CN114395485A - 一种具有促进石斛茎粗生长的胶膜菌菌株tp-2和应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种具有促进石斛茎粗生长的胶膜菌(Tulasnella sp.)菌株TP‑2和应用，属于微生物技术领域。一种具有促进石斛茎粗生长的胶膜菌菌株TP‑2，保藏编号为CCTCC NO：M 20211281。所述菌株TP‑2是从铁皮石斛幼苗迁地诱导实验中获得的形成共生关系的菌根中分离筛选得到，与同批分离的其他菌株相比，菌株TP‑2能够显著促进铁皮石斛幼苗的茎粗生长。可见，铁皮石斛幼苗与菌株TP‑2表现出有益的共生关系，利用TP‑2菌株与铁皮石斛幼苗共生壮苗，可实现铁皮石斛幼苗菌根化，也可作为铁皮石斛栽培的生物菌剂原料。

Description

一种具有促进石斛茎粗生长的胶膜菌菌株TP-2和应用

技术领域

本发明属于微生物技术领域，具体涉及一种具有促进石斛茎粗生长的胶膜菌(Tulasnella sp.)菌株TP-2和应用。

背景技术

石斛属(学名：Dendrobium Sw.)附生植物，石斛，又名万丈须。假鳞茎丛生，伸长呈茎状，多节；总状花序生茎上部节上，具花数朵或仅1朵；花大而艳丽，花被片开展，侧萼片宽阔的基部着生在蕊柱足上，与唇瓣基部共同形成萼囊；唇瓣3裂。本属国产种类中具细茎而花小的类群，如细茎石斛、铁皮石斛、梳唇石斛、美花石斛、钩状石斛、霍山石斛等是中药“石斛”的原植物；茎粗而花大的种类均可作花卉供观赏。其中铁皮石斛(Dendrobiumofficinale)被《道藏》誉为“中华九大仙草之首”，具有多种药理作用。然而石斛植物自然条件下繁殖率低，生长周期长，再加上生境破坏严重，导致野生资源极度匮乏，因此急需人工栽培石斛的方法。

铁皮石斛幼苗可通过非共生萌发培养和共生萌发培养两种方式获得，通过非共生萌发培养，虽具有较高幼苗率，但是方法获得的幼苗移植到自然环境，由于缺少与之建立共生关系的真菌伙伴，适应能力弱，抗病原微生物能力差，生长缓慢，且存活率低，导致后继生长严重受阻。而共生萌发培养技术是指在特定的基质(培养基)中同时播种植物种子和侵染促进种子萌发的共生真菌，该方法可以提高种子的萌发率、幼苗形成率。但由于兰科植物与其真菌伙伴组成复杂多样，幼苗建成后，幼苗矮小，抵御外界阻力能力弱，生长往往受阻停滞或者直接致死，故幼苗后期生长需要与更适合的真菌形成共生，刺激幼苗继续生长。因此，确定能与铁皮石斛幼苗形成共生关系并促进其生长的有效真菌是培育、保护铁皮石斛的关键环节。而菌根化的幼苗的获取是开展铁皮石斛保护、回归、重建种群实践、以及发展铁皮石斛恢复友好栽培的基础。铁皮石斛在各生长阶段所需的真菌种类不一样，通过测定铁皮石斛原球茎和组培苗的生理指标发现，内生真菌主要通过产生内源激素来调节铁皮石斛的生长发育的。然而，现有技术报道了从铁皮石斛成年植株根分离获得的真菌菌株，有些菌株对石斛种子和原球茎致死，有些菌株则能够促进铁皮石斛生长，主要体现在提高幼苗鲜重增长、叶绿素含量、促进营养元素的吸收等方面。石斛为附生草本，茎丛生，少有疏生在匍匐茎上，大风暴雨均可能导致石斛茎发生折断，从而影响幼苗的成活率。因此，提供一种石斛幼苗茎粗的胶膜菌菌株对于人工培育石斛幼苗是有帮助的。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种胶膜菌菌株TP-2，具有促进石斛茎粗的作用，能够用于石斛栽培中。

