CN112717131B - 金丝桃素在制备治疗真菌性皮肤病药物中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及医药技术领域，具体公开金丝桃素在制备治疗真菌性皮肤病药物中的应用。本发明提供了金丝桃素在制备治疗真菌性皮肤病药物中的新应用，经研究发现用金丝桃素制备的治疗真菌性皮肤病药物对真菌性皮肤病不但具有较高的治愈率，同时其相比于其他口服和外用药物，具有副作用小、复发率低的优势，为真菌性皮肤病的治疗提供了新的突破点。

Description

金丝桃素在制备治疗真菌性皮肤病药物中的应用
技术领域
本发明涉及医药技术领域，尤其涉及金丝桃素在制备治疗真菌性皮肤病药物中的应用。
背景技术
金丝桃素是从金丝桃属植物中分离得到的一种天然光敏剂，其经光激活产生过氧化物可以诱导癌细胞凋亡并抑制其生长，同时其对肿瘤组织具有特殊的亲和力，可以优先积聚在肿瘤组织，这种生理活性在光学诊断中已得到广泛应用。目前金丝桃素主要用于治疗肝癌、喉癌等肿瘤疾病。
真菌性皮肤病是指由真菌引起的人类皮肤、黏膜及毛发和甲等皮肤附属器的浅部感染性疾病，临床上多呈水疱鳞屑型表现。该类疾病的共同特点是：发病率高、具有传染性、易复发或再感染。部分难治性真菌感染性皮肤病包括头癣中的脓癣、甲真菌病、真菌感染性肉芽肿等皮肤感染。目前真菌感染性皮肤病一般采用口服和外用抗真菌药治疗。但对部分难治性真菌感染如脓癣、顽固性甲真菌病、真菌感染性肉芽肿及皮下真菌感染对药物的治疗反应性差、治疗周期长、易出现药物肝损伤等毒副反应、治疗效果不佳且极易反复。
发明内容
针对现有治疗真菌性皮肤病的药物存在的上述问题，本发明提供金丝桃素在制备治疗真菌性皮肤病药物中的应用，金丝桃素能够通过非手术和肥口服方法治疗真菌感染性皮肤病，且治疗疗效好、复发率低、副作小，在临床上具有极大的发展潜力。
为达到上述发明目的，本发明实施例采用了如下的技术方案：
金丝桃素在制备治疗真菌性皮肤病药物中的应用。
金丝桃素是贯叶连翘的提取物，属于二蒽酮类化合物，具有抑制中枢神经和镇静的作用，同时也具有极强的抗病毒作用，能直接作用于猪瘟、口蹄疫等病毒，另外对于高致病性禽流感病毒也有良好的杀灭效果。此外还相关研究公开了金丝桃素治疗皮肤肿瘤的作用和功效。但是没有任何相关报道公开其对真菌具有抑制和杀灭的作用。本发明发现金丝桃素除具有上述作用和疗效以外，其对真菌性皮肤病具有较好的治疗功效，并提供了金丝桃素在制备治疗真菌性皮肤病药物中的应用。用金丝桃素制备的治疗真菌性皮肤病药物对真菌性皮肤病不但具有较高的治愈率，其于其他口服和外用真菌药物相比，还具有副作用小、复发率低的优势。本发明提供的金丝桃素在制备治疗真菌性皮肤病药物中的应用对真菌性皮肤病的治疗提供了新的突破点。
优选的，所述真菌性皮肤病为甲真菌病。
金丝桃素对甲真菌病的治疗具有较高的治愈率和更低的复发率。
优选的，所述治疗真菌性皮肤病药物为包含金丝桃素的光动力治疗药物。
本发明还提供了一种治疗真菌性皮肤病的纳米胶束丝素凝胶，所述纳米胶束丝素凝胶的活性成分包括金丝桃素。
将金丝桃素制备成纳米胶束丝素凝胶，利用纳米胶束丝素凝胶光动力治疗的疗效与口服药及外用药结合的治疗接近，但副作用和复发率明显减少，在临床具有更大的发展潜力。
