CN112725192B - 一种紫丁香蘑菌株及其栽培方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一株紫丁香蘑菌株，通过野生紫丁香蘑子实体的组织分离获得ZDXM1菌株，所述的紫丁香蘑ZDXM1菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC）；保藏日：2020年12月04日；保藏登记入册的编号CGMCC NO.21086，本发明通过组织分离得到野生紫丁香蘑ZDXM1菌株，掌握了该菌种的扩繁方法，为紫丁香蘑人工栽培提供了菌种保障；摆脱了以往只能在带有阔叶树或茶园的特殊环境下进行仿生栽培的传统模式，突破了紫丁香蘑的纯人工栽培技术，保护了该物种的种质资源，开发了珍稀食用菌新品种。利用废弃的农作物秸秆种植紫丁香蘑，减少了环境污染，经济效益、社会效益和生态效益良好。

Description

一种紫丁香蘑菌株及其栽培方法

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种紫丁香蘑菌株及其栽培方法。

背景技术

紫丁香蘑Lepista nuda (Bull.) Cooke又名紫晶蘑、兰花菌、米汤菌，在国内分布广泛，从我国最北端的黑龙江到最南部的云南都有，在云南主要分布在滇西和滇南、滇东北以及滇中地区，通常发生于10、11月份，口味香浓、色泽鲜艳呈紫色，是一种富含营养成分且具有多种药理作用的野生珍稀食用菌，在欧洲受欢迎程度与松茸及牛肝菌齐名，有着很好的经济效益。目前针对紫丁香蘑的研究主要集中于生物学特性、菌种分离鉴定、菌种培养、营养成分及其功能评价等方面。近年来我国科研工作者就在不断地进行同属中的花脸香蘑L.sordida人工驯化栽培研究，目前已取得较大突破。与前者相比，有关紫丁香蘑的驯化栽培还处于菌株分离鉴定、生物学特性、液体培养基及二级种筛选优化等基础研究，但栽培方面研究鲜有报道，从已有的关于紫丁香蘑栽培的文献来看，紫丁香蘑栽培的研究报道较少，庄司当等在进行林地栽培研究时，用腐叶土和山土9:1( 质量比) 混合，加入米糠、玉米渣、蛋白胨、酵母粉、葡萄糖为培养基，获得紫丁香蘑子实体（庄司当,王波.紫丁香蘑林地栽培试验.国外农学:国外食用菌,1989,1(4):6-8.）。戴彩云等在密植茶园这一特殊的生态环境下进行紫丁香蘑覆土栽培，最终成功出菇，从覆土播种到出菇耗时长达7个月（戴彩云，催晓明.茶园自生食用菌紫丁香蘑的驯化栽培.贵州茶叶,1994,1(1):24-26.）。综上，在国内，前人主要采用林下或茶园仿生栽培模式来种植紫丁香蘑，相对于其它覆土栽培的常规菇种如双孢蘑菇、大球盖菇、鸡腿菇、平菇等来说，该菌从覆土栽培到出菇这一过程是在有阔叶林或密植茶园这些特殊的生境下完成的，但在纯粹的人工栽培环境（比如食用菌种植大棚或智能出菇房）下是否能出菇仍然是未知的。此外该菌从覆土到出菇周期太长，且栽培过程中随时要保持相对潮湿的环境，水源的消耗比较大，管理上耗时费力。由上可知，其人工栽培还处于小规模的实验阶段，主要以仿生栽培模式为主，日常市场上几乎未见人工栽培的紫丁香蘑，可见其栽培技术并不成熟，还有待于进一步研究，然而至今未见有相关规模化栽培的研究报道，因此发明一种适用于紫丁香蘑分离扩繁及其覆土栽培方法是非常必要的。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种紫丁香蘑菌株；第二目的在于提供所述的紫丁香蘑菌株（Lepista nuda (Bull.) Cooke）ZDXM1的栽培方法。

除非另有说明外，本发明中所采用的百分数均为质量百分数。

本发明的第一目的是这样实现的，紫丁香蘑菌株（Lepista nuda (Bull.) Cooke）ZDXM1，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC），保藏日：2020年12月1日，保藏编号：CGMCC No.21086。

——紫丁香蘑菌株（Lepista nuda (Bull.) Cooke）ZDXM1的获得与鉴定

本发明所述的紫丁香蘑（Lepista nuda (Bull.) Cooke）ZDXM1菌株分离自野生紫丁香蘑标本（标本于2018年11月份采集于中国云南昆明市嵩明县）。通过传统形态特征，结合核糖体大亚基nLSU序列测序，对紫丁香蘑标本及其分离菌株ZDXM1进行分类鉴定。