本发明提供了一种具有促进石斛茎粗生长的胶膜菌菌株TP-2，保藏编号为CCTCCNO：M 20211281。

优选的，胶膜菌菌株TP-2的ITS序列如SEQ ID NO:1所示。

本发明提供了一种用于培育石斛植物的产品，包括所述胶膜菌菌株TP-2和可接受的辅料。

优选的，所述产品包括植物菌肥和微生物菌剂。

本发明提供了所述胶膜菌菌株TP-2或所述产品在促进石斛生长中的应用。

优选的，所述石斛生长包括促进石斛茎粗生长。

本发明提供了所述胶膜菌菌株TP-2在制备促进石斛生长的产品中的应用。

本发明提供了一种促进石斛幼苗茎粗生长的方法，包括以下步骤：

将石斛幼苗和所述胶膜菌菌株TP-2进行共生培养。

优选的，所述石斛包括铁皮石斛。

优选的，所述共生培养的温度为23～27℃，所述共生培养的光周期L/D＝12/12，光照强度为2000～3000Lx。

本发明提供的具有促进石斛茎粗生长的胶膜菌菌株TP-2，是从铁皮石斛幼苗迁地诱导获得的形成共生关系的幼苗菌根中分离筛选获得，经形态鉴定以及分子鉴定，得到TP-2菌株属于胶膜菌 (Tulasnella sp.)。与同批分离的同种或不同种菌株比，TP-2菌株与铁皮石斛共生培养能够显著促进茎粗生长，将所述菌株TP-2进行保藏，保藏编号为CCTCC NO：M 20211281。与此同时，所述菌株TP-2 还能促进幼苗叶片、根系、萌蘖、株高生长，提高幼苗的鲜重及干重。利用胶膜菌属真菌TP-2将铁皮石斛幼苗菌根化，可获得适应性强，节茎粗壮、成活率高的共生幼苗，有望实现重建铁皮石斛种群，实现药用铁皮石斛高效栽培。

本发明还提供一种促进石斛幼苗茎粗生长的方法，工艺简单，操作容易，成本低，适于推广应用，在珍稀濒危兰科植物的回归保护、种群重建实践、药用兰科植物的生态栽培、解决铁皮石斛栽培产业的优质种苗来源瓶颈问题等方面都具有巨大的推广应用价值。

附图说明

图1为本发明使用菌株TP-2与铁皮石斛共生促进幼苗茎粗生长的形态图。

生物材料保藏存活信息

胶膜菌属真菌(Tulasnella sp.)，于2021年10月15日保藏在中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏地址：湖北省武汉市武昌区八一路武汉大学，保藏编号为：CCTCC NO：M20211281，菌株编号为TP-2。

具体实施方式

本发明提供了一种具有促进石斛茎粗生长的胶膜菌菌株TP-2，保藏编号为CCTCCNO：M 20211281。

在本发明中，所述菌株TP-2是从铁皮石斛幼苗迁地诱导获得的形成共生关系的幼苗菌根中分离得到。所述菌株TP-2的形态特征如下：在PDA平板上培养10天，其菌落呈白色毯状，气生菌丝发达，规则圆形发散生长，菌落表面粗糙、干燥，边缘菌丝较稀薄。所述菌株TP-2的菌丝特征如下：观察菌株显微形态特征，在25±2℃条件下培养箱内黑暗培养10天，光学显微镜下观察，菌丝粗35～4.41μm，分枝近直角，新菌丝着生于老菌丝顶部，具更明显隔膜，且隔膜数量更多，老菌丝细胞壁具有加厚现象。经ITS分子鉴定，胶膜菌菌株 TP-2的ITS序列优选如SEQ ID NO:1所示，经比对，该菌株与真菌 Tulasnella sp.(NCBI登录号GQ241863.1)最为相似，最大相似度达到99％。综合形态鉴定、分子鉴定，所述菌株TP-2被鉴定为胶膜菌 (Tulasnella sp.)。

在本发明中，所述菌株TP-2的扩大培养方法，优选包括以下步骤：

将菌株TP-2接种在PDA培养基上，经黑暗培养至真菌菌丝长满培养皿即可。

本发明对PDA培养基的种类没有特殊限制，采用本领域所熟知的PDA培养基即可。所述接种量优选为0.5cm³体积对应一个培养皿 (直径100mm)。所述黑暗培养的温度优选为23～27℃，更优选为 25℃。所述黑暗培养优选在人工气候箱中进行。

在本发明中，利用所述菌株TP-2对石斛幼苗的根部进行菌根化，统计石斛幼苗茎粗的变化，结果表明，与不接内生菌组(PDA组) 和其他从幼苗根中分离的菌株相比，大部分胶膜菌菌株(除TP-9外，分离的TP-2、TP-4和TP-6)与非胶膜菌菌株相比，表现出促进石斛幼苗茎粗的特性，虽然TP-13菌株在培养前期促进茎粗生长效果最好，但到后期，其促进效应并不明显，这表明TP-13的促进效果不稳定。与其他胶膜菌株(分离的TP-4和TP-6)相比，菌株TP-2在培养前期和后期均能显著提高石斛茎粗，这表明，菌株TP-2对石斛幼苗茎粗生长有明显的促进效果。

