CN112715776A - 一种提高肉禽脂质代谢和肌肉品质的植物乳杆菌及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种提高肉禽脂质代谢和肌肉品质的植物乳杆菌及其应用，所述植物乳杆菌为植物乳杆菌ZRR，其保藏编号为CCTCC No:M2016281，其能够同时降解不同种类的胆盐，具有改善肉禽生长性能和屠宰性能，提高肉禽脂质代谢和肌肉品质等优点，可广泛应用于肉禽养殖，推进肉禽健康养殖，提高养殖效益。
Description
技术领域
本发明属于益生菌技术领域，具体涉及一种提高肉禽脂质代谢和肌肉品质的植物乳杆菌及其应用。
背景技术
随着肉禽养殖规模的扩大和生产效率的提高，其肉产量迅速增加，已成为仅次于猪肉的第二大肉类产品，养殖中过分强调生产性能，常采用高脂日粮饲喂肉禽，导致肝内脂质代谢紊乱与脂肪异位沉积，继而也引发饲料转换率与肌肉品质下降。禽类甘油三脂、胆固醇与脂肪酸等脂类物质主要在肝脏中合成，广泛分布于腹部、皮下与肌肉组织中，同摄取、降解以及转运等过程构成复杂的代谢网络，对肉禽的生长性能与肌肉品质产生重要影响。
乳酸菌是益生菌中最具代表性的菌属，乳酸菌除了具有改善饲料风味，抑制病原菌等功能外，还具有改善宿主肠道菌群、增强免疫力、降低胆固醇，改善血脂代谢等生理功能。胆盐水解酶是微生物生长、繁殖过程中产生的一种胞内酶，将结合态甘氨酸胆盐和牛磺酸胆盐，水解为甘氨酸、牛磺酸和共轭胆盐,从而逐步降低体内胆固醇水平，有效降低肝内脂肪积累和血脂水平。胆盐包括牛磺胆酸钠、甘氨胆酸钠、牛磺脱氧胆酸钠和甘氨脱氧胆酸钠这四种，而对四种底物都有不同降解能力的菌株却少有研究。目前关于BSH乳酸菌的研究主要集中在人的食品中，针对饲喂高脂日粮的肉禽，筛选不同BSH底物降解型的功能乳酸菌，是提高肉禽脂质代谢和禽肉品质的重要保证。
发明内容
本部分的目的在于概述本发明的实施例的一些方面以及简要介绍一些较佳实施例。在本部分以及本申请的说明书摘要和发明名称中可能会做些简化或省略以避免使本部分、说明书摘要和发明名称的目的模糊，而这种简化或省略不能用于限制本发明的范围。
本发明提供一种植物乳杆菌在提高肉禽脂质代谢中的应用：所述植物乳杆菌，为植物乳杆菌ZRR，其保藏编号为CCTCC No:M2016281。
作为本发明所述的植物乳杆菌在提高肉禽脂质代谢中的应用：所述植物乳杆菌ZRR能够同时降解牛磺胆酸钠、甘氨胆酸钠、牛磺脱氧胆酸钠和甘氨脱氧胆酸钠四种胆盐，所述植物乳杆菌ZRR在肉禽饮水中添加。
作为本发明所述的植物乳杆菌在提高肉禽脂质代谢中的应用，其特征在于：所述植物乳杆菌ZRR在肉禽饮水中添加量为每毫升水中添加1*106CFU。
本发明还提供所述的植物乳杆菌在改善肉禽肌肉品质中的应用。
本发明涉及的植物乳杆菌ZRR((Lactobacillusplantarum ZRR)，其保藏编号为CCTCC No:M2016281。
本发明从大量产酸能力强的乳酸菌中筛选出对四种胆盐有降解能力的植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)ZRR，相对于现有技术，本发明的植物乳杆菌具有预料不到的技术效果：
(1)本发明的植物乳杆菌ZRR能同时降解牛磺胆酸钠、甘氨胆酸钠、牛磺脱氧胆酸钠和甘氨脱氧胆酸钠等4种胆盐。
(2)本发明植物乳杆菌ZRR改善了肉禽生长性能和屠宰性能，降低腹脂率，提高肉禽的产肉率，增加经济效益。
(3)本发明植物乳杆菌ZRR降低肉鸭血浆的胆固醇、甘油三脂、游离脂肪酸、高密度脂蛋白胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇，对肉鸭脂质代谢产生显著影响。
(4)本发明植物乳杆菌ZRR显著提高肉禽胸肌红度，减少滴水损失，显著提高了肉禽肌肉品质。
因此，本发明的植物乳杆菌能同时降解不同种类的胆盐，具有改善肉禽生长性能和屠宰性能，提高肉禽脂质代谢和肌肉品质等优点，可广泛应用于肉禽养殖，推进肉禽健康养殖，提高养殖效益。
具体实施方式
为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合具体实施例对本发明的具体实施方式做详细的说明。
在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明，但是本发明还可以采用其他不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下做类似推广，因此本发明不受下面公开的具体实施例的限制。
