CN112730826A - 一种人磷酸化血管扩张刺激磷蛋白磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒及其检测方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种人磷酸化血管扩张刺激磷蛋白磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒及其检测方法和应用，其中，所述试剂盒包括磁珠包被的人磷酸化血管扩张刺激磷蛋白单克隆抗体包被物、碱性磷酸酶标记的人磷酸化血管扩张刺激磷蛋白单克隆抗体酶结合物、含PGE1的裂解剂1和含PGE1+ADP的裂解剂2。本发明的试剂盒以磁微粒子作为免疫反应的固相，利用化学发光免疫分析方法与化学发光类测定仪配合，用于测定人体样本中的人磷酸化血管扩张刺激磷蛋白含量，与目前专用于科研的ELISA试剂盒相比，检测范围宽，制备工艺简单价格低廉，灵敏度高，重复性好，线性宽，性能超过目前科研的ELISA试剂盒产品。
Description
技术领域
本发明涉及一种人磷酸化血管扩张刺激磷蛋白磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒及其检测方法和应用，属于免疫检测分析领域。
背景技术
人磷酸化血管扩张刺激磷蛋白(VASP)属于Ena/VASP蛋白家族，是一种肌动蛋白调节蛋白。它能直接或间接与F-actin、G-actin结合，还能与某些黏附斑蛋白如Vinculin、Zyxin 等直接作用。VASP蛋白由380个氨基酸做成，含有3个磷酸化位点，两个为丝氨酸位点(Ser157、Ser239)，一个为苏氨酸位点(Thr278)，这3个位点在体内外直接收蛋白激酶A(PKA)、蛋白激酶G(PKG)和蛋白激酶C(PKC)调控。Ena/VASP家族在肌动蛋白细胞骨架重塑中起着重要作用。VASP能够直接与单体或者肌动蛋白丝结合，在盖帽蛋白存在时，可在体外促进肌动蛋白丝成核、成束和延长。磷酸化能够减少VASP在体外促进成核的能力，也能减少VASP与肌动蛋白单体相互作用。
氯吡格雷是抑制血小板聚集的药物。用于预防和治疗因血小板高聚集引起的心、脑及其他动脉循环障碍疾病，如近期发作的脑卒中、心肌梗死和确诊的外周动脉疾病。氯吡格雷可特异性阻断腺苷二磷酸与血小板膜上P2Y12受体结合而抑制血小板活化，P2Y12受体与腺苷二磷酸结合后，腺苷酸环化酶生成增多，进而抑制环磷酸腺苷的合成，而环磷酸腺苷促进VASP的磷酸化从而抑制血小板的活化。P2Y12受体被抑制则VASP磷酸化，表现为血小板抑制；去磷酸化则血小板恢复活性。VASP可逆磷酸化是P2Y12活化途径的关键环节，作为血小板残余P2Y12受体的特异性细胞内标志物更适用于观察氯吡格雷药效。VASP磷酸化分析是针对P2Y12通路的提议性法检测方法，量化检测VASP的磷酸化水平可特异性地评价氯吡格雷对血小板的抑制程度，且比其他方法具有更好的稳定性。
人磷酸化血管扩张刺激磷酸蛋白(VASP)是一种血小板胞内蛋白，是前列腺素E1受体激活后的下游信号通路产物。血小板ADP受体(P2Y12)激活后，抑制其磷酸化；当存在 ADP受体拮抗剂时，VASP磷酸化产物增多，进而抑制血小板的活化。
目前临床缺乏人磷酸化血管扩张刺激磷蛋白的快速诊断试剂盒。已有的基础和临床研究均是利用生物科技公司提供的专用于科研的试剂盒检测(不能用于临床诊断)。这些试剂盒多是采用酶联免疫吸附技术，检测时间相对较长(从标本提取到酶标仪读取吸光度值，再到定量计算需要5-8h)，且成本高昂。理想的反映器官功能的标记物应兼顾敏感性和特异性，具有准确、简便、价廉、无创等特点。因此，采用现代科学技术，开发联合指标集内各个指标的临床诊断试剂盒，具有重大的临床意义及经济意义，且具有原始创新性。
发明内容
针对现有技术存在的上述问题，本发明的目的是获得一种人磷酸化血管扩张刺激磷蛋白磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒及其检测方法和应用，避免了酶联免疫试剂盒存在的线性范围窄、操作繁琐等缺点，且解决了灵敏度低、稳定性差、成本高等缺陷。
为实现上述发明目的之一，本发明采用的人磷酸化血管扩张刺激磷蛋白磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒的技术方案如下：