本发明提供了一种用于培育石斛植物的产品，包括所述胶膜菌菌株TP-2和可接受的辅料。所述产品优选包括植物菌肥和微生物菌剂。本发明对所述植物菌肥和微生物菌剂的制备方法不做特殊限制，采用本领域所熟知的植物菌肥和微生物菌剂的制备方法即可。例如，微生物菌剂的制备方法，优选将上述扩大培养获得的菌株TP-2的菌丝接种至培养基上，待菌丝长满培养基后，混合，得到植物菌剂。所述植物菌肥优选是将上述扩大培养获得的菌株TP-2的菌丝接种至培养基上，待菌丝长满培养基后，与营养成分混合，得到菌肥。所述培养基包括麦麸、米糠、10％葡萄糖溶液等。所述麦麸、米糠、质量浓度10％葡萄糖溶液的体积比为2：3：3。每500ml培养基添加10片0.5cm³体积大小的菌块。所述培养的温度优选为23～27℃，更优选为25℃。所述培养优选为黑暗培养。所述培养的时间优选为14～16d，更优选为15天，直至辅料具有大量菌丝附着。所述营养成分还优选包括营养元素或有机肥等。

本发明提供了所述胶膜菌菌株TP-2或所述产品在促进石斛生长中的应用。

在本发明中，所述石斛生长优选包括促进石斛的茎粗生长。同时菌株TP-2能够促进幼苗叶片、根系的生长，提高萌蘖能力，增加有机物的含量(干重)等，但与其他菌株相比，未达到显著水平。铁皮石斛幼苗与本发明菌株TP-2表现出有益的共生关系，可利用该菌株壮苗，利用TP-2菌株与铁皮石斛幼苗共生壮苗，实现铁皮石斛幼苗菌根化，同时可作为铁皮石斛栽培的生物菌剂原料。鉴于菌株TP-2 提高幼苗的茎粗的优势特性，能够大大提高幼苗的移栽成活率。

本发明提供了所述胶膜菌菌株TP-2在制备促进石斛生长的产品中的应用。所述产品优选包括所述胶膜菌菌株TP-2和可接受的辅料。所述产品优选包括植物菌肥和微生物菌剂。所述产品与上述技术方案中所述产品相同，在此不做赘述。

本发明提供了一种促进石斛幼苗茎粗生长的方法，包括以下步骤：

将石斛幼苗和所述胶膜菌菌株TP-2进行共生培养。

本发明所述方法对所述石斛的种类没有特殊限制，采用本领域所熟知的石斛属植物即可，例如，细茎石斛、铁皮石斛、梳唇石斛、美花石斛、钩状石斛、霍山石斛。本发明实施例中，以铁皮石斛为例加以说明菌株TP-2与石斛的共生从而促进茎粗生长的方案，但不能理解为对本发明保护范围的限制。

在本发明中，所述共生培养用培养基优选包括燕麦培养基。所述燕麦培养基优选包括以下含量的组分：4g·L^-1燕麦和10g·L^-1琼脂，培养基pH为5.6～5.8。所述石斛幼苗的接种和所述胶膜菌菌株TP-2 移栽的顺序没有特殊限制，采用本领域所熟知的共生关系的植株和菌的接种移栽顺序即可。在本发明实施例中，优先将石斛幼苗移栽至共生培养上，再接种菌株TP-2。菌株TP-2的接种量为每120ml燕麦培养基接种0.5cm³的菌株TP-2菌块。所述菌株TP-2菌块参见上述扩大培养方法获得即可。

在本发明中，所述共生培养的温度优选为23～27℃，更优选为 25℃。所述共生培养的光周期L/D＝12/12，光照强度优选为2000～ 3000Lx，更优选为2500Lx。所述共生培养优选在人工气候箱中进行，以便能够严格控制光照、温度等条件。所述共生培养的时间优选为 30～120d，更优选为90d。所述共生培养有利于胶膜菌菌株TP-2对石斛幼苗进行菌根化。菌株TP-2作为内生菌，通过分泌一定活性成分达到促进幼苗茎粗生长的技术效果。

下面结合实施例对本发明提供的一种具有促进石斛茎粗生长的胶膜菌菌株TP-2和应用进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。