其次，此处所称的“一个实施例”或“实施例”是指可包含于本发明至少一个实现方式中的特定特征、结构或特性。在本说明书中不同地方出现的“在一个实施例中”并非均指同一个实施例，也不是单独的或选择性的与其他实施例互相排斥的实施例。
本发明涉及到的微生物植物乳杆菌，其保藏信息如下：
保藏单位：中国典型培养物保藏中心(CCTCC)；
保藏单位地址：湖北省武汉市武昌区八一路299号武汉大学校内；
分类命名：植物乳杆菌ZRR((Lactobacillusplantarum ZRR)；
保藏号：CCTCC No:M2016281；
保藏日期为：2016年5月25日。
菌株特征：植物乳杆菌(Lactobacillu splantarum)ZRR的菌落呈乳白色，边缘整齐；细胞显微形态为短杆状，无芽孢，革兰氏染色阳性；接触酶阴性，氧化酶阴性；具有较强的生长及产酸性能，在起始pH值为3.0-8.0的培养基上能生长，在10℃条件下呈现微弱生长，在15℃—40℃条件下生长状况良好，在不大于6.5％NaCl的条件下生长状况良好。
植物乳杆菌ZRR在肉禽饮水中添加，每毫升水中添加1*106CFU。
实施例1：植物乳杆菌的筛选与制备：从实验室保存的86株来源于发酵料，动物肠道的乳酸菌中开始筛选。
菌株活化：将-80℃保存菌株在MRS固体培养基上划线活化，37℃静置培养24h；挑取平板上长出的单菌落接种于3mL MRS液体培养基中，37℃过夜培养，12000rpm离心1min，弃上清，收集菌体；取1mL的0.1M醋酸-醋酸钠缓冲液(pH 5.0)洗涤菌体1次，离心后去上清，再取1mL重悬菌体。
通过茚三酮法初筛胆盐水解酶活性：于1.5mL eppendorf管中，加入50μL菌悬液和50μL20mM底物(牛黄胆酸钠或甘氨胆酸钠)，混合后，37℃水浴1h；水浴结束后加入100μL15％TCA终止液终止反应，混匀后12000rpm离心10min；取100μL上清液于10mL玻璃管中，加入900μL茚三酮溶液，塞上橡胶塞，涡旋震荡混匀，沸水浴14min；沸水浴结束后，立即置于冰水中冷却，5min后测定OD570nm。
通过高效液相色谱法复筛胆盐水解酶活性：通过初筛获得吸光度在0.30以上的菌株16株，通过HPLC检测各菌株对牛磺胆酸钠、甘氨胆酸钠、牛磺脱氧胆酸钠、甘氨脱氧胆酸钠四种胆盐的降解能力，胆盐均购自Sigma公司，底物浓度为20mM。HPLC实验条件：色谱柱为安捷伦公司的TC-18型反相色谱柱；检测器为二极管阵列检测器，检测波长为200nm；进样量为20μL；柱温20℃；柱流速1mL/min；流动相A为0.0075mol/L四丁基硫酸氢铵的乙腈-水(60:40)溶液(pH2.5)，流动相B为0.0075mol/L四丁基硫酸氢铵的乙腈-水(30:70)溶液(pH2.5)；梯度洗脱：流动相A为10％，流动相B为90％，流动相A的比例在30min内升高至70％。筛选结果表明，植物乳杆菌ZRR能够同时降解四种胆盐，且其对四种胆盐的降解能力最强，植物乳杆菌ZRR、CR对胆盐的降解结果见表1。
表1植物乳杆菌ZRR对胆盐的降解结果(％)
| 菌株 | 牛磺胆酸钠 | 甘氨胆酸钠 | 牛磺脱氧胆酸钠 | 甘氨脱氧胆酸钠 |
| ZRR | 56.74 | 75.97 | 67.57 | 78.94 |
| CR | 4.85 | 6.68 | 6.99 | 2.39 |
实施例2：植物乳杆菌ZRR在肉禽生长中的应用
菌粉的制备：将冷冻保存的ZRR、CR分别接种于MRS液体培养基中，在温度37℃下培养24h，如此传代培2次得到所述的活化ZRR和CR菌种。将活化的菌种接种在MRS液体培养基中37℃培养，菌液经离心，冷冻干燥、粉碎、辅料混合制成ZRR、CR的冻干粉，使乳酸菌冻干粉的活菌数达到1×1010cfu/g。
选取健康1日龄的樱桃谷肉鸭，随机分为3组，每组6个重复，每重复24只(公母各半)，至42日出栏。以正常饮水为对照，试验组分别在饮水中添加植物乳杆菌CR、植物乳杆菌ZRR，即依次设为对照、BSH(-)与BSH(+)组,每毫升水中添加1*106CFU。在饲养试验开始前和结束时称量各组肉鸭体重，统计各组的采食量，计算各组的平均日增重、平均日采食量和料重比。从每个重复选取1只肉鸭屠宰，称活重，颈静脉采血后，腹脂率、屠宰率、全净膛率按照国家禽育种委员会1984年颁布的家禽生产生能与计算方法进行计算。计算公式为：腹脂率＝腹脂重/活体重×100％；屠宰率率＝胴体重/活体重X100％；全净膛率＝全净膛重/活体重X100％。式中活体重指禁食、只供饮水、12h后的体重。腹脂指腹部板油、肌胃周围和近肛门处的脂肪。并取左侧胸肌，测量肉色及滴水损失。取血浆测总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、甘油三脂及游离脂肪酸。
