CN112725208B - 西藏来源的在低温下产油脂的酵母菌株及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一株西藏来源的在低温下产油脂的酵母菌株及其应用。该菌株在20℃具有最好的生长性能，25℃生长缓慢，30℃及37℃不生长。通过尼罗红染色观察及液体发酵评价，发现该菌株可以在低温条件下生产油脂。通过油脂含量和脂肪酸成分检测发现，该菌株能够分别利用葡萄糖、甘油和木糖三种不同碳源积累较多的油脂，含量分别为细胞干重的54.7％、34.1％和67.76％。该菌株可以利用木糖生产油脂，含有较多的C18:1脂肪酸，油酸和C18:2脂肪酸亚油酸。此外，该菌株可利用不同碳源积累富含高价值不饱和脂肪酸的油脂，具有较好的开发应用潜力。
Description
技术领域
本发明属于微生物生物资源与应用领域，涉及一株西藏来源的在低温下产油脂的酵母(C.rogersii)菌株及其应用。
背景技术
由于人口的增长和人民生活水平的提高，国内外对可持续发展越来越关注，食品行业对生物油脂的竞争也越来越激烈。此外，动物饲料中也需要脂质，例如鱼类积累的油脂用于水产养殖。单细胞油脂(SCOs)是指来自微生物的脂质，是一种潜在的更可持续的脂质来源，可以取代部分鱼油(Scientific Report,2018,8(1):15945)。多种微生物可以产生油脂，包括细菌、酵母、霉菌和微藻等。微生物合成的油脂可用作润滑剂、粘合剂、生物表面活性剂等，应用于生物燃料和可降解聚合物材料等生产，而且微生物具有生长快，容易培养，具有成熟的大规模发酵经验，产品质量容易控制等优势，因此产油脂微生物的开发利用受到广泛的关注。
木糖是自然界中除了葡萄糖之外储量第二多的单糖，例如木质纤维素类生物质水解可以产生很多木糖。但是，很多微生物不具备天然利用木糖的能力。一些产油酵母可以将木糖转化为脂质，其转化率可达其干细胞质量(DCW)的20％以上，包括粘红酵母
(Rhodotorula glutinis)(Bioresour Technol.2009,100(1):356–61),发酵丝孢酵母
(Trichosporon fermentans)(Bioresour Technol.2008,99(16):7881–5)，圆红冬孢酵母(Rhodotorula toruloides)(Appl Microbiol Biotechnol.2018,102(1):143–51)等。组成酵母来源油脂的脂肪酸多为不超过18个碳的脂肪酸，可通过代谢工程改造不同酵母产生价值比较高的多不饱和脂肪酸，但是不同酵母油脂合成效率和脂肪酸的组成不同(化工进展，2016,35:872-878)。因此，开发新的油脂生产酵母，研究其合成调控机制，对于进一步提升微生物油脂生产效率具有重要意义。
Curvibasidium属酵母最早在2004年被定义，其中C.cygneicollum是Rhodotorulafujisanensis的有性阶段。目前在葡萄表皮和土壤等环境都分离出了该菌种，并发现该酵母在维管植物的叶平面中含量很高(International Journal of Food Microbiology,2019,289:154-161；Curr Microbiol,2015,70:587-601)。
本发明通过从西藏地区采集的松萝样品中分离纯化鉴定并鉴定了一株Curvibasidium属酵母菌株C.rogersii JBA-MBY-JT230，这是首次在我国境内报道，该菌株在低温下可以利用不同碳源生产油脂。对该酵母胞内油脂含量及成分进行了分析，发现其油脂富含不饱和脂肪酸油酸和亚油酸，展现了其良好的开发应用潜力。
发明内容
本发明的目的在于提供一株西藏来源低温下产油脂的酵母菌株及其应用。具体提供一株西藏来源可以利用葡萄糖、甘油和木糖在低温下产油脂的酵母菌株C.rogersiiJBA-MBY-JT230，该菌株具有在低温条件下积累油脂的能力，并且能够积累较多的高价值的C18:1脂肪酸，具有很大的应用潜力。
本发明所述西藏来源的一株酵母菌株Curvibasidium rogersii JBA-MBY-JT230，已于2020年12月10日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心CGMCC保藏，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏编号为CGMCC No.21347。分类名为Curvibasidium rogersii，经检测存活。