实施例1

菌株TP-2的分离、纯化和鉴定方法

(一)菌株TP-2的分离、纯化

1.迁地诱导铁皮石斛幼苗菌根

(1)2018年7月底至9月，团队实地调研多个地方，采访当地采药人，最终确认云南广南(23°58′N,105°11′E；1428m alt.)、湖南崀山喀斯特地貌(26°30′N,111°10′E；340malt.)与丹霞地貌(26°20′ N,110°46′E；455m alt.)、重庆罗田(30°31′N,108°33′E；1200malt.)，四川泸定(29°23′N,102°21′E；1382m alt.)和石棉(29°22′N,105°11′ E；3596malt.)六个地方是铁皮石斛原生境，因为历史上采药人于此采集到过野生铁皮石斛。期间采集六个原生境基质带回实验室，将野外带回来的基质分别与无菌混合基质(树皮、泥炭土、火山石以2:1:1 比例混合)等体积混合，然后用无菌水浇灌至饱和，后分装至塑料花盆(半径5cm，高10cm)备用。

(2)选取长势良好的无菌铁皮石斛幼苗，五株为一丛，将其移植到装有诱导基质的塑料花盆，于25±2℃室温条件下光照培养(光周期为12/12h L/D)，保持花盆内基质的湿度，并每隔15天采集幼苗根组织，在显微镜下检查根组织是否被真菌定殖。

(3)移栽60天后，幼苗根组织上发现菌丝团，采集幼苗根样，用于后续的真菌分离实验。

2.胶膜菌TP-2菌株的分离、纯化及保存

(1)根样的来源：铁皮石斛幼苗迁地诱导获得的形成共生关系的幼苗菌根

(2)根样内生真菌的诱导、分离、纯化及保存：在自来水下将用于真菌分离的根样冲洗干净。在超净工作台上，根样放入75％酒精 (C₂H₆O)消毒30s，再移入盛有2％次氯酸钠(NaClO)溶液的灭菌平板中，轻轻搅拌消毒3min，后用无菌尖镊取出，无菌水冲洗 3～4次。用无菌手术刀将根样切成约0.1mm根片段，将其置于PDA 培养基中25℃培养箱黑暗培养。待根片段周围长出真菌菌丝，不断地切取菌丝尖端到新的PDA培养基上作系列转移，转移3～5次后，可得纯菌落，一共获得27株共生真菌。

(3)真菌保存：利用常规的试管斜面法对已纯化的真菌进行保存。将配制好的适量PDA培养基倒入规格为18×20mm的玻璃试管中，培养基倒入量约为试管体积的1/3。硅胶塞后，放入高压灭菌锅内灭菌(121℃，20min)。灭菌后将试管置于超净工作台内摆成斜面待用。在超净工作台上，将纯化后的菌株用无菌接种针挑取边缘菌丝接种于PDA斜面上，并注明菌种、编号、日期。将接种后的试管置于人工气候箱内25±2℃培养。待菌丝要长满PDA斜面时，将试管取出存入4℃冰箱内保存。

(三)胶膜菌属TP-2菌株的鉴定

(1)分子鉴定

采用CTAB法提取真菌菌株TP-2的总DNA，用真菌通用引物 ITS1(TCCGTAGGTGAACCTGCGG，SEQ ID NO:2)和ITS4 (TCCTCCGCTTATTGATATGC，SEQ ID NO:3)；PCR反应体系(25μl) 包括：2.5μl 10×PCR缓冲液，0.4μl dNTP，1.5μl Mg²⁺，1.5μl ITS1，1.5μl ITS4，0.2μlTaq酶，15.4μl ddH₂O，2μl DNA模板；扩增反应在PCR仪Perkin Elmer上进行，如下PCR循环：94℃预变性3min，循环1次；94℃变性1min，51℃退火1min，72℃延伸1min， 30次循环；最后72℃延伸10min；扩增产物送上海生工生物工程有限公司测序。

将胶膜菌属菌株TP-2的nrDNA ITS序列(SEQ ID NO:1)进行 BLAST比对，鉴定结果表明该菌株与真菌Tulasnella sp.(GQ241863.1) 最为相似，最大相似度达到99％。

(2)对菌株TP-2进行形态观察，形态特征如下：

该胶膜菌属菌株在PDA平板上培养10天，其菌落呈白色毯状，气生菌丝发达，规则圆形发散生长，菌落表面粗糙、干燥，边缘菌丝较稀薄。

(3)菌株TP-2进行使用盖玻片插片培养法观察菌株显微形态特征，在25±2℃条件下培养箱内黑暗培养10天，光学显微镜下观察，菌丝粗3.35～4.41μm，分枝近直角，新菌丝着生于老菌丝顶部，具更明显隔膜，且隔膜数量更多，老菌丝细胞壁具有加厚现象。