(1)植物乳杆菌ZRR(BSH+)对肉鸭生长性能和屠宰性能的影响
由表2可知，BSH(-)组肉鸭1-42day平均日增重和出栏重显著低于其余2组(p<0.05)。BSH(+)组肉鸭日均增重、出栏重均优于其余两组。如表3所示，对照组、BSH(-)与BSH(+)组屠宰率依次为89.52％、89.41％与90.51％，BSH(+)组屠宰率最高,BSH(+)组全净膛率(72.33％)最高，BSH(+)组腹脂率(1.05％)最低。因此，BSH(+)组的屠宰性能最优。
表2植物乳杆菌ZRR(BSH+)对樱桃谷肉鸭生长性能的影响
表3植物乳杆菌ZRR(BSH+)对樱桃谷肉鸭屠宰性能的影响(％)
| 项目 | 对照组 | BSH(-)植物乳杆菌 | BSH(+)植物乳杆菌 |
| 屠宰率 | 89.52±0.87 | 89.41±0.68 | 90.51±0.52 |
| 全净膛率 | 71.72±0.51 | 71.35±0.33 | 72.33±0.48 |
| 腹脂率 | 1.07±0.13 | 1.12±0.17 | 1.05±0.03 |
(2)植物乳杆菌ZRR(BSH+)对肉鸭血浆脂肪代谢的影响
如表4所示，BSH(+)组血浆总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、甘油三脂和游离脂肪酸均为最低，其中，高密度脂蛋白胆固醇显著低于其他两组，总胆固醇显著低于BSH(-)组(p<0.05)。
表4植物乳杆菌ZRR(BSH+)对樱桃谷肉鸭血浆生化指标影响(mmol/L)
(3)植物乳杆菌ZRR(BSH+)对肌肉品质的影响
如表5所示，BSH(+)组较对照组可显著提高肉鸭胸肌红度值(p<0.05)，显著降低滴水损失(p<0.05)，BSH(+)组改善肉鸭肌肉品质效果最佳。
表5植物乳杆菌ZRR(BSH+)对樱桃谷肉鸭胸肌肌肉品质影响
综上，植物乳杆菌ZRR改善了肉鸭生长性能和屠宰性能，显著提高了肉禽脂质代谢和肌肉品质。
本发明从大量产酸能力强的乳酸菌中筛选出对四种胆盐有降解能力的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)ZRR，相对于现有技术，本发明的植物乳杆菌具有预料不到的技术效果：(1)本发明的植物乳杆菌ZRR能同时降解牛磺胆酸钠、甘氨胆酸钠、牛磺脱氧胆酸钠和甘氨脱氧胆酸钠等4种胆盐。(2)本发明植物乳杆菌ZRR改善了肉禽生长性能和屠宰性能，降低腹脂率，提高肉禽产肉率，增加了经济效益。(3)本发明植物乳杆菌ZRR降低肉鸭血浆的胆固醇、甘油三脂、游离脂肪酸、高密度脂蛋白胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇，对肉鸭脂质代谢产生显著影响，(4)本发明植物乳杆菌ZRR显著提高肉禽胸肌红度，减少滴水损失，显著提高了肉禽肌肉品质。
因此，本发明的植物乳杆菌能同时降解不同种类的胆盐，具有改善肉禽生长性能和屠宰性能，提高肉禽脂质代谢和肌肉品质等优点，可广泛应用于肉禽养殖，推进肉禽健康养殖，提高养殖效益。
应说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。
Claims (4)
1.一种植物乳杆菌在提高肉禽脂质代谢中的应用，其特征在于：所述植物乳杆菌，为植物乳杆菌ZRR，其保藏编号为CCTCC No:M2016281。
2.如权利要求1所述的植物乳杆菌在提高肉禽脂质代谢中的应用，其特征在于：所述植物乳杆菌ZRR能够同时降解牛磺胆酸钠、甘氨胆酸钠、牛磺脱氧胆酸钠和甘氨脱氧胆酸钠四种胆盐，所述植物乳杆菌ZRR在肉禽饮水中添加。
3.如权利要求1所述的植物乳杆菌在提高肉禽脂质代谢中的应用，其特征在于：所述植物乳杆菌ZRR在肉禽饮水中添加量为每毫升水中添加1*106CFU。
4.权利要求1所述的植物乳杆菌在提高肉禽肌肉品质中的应用。
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