CN116875477A - 一种植物乳杆菌及其应用 - Google Patents
一种植物乳杆菌及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN116875477A CN116875477A CN202310069065.0A CN202310069065A CN116875477A CN 116875477 A CN116875477 A CN 116875477A CN 202310069065 A CN202310069065 A CN 202310069065A CN 116875477 A CN116875477 A CN 116875477A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- lactobacillus plantarum
- culture medium
- parts
- mrs
- lactobacillus
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 240000006024 Lactobacillus plantarum Species 0.000 title claims abstract description 119
- 235000013965 Lactobacillus plantarum Nutrition 0.000 title claims abstract description 118
- 229940072205 lactobacillus plantarum Drugs 0.000 title claims abstract description 118
- 239000006041 probiotic Substances 0.000 claims abstract description 30
- 235000018291 probiotics Nutrition 0.000 claims abstract description 30
- 238000004321 preservation Methods 0.000 claims abstract description 11
- 238000009629 microbiological culture Methods 0.000 claims abstract description 6
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims abstract description 6
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 56
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 claims description 35
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 30
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 30
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 30
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 28
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 26
- 235000009508 confectionery Nutrition 0.000 claims description 24
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 20
- 230000000529 probiotic effect Effects 0.000 claims description 18
- 239000002994 raw material Substances 0.000 claims description 15
- 239000013049 sediment Substances 0.000 claims description 15
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 15
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 14
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 13
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 12
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims description 10
- 241001608472 Bifidobacterium longum Species 0.000 claims description 10
- 240000001046 Lactobacillus acidophilus Species 0.000 claims description 10
- 235000013956 Lactobacillus acidophilus Nutrition 0.000 claims description 10
- 239000005913 Maltodextrin Substances 0.000 claims description 10
- 229920002774 Maltodextrin Polymers 0.000 claims description 10
- 241000194020 Streptococcus thermophilus Species 0.000 claims description 10
- TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N Xylitol Natural products OCCC(O)C(O)C(O)CCO TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 239000008272 agar Substances 0.000 claims description 10
- 229940009291 bifidobacterium longum Drugs 0.000 claims description 10
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims description 10
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims description 10
- DLRVVLDZNNYCBX-RTPHMHGBSA-N isomaltose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O1 DLRVVLDZNNYCBX-RTPHMHGBSA-N 0.000 claims description 10
- 229940039695 lactobacillus acidophilus Drugs 0.000 claims description 10
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 claims description 10
- 229940035034 maltodextrin Drugs 0.000 claims description 10
- HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N meso ribitol Natural products OCC(O)C(O)C(O)CO HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 235000013557 nattō Nutrition 0.000 claims description 10
- 239000000811 xylitol Substances 0.000 claims description 10
- HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N xylitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N 0.000 claims description 10
- 229960002675 xylitol Drugs 0.000 claims description 10