优选的，所述纳米胶束丝素凝胶的制备方法，包括以下工艺步骤：
a、将金丝桃素和维生素E琥珀酯-接枝-ε-多聚赖氨酸聚合物溶于二甲基甲酰胺溶液中，得到混合溶液；将所述混合溶液滴入去离子水，在避光条件下进行自组装，再移至透析袋内，用蒸馏水透析、离心，除去未包裹的游离金丝桃素和维生素E琥珀酯-接枝-ε-多聚赖氨酸聚合物，得到载金丝桃素纳米胶束；
b、将丝素蛋白置于溴化锂溶液中溶解，得到丝素蛋白溶解液，将所述丝素蛋白溶解液置于透析袋中，用蒸馏水透析，得到丝素蛋白溶液；
c、将所述载金丝桃素纳米胶束和所述丝素蛋白溶液按0.8-1.2:1的体积比混合，然后用细胞破碎仪进行超声，得到所述纳米胶束丝素凝胶。
本发明提供的纳米胶束丝素凝胶的制备方法中，以丝素蛋白作为载体材料，以E琥珀酯-接枝-ε-多聚赖氨酸聚合物(VES-g-PLL)作为膜材在特定条件下制备包载金丝桃素的粒子，得到的纳米胶束丝素凝胶可有效提高金丝桃素的稳定性、包封率、皮肤穿透性、在皮肤上停留的时间以及金丝桃素的作用活性，使制备得到的纳米胶束丝素凝胶具有更好的疗效。
优选的，步骤a中，所述金丝桃素和维生素E琥珀酯-接枝-ε-多聚赖氨酸聚合物的质量比为1:2-8。
按照上述金丝桃素和维生素E琥珀酯-接枝-ε-多聚赖氨酸聚合物的质量比制备包载金丝桃素的粒子，可以进一步提高金丝桃素的包封率，避免活性成分的流失和浪费。
优选的，步骤a中，所述二甲基甲酰胺溶液的浓度为5-20mg/ml。
二甲基甲酰胺溶液可以进一步加快金丝桃素和维生素E琥珀酯-接枝-ε-多聚赖氨酸聚合物的自发组合效率。
优选的，步骤a中，所述金丝桃素溶于二甲基甲酰胺溶液后的浓度为1-4wt％。
优选的，步骤a中，所述自组装的过程在温度为25-30℃的避光条件下进行10-15h。
优选的，步骤a中，所述混合溶液与所述去离子水的体积比为1:50-200。
优选的，步骤a中，所述透析袋的截留相对分子质量为3600D。
该透析袋的截留相对分子质量可以保证透析得到的载金丝桃素纳米胶束的纯度。
优选的，步骤b中，所述碳酸钠溶液的质量浓度为12-17g/L。
优选的，步骤b中，所述溴化锂溶液中溴化锂的浓度为9-9.5mol/L。
优选的，步骤b中，所述丝素蛋白在所述溴化锂溶液中溶解的温度为55-65℃、时间为1.5-2.5h。
上述溴化锂溶液的浓度和溶解条件可以进一步提高丝素蛋白的溶解度。
优选的，步骤b中，所述透析的时间为70-75h。
优选的，步骤b中，所述丝素蛋白溶液中所述丝素蛋白的浓度为1.8-2.2g/L。
优选的，步骤c中，所述超声的功率为45-55W、时间为50-70s。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
实施例1
利用金丝桃素制备治疗真菌性皮肤病药物-金丝桃素纳米胶束丝素凝胶，制备方法，包括以下工艺步骤：
a、将质量比为1:2的金丝桃素和维生素E琥珀酯-接枝-ε-多聚赖氨酸聚合物溶于浓度为5mg/ml的二甲基甲酰胺溶液中，得到金丝桃素浓度为1wt％的混合溶液；将所述混合溶液缓慢滴入相当于混合溶液体积50倍的去离子水中，在1000r/min、25℃的避光条件下自组装10h，组装完成后移至透析袋(截留相对分子质量为3600D)内，用蒸馏水透析、离心，除去未包裹的游离金丝桃素和维生素E琥珀酯-接枝-ε-多聚赖氨酸聚合物，得到载金丝桃素纳米胶束；