综合形态学、分子鉴定结果表明，TP-2属于胶膜菌属(Tulasnella sp.)的一株真菌。

将分离得到的菌株TP-2于2018年12月5日保藏在云南大学植物繁殖适应与进化生态学重点实验室兰科植物菌根真菌库，该菌株分类命名为胶膜菌属真菌(Tulasnella sp.)TP-2；并已于2021年10月 15日保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏地址：湖北省武汉市武昌区八一路武汉大学，保藏编号为：CCTCC NO:M 20211281。

对比例1

实施例1中分离的27株内生真菌中，菌株编号TP-3、TP-4、TP-6、 TP-8、TP-9、TP-12、TP-13、TP-14的菌株按照实施例1的方法进行鉴定。

菌株TP-3(SEQ ID NO:4)、TP-4(SEQ ID NO:5)、TP-6(SEQ ID NO:6)、TP-8(SEQ IDNO:7)、TP-9(SEQ ID NO:8)均属于胶膜属真菌(Tulasnella sp.)，菌株TP-12(SEQ ID NO:9)和TP-13(SEQ ID NO:10)均属于瘤菌根菌(Epulorhiza sp)，菌株TP-14(SEQ ID NO:11)属于蜡壳菌属真菌(Sebacina sp.)。

实施例2

胶膜菌属真菌TP-2菌株促进铁皮石斛幼苗茎粗生长有效性实验

利用无菌铁皮石斛幼苗与真菌在培养基内的共生实验来验证该真菌是否对幼苗茎粗生长有促进效果以及对比不同真菌对茎粗生长促进效果的差异：

(1)配制共生培养基：共生萌发培养基为燕麦琼脂培养基，包括4g·L^-1燕麦和10g·L^-1琼脂，培养基pH为5.7；

(2)将用于验证促生长功能的15株菌根真菌及本发明所述胶膜菌属真菌Tulasnella sp.TP-2取出，接种在PDA培养基上，置于人工气候箱内，在温度为25±2℃黑暗培养活化至真菌菌丝长满培养皿得到共生菌株材料；

(3)将长势大约一致(叶：4～5片，根：2条，株高：1.7～2.5cm，茎粗：1.2～1.5mm)的无菌幼苗移栽到装有燕麦琼脂培养基的组培瓶中，每组真菌处理230株苗，46个重复；

(4)将用于共生菌株接种至栽有无菌幼苗的组培瓶中，再置于组培室，在温度为25±2℃条件下恒温培养，光照周期L/D＝12/12，光照强度为2500Lx；

(5)真菌对铁皮石斛幼苗茎粗促进效果和数据统计分析：统计两个时期(共生30天和90天)，利用游标卡尺测量株高1cm处的节茎直径，每次每组至少测量35株幼苗的茎粗，计算出每组茎粗平均值(S)，S＝maen(St)±SE，其中St为各时期幼苗的茎粗，SE为标准误；

共生培养90天截止实验时，利用广义线性模型(GLMs)比较不同真菌接种处理对茎粗生长的影响，并用最小显著性差异(LSD)比较各处理平均值，不同共生真菌处理，对幼苗茎粗影响程度不一，P<0.05 (表1)。

表1不同真菌对铁皮石斛幼苗茎粗生长的影响(30天、90天统计)

注意：小写字母表示不同真菌处理间的显著性。

从表1可知，与铁皮石斛幼苗共生培养30天后，不同真菌处理组包括不接菌处理的PDA对照组茎粗均有生长变粗壮，但生长效果不尽相同。TP-13菌株有最好的促进效果，茎粗达到2.374±0.124mm，同时TP-2、TP-4、TP-6三株共生真菌也要较好的促进效果，均显著高于不接菌处理的PDA对照组。共生培养90天时，除了TP-2、TP-4、 TP-6外，其他真菌菌株处理组的铁皮幼苗茎粗大小与对照组相当。菌株TP-2、TP-4、TP-6接种处理的幼苗其茎粗显著大于对照，并且 TP-2较TP-4、TP-6相比，能显著促进茎粗生长效果，高达2.622±0.12 mm，且较30天高出28.9％。因此，Tulasnella sp.TP-2菌株对铁皮石斛幼苗茎粗生长有最明显的促进效果，且具有长期的促进稳定性。