- 235000010447 xylitol Nutrition 0.000 claims description 10
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 8
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 claims description 6
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 6
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 6
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 6
- 108020004465 16S ribosomal RNA Proteins 0.000 claims description 5
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 5
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 claims description 5
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 claims description 5
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 5
- 235000015278 beef Nutrition 0.000 claims description 5
- YXVFQADLFFNVDS-UHFFFAOYSA-N diammonium citrate Chemical compound [NH4+].[NH4+].[O-]C(=O)CC(O)(C(=O)O)CC([O-])=O YXVFQADLFFNVDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 238000007865 diluting Methods 0.000 claims description 5
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims description 5
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 5
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 5
- 239000012535 impurity Substances 0.000 claims description 5
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 5
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 claims description 5
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 claims description 5
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 claims description 5
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 claims description 5
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 claims description 5
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 claims description 5
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 claims description 5
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 5
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 claims description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 4
- 239000003086 colorant Substances 0.000 claims description 4
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 claims description 4
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 claims description 4
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 abstract description 52
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 abstract description 24
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 15
- 230000001603 reducing effect Effects 0.000 abstract description 14
- 239000008280 blood Substances 0.000 abstract description 12
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 abstract description 12
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 10
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 229940116369 pancreatic lipase Drugs 0.000 description 15
- 102000019280 Pancreatic lipases Human genes 0.000 description 14
- 108050006759 Pancreatic lipases Proteins 0.000 description 14
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 14
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 11
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 9
- 208000004930 Fatty Liver Diseases 0.000 description 9
- 206010019708 Hepatic steatosis Diseases 0.000 description 9
- BHQCQFFYRZLCQQ-OELDTZBJSA-N cholic acid Chemical compound C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 BHQCQFFYRZLCQQ-OELDTZBJSA-N 0.000 description 9
- 208000010706 fatty liver disease Diseases 0.000 description 9
- 231100000240 steatosis hepatitis Toxicity 0.000 description 9
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 9
- 241000917009 Lactobacillus rhamnosus GG Species 0.000 description 8
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 8
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 8
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 8
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 8
- 229940099352 cholate Drugs 0.000 description 7