b、蚕茧先在12g/L的碳酸钠溶液中煮沸，然后用蒸馏水清洗去除杂质，得到丝素蛋白，将丝素蛋白在9mol/L的溴化锂溶液中55℃下溶解1.5h，得到丝素蛋白溶解液，将所述丝素蛋白溶解液置于透析袋中，用蒸馏水透析70h，得到浓度为1.8g/L的丝素蛋白溶液；
c、将载金丝桃素纳米胶束和丝素蛋白溶液，按0.8:1的体积比混合，然后用功率为45W的细胞破碎仪超声70s，得到金丝桃素纳米胶束丝素凝胶。
实施例2
利用金丝桃素制备治疗真菌性皮肤病药物-金丝桃素纳米胶束丝素凝胶，制备方法，包括以下工艺步骤：
a、将质量比为1:4的金丝桃素和维生素E琥珀酯-接枝-ε-多聚赖氨酸聚合物溶于浓度为10mg/ml的二甲基甲酰胺溶液中，得到金丝桃素浓度为2wt％的混合溶液；将所述混合溶液缓慢滴入相当于混合溶液体积100倍的去离子水中，在1100r/min、28℃的避光条件下自组装12h，组装完成后移至透析袋(截留相对分子质量为3600D)内，用蒸馏水透析、离心，除去未包裹的游离金丝桃素和维生素E琥珀酯-接枝-ε-多聚赖氨酸聚合物，得到载金丝桃素纳米胶束；
b、蚕茧先在15g/L的碳酸钠溶液中煮沸，然后用蒸馏水清洗去除杂质，得到丝素蛋白，将丝素蛋白在9.3mol/L的溴化锂溶液中60℃下溶解2h，得到丝素蛋白溶解液，将所述丝素蛋白溶解液置于透析袋中，用蒸馏水透析72h，得到浓度为2g/L的丝素蛋白溶液；
c、将载金丝桃素纳米胶束和丝素蛋白溶液，按1:1的体积比混合，然后用功率为50W的细胞破碎仪超声60s，得到金丝桃素纳米胶束丝素凝胶。
实施例3
利用金丝桃素制备治疗真菌性皮肤病药物-金丝桃素纳米胶束丝素凝胶，制备方法，包括以下工艺步骤：
a、将质量比为1:8的金丝桃素和维生素E琥珀酯-接枝-ε-多聚赖氨酸聚合物溶于浓度为20mg/ml的二甲基甲酰胺溶液中，得到金丝桃素浓度为4wt％的混合溶液；将所述混合溶液缓慢滴入相当于混合溶液体积200倍的去离子水中，在1200r/min、30℃的避光条件下自组装15h，组装完成后移至透析袋(截留相对分子质量为3600D)内，用蒸馏水透析、离心，除去未包裹的游离金丝桃素和维生素E琥珀酯-接枝-ε-多聚赖氨酸聚合物，得到载金丝桃素纳米胶束；
b、蚕茧先在17g/L的碳酸钠溶液中煮沸，然后用蒸馏水清洗去除杂质，得到丝素蛋白，将丝素蛋白在9.5mol/L的溴化锂溶液中65℃下溶解2.5h，得到丝素蛋白溶解液，将所述丝素蛋白溶解液置于透析袋中，用蒸馏水透析75h，得到浓度为2.2g/L的丝素蛋白溶液；
c、将载金丝桃素纳米胶束和丝素蛋白溶液，按1.2:1的体积比混合，然后用功率为55W的细胞破碎仪超声70s，得到金丝桃素纳米胶束丝素凝胶。
将实施例1-3得到的金丝桃素纳米胶束丝素凝胶采用光动力治疗方法对甲真菌病的治疗疗效与现有的甲真菌病药物的治疗疗效进行测试。其中现有的真菌药物及其治疗方法包括：1)口服抗真菌药治疗：特比萘芬，成人剂量250mg，1次/d；指甲真菌病治疗周期为9周，趾甲真菌病治疗周期为16周。2)口服抗真菌药+外用抗真菌药：口服抗真菌药与1)相同；外用抗真菌药选择5％阿莫罗芬搽剂，每周2次外用；指甲真菌病治疗周期为9周，趾甲真菌病治疗周期为16周。3)5-氨基酮戊酸光动力治疗：将5-氨基酮戊酸作为光敏剂，外用于甲板(均匀覆盖甲板)，封包5h后，使用波长为630nm的红光照射，能量100J/cm2，每间隔2周治疗一次，共治疗5次。