实施例3

为了进一步明确筛选的TP-2菌株对铁皮石斛生长方面的影响，本发明分别测定幼苗萌蘖数、新叶数、新根数、株高、鲜重以及干重等指标，萌蘖：培养90天时统计新萌芽的小芽；新叶数：培养90天时统计叶片数，减去幼苗最初的叶片数，即得到新叶数；新根数：培养90天时统计根数，减去幼苗最初的根数，即得到新根数；株高：培养90天统计时，利用直尺测量植株的长度；茎粗：利用游标卡尺 (数显卡尺，0-150mm)测量株高1cm处的节茎直径；鲜重；培养 90天统计时将幼苗清洗干净，自然风干，无水分，称重获得；干重：培养90天统计时，将幼苗放入80℃烘箱中烘烤干，期间称重检查干重数字是否变化，直至幼苗的干重数值不再变化，称量所有幼苗干重值。

结果如表2所示。

表2不同真菌对铁皮石斛幼苗生长的影响(90天统计)

注意：小写字母表示不同真菌处理间的显著性。

由上述表2可知，与空白对照相比，TP-2菌株对铁皮石斛新叶数、新根数、幼苗的干重和鲜重均有显著促进作用，而且与其他菌株相比，也具有明显的优势。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

序列表

<110> 云南大学

<120> 一种具有促进石斛茎粗生长的胶膜菌菌株TP-2和应用

<160> 11

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 608

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 1

gcggaaggat catagtaatc gtctttgacg ttctatctcc atcgtcctcg ggacgttaag 60

gcgctctggt cgaggataaa ggacccctct gaccgaggct aaacggtcgc ttgcctgtgt 120

tacctctttg gaggcacacg ttaaagatcg ttccgcgttg tgagtctaac accagttgta 180

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gtccctttga gcttgagacg cgcatgaccg gccgttgggc tcgcgtcacc aagtccgcgt 540

ccttctggac gtcggtacta caacgcatga cctcattggg gtaggacaac ccgctagact 600

taagcata 608

<210> 2

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 2

tccgtaggtg aacctgcgg 19

<210> 3

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

tcctccgctt attgatatgc 20

<210> 4

<211> 611

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 4

ctgcggaagg atcatagtaa acgtctttga cgcacttcgt tccgtcgtcc tccggacgtt 60

aaggcgctct ggtcgaggat aaacgacccc tctgaccgag gctaacccgt cgcgcttccg 120

tgttaccgtc cgcggcacac gttaaagatc gttccgcgtt gtgagtcttg ctggttgtaa 180

taaactgttt acaaccggta gcgctggatc ccttggcacg tcattcgatg aagaccgttg 240

caaattgcga taaagtgatg tgatgcgcaa gtccaccact tatacgtgaa tcatcgagtt 300

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gtccgctgcg acgtcggtac tacaaccaca tgacctcatt ggggtaggac aacccgctag 600

acttaagcat a 611

<210> 5

<211> 1123

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 5

gggagggcat cggtctttgg acgttcgcta gtctccgtcg tccgccggac gttaagctgc 60

tctggtcgag gataaacgac ccctctgacc gaggctaatc cgtcgtcctc ggggtaacgg 120

ctcctggacc acgttaagaa cggttcgggg tggggagccc cgatccaacg ggggatacca 180

attcgttaac aacgggaagg gagggttccc tgggaccgtc attcaaggaa aacggtggaa 240

aatggcaata aagggagggg aggcgcaggt cccccactaa tacgggaacc ttcgagtggt 300

tgaaggcttt gccccgggcc ctaaccgggt tgcggatggc ccctttgagg gtcttggctt 360

accttcggaa gcttttcttc ggtgaccaac cggagtccgg agtcttcgtt ccttggggat 420

cgggttctct tggatgcttc gggccaatcg ctggtgggtt atcctatggc cggacgggga 480

agccccccga agtcaaaact ggtggaacgg gtggtcaaac ccggcgcttc caagtccaaa 540

acggccgaac ttcgccggct tctcggaact acaaccatgg acttcatggg ggaaggacaa 600

ccggttaatt taggctacaa gggggggggg aaaaaaattt gtattcgttt tggcctttcc 660

ttattccccg tcgccccgga agtttaactt cttcggttca ggataaaaca accctctaac 720

gaggctatcc tctcctctgg ttagctctct gacacattta gagagctctc gcgttgtgac 780

tctatctctc tcggatatca catctcttat acacgtatga tatgatactc tgtgacacat 840

atctctgtaa agactgtgca ttttgctata aggttatgag gtgcgcgatc tctatatcgt 900

gattctcagt ttatgaacgt ttgcgctaca cgcggaatgc ctttgagatc tgtactctgg 960

aatttttctg tgtatcccaa ttcgaacctg ctctgtgaga gtgttataga tgcccagcgc 1020

atcgagacgc attccagatg aagtctgctc catcaagtga cgcgtgtagg acgcagatga 1080

gcctcttctt catcatctac tcttgtgcga cgaccatcat ctt 1123

<210> 6

<211> 609

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 6

aaaaaactgg ggtgtctccc caatgaggtc atgcgttgta gtaccgacgt cccagaggaa 60

cgcggacttg gcgacacgag ctcaacgctc ggtcaagcgc atctccactc cgagggactc 120

cacgctcagg cattagagtg acccatcaga caatcagcgc gacgcatcta agagaacacg 180

gtccacagac cgaggactcc gaactcgggt ctaagaaaga ctcccgaagg gatacaatga 240

cgctcaaagg ggcataccgc agccggatta gggcgcggtg caatgcgttc aacaactcga 300

tgattcacgt ataagtggtg gacttgcgca tcacatcact ttatcgcaat ttgcaacggt 360

cttcatcgaa tgacgtgcca agggatccag cgctaccggt tgtaattgtt tttacaactg 420

gtgttagact cacaacgcgg aacgatcttt aacgtgtgcc tcggcaaaga ggtaacacca 480

ggacggattc acctctgtca gaggggtcgt ttatcctcga ccagagcacc ttaacgtccc 540

gaggacgatg gaaacagcac gtcaaagacg attacttatg atccttccgc aggtaccctt 600

acggaaagc 609

<210> 7

<211> 602

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 7

atgcttaagt ctagcgggtt gtcctacccc aatgaggtca tgcgttgtag tcctgctggt 60

taaggcagac ttggcgacgc gagctcaaca cccggtcaag cacgtctcgg actctgaagg 120

aactccacgc ttaggcatta gaggacccat caggcgatcg gtgcgacgca tctaagagaa 180

cacgatccag aagaggaccg aggactctga actcgggtcc tttggaaaag gactcccgaa 240

gggatacaat gacgctcaaa ggggcatacc gcagccggtt tagggcgcgg tgcaatgcgt 300

tcaacaactc gatgattcac gtataagtgg tggacttgcg catcacatca ctttatcgca 360

atttgcaacg gtcttcatcg aatgacgtgc caagggatcc atcgctaccg gttgtaaaaa 420

gtttatacaa ctggtgttag actcacaacg cggaacgatc tttaacgtgt gcctcgtcga 480

ggtaacacag agcgacgggt tttacctcgg tcagaggggt cgtttatcct cgaccagagc 540

gcattaacgt cccgaggaca acggaaaaag cgaacgtcaa agacgattac tatgatcctt 600

cc 602

<210> 8

<211> 603

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 8

gaaggatcat agtaatcgtc tttgacgttc tatctccctc gtcctcggga cgttaaggcg 60

ctctggtcga ggataaacga cccctctgac cgaggttaaa cggtcgcttg cctgtgttac 120

ctcttcggag gcacacgtta aagatcgttc cgcgttgtga gtctaacacc agttgtaaac 180

tttctacaac cggcagcgct ggatcccttg gcacgtcatt cgatgaagac cgttgcaaat 240

tgcgataaag tgatgtgatg cgcaagtcca ccacttatac gtgaatcatc gagttgttga 300

acgcattgca ccgcgcccta aaccggctgc ggtatgcccc tttgagcgtc attgtattcc 360

ttcgggagtc tttccttgct gaaagacccg agctcggagt cctcggtcct ttggatcgtg 420