- OABYVIYXWMZFFJ-ZUHYDKSRSA-M sodium glycocholate Chemical compound [Na+].C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(=O)NCC([O-])=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 OABYVIYXWMZFFJ-ZUHYDKSRSA-M 0.000 description 7
- JAJWGJBVLPIOOH-IZYKLYLVSA-M sodium taurocholate Chemical compound [Na+].C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(=O)NCCS([O-])(=O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 JAJWGJBVLPIOOH-IZYKLYLVSA-M 0.000 description 7
- 206010003210 Arteriosclerosis Diseases 0.000 description 6
- 208000031226 Hyperlipidaemia Diseases 0.000 description 6
- 208000011775 arteriosclerosis disease Diseases 0.000 description 6
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 6
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 5
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 5
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 5
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000003833 bile salt Substances 0.000 description 4
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 4
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 4
- 235000012054 meals Nutrition 0.000 description 4
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 4
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 4
- UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N triformin Chemical compound O=COCC(OC=O)COC=O UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 229940093761 bile salts Drugs 0.000 description 3
- 206010008118 cerebral infarction Diseases 0.000 description 3
- 208000026106 cerebrovascular disease Diseases 0.000 description 3
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 description 3
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- BHQCQFFYRZLCQQ-UHFFFAOYSA-N (3alpha,5alpha,7alpha,12alpha)-3,7,12-trihydroxy-cholan-24-oic acid Natural products OC1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(O)=O)C)C1(C)C(O)C2 BHQCQFFYRZLCQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004380 Cholic acid Substances 0.000 description 2
- 108010000231 Choloylglycine hydrolase Proteins 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 description 2
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 2
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 2
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 235000019416 cholic acid Nutrition 0.000 description 2
- 229960002471 cholic acid Drugs 0.000 description 2
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 2
- KXGVEGMKQFWNSR-UHFFFAOYSA-N deoxycholic acid Natural products C1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(O)=O)C)C1(C)C(O)C2 KXGVEGMKQFWNSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 2
- 210000004051 gastric juice Anatomy 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 2
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 2
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 2
- KJFMBFZCATUALV-UHFFFAOYSA-N phenolphthalein Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1C1(C=2C=CC(O)=CC=2)C2=CC=CC=C2C(=O)O1 KJFMBFZCATUALV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000008057 potassium phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 2
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 2
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 2
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 description 1
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 description 1
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 description 1
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 description 1
- 206010033645 Pancreatitis Diseases 0.000 description 1
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- BAECOWNUKCLBPZ-HIUWNOOHSA-N Triolein Natural products O([C@H](OCC(=O)CCCCCCC/C=C\CCCCCCCC)COC(=O)CCCCCCC/C=C\CCCCCCCC)C(=O)CCCCCCC/C=C\CCCCCCCC BAECOWNUKCLBPZ-HIUWNOOHSA-N 0.000 description 1