一、ZDXM1菌株分离培养

将野生紫丁香蘑子实体作为驯化材料，采用组织分离法得到紫丁香蘑ZDXM1菌株，再将其菌丝体接种到改良PDA培养基斜面上，于20~25℃下培养13~15d，获得试管菌种，于4~6℃保存备用。所述的试管琼脂培养基的配方为改良PDA培养基，配方为：土豆200g/L，葡萄糖20g/L，琼脂15g/L，蛋白胨3g/L，酵母膏1g/L，硫酸镁0.5g/L，磷酸氢二钾1g/L。

二、形态学特征

子实体中等大小，菌盖直径3.5~10cm，半球形至平展，幼时亮紫色、丁香紫色，成熟时变为淡紫色，光滑，湿润，边缘内卷，无条纹。菌肉淡紫色，较厚。菌褶紫色或淡紫色，直生至稍延生，边缘往往呈小锯齿状。菌柄长4~9 cm，粗0.5~2 cm，圆柱形，同菌盖色，初期上部有絮状粉末，下部光滑或具有纵条纹，内实，基部稍膨大。担子具2~4个小梗（图6B），担孢子无色，长椭圆形，近光滑，(5~9.5) μm×(3.5~5.5) μm（图6A）。菌株ZDXM1菌丝在改良PDA培养基上呈淡紫色或紫色，辐射状生长，后期会形成大量絮状气生菌丝，并产生色素使培养基变为黄褐色或褐色，大约13d左右菌丝可长满整个平皿（6cm）（图3A）。其双核菌丝壁薄，分枝较多，有隔，透明，会形成大量的琐状联合结构（图3B），综上，紫丁香蘑ZDXM1（CGMCCNO.21086）具有显著香蘑属真菌特征，初步确定其为香蘑属真菌。

三、分子鉴定

本发明对野生紫丁香蘑子实体及其菌丝分离物ZDXM1进行DNA提取和核糖体大亚基nLSU序列（所用引物为LROR和LR5组成的引物对）测序，将所测得试验样品的nLSU序列提交NCBI数据库进行BLAST序列比对分析，结果显示野生紫丁香蘑子实体与NCBI中的L.nudaAY207223高达99.77%，ZDXM1菌株与L.nudaMH878423的同源相似性高达99.44%，分析确定实施例1分离得到的ZDXM1菌株为本发明所述的紫丁香蘑L.nuda。 分析确定实施例1分离得到的紫丁香蘑ZDXM1（CGMCC NO.21086）为本发明所述的紫丁香蘑L.nuda。

LROR：5’-ACCCGCTGAACTTAAGC-3’；

LR5：5’-TCCTGAGGGAAACTTCG-3’。

鉴于上述形态特征及核糖体大亚基nLSU序列的分类鉴定研究，确定本发明菌株为紫丁香蘑L.nuda。紫丁香蘑（Lepista nuda (Bull.) Cooke）ZDXM1，已在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，其保藏日为2020年12月04日，保藏编号为CGMCCNO.21086；所述紫丁香蘑ZDXM1菌株属于担子菌门、伞菌纲、伞菌目、口蘑科、香蘑属。

本发明的第二目的是这样实现的，包括栽培种制备和大棚栽培步骤，具体包括：

A、栽培种制备：

1）母种扩繁：将紫丁香蘑（Lepista nuda (Bull.) Cooke）ZDXM1的菌丝接种到改良PDA培养基上，于温度20~25℃避光培养13~15天得到扩繁母种；

2）原种制备：将扩繁母种菌块接种到原种培养料中于温度20~25℃避光培养40~45天得到扩繁原种；

3）栽培种制备：将扩繁原种接种到栽培种培养料上于温度20~25℃避光培养得到栽培种；

所述的改良PDA培养基配方为：土豆100~300g/L，葡萄糖15~30g/L，琼脂15~20g/L，蛋白胨2~4g/L，酵母膏0.5~1.5g/L，硫酸镁0.2~0.7g/L，磷酸氢二钾0.5~1.5 g/L；

所述的原种培养料配方为：稻（麦）草75~85份，麦麸12~22份，蔗糖0.5~1.5份，石灰0.5~1.5份；

所述的栽培种培养料配方为：主料75~85份，麦麸12~22份，石膏0.5~1.5份，石灰0.5~1.5份；所述的主料为稻（麦）草、玉米芯、阔叶树木屑、棉籽壳中的2种或多种原料组成的混合料；

B、大棚栽培：

a、播种：将栽培种菌种处理成菌块播撒到畦床上，接着在菌种层上播撒一层栽培料，在料面上再播撒一层菌种进行封面以防止杂菌滋生，然后再覆盖一层土壤，最后再加盖一层保湿层；

所述的栽培料的配方为：主料75~85份，麦麸12~22份，石膏0.5~1.5份，石灰0.5~1.5份；所述的主料为稻（麦）草、玉米芯、阔叶树木屑、棉籽壳中的2种或多种原料组成的混合料；

b、管理：栽培初期保持土壤含水量为30%~50%，空气湿度为60%~75%，气温20℃~25℃，待畦床中菌丝开始扭结爬出土面后，采用滴灌或喷灌喷淋重水1~2次，刺激原基形成，整个栽培期要经常通风换气保持棚内空气清新，避免高温高湿环境造成菌种感染杂菌，在播种80~90d后，开始出现菌蕾，此后每天土壤含水量保持在45%~60%，控制空气湿度在75%~90%之间，气温在10℃~22℃之间，温度高于30℃要及时通风换气；

C、采收：在紫丁香蘑菌盖开伞前即进行采收。

所述的栽培方法具体操作如下：

一、栽培种制备：

1）紫丁香蘑ZDXM1菌株的母种扩繁：将组织分离获得的紫丁香蘑ZDXM1（CGMCCNO.21086）的菌丝接种至改良PDA培养基（平皿）上，培养条件为20~25℃恒温避光，单次培养时间为13~15d；

2）紫丁香蘑ZDXM1菌株的原种制备：从扩繁母种中挑取3~4块2cm³大小菌块接种至装有培养料的原种瓶中继续扩大培养，培养条件为20~25℃恒温避光，单次培养时间为40~45d；

3）紫丁香蘑ZDXM1菌株的栽培种制备：用接种枪从扩繁原种中均匀地取12~16g原种，接种于装有栽培种培养料的塑料袋中，20~25℃下培养至菌丝满袋，即完成扩繁。

二、大棚栽培

将发完菌的栽培种移送至自然常温大棚或者控温型大棚中进行覆土栽培，为了更好的阐明覆土栽培过程，这里以自然常温大棚栽培为例进行阐述，具体包括如下步骤：

1）栽培季节：紫丁香蘑属中低温菌类，覆土栽培时将大棚内温度保持在20~25℃，有利于覆土栽培后菌丝快速萌发定植。

2）整畦：利用人工或机械翻耕疏松土壤，整地前每亩地块可撒30kg~60kg生石灰，起到杀菌、杀虫的作用。最后开厢作畦备用。

3）播种：将发完菌的栽培种移至食用菌栽培大棚，将菌棒外袋脱去，把菌种弄碎成蚕豆大小的菌块，播撒到提前整理好的畦床上，菌种厚度3~4cm，接着在菌种层上播撒一层预先灭菌处理的栽培料，厚度在2~3cm左右，最后在整个料面上撒一层薄薄的菌种进行封面。

4）覆土：菌种播撒完成后，在料面上覆盖一层1.5~2.5cm厚的棚内土壤，要保证将菌种全部覆盖，最后加盖一层松针保湿。

5）出菇管理：栽培期保持土壤含水量为30%~60%左右，空气湿度60%~90%，气温10℃~25℃，整个栽培期要经常通风换气保持棚内空气清新。

6）采收及后续管理：紫丁香蘑菌盖即将要开伞前要及时进行采收，采完菌后养菌3~5d，继续按照之前的出菇管理方法养菌出菇。

与现有技术相比，本发明的有益效果：

1、本发明通过组织分离得到野生紫丁香蘑ZDXM1菌株，掌握了该菌种的扩繁方法，为紫丁香蘑人工栽培提供了菌种保障；并通过纯人工栽培技术获得了紫丁香蘑子实体，保护了该物种的种质资源，开发了食用菌新品种。

2、本发明得到的紫丁香蘑菌种可运至食用菌种植大棚内进行覆土栽培，摆脱了以往只能在带有阔叶树或茶园等特殊环境下进行仿生栽培的传统模式，突破了紫丁香蘑的纯人工栽培技术。采用大棚种植紫丁香蘑，出菇管理这一过程集中而统一，能更有效地将温度、湿度、光照强度等外界环境控制在合理的范围，大大提高了紫丁香蘑人工栽培的成功率，与传统仿生栽培周期（7个月）相比，本发明将此周期（从覆土栽培至出菇）缩短至3个月左右，大大节省了人力、物力以及管理成本。

3、本发明利用了大量的农作物秸秆（稻麦草、玉米芯）种植紫丁香蘑，使废弃的农作物秸秆得到有效利用，减少环境污染，经济效益、社会效益和生态效益良好，此外本发明所制备的紫丁香蘑菌种发菌好，发菌后期不容易腐败变质，耐贮性好，且污染率低。

附图说明

图1为野生紫丁香蘑子实体；

图2为紫丁香蘑ZDXM1（CGMCC NO.21086）菌株试管菌种；

图3 紫丁香蘑ZDXM1（CGMCC NO.21086）菌株在平板上培养13d的菌丝体生长情况及其显微结构；

其中：A为菌落；B为双核菌丝锁状联合；

图4紫丁香蘑ZDXM1（CGMCC NO.21086）菌株大棚覆土栽培30d的菌丝爬土情况；

图5紫丁香蘑ZDXM1（CGMCC NO.21086）菌株大棚覆土栽培90d出菇情况；

其中：a、b为子实体幼菇期；c、d为子实体成熟期；

图6为大棚内覆土栽培获得紫丁香蘑子实体的担子和担孢子；

其中：A为担孢子；B为长在担子上的孢子。

具体实施方式

下面结合实施例和附图对本发明作进一步的说明，但不以任何方式对本发明加以限制，基于本发明教导所作的任何变换或替换，均属于本发明的保护范围。

本发明所述的紫丁香蘑菌株（Lepista nuda (Bull.) Cooke）ZDXM1，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC），保藏日：2020年12月04日，保藏编号：CGMCC No.21086。

本发明所述的紫丁香蘑菌株（Lepista nuda (Bull.) Cooke）ZDXM1的栽培方法，包括栽培种制备和大棚栽培步骤，具体包括：

A、栽培种制备：

1）母种扩繁：将紫丁香蘑（Lepista nuda (Bull.) Cooke）ZDXM1的菌丝接种到改良PDA培养基上，于温度20~25℃避光培养13~15d得到扩繁母种；

2）原种制备：将扩繁母种菌块接种到原种培养料中于温度20~25℃避光培养40~45天得到扩繁原种；

3）栽培种制备：将扩繁原种接种到栽培种培养料上于温度20~25℃避光培养得到栽培种；

所述的改良PDA培养基配方为：土豆100~300g/L，葡萄糖15~30g/L，琼脂15~20g/L，蛋白胨2~4g/L，酵母膏0.5~1.5g/L，硫酸镁0.2~0.7g/L，磷酸氢二钾0.5~1.5 g/L；

所述的原种培养料配方为：稻（麦）草75~85份，麦麸12~22份、蔗糖0.5~1.5份、石灰0.5~1.5份；

所述的栽培种培养料配方为：主料75~85份，麦麸12~22份，石膏0.5~1.5份，石灰0.5~1.5份；所述的主料为稻（麦）草、玉米芯、阔叶树木屑、棉籽壳中的2种或多种原料组成的混合料；

B、大棚栽培：

a、播种：将栽培种菌种处理成菌块播撒到畦床上，接着在菌种层上播撒一层栽培料，在料面上再播撒一层菌种进行封面以防止杂菌滋生，然后再覆盖一层土壤，最后再加盖一层保湿层；

所述的栽培料的配方为：主料75~85份，麦麸12~22份，石膏0.5~1.5份，石灰0.5~1.5份；所述的主料为稻（麦）草、玉米芯、阔叶树木屑、棉籽壳中的2种或多种原料组成的混合料；

b、管理：栽培初期保持土壤含水量为30%~50%，空气湿度为60%~75%，气温20℃~25℃，待畦床中菌丝开始扭结爬出土面后，采用滴灌或喷灌喷淋重水1~2次，刺激原基形成，整个栽培期要经常通风换气保持棚内空气清新，避免高温高湿环境造成菌种感染杂菌，在播种80~90d后，开始出现菌蕾，此后每天土壤含水量保持在45%~60%，控制空气湿度在75%~90%之间，气温在10℃~22℃之间，温度高于30℃要及时通风换气；

C、采收：在紫丁香蘑菌盖开伞前即进行采收。

所述的改良PDA培养基配方为：土豆200g/L，葡萄糖20g/L，琼脂15g/L，蛋白胨3g/L，酵母膏1g/L，硫酸镁0.5g/L，磷酸氢二钾1g/L。

所述的原种培养料配方为：稻（麦）草75~85份，麦麸12~22份，蔗糖0.5~1.5份，石灰0.5~1.5份；

A步骤中所述的栽培种培养料配方为：主料75~85份，麦麸12~22份，石膏0.5~1.5份，石灰0.5~1.5份；所述的主料为稻（麦）草、玉米芯、阔叶树木屑、棉籽壳中的2种或多种原料组成的混合料。

B步骤中所述的栽培料配方为：主料75~85份，麦麸12~22份，石膏0.5~1.5份，石灰0.5~1.5份；所述的主料为稻（麦）草、玉米芯、阔叶树木屑、棉籽壳中的2种或多种原料组成的混合料。

B步骤a）中所述的土壤的厚度为1.5~2.5cm。

B步骤a）中所述的保湿层为松针。

所述的保湿层的厚度为0.5~1.5 cm 。

下面以具体实施对本发明做进一步说明：

下述各实施例中使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法；下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

实施例1

紫丁香蘑ZDXM1（CGMCC NO.21086）的分离、培养、鉴定及保藏

本实施例所述的紫丁香蘑（Lepista nuda (Bull.) Cooke）ZDXM1菌株分离自野生紫丁香蘑标本（标本于2018年11月份采集于中国云南昆明市嵩明县）。通过传统形态特征，结合核糖体大亚基nLSU序列测序，对紫丁香蘑标本及其分离菌株ZDXM1进行分类鉴定。

一、ZDXM1菌株分离培养

将野生紫丁香蘑子实体作为驯化材料，采用组织分离法得到紫丁香蘑ZDXM1菌株，再将其菌丝体接种到改良PDA培养基斜面上，于25℃下培养13d，获得试管菌种，于4~6℃保存备用。所述的试管琼脂培养基的配方为改良PDA培养基，配方为：土豆200g/L，葡萄糖20g/L，琼脂15g/L，蛋白胨3g/L，酵母膏1g/L，硫酸镁0.5g/L，磷酸氢二钾1g/L。

二、形态学特征

子实体中等大小，菌盖直径3.5~10cm，半球形至平展，幼时亮紫色、丁香紫色，成熟时变为淡紫色，光滑，湿润，边缘内卷，无条纹。菌肉淡紫色，较厚。菌褶紫色或淡紫色，直生至稍延生，边缘往往呈小锯齿状。菌柄长4~9cm，粗0.5~2cm，圆柱形，同菌盖色，初期上部有絮状粉末，下部光滑或具有纵条纹，内实，基部稍膨大。担子具2~4个小梗（图6的B），担孢子无色，长椭圆形，近光滑，(5~9.5) um×(3.5~5.5) um（图6的A）。菌株ZDXM1菌丝在改良PDA培养基上呈淡紫色或紫色，辐射状生长，后期会形成大量絮状气生菌丝，并产生色素使培养基变为黄褐色或褐色，大约13d左右菌丝可长满整个平皿（6cm）（图3的A）。其双核菌丝壁薄，分枝较多，有隔，透明，会形成大量的琐状联合结构（图3的B），综上，紫丁香蘑ZDXM1（CGMCCNO.21086）具有显著香蘑属真菌特征，初步确定其为香蘑属真菌。

三、分子鉴定

本实施例对野生紫丁香蘑子实体及其菌丝分离物ZDXM1进行DNA提取和核糖体大亚基nLSU序列（所用引物为LROR和LR5组成的引物对）测序，将所测得试验样品的nLSU序列提交NCBI数据库进行BLAST序列比对分析，结果显示野生紫丁香蘑子实体与NCBI中的L.nuda AY207223高达99.77%，ZDXM1菌株与L.nudaMH878423的同源相似性高达99.44%，分析确定实施例1分离得到的ZDXM1菌株为本发明所述的紫丁香蘑L.nuda。分析确定实施例1分离得到的紫丁香蘑ZDXM1（CGMCC NO.21086）为本发明所述的紫丁香蘑L.nuda。

LROR：5’-ACCCGCTGAACTTAAGC-3’；

LR5：5’-TCCTGAGGGAAACTTCG-3’。

鉴于上述形态特征及核糖体大亚基nLSU序列的分类鉴定研究，确定本发明菌株为紫丁香蘑L.nuda。紫丁香蘑（Lepista nuda (Bull.) Cooke）ZDXM1，已在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，其保藏日为2020年12月04日，保藏编号为CGMCCNO.21086；所述紫丁香蘑ZDXM1菌株属于担子菌门、伞菌纲、伞菌目、口蘑科、香蘑属。

实施例2

紫丁香蘑ZDXM1（CGMCC NO.21086）子实体栽培的方法

本实施例所述的紫丁香蘑的栽培方法，包括以下步骤：

母种扩繁

原种制备

栽培种制备

接种

覆土

采收

1）紫丁香蘑ZDXM1菌株的母种扩繁：将组织分离获得的紫丁香蘑ZDXM1（CGMCCNO.21086）的菌丝接种至改良PDA培养基（6cm平皿）上，培养条件为25℃恒温避光，单次培养时间为13d，所述的改良PDA培养基，配方为：土豆200g/L，葡萄糖20g/L，琼脂15g/L，蛋白胨3g/L，酵母膏1g/L，硫酸镁0.5g/L，磷酸氢二钾1g/L；

2）紫丁香蘑ZDXM1菌株的原种制备：从扩繁母种中挑取4块2cm³大小菌块接种至装有培养料的原种瓶（650mL）中继续扩大培养，培养条件为25℃恒温避光，单次培养时间为40d；所述原种配方为：麦草82%、麦麸17%、蔗糖1%、石灰1%，所述的原种培养料的含水量控制在65%，121℃高压灭菌2.0h。

3）紫丁香蘑ZDXM1菌株的栽培种制备：用接种枪从扩繁原种中均匀地取12g原种，接种于装有栽培种培养料的塑料袋(15cm×30cm×0.05cm)中， 25℃下避光培养60d满袋，即完成扩繁。所述栽培种配方为：麦草35%、木屑30%、棉籽壳17%、麦麸16%、石膏1%、石灰1%，所述的栽培种培养料的含水量控制在65%，121℃高压灭菌2.5h。

4）覆土栽培

A、栽培季节：紫丁香蘑属中低温菌类，覆土栽培时将大棚内温度保持在20~25℃，有利于覆土栽培后菌丝快速萌发定植，本实施例在8月初播种，11月初收获。

B、整畦：利用人工或机械翻耕疏松土壤，整地前每亩地块可撒30kg生石灰，起到杀菌、杀虫的作用。开厢作畦备用，畦面宽0.8m，畦与畦间沟宽约30cm，深10cm，畦长5m。播种前需进行土壤预湿，使得土壤潮湿而不粘。

C、播种：采用菌棒脱袋覆土栽培法，将长满菌丝的栽培种外袋割破，取出菌棒，具体做法是：将菌种弄碎成蚕豆大小的菌块，播撒到提前整理好的畦床上，菌种厚度3cm，接着在菌种层上播撒一层预先灭菌处理的栽培料，厚度在2cm左右，最后在整个料面上播撒一层薄薄的菌种进行封面，以利于紫丁香蘑形成菌种优势，防止青霉、鬼伞等杂菌滋生，影响最终的产量和品质。上述步骤C所述栽培料的制备方法为：完全按照实施例2中栽培种培养基的配方和方法称料，搅拌均匀，建堆发酵，堆高1.0~1.5m，堆长大于4m，将料堆发酵2~3d后，搅拌均匀，用耐高温聚丙烯菌袋(17cm×33cm×0.05cm)装袋，用橡皮筋扎口，在121℃高压灭菌锅灭菌2h，冷却后移入大棚备用。

D、覆土：菌种播撒完成后，在料面上覆盖一层1.5cm厚的棚内土壤，所述的表层土壤为离地表10cm深的土壤，要保证将菌种全部覆盖，最后加盖一层0.5cm厚松针保湿，喷雾状水将土层和松针层浇湿浇透，之后每天在土表喷水保湿，注意勤喷细喷，避免土壤内含水量过高或积水，导致土壤板结，影响紫丁香蘑菌丝生长发育。

E、出菇管理：栽培初期保持土壤含水量为30%~50%，空气湿度为60%~75%，气温20℃~25℃，待畦床中菌丝开始扭结爬出土面后，可采用滴灌或喷灌喷淋重水（以浇透覆土材料但地面没有明显积水为宜）1~2次，刺激原基形成，整个栽培期要经常通风换气保持棚内空气清新，避免高温高湿环境造成菌种感染杂菌，棚内可以放置一定数量的沾虫板杀灭菇蝇等飞虫。播种80~90d后，开始出现菌蕾，此后每天土壤含水量保持在45%~60%，控制空气湿度在75%~90%之间，气温在10℃~22℃之间，温度高于30℃要及时通风换气。

F、采收及后续管理：紫丁香蘑菌盖即将要开伞前要及时进行采收，采完菌后养菌3~5d，继续按照之前的出菇管理方法养菌出菇，约10~15d左右可形成下一潮菇蕾，可采收2~3潮菇。

实施例3

其它步骤同实施例2，不同点在于栽培种培养基及栽培料配方如下：麦草47%、阔叶树木屑35%、麦麸16%、石膏1%、石灰1%。

实施例4

其它步骤同实施例2，不同点在于栽培种培养基及栽培料配方如下：麦草40%、阔叶树木屑25%、玉米芯17%、麦麸16%、石膏1%、石灰1%。

SEQUENCE LISTING

<110> 中华全国供销合作总社昆明食用菌研究所

<120> 一种紫丁香蘑菌株及其栽培方法

<130> 2020

<160> 2

<170> PatentIn version 3.3

<210> 1

<211> 899

<212> DNA

<213> 野生紫丁香蘑子实体LSU序列

<400> 1

ggggggaaga tgaactaaca ggattcccct agtaactgcg agtgaagcgg gaaaagctca 60

aatttaaaat ctggcggtct ctggccgtcc gagttgtaat ctagagaagt gctatccgcg 120

ctggaccgtg tacaagtctc ctggaacgga gcgtcataga gggtgagaat cccgtctttg 180

acacggacta ccagggcttt gtgatgtgct ctcaaagagt cgagttgttt gggaatgcag 240

ctctaaatgg gtggtaaatt ccatctaaag ctaaatattg gcgagagacc gatagcgaac 300

aagtaccgtg agggaaagat gaaaagaact ttggaaagag agttaaacag tacgtgaaat 360

tgttgaaagg gaaacgcttg aagtcagtcg cgttggctgg ggatcaacct tgctcttttg 420

cttggtgtac tttccagttg acgggtcagc atcaattttg attggtggat aaagatcagg 480

ggaatgtggc atcttcggat gtgttatagc ccttggttgc atacatcagt tgggattgag 540

gaactcagca cgccgcaagg ccgggtcttt gaccacgtac gtgcttagga tgctggcata 600

atggctttaa tcgacccgtc ttgaaacacg gaccaaggag tctaacatgc ccgcgagtgt 660

ttgggtggaa aacccggacg cgtaatgaaa gtgaaagttg agatccctgt cgtggggagc 720

atcgacgccc ggaccagacc ttttgtgacg gtcccgcggt agagcgtgta tgttgggacc 780

cgaaagatgg tgaactatgc ctgaataggg tgaagccaga ggaaactctg gtggaggctc 840

gtagcgattc tgacgtgcaa atcgatcgtc gaatttgggt ataggggcga aagactaat 899

<210> 2

<211> 944

<212> DNA

<213> 紫丁香蘑ZDXM1（CGMCC）菌株LSU序列

<400> 2

ggggagacta gcaggattcc cctagtaact gcgagtgaag cgggaaaagc tcaaatttaa 60

aatctggcgg tctctggccg tccgagttgt aatctagaga agtgctatcc gcgctggacc 120

gtgtacaagt ctcctggaac ggagcgtcat agagggtgag aatcccgtct ttgacacgga 180

ctaccagggc tttgtgatgt gctctcaaag agtcgagttg tttgggaatg cagctctaaa 240

tgggtggtaa attccatcta aagctaaata ttggcgagag accgatagcg aacaagtacc 300

gtgagggaaa gatgaaaaga actttggaaa gagagttaaa cagtacgtga aattgttgaa 360

agggaaacgc ttgaagtcag tcgcgttggc tggggatcaa ccttgctctt ttgcttggtg 420

tactttccag ttgacgggtc agcatcaatt ttgattggtg gataaagatc aggggaatgt 480

ggcatcttcg gatgtgttat agcccttggt tgcatacatc agttgggatt gaggaactca 540

gcacgccgca aggccgggtc tttgaccacg tacgtgctta ggatgctggc ataatggctt 600

taatcgaccc gtcttgaaac acggaccaag gagtctaaca tgcccgcgag tgtttgggtg 660

gaaaacccgg acgcgtaatg aaagtgaaag ttgagatccc tgtcgtgggg agcatcgacg 720

cccggaccag accttttgtg acggtcccgc ggtagagcgt gtatgttggg acccgaaaga 780

tggtgaacta tgcctgaata gggtgaagcc agaggaaact ctggtggagg ctcgtagcga 840

ttctgacgtg caaatcgatc gtcgaatttg gaattagggg ccaaaagact aatcgaacct 900

tctagtagct gttctcaaaa tatccccccc cccaaaaaaa accc 944

Claims (1)

1.一种紫丁香蘑菌株（Lepista nuda (Bull.) Cooke）ZDXM1的栽培方法，其特征在于，菌株保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC），保藏日：2020年12月04日，保藏编号：CGMCC No.21086；栽培方法包括如下步骤：

1）母种扩繁：将组织分离获得的紫丁香蘑菌株ZDXM1的菌丝接种至改良PDA培养基上25℃恒温避光培养，单次培养13d；改良PDA培养基配方为：土豆200g/L、葡萄糖20g/L、琼脂15g/L、蛋白胨3g/L、酵母膏1g/L、硫酸镁0.5g/L、磷酸氢二钾1g/L；

2）原种制备：从扩繁母种中挑取4块2cm³菌块接种至装有培养料的原种瓶中25℃恒温避光继续扩大培养，单次培养40d；原种培养料的配方为：麦草82%、麦麸17%、蔗糖1%、石灰1%，原种培养料的含水量控制在65%，121℃高压灭菌2h；

3）栽培种制备：用接种枪从扩繁原种中均匀地取12g原种，接种于装有栽培种培养料的塑料袋中，25℃下避光培养60d至满袋，即完成扩繁；栽培种培养料的配方为：麦草35%、木屑30%、棉籽壳17%、麦麸16%、石膏1%、石灰1%，栽培种培养料的含水量控制在65%，121℃高压灭菌2.5h；

4）覆土栽培

A、栽培季节：覆土栽培时将大棚内温度保持在20~25℃，有利于覆土栽培后菌丝快速萌发定植；

B、整畦：利用人工或机械翻耕疏松土壤，整地前每亩地块撒30kg生石灰；开厢作畦备用，畦面宽0.8m，畦与畦之间的沟宽30cm、深10cm，畦长5m；播种前需进行土壤预湿，使土壤潮湿而不粘；

C、播种：采用菌棒脱袋覆土栽培法，将长满菌丝的栽培种外袋割破，取出菌棒，将菌种弄碎成蚕豆大小的菌块，播撒到提前整理好的畦床上，菌种厚度3cm；然后在菌种层上播撒一层厚度2cm的预先灭菌处理的栽培料，最后在整个料面上播撒一层薄薄的菌种进行封面；栽培料的制备方法：按麦草35%、木屑30%、棉籽壳17%、麦麸16%、石膏1%、石灰1%配料后搅拌均匀，以堆高1.0~1.5m、堆长大于4m建堆发酵，料堆发酵2~3d后搅拌均匀，用耐高温聚丙烯菌袋装袋，用橡皮筋扎口，在121℃高压灭菌锅灭菌2h，冷却后移入大棚备用；

D、覆土：菌种播撒完成后在料面上覆盖一层1.5cm厚的棚内土壤将菌种全部覆盖，最后加盖一层0.5cm厚松针保湿，喷雾状水将土层和松针层浇湿浇透，之后每天在土壤表面喷水保湿，应注意勤喷、细喷，避免土壤内含水量过高或积水，导致土壤板结，影响紫丁香蘑菌丝生长发育；

E、出菇管理：栽培初期保持土壤含水量为30%~50%，空气湿度为60%~75%，气温20℃~25℃，待畦床中菌丝开始扭结爬出土面后，采用滴灌或喷灌喷淋重水1~2次，刺激原基形成；整个栽培期要经常通风换气保持棚内空气清新，避免高温高湿环境造成菌种感染杂菌，棚内放置一定数量的沾虫板杀灭菇蝇；播种80~90d后，开始出现菌蕾，此后每天土壤含水量保持在45%~60%，控制空气湿度在75%~90%，气温在10℃~22℃，若温度高于30℃及时通风换气；

F、采收及后续管理：在紫丁香蘑的菌盖即将开伞前及时采收，采完菌后养菌3~5d，继续按照之前的出菇管理方法养菌出菇，10~15d形成下一潮菇蕾，能采收2~3潮菇。

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