本发明JBA-MBY-JT230菌株的分离、纯化和筛选过程如下：用75％乙醇浸泡样品，对样品的表面进行消毒处理，然后用生理盐水冲洗消毒过后的样品，将洗脱液涂布于YPD固体培养基平板作为阴性对照，若对照无微生物生长则认为样品表面的微生物被杀死，再捣碎样品获得含内生菌的样品匀浆，用生理盐水稀释后，涂布于固体培养基平板，为了筛选到耐低温微生物，培养箱温度设置为15℃。之后将平板上的菌落挑取到新的YPD平板上划线培养，得到单菌落后挑取单菌落再次划线，重复三次，得到耐低温的JBA-MBY-JT230菌株。
本发明所涉及的C.rogersii(即Curvibasidium rogersii)菌株，JBA-MBY-JT230的单菌落呈奶油色到淡黄色，边缘光滑，轻微反光，菌落隆起，易挑起，显微镜下的细胞呈现卵形、椭圆形，经过细胞形态特征观察，以及基于真菌基因组中ITS区域和26S D1/D2序列这一分子标记的测序并通过NCBI数据库blast比对分析，鉴定其为C.rogersii相关菌株，并命名为为C.rogersii JBA-MBY-JT230。其分离自西藏松萝，在4～25℃，最优选地20℃下可有效利用木质纤维素水解后的主要成分葡萄糖和木糖。
本发明的目的是通过以下技术方案实现的：
第一方面，本发明提供一株酵母菌株Curvibasidium rogersii JBA-MBY-JT230，其保藏编号为CGMCC No.21347。
第二方面，本发明提供一种酵母菌株Curvibasidium rogersii JBA-MBY-JT230在生产油脂中的用途。
作为本发明的一个实施方案，所述酵母菌株在低温条件下生产油脂。
作为本发明的一个实施方案，所述低温为4-25℃。
作为本发明的一个实施方案，所述酵母菌株利用葡萄糖、甘油、木糖、蔗糖、菊粉、乙醇中的一种或几种为碳源生产油脂。
作为一个实施方案，所述油脂主要为C18不饱和脂肪酸。
作为一个实施方案，所述酵母菌株利用葡萄糖、木糖、蔗糖、乙醇、菊粉中的一种或几种为碳源生产C18:1和/或C18:2不饱和脂肪酸。
作为一个实施方案，所述酵母菌株利用木质纤维素水解产物(水解后的主要成分：葡萄糖和木糖)为碳源生产油脂。
第三方面，本发明涉及一种酵母菌株Curvibasidium rogersii JBA-MBY-JT230在利用木质纤维素类生物质水解物生产微生物油脂中的用途。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
1)本发明从不同样本中分离筛选到一株低温产油脂的C.rogersii菌株，经过基因组分析和尼罗红染色观察揭示其在低温下积累油脂的能力；
2)本发明中的一株C.rogersii菌株经液体活化，并在4～25℃，最优选地20℃条件下以葡萄糖、甘油和木糖碳源为发酵培养基时，在发酵2～10天，最优选地9天时即可积累大量的油脂；
3)本发明测定了一株C.rogersii菌株积累油脂的成分，主要积累的是C18的油脂，相比于目前研究广泛地解脂椰氏酵母ATCC201249能够积累较多高价值的C18:1油脂；
4)本发明涉及到的一株C.rogersii菌株能够天然地利用木质纤维素水解后的主要成分葡萄糖和木糖生产油脂，显示了其利用低成本原料生产高价值油脂的能力。
附图说明
图1为菌株在YPD平板上的菌落形态及(400倍)显微镜下的细胞形态；其中，(a)为菌落形态，(b)为显微镜下的细胞形态；
图2为菌株JBA-MBY-JT230及对照菌株s288c在YPD固体培养基不同温度培养72h后的平板照片，其中，10℃(A)，15℃(B)，20℃(C)，25℃(D)；
图3为菌株经尼罗红染色后在激光共聚焦显微镜下的荧光照片。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明进行详细说明。以下实施例将有助于本领域的技术人员进一步理解本发明，但不以任何形式限制本发明。应当指出的是，对本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干调整和改进。这些都属于本发明的保护范围。