- PHYFQTYBJUILEZ-UHFFFAOYSA-N Trioleoylglycerol Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(=O)OCC(OC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC)COC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC PHYFQTYBJUILEZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 1
- 230000002019 anti-mutation Effects 0.000 description 1
- 239000012752 auxiliary agent Substances 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 238000004737 colorimetric analysis Methods 0.000 description 1
- 208000029078 coronary artery disease Diseases 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 235000013367 dietary fats Nutrition 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 1
- 238000000556 factor analysis Methods 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 235000021588 free fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 229940040461 lipase Drugs 0.000 description 1
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 description 1
- 235000019626 lipase activity Nutrition 0.000 description 1
- 230000003137 locomotive effect Effects 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000011812 mixed powder Substances 0.000 description 1
- 150000002759 monoacylglycerols Chemical class 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 description 1
- 229940095353 oral granules Drugs 0.000 description 1
- 238000007427 paired t-test Methods 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 239000012898 sample dilution Substances 0.000 description 1
- 230000001953 sensory effect Effects 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 238000002791 soaking Methods 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- PHYFQTYBJUILEZ-IUPFWZBJSA-N triolein Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC(OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC)COC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC PHYFQTYBJUILEZ-IUPFWZBJSA-N 0.000 description 1
- 229940117972 triolein Drugs 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23G—COCOA; COCOA PRODUCTS, e.g. CHOCOLATE; SUBSTITUTES FOR COCOA OR COCOA PRODUCTS; CONFECTIONERY; CHEWING GUM; ICE-CREAM; PREPARATION THEREOF
- A23G3/00—Sweetmeats; Confectionery; Marzipan; Coated or filled products
- A23G3/34—Sweetmeats, confectionery or marzipan; Processes for the preparation thereof
- A23G3/36—Sweetmeats, confectionery or marzipan; Processes for the preparation thereof characterised by the composition containing organic or inorganic compounds
- A23G3/364—Sweetmeats, confectionery or marzipan; Processes for the preparation thereof characterised by the composition containing organic or inorganic compounds containing microorganisms or enzymes; containing paramedical or dietetical agents, e.g. vitamins
- A23G3/366—Sweetmeats, confectionery or marzipan; Processes for the preparation thereof characterised by the composition containing organic or inorganic compounds containing microorganisms or enzymes; containing paramedical or dietetical agents, e.g. vitamins containing microorganisms, enzymes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23G—COCOA; COCOA PRODUCTS, e.g. CHOCOLATE; SUBSTITUTES FOR COCOA OR COCOA PRODUCTS; CONFECTIONERY; CHEWING GUM; ICE-CREAM; PREPARATION THEREOF
- A23G3/00—Sweetmeats; Confectionery; Marzipan; Coated or filled products
- A23G3/34—Sweetmeats, confectionery or marzipan; Processes for the preparation thereof
- A23G3/36—Sweetmeats, confectionery or marzipan; Processes for the preparation thereof characterised by the composition containing organic or inorganic compounds
- A23G3/48—Sweetmeats, confectionery or marzipan; Processes for the preparation thereof characterised by the composition containing organic or inorganic compounds containing plants or parts thereof, e.g. fruits, seeds, extracts
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/02—Separating microorganisms from their culture media
