水体内枯草芽孢杆菌终浓度为10⁵～10⁶cfu/mL，并长期保持育苗水体内枯草芽孢杆菌终浓度不低于10⁵cfu/mL；

（9）通过在育苗水体中加入氨基酸发泡剂，通气和祛除水面泡沫，或通过换水，维持育苗水体好氧异养菌浓度不高于10⁶cfu/mL；

（10）培育幼体后期，投放0.05～0.1%β-环糊精或0.1～0.2%壳聚糖于育苗水体中，强化残余物分解，控制育苗水体铵氮NH4-N不超过0.5mg/L；

（11）培育幼体后期，通过交换海水使育苗水体亚硝氮NO₂-N为0.1mg/L；用于交换海水必须通过步骤（6）的处理，交换的比例不超过育苗水体的15%/d。

2. 根据权利要求1所述的一种用于幼苗培育的育苗水体微生物群落调控方法，其特征在于：步骤（5）中所述的光合细菌制剂中的光合细菌是指红假单胞菌。

3. 根据权利要求1所述的一种用于幼苗培育的育苗水体微生物群落调控方法，其特征在于：步骤（6）中所述的硅藻是指骨条藻、角毛藻的组合。

4. 根据权利要求1所述的一种用于幼苗培育的育苗水体微生物群落调控方法，其特征在于：步骤（9）中所述的氨基酸发泡剂是指月桂酰基谷氨酸钠或酰化胶原肽。