实施例1-3得到的金丝桃素纳米胶束丝素凝胶的光动力治疗方法为：金丝桃素纳米胶束丝素凝胶作为光敏剂，外用于甲板(均匀覆盖甲板)，封包5h后，使用波长630nm的红光照射，能量100J/cm2，每间隔2周治疗一次，共治疗5次。
金丝桃素纳米胶束丝素凝胶与现有的甲真菌病药物的治疗疗效数据如表1所示。每组治疗的患者人数为60人。
表1金丝桃素纳米胶束丝素凝胶与现有的甲真菌病药物的治疗疗效
Figure BDA0002902559810000061
Figure BDA0002902559810000071
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换或改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (5)

1.一种治疗真菌性皮肤病的纳米胶束丝素凝胶，其特征在于：所述纳米胶束丝素凝胶的活性成分包括金丝桃素；
所述纳米胶束丝素凝胶的制备方法包括以下工艺步骤：
a、将金丝桃素和维生素E琥珀酯-接枝-ε-多聚赖氨酸聚合物溶于二甲基甲酰胺溶液中，得到混合溶液；将所述混合溶液滴入去离子水中，在避光条件下进行自组装，再移至透析袋内，用蒸馏水透析、离心，除去未包裹的游离金丝桃素和维生素E琥珀酯-接枝-ε-多聚赖氨酸聚合物，得到载金丝桃素纳米胶束；
b、将丝素蛋白置于溴化锂溶液中溶解，得到丝素蛋白溶解液，将所述丝素蛋白溶解液置于透析袋中，用蒸馏水透析，得到丝素蛋白溶液；
c、将所述载金丝桃素纳米胶束和所述丝素蛋白溶液按0.8-1.2:1的体积比混合，然后用细胞破碎仪进行超声，得到所述纳米胶束丝素凝胶；
其中，步骤a中，所述金丝桃素和维生素E琥珀酯-接枝-ε-多聚赖氨酸聚合物的质量比为1:2-8；所述二甲基甲酰胺溶液的浓度为5-20mg/ml；所述金丝桃素溶于二甲基甲酰胺溶液后的浓度为1-4wt％。
2.如权利要求1所述的治疗真菌性皮肤病的纳米胶束丝素凝胶，其特征在于：步骤a中，所述自组装的过程为：在温度为25-30℃的避光条件下进行10-15h；和/或
步骤a中，所述混合溶液与所述去离子水的体积比为1:50-200；和/或
步骤a中，所述透析袋的截留相对分子质量为3600D。
3.如权利要求1所述的治疗真菌性皮肤病的纳米胶束丝素凝胶，其特征在于：
步骤b中，所述溴化锂溶液中溴化锂的浓度为9-9.5mol/L；
步骤b中，所述丝素蛋白在所述溴化锂溶液中溶解的温度为55-65℃、时间为1.5-2.5h。
4.如权利要求1所述的治疗真菌性皮肤病的纳米胶束丝素凝胶，其特征在于：步骤b中，所述透析的时间为70-75h；和/或
步骤b中，所述丝素蛋白溶液中所述丝素蛋白的浓度为1.8-2.2g/L。
5.如权利要求1所述的治疗真菌性皮肤病的纳米胶束丝素凝胶，其特征在于：步骤c中，所述超声的功率为45-55W、时间为50-70s。
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