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/225—Lactobacillus
- C12R2001/25—Lactobacillus plantarum
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Botany (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明属于益生菌的制备领域，具体涉及一种植物乳杆菌及其应用。所述植物乳杆菌已于2022年07月06日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC NO.25223，分类命名为Lactobacillus plantarum BHP03。本发明制得的植物乳杆菌具有降胆固醇、降血脂的作用。
Description
技术领域
本发明属于益生菌的制备领域，具体涉及一种植物乳杆菌及其应用。
背景技术
乳酸菌是一类能利用碳水化合物产生乳酸的非病原性、革兰氏阳性细细菌的通称，被认为具有抗突变和抗癌活性、增强免疫反应和抑制病原体的特性。高脂血症是指血脂水平过高，可直接引起一些严重危害人体健康的疾病，如动脉粥样硬化、冠心病、胰腺炎等。许多研究报告了乳酸菌在降低血脂胆固醇方面的作用，一些新的生物学观点也为预防和治疗心血管疾病提供新靶点，乳酸菌可能成为预防/治疗心血管疾病的天然辅助剂。植物乳杆菌作为乳酸菌的一种，已有许多植物乳杆菌降低高脂血症小鼠血清总胆固醇和甘油三酯水平的报道，多方印证了植物乳杆菌于降低心血管疾病风险中的重要作用。
乳酸菌降脂有以下几种作用方式：(1)抑制脂肪酶活性。当人体摄入的食物进入肠道后，肠道中的胰脂肪酶将脂肪分解为单酰甘油与游离的脂肪酸，导致血脂升高，一些乳酸菌通过抑制脂肪酶的活性，减少机体对脂肪的消化与吸收，可以有效改善肥胖与高血脂等症状，达到降血脂的目的。(2)降低胆固醇含量。研究表明，厌氧条件下，部分乳酸菌在胆固醇-MRS固体培养基中生长时，菌株可将胆固醇以吸入细胞内的方式降低培养基中总胆固醇含量。(3)结合胆酸盐。酸性的环境下，胆固醇可与胆盐结合成沉淀，从而起到降胆固醇的作用。同时也有研究发现，乳酸菌代谢产生的胆盐水解酶(Bile salt hydrolase，BSH)可以将结合态的胆盐转变为游离态胆酸，而胆固醇与游离态胆酸可形成复合物被沉淀下来。
然而，目前市场上的乳酸菌对胆固醇的清除能力低，在人体肠道中耐受力差，降血脂的效果差，而且使得制得的益生菌等产品后，效果更是无法达到具备好的降血脂的效果，因此，现有技术需要进一步的改进。
发明内容
本发明的目的是提供一种具有降胆固醇、降血脂的作用的植物乳杆菌及其应用。
一种植物乳杆菌，所述植物乳杆菌已于2022年07月06日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC NO.25223，分类命名为植物乳杆菌Lactobacillus plantarum BHP03。
进一步的，所述的植物乳杆菌的16S rDNA全序列如SEQ ID No:1所示。
一种所述的植物乳杆菌的分离纯化的方法，由以下步骤制备而成：(1)取含有植物乳杆菌的样品，加入MRS培养基中，在35-38℃恒温摇床富集培养20-25h，吸取富集液1-2ml，用PBS无菌水稀释，在10-3、10-4、10-5梯度下各吸取100μL于MRS琼脂培养基平板中涂布、编号并记录，于厌氧箱35-38℃下倒置培养24-48h；(2)使用无菌接种挑取单个特征菌落于对应液体培养基中，35-38℃厌氧培养24-26h后，再使用无菌接种环再次沾取菌液平板划线，反复划线至同一平板中的菌落颜色、大小、形状均一致为止，将菌落移接至MRS液体培养基中培养，于已灭菌的甘油管中-18—-22℃保存，得分离纯化后的植物乳杆菌。
进一步的，所述的含有植物乳杆菌的样品与MRS液体培养基的质量体积比为1-2g：100-200mL，所述的植物乳杆菌的样品中植物乳杆菌的质量浓度为1％-2％。
进一步的，所述的MRS培养基为MRS液体培养基培养，该液体培养基是通过每1L蒸馏水中加入以下原料制得，该原料为含酵母膏4-6g、蛋白胨8-12g、牛肉膏8-12g、葡萄糖18-22g、乙酸钠4-6g、柠檬酸二铵1-3g、K2HPO4·3H2O 2.65-2.69g、MnSO4·H2O 0.03-0.08g、MgSO40.043-0.049g、吐温80 1-2mL；该液体培养基培养的pH为6.2-6.8。
一种所述的植物乳杆菌菌悬液的制备方法，由以下步骤制备而成：
(1)将上述甘油管中分离纯化后保存的植物乳杆菌菌株在MRS琼脂平板上划线，挑取单菌落于MRS液体培养基中扩大培养18-20h，然后以2-3％接种量接种到液体MRS液体培养基中，于36-38℃培养16-20h，传2-3代后在3500-4500r/min，4-5℃条件下离心10-15min，离心后上清液过0.22-0.24μL滤膜除杂，得植物乳杆菌发酵上清液；(2)取离心后的沉淀用质量分数为0.8％-0.9％的无菌生理盐水清洗3-4次后进行重悬，统一调整菌悬液密度在0.8×108-1.2×108CFU/mL，所得即为植物乳杆菌的菌悬液。
一种由所述的植物乳杆菌制得的益生菌压片糖果，由以下原料重量份数制备而成：木糖醇50-80份、麦芽糊精10-15份、纳豆粉50-75份、低聚异麦糖10-20份、长双歧杆菌3-5份、嗜酸乳杆菌2-5份、植物乳杆菌8-15份、嗜热链球菌3-6份、柠檬酸0.5-1份、硬脂酸镁0.1-0.5份。
所述的益生菌压片糖果制备方法，由以下步骤制备而成：将长双歧杆菌粉、嗜酸乳杆菌粉、植物乳杆菌粉、嗜热链球菌菌粉与木糖醇、麦芽糊精、纳豆粉、低聚异麦糖、柠檬酸、硬脂酸镁混合后进入压片机压制成片。该益生菌压片糖果的质量为1g-1.5g。
本发明的植物乳杆菌具有降胆固醇、降血脂的作用，并且本发明的植物乳杆菌BHP03的菌悬液及发酵液均对牛磺胆酸纳和甘氨胆酸纳具有较强的结合能力，对胰脂肪酶有较好的抑制能力。此外，本发明的植物乳杆菌BHP03对于人体肠道具有良好的耐受性。使用本发明的植物乳杆菌BHP03制得的益生菌压片糖果具有有效改善脂肪肝，动脉硬化，高血脂症，还可以脑梗术后具有帮助患者恢复健康的作用。
附图说明
图1为本发明的SEQ ID No:1序列图。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
实施例1：
一种植物乳杆菌，所述植物乳杆菌已于2022年07月06日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC NO.25223，分类命名为Lactobacillusplantarum BHP03。
所述的植物乳杆菌的16S rDNA全序列如SEQ ID No:1所示。
一种所述的植物乳杆菌的分离纯化的方法，由以下步骤制备而成：(1)取含有植物乳杆菌的样品，加入MRS培养基中，在35℃恒温摇床富集培养20h，吸取富集液1ml，用PBS无菌水稀释，在10-3、10-4、10-5梯度下各吸取100μL于MRS琼脂培养基平板中涂布、编号并记录，于厌氧箱35℃下倒置培养24h；(2)使用无菌接种挑取单个特征菌落于对应液体培养基中，35℃厌氧培养24h后，再使用无菌接种环再次沾取菌液平板划线，反复划线至同一平板中的菌落颜色、大小、形状均一致为止，将菌落移接至MRS液体培养基中培养，于已灭菌的甘油管中-18℃保存，得分离纯化后的植物乳杆菌。
所述的含有植物乳杆菌的样品与MRS液体培养基的质量体积比为1g：100mL，所述的植物乳杆菌的样品中植物乳杆菌的质量浓度为1％。
所述的MRS培养基为MRS液体培养基培养，该液体培养基是通过每1L蒸馏水中加入以下原料制得，该原料为含酵母膏4g、蛋白胨8g、牛肉膏8g、葡萄糖18g、乙酸钠4g、柠檬酸二铵1g、K2HPO4·3H2O 2.65g、MnSO4·H2O 0.03g、MgSO40.043 g、吐温80 1mL；该液体培养基培养的pH为6.2。
一种所述的植物乳杆菌菌悬液的制备方法，由以下步骤制备而成：
(2)将上述甘油管中分离纯化后保存的植物乳杆菌菌株在MRS琼脂平板上划线，挑取单菌落于MRS液体培养基中扩大培养18h，然后以2％接种量接种到液体MRS液体培养基中，于36℃培养16h，传2代后在3500r/min，4℃条件下离心10min，离心后上清液过0.22μL滤膜除杂，得植物乳杆菌发酵上清液；(2)取离心后的沉淀用质量分数为0.8％的无菌生理盐水清洗3次后进行重悬，统一调整菌悬液密度在0.8×108CFU/mL，所得即为植物乳杆菌的菌悬液。
一种由所述的植物乳杆菌制得的益生菌压片糖果，由以下原料重量份数制备而成：木糖醇50份、麦芽糊精10份、纳豆粉50份、低聚异麦糖10份、长双歧杆菌3份、嗜酸乳杆菌2份、植物乳杆菌8份、嗜热链球菌3份、柠檬酸0.5份、硬脂酸镁0.1份。
所述的益生菌压片糖果制备方法，由以下步骤制备而成：将长双歧杆菌粉、嗜酸乳杆菌粉、植物乳杆菌粉、嗜热链球菌菌粉与木糖醇、麦芽糊精、纳豆粉、低聚异麦糖、柠檬酸、硬脂酸镁混合后进入压片机压制成片。该益生菌压片糖果的质量为1g。