实施例1、耐低温酵母菌株的筛选与生物学鉴定
1)耐低温酵母菌株的筛选
采集于西藏高原地区不同地理位置的样品，用生理盐水冲洗样品，得到洗脱液后涂布于YPD固体培养基平板进行分离样品表面微生物。用75％乙醇浸泡样品，对样品的表面进行消毒处理，然后用生理盐水冲洗消毒过后的样品，将洗脱液涂布于YPD固体培养基平板作为阴性对照，若对照无微生物生长则认为样品表面的微生物被杀死，再捣碎样品获得含内生菌的样品匀浆，用生理盐水稀释后，涂布于固体培养基平板，为了筛选到耐低温微生物，培养箱温度设置为15℃。之后将平板上的菌落挑取到新的YPD平板上划线培养，得到单菌落后挑取单菌落再次划线，重复三次，得到耐低温的酵母菌株。
2)C.rogersii菌株的鉴定
本发明所述培养基配方如下(灭菌条件均为115℃，20min)，
YPD液体培养基(1L)：酵母粉10g，蛋白胨20g/L，葡萄糖20g。高压灭菌。
YPD固体培养基(1L)：酵母粉10g，蛋白胨20g/L，葡萄糖20g，琼脂20g。高压灭菌。
YPD发酵培养基(1L)：酵母粉10g，蛋白胨10g/L，葡萄糖40g。高压灭菌。
YPX发酵培养基(1L)：酵母粉10g，蛋白胨10g/L，木糖40g。高压灭菌。
YPG发酵培养基(1L)：酵母粉10g，蛋白胨10g/L，甘油40g。高压灭菌。
通过将该低温酵母菌株在YPD平板中培养大约7天后，在400x显微镜下观察其细胞状态；细胞呈卵形、椭圆形，细胞大小为(3.1-4.2×1.3-2.3)μm。无性繁殖方式为单边芽殖。
菌株在YPD的在400倍显微镜下的显微图片如图1所示。
将菌株进行基因组提取，并进行ITS序列和26S D1/D2序列测序的分类鉴定。通过真菌ITS通用引物(正向ITS1：5’-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3’SEQ ID NO.3；反向ITS4：5’-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3’SEQ ID NO.4)和26S D1/D2通用引物(正向26s-F：5’-GCATATCAATAAGCGGAGGAAAAG-3’SEQ ID NO.5；反向26s-R：5’-GGTCCGTGTTTCAAGACGG-3’SEQID NO.6)进行以基因组为模板的PCR扩增。终测得ITS序列和26S D1/D2序列进行blast(http://blas-t.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi)同源比对，将该菌株鉴定为C.rogersii。
其中，JBA-MBY-JT230 ITS序列，SEQ ID NO.1，如下：
ATTTTCCAACTCTGTGCATTATTGGCGGACTGGCAGTAAGAAATTACTATTCAGTCTGCGGCTCACTATTAAACATTAGTTAAAGTATGTATATAAAAACAAAACAAAAAAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGCTCTCGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGTGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACCTTGCACTCTCTGGTATTCCGGAGAGTATGTCTGTTTGAGTGTCATGAACTCTTCAACCTACCGATTTCTAGTAAATCGGATTAGTGTTTGGATTCTGAACGCTTGCTGGCCTTTATTGGCGAAGCTCGTTCGTAAATGATTAGCATCTCATATTCGAAAATCGGATTGACTCAGTGTAATAGACTATTCGCTGAGGACGCTCTTTCGGGAGTGGCCGAGTTTTGTAAAGTAGAAGCTTCTAATTCTATTAGTCAACTTTAGATTAGACCTCAGATCAGGCAGGATTACCCGCTGAACTTAAGCATATC