ttctctcaga tgcgtcgcgc cgatcgcctg atgggtactc taatgcctga gcgtggagtc 480

cctttgagct tgagacgcgc ttgaccggcc gttgggctcg cgtcaccaag tccgcgtcct 540

ctggacgtcg gtactacaac gcatgacctc attggggtag gacaacccgc tagacttaag 600

cat 603

<210> 9

<211> 619

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 9

tccgcttatt gatatgctta agtctagcgg gttgtcctac cccaatgagg tcatgcgttg 60

tagtaccgac gtccagaagg acgcggactt ggtgacgcga gcccaacggc cggtcaagcg 120

cgtctcaagc tcaaagggac tccacgctca ggcattagag tacccatcag gcgatcggcg 180

cgacgcatct gagagaacac gatccagagg accgaggact ccgaactcgg gtctttcagc 240

aaggaaagac tcccgaagga atacaatgac gctcaaaggg gcataccgca gccggattag 300

ggcgcggtgc aatgcgttca acaactcgat gattcacgta taagtggtgg acttgcgcat 360

cacatcactt tatcgcaatt tgcaacggtc ttcatcgaat gacgtgccaa gggatccagc 420

gctgccggtt gtagaaagtt tacaactggt gttagactca caacgcggaa cgatctttaa 480

cgtgtgcctc cagagaggta acacaggcaa gcgaccgttt aacctcggtc agaggggtcg 540

tttatcctcg accagagcgc cttaacgtcc cgaggacgat ggagatagaa cgtcaaagac 600

gattactatg atccttccg 619

<210> 10

<211> 610

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 10

ggctgggtaa gtctttgagt tcgctttttc cgttgtcctc gggacgttaa tgcgctctgg 60

tcgaggataa acgacccctc tgaccgaggt aaaacccgtc gctctgtgtt acctcgacga 120

ggcacacgtt aaagatcgtt ccgcgttgtg agtctaacac cagttgtata aactttttac 180

aaccggtagc gatggatccc ttggcacgtc attcgatgaa aaccgttgca aattgcgata 240

aagtgatgtg atgcgcaagt ccaccactta tacgtgaatc atcgagttgt tgaacgcatt 300

gcaccgcgcc ctaaaccggc tgcggtatgc ccctttgagc gtcattgtat cccttcggga 360

gtccttttcc aaaggacccg agttcagagt cctcggtcct cttctggatc gtgttctctt 420

agatgcgtcg caccgatcgc ctgatgggtc ctctaatgcc taagcgtgga gttccttcag 480

agtccgaaac gtgcttgacc gggtgttgag ctcgcgtcgc caagtctgcc ttaaccaaca 540

ggactacaac acatgacctc attggggtag gacaacccgc tagacttaag catatcaata 600

agcggaggaa 610

<210> 11

<211> 888

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 11

ctttttgatc aattcggtct tctgtgctgg tggcaacaca tgtgcacgtc gatcgtaatt 60

ccatcctcct cccaaccgtc catgtgtgtg tttggtcgac ctcggtcgaa gagttgtggc 120

ccttggcctc gattcgttcc agatgcacct tggttatttc acccactctg ggtactagaa 180

acaaagaaca ttttatataa actatacaac tttcaacaac ggatctcttg gctctcgcat 240

cgatgaagaa cgcagcgaaa tgcgataagt aatgtgaatt gcagaattca gtgaatcatc 300

gaatctttga acgcaccttg caccctttgg tattccgaag ggtacgcccg tttgagtgtc 360

attgtaatct caatcccacg actttatgtt gtgtgattgg acttggatcc tgtcgctttt 420

gtgactgatc cgaaatgcat cagcgtgtgt ccgtcgtgac gataaaccga ttgttaaact 480

tcatcgggct cgctctgtcg aggttgtctg gcgaaagcac atgctaaacc cccctacatt 540

ttgacaattt gacctcaaat cgggtgggat cacccgctga acttaagcat atcaaacggg 600

ggggagaaag aaaattttat tgtacaattc cggtagaaca gtgctaggtg gcaacacatg 660

gtgcacgtcg atccgtaatt tccatcctcc tccaaggttc atggtgtgtg gtttggtcga 720

cctcggtcga aagagttgtg ggccctttgg cctcatttct ttcacatgcg cttaggttat 780

ttcaccctct ggggactaaa aacaaaaaaa atgttatata aactatacaa ctttcaacac 840

cggatctcct tggctcgctc gatgaagaag acaccaaatg ctcataag 888

Claims (10)

1.一种具有促进石斛茎粗生长的胶膜菌(Tulasnella sp.)菌株TP-2，其特征在于，保藏编号为CCTCC NO：M 20211281。

2.根据权利要求1所述胶膜菌菌株TP-2，其特征在于，胶膜菌菌株TP-2的ITS序列如SEQID NO:1所示。

3.一种用于石斛植物栽培的产品，其特征在于，包括权利要求1或2所述胶膜菌菌株TP-2和可接受的辅料。

4.根据权利要求3所述产品，其特征在于，所述产品包括植物菌肥和微生物菌剂。

5.权利要求1或2所述胶膜菌菌株TP-2或权利要求3或4所述产品在促进石斛生长中的应用。

6.根据权利要求5所述应用，其特征在于，所述石斛生长包括促进石斛茎粗生长。

7.权利要求1或2所述胶膜菌菌株TP-2在制备促进石斛生长的产品中的应用。

8.一种促进石斛幼苗茎粗生长的方法，其特征在于，包括以下步骤：

将石斛幼苗和权利要求1或2所述胶膜菌菌株TP-2进行共生培养。

9.根据权利要求8所述方法，其特征在于，所述石斛包括铁皮石斛。

10.根据权利要求8所述方法，其特征在于，所述共生培养的温度为23～27℃，所述共生培养的光周期L/D＝12/12，光照强度为2000～3000Lx。

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