实施例2：
一种植物乳杆菌，所述植物乳杆菌已于2022年07月06日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC NO.25223，分类命名为Lactobacillusplantarum BHP03。
所述的植物乳杆菌的16S rDNA全序列如SEQ ID No:1所示。
一种所述的植物乳杆菌的分离纯化的方法，其特征在于，由以下步骤制备而成：(1)取含有植物乳杆菌的样品，加入MRS培养基中，在36℃恒温摇床富集培养22h，吸取富集液1-2ml，用PBS无菌水稀释，在10-3、10-4、10-5梯度下各吸取100μL于MRS琼脂培养基平板中涂布、编号并记录，于厌氧箱37℃下倒置培养30h；(2)使用无菌接种挑取单个特征菌落于对应液体培养基中，36℃厌氧培养25h后，再使用无菌接种环再次沾取菌液平板划线，反复划线至同一平板中的菌落颜色、大小、形状均一致为止，将菌落移接至MRS液体培养基中培养，于已灭菌的甘油管中-20℃保存，得分离纯化后的植物乳杆菌。
所述的含有植物乳杆菌的样品与MRS液体培养基的质量体积比为1.5g：150mL，所述的植物乳杆菌的样品中植物乳杆菌的质量浓度为1.5％。
所述的MRS培养基为MRS液体培养基培养，该液体培养基是通过每1L蒸馏水中加入以下原料制得，该原料为含酵母膏5g、蛋白胨10g、牛肉膏10g、葡萄糖20g、乙酸钠5g、柠檬酸二铵2g、K2HPO4·3H2O 2.63g、MnSO4·H2O 0.05g、MgSO40.043-0.049g、吐温80 1.5mL；该液体培养基培养的pH为6.5。
一种所述的植物乳杆菌菌悬液的制备方法，由以下步骤制备而成：
(3)将上述甘油管中分离纯化后保存的植物乳杆菌菌株在MRS琼脂平板上划线，挑取单菌落于MRS液体培养基中扩大培养19h，然后以2-3％接种量接种到液体MRS液体培养基中，于36-38℃培养18h，传2代后在4000r/min，4℃条件下离心12min，离心后上清液过0.23μL滤膜除杂，得植物乳杆菌发酵上清液；(2)取离心后的沉淀用质量分数为0.85％的无菌生理盐水清洗3次后进行重悬，统一调整菌悬液密度在1×108CFU/mL，所得即为植物乳杆菌的菌悬液。
一种由所述的植物乳杆菌制得的益生菌压片糖果，由以下原料重量份数制备而成：木糖醇70份、麦芽糊精12份、纳豆粉70份、低聚异麦糖15份、长双歧杆菌4份、嗜酸乳杆菌3份、植物乳杆菌10份、嗜热链球菌5份、柠檬酸0.8份、硬脂酸镁0.4份。
所述的益生菌压片糖果制备方法，由以下步骤制备而成：将长双歧杆菌粉、嗜酸乳杆菌粉、植物乳杆菌粉、嗜热链球菌菌粉与木糖醇、麦芽糊精、纳豆粉、低聚异麦糖、柠檬酸、硬脂酸镁混合后进入压片机压制成片。该益生菌压片糖果的质量为1.2g。
实施例3：
一种植物乳杆菌，所述植物乳杆菌已于2022年07月06日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC NO.25223，分类命名为Lactobacillusplantarum BHP03。
所述的植物乳杆菌的16S rDNA全序列如SEQ ID No:1所示。
一种所述的植物乳杆菌的分离纯化的方法，其特征在于，由以下步骤制备而成：(1)取含有植物乳杆菌的样品，加入MRS培养基中，在38℃恒温摇床富集培养25h，吸取富集液2ml，用PBS无菌水稀释，在10-3、10-4、10-5梯度下各吸取100μL于MRS琼脂培养基平板中涂布、编号并记录，于厌氧箱38℃下倒置培养48h；(2)使用无菌接种挑取单个特征菌落于对应液体培养基中，38℃厌氧培养26h后，再使用无菌接种环再次沾取菌液平板划线，反复划线至同一平板中的菌落颜色、大小、形状均一致为止，将菌落移接至MRS液体培养基中培养，于已灭菌的甘油管中-22℃保存，得分离纯化后的植物乳杆菌。
所述的含有植物乳杆菌的样品与MRS液体培养基的质量体积比为2g：200mL，所述的植物乳杆菌的样品中植物乳杆菌的质量浓度为2％。
所述的MRS培养基为MRS液体培养基培养，该液体培养基是通过每1L蒸馏水中加入以下原料制得，该原料为含酵母膏6g、蛋白胨12g、牛肉膏12g、葡萄糖22g、乙酸钠6g、柠檬酸二铵3g、K2HPO4·3H2O 2.69g、MnSO4·H2O 0.08g、MgSO40.049 g、吐温80 2mL；该液体培养基培养的pH为6.8。
一种所述的植物乳杆菌菌悬液的制备方法，由以下步骤制备而成：
(4)将上述甘油管中分离纯化后保存的植物乳杆菌菌株在MRS琼脂平板上划线，挑取单菌落于MRS液体培养基中扩大培养20h，然后以3％接种量接种到液体MRS液体培养基中，于38℃培养20h，传3代后在4500r/min，5℃条件下离心15min，离心后上清液过0.24μL滤膜除杂，得植物乳杆菌发酵上清液；(2)取离心后的沉淀用质量分数为0.9％的无菌生理盐水清洗4次后进行重悬，统一调整菌悬液密度在1.2×108CFU/mL，所得即为植物乳杆菌的菌悬液。
一种由所述的植物乳杆菌制得的益生菌压片糖果，由以下原料重量份数制备而成：木糖醇80份、麦芽糊精15份、纳豆粉75份、低聚异麦糖20份、长双歧杆菌5份、嗜酸乳杆菌5份、植物乳杆菌15份、嗜热链球菌6份、柠檬酸1份、硬脂酸镁0.5份。
所述的益生菌压片糖果制备方法，由以下步骤制备而成：将长双歧杆菌粉、嗜酸乳杆菌粉、植物乳杆菌粉、嗜热链球菌菌粉与木糖醇、麦芽糊精、纳豆粉、低聚异麦糖、柠檬酸、硬脂酸镁混合后进入压片机压制成片。该益生菌压片糖果的质量为1.5g。
本发明的植物乳杆菌还可以被用于制作益生菌混合粉、降血脂、降胆固醇类口服液、口服颗粒等其他产品。
试验例1：
植物乳杆菌BHP03耐模拟人工胃、肠液能力的测定：
人工胃液：将0.1mol/L磷酸钾缓冲液pH调至2.5，灭菌后加入胃蛋白酶10g使其充分溶解，使用前进行37℃预热。
人工肠液：将0.1mol/L磷酸钾缓冲液pH调至8.0后灭菌，加入胰蛋白酶(10g/L)，猪胆盐(3g/L)，混合使其充分溶解，得到模拟肠液。使用前进行37℃预热。
将本发明实施例1分离纯化后得到的BHP03植物乳杆菌活化2-3代后，以2％接种量接种至MRS液体培养基中，在37℃恒温摇床中培养18h，分别吸取1mL菌悬液接种到9mL人工胃液和人工肠液中，37℃分别孵育3h、4h后用平板计数法测定菌株的活菌数。按如下公式计算耐受率：
表1模拟胃液和肠液耐受能力
如表1所示，植物乳杆菌在pH 2.5的模拟胃液中及含胆盐的pH 8.0模拟肠液中，均表现出良好的耐受能力，且其在模拟肠液中耐受率显著高于阳性对照乳杆菌鼠李糖乳杆菌ATCC53103。实验表明，本发明中的植物乳杆菌具有良好的耐胃肠道逆环境性能。
试验例2：
胰脂肪酶抑制率的测定
在100mL锥形瓶中加入4mL聚乙烯醇三油酸甘油酯乳化液和5mLPBS，37℃水浴10min，预热后加入1mL样品于37℃放置10min，之后加入1mL 2mg/mL胰脂肪酶(使用pH＝7.4，0.025mol/LPBS溶液配制)，放入37℃水浴锅中反应15min，反应结束后立刻加入15mL95％无水乙醇，终止酶反应，样品空白组先不加酶液，待反应15min结束立即加入95％乙醇后再加入1mL胰脂肪酶液。加酚酞指示剂2滴，用0.05mol/L氢氧化钠滴定，直至微红色并保持30s不褪色为滴定终点，记录消耗氢氧化钠溶液的体积。使用如下公式计算剩余酶活：
式中：U-每克胰脂肪酶中所含酶活，IU；V样-样品组消耗NaOH溶液的体积，mL；V0-样品空白组消耗NaOH溶液的体积，mL；c-NaOH标准溶液的浓度，mol/L；w-胰脂肪酶的添加量，g；t-加入胰脂肪酶后的反应时间，min。
分别使用本发明中实施例1中所述的植物乳杆菌菌悬液的制备方法制得的植物乳杆菌菌悬液为样品1，菌悬液的浓度为1×108CFU/mL，另外，取鼠李糖乳杆菌ATCC 53103菌悬液为样品2，该菌悬液的浓度1×108CFU/mL，使用以上方法测定并计算胰脂肪酶抑制率，结果如下表2所示：
表2胰脂肪酶抑制率
| 菌株 | 菌悬液抑制率(％) | 发酵上清液抑制率(％) |
| 植物乳杆菌BHP03 | 64.39±2.73％A | 67.5±2.50％a |
| 鼠李糖乳杆菌ATCC53103 | 56.82±1.31％A | 62.50±2.50％a |
胰脂肪酶是水解膳食脂肪最重要的酶，通过抑制胰脂肪酶活性，可使胰脂肪酶丧失部分分解能力，从源头上控制脂肪进入血液，从而降低脂肪的消化和吸收，起到降脂作用。如表2所示，与鼠李糖乳杆菌ATCC 53103相比，植物乳杆菌BHP03对胰脂肪酶有更优的抑制作用，其中菌悬液的抑制率由56.82％提高到64.39％，发酵上清液抑制率提高了5％。因此，本发明中的植物乳杆菌具有优异的降脂功效。
试验例3：
结合胆酸盐能力的测定