所述试剂盒包括磁珠包被的人磷酸化血管扩张刺激磷蛋白单克隆抗体包被物、碱性磷酸酶标记的人磷酸化血管扩张刺激磷蛋白单克隆抗体酶结合物、含PGE1的裂解剂1和含 PGE1+ADP的裂解剂2。
优选的，所述磁珠包被的人磷酸化血管扩张刺激磷蛋白单克隆抗体包被物为表面包裹有人磷酸化血管扩张刺激磷蛋白单克隆抗体包被物的超顺磁性纳米材料，粒径为10～30nm，所述磁珠包被的人磷酸化血管扩张刺激磷蛋白单克隆抗体包被物悬浮于磁微粒包被物缓冲液中形成磁微粒悬浮液，浓度为0.1mg/mL～1.0mg/mL。更优选的，磁微粒浓度为0.5mg/mL。
其中，磁微粒包被物缓冲液为20mM～200mM Tris(三羟甲基氨基甲烷)缓冲液，PH为6.5～8.0。作为一种优选的实施方式，磁微粒包被物缓冲液浓度为100mM，PH为7.0。
优选的，所述碱性磷酸酶标记的人磷酸化血管扩张刺激磷蛋白单克隆抗体酶结合物为碱性磷酸酶和人磷酸化血管扩张刺激磷蛋白抗体的偶联物，其中人磷酸化血管扩张刺激磷蛋白抗体为小鼠单克隆抗体，所述碱性磷酸酶标记的人磷酸化血管扩张刺激磷蛋白单克隆抗体酶结合物采用磁微粒包被物缓冲液稀释。检测时，蛋白单克隆抗体酶结合物稀释于酶标记物缓冲液中，稀释比例为1:400～1:2000，优选的稀释比例为1:1000。
其中，酶标记物缓冲液为20mM～200mM Tris缓冲液，PH为6.5～8.0。优选的浓度为20mM，优选的PH为7.4。
优选的，所述含PGE1的裂解剂1使用时将PGE1稀释至2-50μmol/L。
优选的，所述含PGE1+ADP的裂解剂2使用时将PGE1+ADP稀释至2-50μmol/L。
其中，所述裂解剂缓冲液PH为6.5～8.0。最优选的浓度为10μM，PH为7.4。
优选的，所述试剂盒还包括人磷酸化血管扩张刺激磷蛋白校准品。
更优选的，所述人磷酸化血管扩张刺激磷蛋白校准品为含20％胎牛血清的校准品缓冲液，将人磷酸化血管扩张刺激磷蛋白抗原稀释至工作浓度，分别为0、6.25、12.5、25.0、50.0和100.0ng/mL。
其中，校准品缓冲液为20mM～200mM Tris缓冲液，PH为6.5～8.0，优选的浓度为20mM，优选的PH为7.4。
试剂盒将上述试剂组分组装成盒，于2～8℃条件下保存。
本发明使用的超顺磁材料不同于常规技术合成的磁微粒，常规技术采用的磁微粒粒径一般为1～3μm不等，此种粒径磁微粒比表面积较小，检测分辨灵敏度不高。与现有技术不同的是，本发明采用的磁微粒为超顺磁性纳米材料制成，粒径为10～30nm；粒径小于30nm的超顺磁性纳米颗粒具有大的磁矩常量，可忽略剩磁和矫顽力，能够对应用的磁场做出快速的响应；同时比表面积大，容易分散，可以提高检测单个抗原分子的能力，提高试剂盒的线性范围和检测灵敏度。
本发明的另一个目的是公开了一种使用上述人磷酸化血管扩张刺激磷蛋白磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒的人磷酸化血管扩张刺激磷蛋白磁微粒化学发光免疫定量检测方法。所述方法包括如下步骤：
a)加样和孵育：将待测样本、校准品分别加入反应管中，加入等体积的含PGE1D裂解剂1和含PGE1+ADP的裂解剂2，孵育反应后加入等体积的碱性磷酸酶标记的人磷酸化血管扩张刺激磷蛋白单克隆抗体酶结合物和磁珠包被的人磷酸化血管扩张刺激磷蛋白单克隆抗体包被物，孵育反应形成VASP蛋白单克隆抗体酶结合物-人磷酸化血管扩张刺激磷蛋白-VASP蛋白单克隆抗体包被物复合物；体系中待测蛋白或校准品、蛋白单克隆抗体酶结合物和蛋白单克隆抗体包被物均为相同体积；反应时一般加入量为每种50μL；
b)磁分离清洗：将步骤a)中孵育完成的反应管放置在磁分离架上，静置后除去上清，加入300μl磁珠包被物缓冲液清洗后再次将反应管放置在磁分离架上静置后除去上清，反复清洗；一般清洗次数为3次，可根据各组分的加入量适当调整清洗次数；
c)发光检测：加入酶促发光底物液避光孵育，测量发光值。
本发明中采用的发光测量仪为滨松9507半自动化学发光仪，匹配的发光底物液为Lumi-PHos 530底物液。
优选的，所述磁珠包被的人磷酸化血管扩张刺激磷蛋白单克隆抗体包被物采用如下步骤制备：将超顺磁微粒加入PBS缓冲液(PH7.4)中，加入人磷酸化血管扩张刺激磷蛋白抗体， 37℃反应18小时得到人磷酸化血管扩张刺激磷蛋白抗体的磁珠包被物。使用时，将磁珠包被的人磷酸化血管扩张刺激磷蛋白单克隆抗体包被物稀释于磁珠包被物缓冲液中，稀释比例为0.1mg/mL～1.0mg/mL，优选的稀释比例为0.5mg/mL。
优选的，所述碱性磷酸酶标记的人磷酸化血管扩张刺激磷蛋白单克隆抗体酶结合物采用如下步骤制备：将碱性磷酸酶加入碳酸钠缓冲液(PH8.0)中，加入人磷酸化血管扩张刺激磷蛋白抗体，37℃反应4小时后，用ProteinG亲和柱(GE公司)纯化酶标抗体，得到人磷酸化血管扩张刺激磷蛋白单克隆抗体酶结合物。使用时，将碱性磷酸酶标记的人磷酸化血管扩张刺激磷蛋白单克隆抗体酶结合物稀释于酶标记物缓冲液中，稀释比例为1:400～ 1:2000，优选的稀释比例为1:1000。
优选的，所述含PGE1的裂解剂1的制备方法为，用裂解剂缓冲液将PGE1稀释至工作浓度，稀释比例为2-50μM，更优选的稀释比例为10μM。
优选的，所述含PGE1+ADP的裂解剂2的制备方法为，用裂解剂缓冲液将PGE1+ADP稀释至工作浓度，稀释比例为2-50μM，更优选的稀释比例为10μM。
优选的，所述人磷酸化血管扩张刺激磷蛋白校准品的制备方法为，用校准品缓冲液将人磷酸化血管扩张刺激磷蛋白抗原稀释至工作浓度，分别为0、6.25、12.5、25.0、50.0和100.0 ng/mL。采用蛋白校准品检测后绘制标准曲线，标准曲线公式y＝76235x–25455，R2＝ 0.9994。
本发明的第三个目的在于公开一种上述人磷酸化血管扩张刺激磷蛋白磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒的应用，所述试剂盒用于评估抗血小板药物的用药效果。抗血小板药物如氯吡格雷。
与现有技术相比，本发明的人磷酸化血管扩张刺激磷蛋白含量(VASP-P)试剂盒以磁微粒子作为免疫反应的固相，利用化学发光免疫分析方法与化学发光类测定仪配合，用于测定人体样本中的人磷酸化血管扩张刺激磷蛋白含量，避免了酶联免疫试剂盒存在的线性范围窄、操作繁琐等缺点，且解决了灵敏度低、稳定性差、成本高等缺陷，该试剂盒与目前专用于科研的ELISA试剂盒相比，检测范围宽，制备工艺简单价格低廉，灵敏度高，重复性好，线性宽，性能超过目前科研的ELISA试剂盒产品。
附图说明
图1为裂解剂1和裂解剂2的作用原理图；
图2为本发明的标准曲线图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明提供的人磷酸化血管扩张刺激磷蛋白磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒及其检测方法和应用作进一步详细、完整地说明。下面描述的实施例是示例性的，仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。
下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的实验材料如无特殊说明，均为市场购买得到。
实施例1、试剂盒的制备
本发明的试剂盒以磁微粒子作为免疫反应的固相，利用化学发光免疫分析方法与化学发光类测定仪配合，用于测定人体体样本中的人磷酸化血管扩张刺激磷蛋白含量。反应的技术原理为：待测样本、校准品与碱性磷酸酶标记的人磷酸化血管扩张刺激磷蛋白单克隆抗体酶结合物、磁珠包被的人磷酸化血管扩张刺激磷蛋白单克隆抗体包被物结合形成VASP 蛋白单克隆抗体酶结合物-人磷酸化血管扩张刺激磷蛋白-VASP蛋白单克隆抗体包被物复合物，在外加磁场中直接沉淀，将免疫反应形成的复合物与未结合的其它物质分离。清洗沉淀的复合物，加入酶促化学发光底物，底物在酶作用下被催化裂解，形成不稳定的激发态中间体，当激发态中间体回到基态时便发出光子，形成发光反应，利用发光仪测定反应的发光强度。在测定范围内，发光强度与样本中的人磷酸化血管扩张刺激磷蛋白浓度成正比，使用改良的四参数Logistic方程拟合可定量测算出待测样本中人磷酸化血管扩张刺激磷蛋白浓度。
1.试剂盒的制备过程如下：
(1)磁微粒包被物缓冲液制备：
| 物料 | 用量 |
| 三羟甲基氨基甲烷 | 2.42g |
| 氯化钠 | 18.00g |
| Tween-20 | 0.50g |
| 牛血清白蛋白 | 50.00g |
| Proclin300 | 1.00g |
将上述物料加入1000mL去离子水中，充分搅拌溶解，调节PH至7.00±0.10。
(2)酶标记物缓冲液制备：
| 物料 | 用量 |
| 三羟甲基氨基甲烷 | 2.42g |
| 氯化钠 | 18.00g |
| Tween-20 | 1.00g |
| 牛血清白蛋白 | 50.00g |
| Proclin300 | 1.00g |
将上述物料加入1000mL去离子水中，充分搅拌溶解，调节PH至7.40±0.10。
(3)裂解剂缓冲液制备：
| 物料 | 用量 |
| Proclin300 | 1.00g |
将上述物料加入1000mL去离子水中，充分搅拌溶解，调节PH至7.40±0.10。
(4)校准品缓冲液制备：
| 物料 | 用量 |
| 三羟甲基氨基甲烷 | 2.42g |
| 氯化钠 | 18.00g |
| Tween-20 | 1.00g |
| 胎牛血清 | 200mL |
| Proclin300 | 1.00g |
将上述物料加入1000mL去离子水中，充分搅拌溶解，调节PH至7.40±0.10。
(5)磁珠包被的人磷酸化血管扩张刺激磷蛋白单克隆抗体磁微粒悬浮液制备方法：
将50μg人磷酸化血管扩张刺激磷蛋白抗体(采购于深圳雅为公司)加入1mL 50mM磷酸盐缓冲液(pH7.4)中，加入10mg超顺磁微粒(采购于Merk公司，货号EM1 100/40)， 37℃反应12小时后，用磁分离装置对超顺磁微粒进行3次清洗，每次加入1ml 10mM磷酸盐缓冲液(pH7.4)，清洗完成后加入1ml 50mM磷酸盐缓冲液(pH7.4)得到10mg/ml的磁珠母液。用磁珠包被物缓冲液(50mM Tris缓冲液，PH7.0)稀释磁珠母液浓度为0.5mg/mL，得实验用磁珠包被的人磷酸化血管扩张刺激磷蛋白单克隆抗体的磁微粒悬浮液。
(6)碱性磷酸酶标记的人磷酸化血管扩张刺激磷蛋白抗体制备方法：
将100μg碱性磷酸酶加入1mL10mM碳酸钠缓冲液(pH8.0)中，加入5μg人磷酸化血管扩张刺激磷蛋白抗体(采购于深圳雅为公司)，37℃反应4小时后，用ProteinG亲和柱 (GE公司)纯化酶标抗体，得到人磷酸化血管扩张刺激磷蛋白单克隆抗体酶结合物。稀释于酶标记物缓冲液中，稀释比例为1:1000。
(7)含前列腺素E1(PGE1)裂解剂1的制备方法：用红细胞裂解液(采购于上海生工公司，货号C510006)将PGE1稀释至工作浓度，最终浓度为10μmol/L。
(8)含PGE1+ADP裂解剂2的制备方法：用红细胞裂解液(采购于上海生工公司，货号C510006)将PGE1、ADP(二磷酸腺苷)稀释至工作浓度，稀释比例为10μmol/L。
(9)人磷酸化血管扩张刺激磷蛋白校准品的制备方法：
用校准品缓冲液将人磷酸化血管扩张刺激磷蛋白抗原稀释至工作浓度，分别为0，6.25， 12.5，25.0，50.0，100.0ng/mL。
(10)组装：将上述试剂组分组装成盒，于2～8℃条件下保存。
实施例2、试剂盒的测试方法
(1)加样和孵育：吸取人磷酸化血管扩张刺激磷蛋白校准品或新鲜病人样本50μL加入反应管中，分别加入50μL PGE1裂解剂1和PGE1+ADP裂解剂2，裂解剂1和裂解剂2 的作用原理图如图1所示，37℃孵育反应10分钟左右；然后加入碱性磷酸酶标记的人磷酸化血管扩张刺激磷蛋白单克隆抗体酶结合物50μL和磁珠包被的人磷酸化血管扩张刺激磷蛋白单克隆抗体包被物50μL，37℃孵育反应10分钟左右；
(2)磁分离清洗：将孵育反应完成后的反应管放在磁分离架上静置1分钟，除去上清液；第一次加入磁珠包被物缓冲液300μL，放在磁分离架上静置1分钟，除去上清液；第二次加入磁珠包被物缓冲液300μL，放在磁分离架上静置1分钟，除去上清液；第三次加入磁珠包被物缓冲液300μL，放在磁分离架上静置1分钟，除去上清液；
(3)发光检测：加入Lumi-PHos 530底物液(采购于美国Lumigen公司)200μL，37℃避光孵育5分钟后，用滨松9507半自动化学发光仪测量发光值。
实施例3、试剂盒的性能测试结果
试剂盒性能评价指标：对采用该方法制备的试剂盒进行准确度、线性、精密度、特异性和稳定性进行测定。采用蛋白校准品检测后绘制标准曲线，标准曲线如图2所示，标准曲线公式y＝76235x–25455，R2＝0.9994，同时对检测结果线性情况进行评价，检测结果如下表所示：
| 浓度ng/mL | 发光值1 | 发光值2 | 均值 |
| 0.000 | 9985 | 9847 | 9916 |
| 6.125 | 464998 | 447115 | 456057 |
| 12.250 | 980998 | 953436 | 967217 |
| 25.000 | 1890029 | 1741507 | 1815768 |
| 50.000 | 3777745 | 3586306 | 3682026 |
| 100.000 | 7751427 | 7565142 | 7658285 |
以浓度为10ng/ml的蛋白校准品进行重复性检测，检测结果如下表所示：
由上述检测结果及分析可知，本发明的试剂盒检测结果线性宽，灵敏度高，重复性好，其结果均具有统计学意义。
采用本发明的检测试剂盒与市售的ELISA试剂盒进行比较，测定结果如下表：
由以上的结果可以看出：本发明涉及的试剂盒与ELISA试剂盒相比，性能测试结果更优，本发明的人磷酸化血管扩张刺激磷蛋白磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒具有很好的适用性和先进性。
最后有必要在此说明的是：以上实施例只用于对本发明的技术方案作进一步详细地说明，不能理解为对本发明保护范围的限制，本领域的技术人员根据本发明的上述内容作出的一些非本质的改进和调整均属于本发明的保护范围。
Claims (10)
1.一种人磷酸化血管扩张刺激磷蛋白磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括磁珠包被的人磷酸化血管扩张刺激磷蛋白单克隆抗体包被物、碱性磷酸酶标记的人磷酸化血管扩张刺激磷蛋白单克隆抗体酶结合物、含PGE1的裂解剂1和含PGE1+ADP的裂解剂2。
2.根据权利要求1所述的人磷酸化血管扩张刺激磷蛋白磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于，所述磁珠包被的人磷酸化血管扩张刺激磷蛋白单克隆抗体包被物为表面包裹有人磷酸化血管扩张刺激磷蛋白单克隆抗体的超顺磁性纳米材料，粒径为10～30nm。
3.根据权利要求1所述的人磷酸化血管扩张刺激磷蛋白磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于，所述碱性磷酸酶标记的人磷酸化血管扩张刺激磷蛋白单克隆抗体酶结合物为碱性磷酸酶和人磷酸化血管扩张刺激磷蛋白抗体的偶联物。
4.根据权利要求2所述的人磷酸化血管扩张刺激磷蛋白磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于，所述磁珠包被的人磷酸化血管扩张刺激磷蛋白单克隆抗体包被物采用磁微粒包被物缓冲液稀释为磁微粒悬浮液，所述磁微粒包被物缓冲液为20mM～200mMTris缓冲液，PH为6.5～8.0。
5.根据权利要求3所述的人磷酸化血管扩张刺激磷蛋白磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于，所述碱性磷酸酶标记的人磷酸化血管扩张刺激磷蛋白单克隆抗体酶结合物采用磁微粒包被物缓冲液稀释，酶标记物缓冲液为20mM～200mM Tris缓冲液，PH为6.5～8.0。
6.根据权利要求1所述的人磷酸化血管扩张刺激磷蛋白磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于，所述含PGE1的裂解剂1和含PGE1+ADP的裂解剂2采用裂解剂缓冲液稀释，所述裂解剂缓冲液PH为6.5～8.0。
7.根据权利要求1所述的人磷酸化血管扩张刺激磷蛋白磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括人磷酸化血管扩张刺激磷蛋白校准品。
8.一种采用根据权利要求1～7任一项所述的人磷酸化血管扩张刺激磷蛋白磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒的检测方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
a)加样和孵育：将待测样本、校准品分别加入反应管中，加入等体积的含PGE1裂解剂1和含PGE1+ADP的裂解剂2，孵育反应后加入等体积的碱性磷酸酶标记的人磷酸化血管扩张刺激磷蛋白单克隆抗体酶结合物和磁珠包被的人磷酸化血管扩张刺激磷蛋白单克隆抗体包被物，孵育反应；体系中待测蛋白或校准品、蛋白单克隆抗体酶结合物和蛋白单克隆抗体包被物均为相同体积；
b)磁分离清洗：将步骤a)中孵育完成的反应管放置在磁分离架上，静置后除去上清，加入磁珠包被物缓冲液清洗后再次将反应管放置在磁分离架上静置后除去上清，反复清洗；
c)发光检测：向步骤b)中清洗后的复合物中加入酶促化学发光底物液避光孵育，测量发光值。
9.根据权利要求8所述的人磷酸化血管扩张刺激磷蛋白磁微粒化学发光免疫定量检测方法，其特征在于，所述磁珠包被的人磷酸化血管扩张刺激磷蛋白单克隆抗体包被物采用如下步骤制备：将超顺磁微粒加入PBS缓冲液中，加入人磷酸化血管扩张刺激磷蛋白抗体，37℃反应18小时得到人磷酸化血管扩张刺激磷蛋白抗体的磁珠包被物。
10.一种根据权利要求1～7任一项所述的人磷酸化血管扩张刺激磷蛋白磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒的应用，其特征在于，所述试剂盒用于评估抗血小板药物的用药效果。
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Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113238062A (zh) * | 2021-07-13 | 2021-08-10 | 湖南菲思特精准医疗科技有限公司 | 一种用于人磷酸化血管扩张刺激磷蛋白光激化学发光均相免疫检测试剂盒及其检测方法 |
| CN114002440A (zh) * | 2021-12-30 | 2022-02-01 | 湖南菲思特精准医疗科技有限公司 | 一种用于人磷酸化血管扩张刺激蛋白的酶联免疫检测试剂盒及其检测方法 |
| CN114217069A (zh) * | 2021-11-19 | 2022-03-22 | 上海普然生物科技有限公司 | 一种用于神经元丝状蛋白磁微粒化学发光免疫检测试剂盒及其检测方法 |
Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1999024473A1 (en) * | 1997-11-07 | 1999-05-20 | Aventis Pharma Deutschland Gmbh | Antibodies against phosphorylated vasp (vasodilator-stimulated phosphoprotein), hybridoma cells for their preparation, and their use |
| US20040146950A1 (en) * | 2002-11-21 | 2004-07-29 | The University Of North Carolina | Phosphoprotein detection reagent and methods of making and using the same |
| CN102435753A (zh) * | 2011-08-31 | 2012-05-02 | 内蒙古科慧生物科技有限责任公司 | 糖化血红蛋白(HbAlc)定量测定试剂盒及其检测方法 |
| CN102803505A (zh) * | 2009-06-12 | 2012-11-28 | 赛泰克斯生物公司 | 属于细胞信号通路的细胞内生物标记物的全血含量及其测量确定细胞群的活化的用途 |
| CN108982861A (zh) * | 2018-07-26 | 2018-12-11 | 北京普恩光德生物科技开发有限公司 | 一种血管扩张型刺激磷蛋白检测试剂盒 |
| CN109975499A (zh) * | 2019-05-05 | 2019-07-05 | 武汉大学 | 一种提升利托那韦药物抗癌有效性的检测方法 |