JBA-MBY-JT230 26S rDNA D1/D2序列，SEQ ID NO.2，如下：TTGTAATCTGGCACTTTCAGTGTCCGAGTTGTAATCTCGAGAAGTGTTTTCCGCGCCGGACTGCATACAAGTCTGTTGGAATACAGCGTCATAGTGGTGAGAACCCCGTAACTGATGCAGATGCCCGGTGCTTTGTGATACACTTTCGAAGAGTCGAGTTGTTTGGGAATGCAGCTCAAATTGGGTGGTAAATTCCATCTAAAGCTAAATATTGGCGAGAGACCGATAGCGAACAAGTACCGTGAGGGAAAGATGAAAAGCACTTTGGAAAGAGAGTTAACAGTACGTGAAATTGTTGGAAGGGAAACGATTGAAGTCAGACTTGTTATCTGGAGTTCAGCCTTTAGGTGTACTCTCCAGTTTACAGGCCAGCATCAGTTTTTGGGGCGGGAAAATCGTAATTAGAAGGTAGCAGCCTAGCTGTGTTATAGCTTTTTACTGGATTCCGCTTCGGGGACTGAGGAATGCAGTGTGCTTTTAGCAATACCCTCGGGTATTTCACACTTAGGA
本发明菌株JBA-MBY-JT230的形态特征和培养：在YPD平板上15℃下培养7d后，单菌落呈奶油色到淡黄色，边缘光滑，轻微反光，菌落隆起，易挑起。显微特征：在YPD平板培养7d后，细胞呈卵形、椭圆形，细胞大小为(3.1-4.2×1.3-2.3)μm。无性繁殖方式为单边芽殖。C.rogersii JBA-MBY-JT230与模式酵母s288c相比在低温环境下有着较好生长状态，能够利用多种碳源，包括葡萄糖、甘油和木糖积累油脂，并且与对照菌株解脂椰氏酵母相比油脂成分中油酸的比例比较高。
检测两株菌株不同碳源同化能力，并与系统发生树中亲缘关系最近的菌种C.rogersii、C.cygneicollum、R.nothofagi和C.pallidicorallinum作比较，结果如下表1：
表1 JBA-MBY-JT230碳源同化实验结果及对比*
*1.Y230为JBA-MBY-JT230的缩写，+，强同化；-，不同化，s，慢同化；L，延迟同化；w，弱同化；v，部分菌株可同化、部分不能同化；N，没有数据。
2.数据来源：North American Fungi,2012,7(12):1-8。
3.数据来源：The Yeasts,5th Edition,edited by P.kurtzman C,W.Fell J,Boekhout T.Elsevier,2011:87-110.
在碳源同化实验中，Y230菌株可以同化葡萄糖、甘露醇、甘油(慢同化)、鼠李唐(弱同化)、木糖醇、蔗糖、棉子糖(弱同化)、木糖(慢同化)、D-阿拉伯糖(延迟同化)、山梨糖、N-乙酰氨基葡萄糖(弱同化)、菊粉、松三糖(弱同化)、水杨苷、乙醇、葡萄糖酸内酯和琥珀酸。都不能同化乳糖、麦芽糖、赤藓糖醇、海藻糖、核糖、葡萄糖酸酯、可溶性淀粉、纤维二糖、乳酸、甲醇、肌醇和十六烷，多处特征和最相近的菌种C.rogersii多处不同。
检测两株菌株氮源同化能力，并与系统发生树中亲缘关系最近的C.rogersii、C.cygneicollum、R.nothofagi和C.pallidicorallinum作比较，结果如下表2：
表2 JBA-MBY-JT230氮源同化实验结果及对比*
| 名称 | 230 | C.rogersii<sup>2</sup> | C.cygneicollum<sup>3</sup> | R.nothofagi<sup>3</sup> | C.pallidicorallinum<sup>3</sup> |
| 硝酸盐 | - | - | - | - | - |
| 盐酸苯甲嗪 | - | - | N | N | N |
| L-赖氨酸 | + | + | N | N | N |
*1.+，强同化；-，不同化，s，慢同化；L，延迟同化；w，弱同化；v，部分菌株可同化、部分不能同化；N，没有数据。
2.数据来源：North American Fungi,2012,7(12):1-8。
3.数据来源：The Yeasts,5th Edition,edited by P.kurtzman C,W.Fell J,Boekhout T.Elsevier,2011:87-110.