将甘氨胆酸钠分别配制为0.03、0.06、0.09、0.12、0.18、0.24、0.3mmol/L的标准溶液；将牛磺胆酸钠分别配制为0.05、0.1、0.15、0.2、0.25、0.3mmol/L的标准溶液，现配现用。分别取2mL胆酸盐标准溶液于试管中，加入60％H2SO4于70℃水浴40min，取出冰浴5min，387nm处测定其吸光度。以溶液浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，分别绘制甘氨胆酸钠与牛磺胆酸钠的标准曲线图。
取3mL不同样品放入三角瓶中，加入3mL10 g/L胃蛋白酶与1mL 0.01mol/L盐酸，在37℃恒温振荡箱中振荡1h，模拟胃部消化；用0.1mol/LNaOH调节pH至6.3，加入4mL 10g/L胰蛋白酶，在37℃恒温振荡箱中振荡1h，模拟肠消化。一份三角瓶加入4mL 0.4mmol/L甘氨胆酸钠，另一份加入4mL 0.5mmol/L牛磺胆酸钠，于37℃下恒温振荡1h，之后4000r/min离心20min，取上清液2mL，用硫酸比色法测定胆酸盐含量，计算如公式(2)和公式(3)所示：
式中：R1-甘氨胆酸钠结合能力，mmol/mL；N1-甘氨胆酸钠加入量，mmol；N2-甘氨胆酸钠剩余量，mmol；V1-样品加入体积，mL；A-样品稀释倍数；R2-牛磺胆酸钠结合能力，mmol/mL；N3-牛磺胆酸钠加入量，mmol；N4-牛磺胆酸钠剩余量，mmol；V2-样品加入体积，mL。(甘氨胆酸钠标准曲线：y＝2.645x+0.0462，R2＝0.9995；牛磺胆酸钠标准曲线：y＝2.488x+0.0328，R2＝0.9967。)
胆酸盐结合能力
分别使用本发明中实施例1中所述的植物乳杆菌菌悬液的制备方法制得的植物乳杆菌菌悬液为样品1，菌悬液的浓度为1×108CFU/mL，另外，取鼠李糖乳杆菌ATCC 53103菌悬液为样品2，该菌悬液的浓度1×108CFU/mL，使用以上方法测定并计算甘氨胆酸钠结合力和牛磺胆酸钠结合力，结果如下表3所示：
表3
胆酸盐在肠道中水解脂肪以及脂溶性物质，降低肠道中胆酸盐含量，可作为表征降血脂的一项直观指标。植物乳杆菌BHP03菌悬液结合甘氨胆酸钠和牛磺胆酸钠的能力分别为0.4842mmol/L和0.6061mmol/L，发酵上清液分别为0.4028mmol/mL及0.5149±0.0008mmol/L，与阳性对照鼠李糖乳杆菌ATCC 53103相比无显著性差异，结合能力较好。
胆固醇清除率的测定
于具塞试管中各加入9mL MRS胆固醇培养基，按2％比例接种活化的植物乳杆菌BHP03，未接种的作为样品对照组，置于37℃厌氧培养箱18h，培养结束后，4℃，4000rpm离心10min。使用胆固醇试剂盒测定发酵上清液中胆固醇含量，并计算出植物乳杆菌BHP03对胆固醇的清除率。胆固醇清除率计算公式如下所示：
式中：A-样品组胆固醇含量，μmol/L；B-样品对照组胆固醇含量，μmol/L。
表4胆固醇清除率
由表4可知，在培养18h后，植物乳杆菌BHP03胆固醇清除率为30.55±0.85％，阳性对照益生菌鼠李糖乳杆菌ATCC 53103的胆固醇清除率为22.15±1.17％，且菌株之间胆固醇清除率呈显著性差异(p＜0.05)，说明本发明中植物乳杆菌BHP03具有优良的清除胆固醇的能力。
以上实验结果表明，植物乳杆菌BHP03的胃肠道耐受能力、抑制胰脂肪酶能力及清除胆固醇能力均优于阳性对照益生菌鼠李糖乳杆菌ATCC 53103，可用于降脂产品的开发。
本发明所有实验重复次数≥2次，数据用平均值±标准x差(±s)表示，采用SPSS25软件进行组间比较，并采用单因素方差分析，组内用配对t检验分析，不同字母代表两者之间差异显著(p<0.05)。
试验例4：
现有石家庄门诊观察中度到重度脂肪肝30位(中度脂肪肝19位，重度脂肪肝11)，饭后半小时服用本发明实施例1制得的益生菌压片糖果，每次两片，每天三次，连续服用四周，其中中度脂肪肝19位，16位为轻度:重度脂肪肝11位，8位专为中度。继续服用八周，18位脂肪肝正常为正常，11位中度和重度脂肪肝转为轻度，1位重度脂肪肝转为中度。综上，本发明制得的益生菌压片糖果有明显的改善和调节作用，十二周有效率100％。
试验例5：
济南门诊观察年龄40-55岁动脉硬化者50位。饭后半小时服用本发明实施例2制得的益生菌压片糖果，每次两片，每天两次，连续服用三月，39位动脉硬化者症状显著改善，11位症状有缓解。1位放弃服用，49位继续服用六个月，46位动脉硬化症状消失，3位动脉硬化症状由重度转为轻微。综上,本发明制得的益生菌压片糖果，对干动脉硬化者有显著改善和调节作用，服用九个月治愈率92％。
试验例6：
南阳门诊观察脑梗术后患者28位(20位语言能力丧失、24位部分肢体感觉丧失、18位行动能力丧失)。饭后半小时服用本发明实施例2制得的益生菌压片糖果，每次两片，每天三次，连续服用三月，19位语言能力部分恢复，22位部分肢体感觉恢复，16位行动部分能力恢复。继续服用六个月，20位语言能力完全或部分恢复，24位肢体感觉完全或部分恢复，18位行动能力完全或部分恢复。综上，本发明制得的益生菌压片糖果对于脑梗术后患者有显著改善和调节作用，九个月有效治愈率100％。
试验例7：
沈阳门诊观察高血脂症60位(高胆固醇39位，高甘油三脂21位)，饭后半小时服用本发明实施例2制得的益生菌压片糖果，每次两片，每天三次，连续服用四周，检测，高胆固醇36位理化指标明显改善，高甘油三脂20位理化指标显著改善。继续服用八周，检测，高胆固醇36位指标恢复正常范围，3位指标降低至接近正常范围:高甘油三脂20位理化指标全部恢复正常指标范围。综上，本发明制得的益生菌压片糖果对于高血脂症有明显的改善和调节作用，十二周有效率100％。
Claims (8)
1.一种植物乳杆菌，其特征在于，所述植物乳杆菌已于2022年07月06日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC NO.25223，分类命名为Lactobacillus plantarum BHP03。
2.根据权利要求1所述的植物乳杆菌，其特征在于，所述的植物乳杆菌的16S rDNA全序列如SEQ ID No:1所示。
3.一种权利要求1-2所述的植物乳杆菌的分离纯化的方法，其特征在于，由以下步骤制备而成：(1)取含有植物乳杆菌的样品，加入MRS培养基中，在35-38℃恒温摇床富集培养20-25h，吸取富集液1-2ml，用PBS无菌水稀释，在10-3、10-4、10-5梯度下各吸取100μL于MRS琼脂培养基平板中涂布、编号并记录，于厌氧箱35-38℃下倒置培养24-48h；(2)使用无菌接种挑取单个特征菌落于对应液体培养基中，35-38℃厌氧培养24-26h后，再使用无菌接种环再次沾取菌液平板划线，反复划线至同一平板中的菌落颜色、大小、形状均一致为止，将菌落移接至MRS液体培养基中培养，于已灭菌的甘油管中-18—-22℃保存，得分离纯化后的植物乳杆菌。
4.根据权利要求3所述的植物乳杆菌的分离纯化的方法，其特征在于，所述的含有植物乳杆菌的样品与MRS液体培养基的质量体积比为1-2g：100-200mL，所述的植物乳杆菌的样品中植物乳杆菌的质量浓度为1％-2％。
5.根据权利要求3所述的植物乳杆菌的分离纯化的方法，其特征在于，所述的MRS培养基为MRS液体培养基培养，该液体培养基是通过每1L蒸馏水中加入以下原料制得，该原料为含酵母膏4-6g、蛋白胨8-12g、牛肉膏8-12g、葡萄糖18-22g、乙酸钠4-6g、柠檬酸二铵1-3g、K2HPO4·3H2O 2.65-2.69g、MnSO4·H2O 0.03-0.08g、MgSO4 0.043-0.049g、吐温80 1-2mL；该液体培养基培养的pH为6.2-6.8。
6.一种权利要求3-5任一所述的植物乳杆菌菌悬液的制备方法，其特征在于，由以下步骤制备而成：
将上述甘油管中分离纯化后保存的植物乳杆菌菌株在MRS琼脂平板上划线，挑取单菌落于MRS液体培养基中扩大培养18-20h，然后以2-3％接种量接种到液体MRS液体培养基中，于36-38℃培养16-20h，传2-3代后在3500-4500r/min，4-5℃条件下离心10-15min，离心后上清液过0.22-0.24μL滤膜除杂，得植物乳杆菌发酵上清液；(2)取离心后的沉淀用质量分数为0.8％-0.9％的无菌生理盐水清洗3-4次后进行重悬，统一调整菌悬液密度在0.8×108-1.2×108CFU/mL，所得即为植物乳杆菌的菌悬液。
7.一种由权利要求1-4任一所述的植物乳杆菌制得的益生菌压片糖果，其特征在于，由以下原料重量份数制备而成：木糖醇50-80份、麦芽糊精10-15份、纳豆粉50-75份、低聚异麦糖10-20份、长双歧杆菌3-5份、嗜酸乳杆菌2-5份、植物乳杆菌8-15份、嗜热链球菌3-6份、柠檬酸0.5-1份、硬脂酸镁0.1-0.5份。