| CN110514844A (zh) * | 2019-08-14 | 2019-11-29 | 湖南山河生物医学技术孵化中心(有限合伙) | 一种人五聚素3磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒及其制备方法 |
| CN111596066A (zh) * | 2015-05-08 | 2020-08-28 | 分析科学莱布尼茨研究所Isas协会 | 鉴定用于凝血障碍的诊断和风险分层的标记蛋白的方法 |
-
2020
- 2020-12-23 CN CN202011532533.6A patent/CN112730826A/zh active Pending
Patent Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1999024473A1 (en) * | 1997-11-07 | 1999-05-20 | Aventis Pharma Deutschland Gmbh | Antibodies against phosphorylated vasp (vasodilator-stimulated phosphoprotein), hybridoma cells for their preparation, and their use |
| US20040146950A1 (en) * | 2002-11-21 | 2004-07-29 | The University Of North Carolina | Phosphoprotein detection reagent and methods of making and using the same |
| CN102803505A (zh) * | 2009-06-12 | 2012-11-28 | 赛泰克斯生物公司 | 属于细胞信号通路的细胞内生物标记物的全血含量及其测量确定细胞群的活化的用途 |
| CN102435753A (zh) * | 2011-08-31 | 2012-05-02 | 内蒙古科慧生物科技有限责任公司 | 糖化血红蛋白(HbAlc)定量测定试剂盒及其检测方法 |
| CN111596066A (zh) * | 2015-05-08 | 2020-08-28 | 分析科学莱布尼茨研究所Isas协会 | 鉴定用于凝血障碍的诊断和风险分层的标记蛋白的方法 |
| CN108982861A (zh) * | 2018-07-26 | 2018-12-11 | 北京普恩光德生物科技开发有限公司 | 一种血管扩张型刺激磷蛋白检测试剂盒 |
| CN109975499A (zh) * | 2019-05-05 | 2019-07-05 | 武汉大学 | 一种提升利托那韦药物抗癌有效性的检测方法 |
| CN110514844A (zh) * | 2019-08-14 | 2019-11-29 | 湖南山河生物医学技术孵化中心(有限合伙) | 一种人五聚素3磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒及其制备方法 |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113238062A (zh) * | 2021-07-13 | 2021-08-10 | 湖南菲思特精准医疗科技有限公司 | 一种用于人磷酸化血管扩张刺激磷蛋白光激化学发光均相免疫检测试剂盒及其检测方法 |
| CN113238062B (zh) * | 2021-07-13 | 2021-09-28 | 湖南菲思特精准医疗科技有限公司 | 一种用于人磷酸化血管扩张刺激磷蛋白光激化学发光均相免疫检测试剂盒及其检测方法 |
| CN114217069A (zh) * | 2021-11-19 | 2022-03-22 | 上海普然生物科技有限公司 | 一种用于神经元丝状蛋白磁微粒化学发光免疫检测试剂盒及其检测方法 |
| CN114002440A (zh) * | 2021-12-30 | 2022-02-01 | 湖南菲思特精准医疗科技有限公司 | 一种用于人磷酸化血管扩张刺激蛋白的酶联免疫检测试剂盒及其检测方法 |
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