在氮源同化实验中，230菌株可以同化L-赖氨酸，不能同化硝酸盐和盐酸苯甲嗪。和最相近的菌种C.rogersii一致。
实施例2、JBA-MBY-JT230的耐低温能力
本发明测定了JBA-MBY-JT230的耐低温能力。
具体步骤如下，取保存的菌株JBA-MBY-JT230及作为对照的酿酒酵母菌株S288C10μl于5ml(含1mlYPD)的离心管中，JBA-MBY-JT230于20℃150rpm培养，S288C于30℃150rpm培养。待菌株生长到OD600为1.0左右时进行二次活化，既取培养后的菌株200μl于5ml(含1mlYPD)的离心管中继续培养。待菌株生长到OD600为0.6～0.8时3)调整菌液OD600为1，取100μl菌液，用水分别稀释101,102,103,104,105倍，然后分别取2μl菌液在YPD固体培养基上进行点板，实验结果如图2所示。JBA-MBY-JT230均具有良好的耐低温能力，在10℃，15℃培养了72h的情况下，生长情况均明显的好于对照菌株，且这株菌株对高温耐性差，在25℃培养了72h的情况下，JBA-MBY-JT230的生长相较于对照菌株明显较差。
实施例3、JBA-MBY-JT230经尼罗红染色后胞内荧光信号
本发明测定了JBA-MBY-JT230的经尼罗红染色后胞内荧光情况
具体步骤如下，将JBA-MBY-JT230菌株使用平板划线的方法在YPD固体培养基的平板上4～25℃，最优选地15℃静置培养2～10天，最优选地9天，挑取菌落并稀释于无菌水中，将配置好的0.5mg/ml的尼罗红染料以1/1000的比例加入到菌液中，对菌株体内的脂滴进行染色，在避光的环境下染色5min，使用激光共聚焦显微镜以激发波长488nm，发射波长570nm的荧光强度观察细胞内的荧光信号，结果如图3所示。
本发明鉴定的一株C.rogersii经尼罗红染色后胞内荧光信号强度显示，这株酵母有能够利用葡萄糖作为底物在低温下大量积累油脂的潜力。
实施例4、JBA-MBY-JT230胞内脂质含量
本发明测定了JBA-MBY-JT230的胞内脂质含量。
具体步骤如下，取保存的菌株JBA-MBY-JT230及对照菌株解脂椰氏酵母(缩写为YL-CON)保藏编号为ATCC201249作为对照菌株10μl菌液于5ml(含1mlYPD)的离心管中，JBA-MBY-JT230，20℃150rpm培养，YL-CON 30℃150rpm培养，待菌液生长到OD600为1左右将菌液分别加入到100mlYPD，或者YPX，或者YPG发酵培养基中，JBA-MBY-JT230 20℃150rpm培养，YL-CON 30℃150rpm培养，9天后将菌液以8000rpm 3min离心收集菌体，并用无菌水洗两遍，去掉上清液，用液氮快速冷冻细胞，然后使用冷冻离心机对细胞进行冷冻干燥。分别取干燥后的细胞100mg于50ml离心管中，然后加入10ml 4M HCl溶液，在60℃的水浴中温育2h，将酸水解的生物质与15ml氯仿/甲醇2：1(v/v％)混合物混合，并在室温下摇床160rpm中温育2h，然后将样品4000rpm离心10min，取上层的氯仿层加入到烘干称重后的50ml离心管中，60℃水浴蒸发有机相，最后55℃烘干至重量恒定。计算胞内脂质含量方法是ω＝W1/W2*100％，其中，ω为总脂含量(％)，W1为油脂含量(g)，W2为提取前细胞干重(g)，结果如表3所示。
表3 JBA-MBY-JT230在不同碳源培养基中的脂质含量*
| 酵母样品名称 | 细胞干重(mg) | 油脂重量(mg) | 总脂含量(％) |
| YL-CON-YPD | 103±1.00 | 69.95±7.45 | 67.85±6.57 |
| YL-CON-YPG | 101±1.00 | 54.05±3.95 | 53.56±4.44 |
| JBA-MBY-JT230-YPD | 102.55±1.45 | 56.05±2.05 | 54.7±2.77 |
| JBA-MBY-JT230-YPG | 102.05±0.95 | 34.75±5.15 | 34.1±5.36 |
| JBA-MBY-JT230-YPX | 105.2±1.10 | 70.95±2.35 | 67.76±2.66 |
*YPD表示碳源为葡萄糖，YPG中碳源为甘油，其余和YPD一致，YPX中碳源为木糖，其余和YPD一致。YL代表解脂耶氏酵母，CON代表对照。
本发明鉴定的这株C.rogersii胞内脂质含量结果显示，其可以作为利用葡萄糖、木糖、蔗糖、乙醇、菊粉中的一种或几种为碳源生产油脂的微生物工厂。这株产油酵母能够在低温下利用葡萄糖、甘油、木糖这三种碳源分别积累细胞干重的54.7％、34.1％、67.76％的油脂，这也表明了其在生物质资源高效转化过程中具有潜在的应用前景及价值。
实施例5、JBA-MBY-JT230胞内脂质成分分析
本发明测定了JBA-MBY-JT230的胞内脂质成分
具体步骤如下，分别取JBA-MBY-JT230和对照菌株YL-CON干燥后的细胞100mg，在试管中加入5ml的15％硫酸-甲醇，在密闭的试管中70℃水浴1小时每隔一段时间晃动试管，然后冷凝至10℃加入0.75ml ddH2O，再加入2ml正己烷，混匀后4000rpm离心10min，取上清使用气质联用色谱测定脂肪酸甲酯组成。结果如表4和表5所示。
表4对照菌株YL-CON在不同碳源培养基中的脂质成分
表5 JBA-MBY-JT230菌株在不同碳源培养基中的脂质成分*
| JBA-MBY-JT230-YPD | JBA-MBY-JT230-YPX | JBA-MBY-JT230-YPG | |
| 15:0 | 0.87±0.06 | 0.51±0.72 | 1.25±0.08 |
| △9 16:1 | 5.50±0.16 | 2.79±1.97 | 1.72±1.00 |
| 16:0 | 8.51±0.01 | 10.87±1.13 | 14.82±0.01 |
| △10 17:1 | n.d. | n.d. | 0.74±0.07 |
| 17:0 | n.d. | n.d. | n.d. |
| △9,12 18:2 | 18.53±0.06 | 18.15±5.93 | 29.19±0.04 |
| △9 18:1 | 63.68±1.57 | 67.69±7.22 | 49.80±1.16 |
| 10 19:1 | n.d. | n.d. | 0.36±0.36 |
| 19:0 | 0.63±0.63 | n.d. | 1.53±0.026 |
| △11 20:1 | 1.74±0.09 | n.d. | 0.57±0.57 |
| △13 22:1 | 1.00±1.00 | n.d. | n.d. |
| 22:0 | n.d. | n.d. | n.d. |
| 24:0 | n.d. | n.d. | n.d. |
| 25:0 | 0.74±0.74 | n.d. | n.d. |
*数据以百分比显示平均值±标准差，n.d.代表未检测到；YPD表示碳源为葡萄糖，YPG中碳源为甘油，其余和YPD一致，YPX中碳源为木糖，其余和YPD一致。YL代表解脂耶氏酵母，CON代表对照。
从表格中可以看出，JBA-MBY-JT230及对照菌株解脂椰氏酵母(YL-CON)积累的主要是C18的脂肪酸，JBA-MBY-JT230与YL-CON相比细胞内能够积累更多的C18:1脂肪酸(油酸)，其中在以甘油为碳源的条件下能够积累更多的C18:2亚油酸。
本发明鉴定的C.rogersii菌株胞内脂质成分结果显示，JBA-MBY-JT230能够利用葡萄糖、木糖、蔗糖、乙醇、菊粉中的一种或几种为碳源积累大量的不饱和脂肪酸，具有很高的应用前景。
综上所述，本发明提供了一株从中国西藏地区采集的松萝样品中分离得到的低温产油脂酵母(C.rogersii)菌株，经过形态学观察与分子鉴定将其分类归属为C.rogersii(即Curvibasidium rogersii)。该菌株于2020年12月10日保藏于中国(北京)普通微生物菌种保藏中心，且将其原始命名为JBA-MBY-JT230，保藏编号为CGMCC No.21347。该菌株在20℃具有最好的生长性能，25℃生长缓慢，30℃及37℃不生长。通过尼罗红染色观察及液体发酵评价，发现JBA-MBY-JT230可以在低温条件下生产油脂。通过油脂含量和成分检测发现，JBA-MBY-JT230能够在4～25℃，优选地20℃条件下以葡萄糖、木糖、蔗糖、乙醇、菊粉中的一种或几种为碳源积累大量脂肪酸，利用葡萄糖、甘油和木糖三种不同碳源积累的油脂含量分别为细胞干重的54.7％、34.1％和67.76％。此外，与目前研究较为广泛的产油酵母解脂椰氏酵母ATCC201249相比，该酵母菌株可以利用木糖生产油脂，含有较多的C18:1脂肪酸(油酸)。油酸可用于生产塑料增塑剂、柔软剂、机械切削油等，在化工领域可以用于生产胶粘剂、油漆、高级油墨等，在毛纺领域可以用于生产纺织助剂和助染剂等，具有广泛的应用范围。JBA-MBY-JT230可以同时利用葡萄糖和木糖积累油脂，具有利用廉价的木质纤维素类生物质资源生产微生物油脂的开发潜力。
序列表
<110> 上海交通大学
伽蓝集团股份有限公司
<120> 西藏来源的在低温下产油脂的酵母菌株及其应用
<141> 2021-03-05
<160> 6
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 530
<212> DNA
<213> 酵母菌(Curvibasidium rogersii)
<400> 1
attttccaac tctgtgcatt attggcggac tggcagtaag aaattactat tcagtctgcg 60
gctcactatt aaacattagt taaagtatgt atataaaaac aaaacaaaaa aaaactttca 120
acaacggatc tcttggctct cgcatcgatg aagaacgcag cgaaatgtga taagtaatgt 180
gaattgcaga attcagtgaa tcatcgaatc tttgaacgca ccttgcactc tctggtattc 240
cggagagtat gtctgtttga gtgtcatgaa ctcttcaacc taccgatttc tagtaaatcg 300
gattagtgtt tggattctga acgcttgctg gcctttattg gcgaagctcg ttcgtaaatg 360
attagcatct catattcgaa aatcggattg actcagtgta atagactatt cgctgaggac 420
gctctttcgg gagtggccga gttttgtaaa gtagaagctt ctaattctat tagtcaactt 480
tagattagac ctcagatcag gcaggattac ccgctgaact taagcatatc 530
<210> 2
<211> 510
<212> DNA
<213> 酵母菌(Curvibasidium rogersii)
<400> 2
ttgtaatctg gcactttcag tgtccgagtt gtaatctcga gaagtgtttt ccgcgccgga 60
ctgcatacaa gtctgttgga atacagcgtc atagtggtga gaaccccgta actgatgcag 120
atgcccggtg ctttgtgata cactttcgaa gagtcgagtt gtttgggaat gcagctcaaa 180
ttgggtggta aattccatct aaagctaaat attggcgaga gaccgatagc gaacaagtac 240
cgtgagggaa agatgaaaag cactttggaa agagagttaa cagtacgtga aattgttgga 300
agggaaacga ttgaagtcag acttgttatc tggagttcag cctttaggtg tactctccag 360
tttacaggcc agcatcagtt tttggggcgg gaaaatcgta attagaaggt agcagcctag 420
ctgtgttata gctttttact ggattccgct tcggggactg aggaatgcag tgtgctttta 480
gcaataccct cgggtatttc acacttagga 510
<210> 3
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
tccgtaggtg aacctgcgg 19
<210> 4
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
tcctccgctt attgatatgc 20
<210> 5
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 5
gcatatcaat aagcggagga aaag 24
<210> 6
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 6
ggtccgtgtt tcaagacgg 19
Claims (7)
1.一株Curvibasidium属酵母菌株Curvibasidium rogersiiJBA-MBY-JT230，其保藏编号为CGMCC No. 21347。
2.一种根据权利要求1所述的酵母菌株Curvibasidium rogersiiJBA-MBY-JT230在生产油脂中的用途。
3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于，所述酵母菌株在低温条件下生产油脂，所述低温为4-25℃。
4.根据权利要求3所述的用途，其特征在于，所述酵母菌株利用葡萄糖、甘油、木糖、蔗糖、菊粉、乙醇中的一种或几种为碳源生产油脂。
5.根据权利要求4所述的用途，其特征在于，所述酵母菌株利用葡萄糖、木糖、蔗糖、乙醇、菊粉中的一种或几种为碳源生产C18:1和/或C18:2不饱和脂肪酸。
6.根据权利要求3所述的用途，其特征在于，所述酵母菌株利用木质纤维素水解产物为碳源生产油脂。
7.一种根据权利要求1所述的酵母菌株Curvibasidium rogersiiJBA-MBY-JT230在利用木质纤维素类生物质水解液生产微生物油脂中的用途。
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