8.根据权利要求7所述的益生菌压片糖果制备方法，其特征在于，由以下步骤制备而成：将长双歧杆菌粉、嗜酸乳杆菌粉、植物乳杆菌粉、嗜热链球菌菌粉与木糖醇、麦芽糊精、纳豆粉、低聚异麦糖、柠檬酸、硬脂酸镁混合后进入压片机压制成片。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202310069065.0A CN116875477B (zh) | 2023-02-06 | 2023-02-06 | 一种植物乳杆菌及其应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202310069065.0A CN116875477B (zh) | 2023-02-06 | 2023-02-06 | 一种植物乳杆菌及其应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN116875477A true CN116875477A (zh) | 2023-10-13 |
| CN116875477B CN116875477B (zh) | 2024-03-19 |
Family
ID=88255584
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202310069065.0A Active CN116875477B (zh) | 2023-02-06 | 2023-02-06 | 一种植物乳杆菌及其应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN116875477B (zh) |
Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20110117629A1 (en) * | 2009-11-19 | 2011-05-19 | Family Medicine Interantional Co., Ltd. | Lactobacillus plantarum bb9 capable of adhering to gastrointestinal tract and cholesterol removal |
| CN102899276A (zh) * | 2012-11-07 | 2013-01-30 | 山东宝来利来生物工程股份有限公司 | 一株具有降胆固醇能力的嗜热链球菌及其应用 |
| CN103598594A (zh) * | 2013-10-28 | 2014-02-26 | 天津科技大学 | 植物乳杆菌在降血脂和辅助减肥方面的应用 |
| CN103642716A (zh) * | 2013-11-21 | 2014-03-19 | 河北一然生物科技有限公司 | 一种植物乳杆菌及其应用 |
| CN108728382A (zh) * | 2018-06-07 | 2018-11-02 | 四川大学 | 一株具降胆固醇及促进肠道短链脂肪酸产生能力的植物乳杆菌及其应用 |
| US20190111091A1 (en) * | 2016-08-24 | 2019-04-18 | Synbio Tech Inc. | Method for reducing body fat by administering lactobacillus plantarum |
| CN112715776A (zh) * | 2020-12-31 | 2021-04-30 | 江苏省农业科学院 | 一种提高肉禽脂质代谢和肌肉品质的植物乳杆菌及其应用 |
-
2023
- 2023-02-06 CN CN202310069065.0A patent/CN116875477B/zh active Active
Patent Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20110117629A1 (en) * | 2009-11-19 | 2011-05-19 | Family Medicine Interantional Co., Ltd. | Lactobacillus plantarum bb9 capable of adhering to gastrointestinal tract and cholesterol removal |
| CN102899276A (zh) * | 2012-11-07 | 2013-01-30 | 山东宝来利来生物工程股份有限公司 | 一株具有降胆固醇能力的嗜热链球菌及其应用 |
| CN103598594A (zh) * | 2013-10-28 | 2014-02-26 | 天津科技大学 | 植物乳杆菌在降血脂和辅助减肥方面的应用 |
| CN103642716A (zh) * | 2013-11-21 | 2014-03-19 | 河北一然生物科技有限公司 | 一种植物乳杆菌及其应用 |
| US20190111091A1 (en) * | 2016-08-24 | 2019-04-18 | Synbio Tech Inc. | Method for reducing body fat by administering lactobacillus plantarum |
| CN108728382A (zh) * | 2018-06-07 | 2018-11-02 | 四川大学 | 一株具降胆固醇及促进肠道短链脂肪酸产生能力的植物乳杆菌及其应用 |
| CN112715776A (zh) * | 2020-12-31 | 2021-04-30 | 江苏省农业科学院 | 一种提高肉禽脂质代谢和肌肉品质的植物乳杆菌及其应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN116875477B (zh) | 2024-03-19 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Pedrosa et al. | Survival of yogurt-containing organisms and Lactobacillus gasseri (ADH) and their effect on bacterial enzyme activity in the gastrointestinal tract of healthy and hypochlorhydric elderly subjects | |
| CN110669697B (zh) | 一种高产短链脂肪酸的干酪乳杆菌、培养方法及其应用 | |
| CN110106119B (zh) | 一株分离自母乳的鼠李糖乳杆菌m9及其应用 | |
| CN111440750B (zh) | 一株具有缓解乳糖不耐受和降甘油三酯功能的动物双歧杆菌乳亚种及其应用 | |
| CN112725219B (zh) | 一种青春双歧杆菌菌株及其应用 | |
| CN116024130B (zh) | 一株降血尿酸发酵乳杆菌a21215及其应用 | |
| CN111996147B (zh) | 一株具有降甘油三酯功能的副干酪乳杆菌及其应用 | |
| CN116676225B (zh) | 一株具有安神助眠功效的鼠李糖乳杆菌lr-28菌株、发酵产物、嘉眠菌群组合剂及应用 | |
| CN116286468A (zh) | 一株具有抗氧化功能的发酵粘液乳杆菌lf-onlly及其在发酵食品中的应用 | |
| CN114181864A (zh) | 一种鼠李糖乳杆菌hf01及其应用 | |
| CN114642686A (zh) | 一种复合益生菌及其延缓衰老和抗氧化的作用 | |
| CN112608865A (zh) | 一株具有降甘油三酯功能的鼠李糖乳杆菌及其应用 | |
| CN109983115B (zh) | 一种加氏乳杆菌及其培养方法和应用 | |
| CN110484459B (zh) | 一株植物乳杆菌及其应用 | |
| CN116814481A (zh) | 一株源自酸马奶的益生副干酪乳酪杆菌pc646及其人工智能筛选方法 | |
| CN114848684A (zh) | 一种对高脂血症具有明显改善作用的复合益生菌组合物 | |
| CN116875477B (zh) | 一种植物乳杆菌及其应用 | |
| CN114984065B (zh) | 一种提高免疫力的益生菌组合物及其制备方法 | |
| CN116445356A (zh) | 一种调节肠道菌群及增强免疫力的动物双歧杆菌乳亚种ba67及其应用 | |
| CN113604385B (zh) | 具有降解黄油能力的德氏乳杆菌及其应用 | |
| CN113046276B (zh) | 一种母乳源鼠李糖乳杆菌及其应用 | |
| CN111195267B (zh) | 具有促进肠干细胞增生、抗病毒、抗发炎和抗过敏功效的乳酸菌晶体组合物及其制备方法 | |
| WO1989000425A1 (en) | Lipid peroxide content reducer | |
| CN117264819A (zh) | 一种具有透明质酸酶抑制活性的植物乳植杆菌yys-b1及其应用 | |
| CN116515668A (zh) | 一种具有降胆固醇及肠道调节功能的干酪乳杆菌lpm-0188及其制备方法、应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |