CN112708590B - 促进艾克曼嗜黏蛋白菌生长的组合物及其用途 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种促进艾克曼嗜黏蛋白菌(Akkermansia muciniphila)生长的组合物,该组合物包含凉薯发酵物。该组合物进一步促进使用者的戈氏副拟杆菌(Parabacteroides goldsteinii)及双歧杆菌属(Bifidobacterium)细菌生长,并且能改善使用者的体重、体脂肪及腰围、及肌肤状态。
Description
技术领域
本发明关于一种组合物,特别是一种促进艾克曼嗜黏蛋白菌(Akkermansiamuciniphila)生长的组合物。
背景技术
根据研究,约有70%以上的微生物共生在人体的消化系统,尤其在肠胃道中构筑了丰富且复杂的生态系统,称为肠道菌相,影响人体许多生理状态及调节,能反映出人体的各项身体状态,对人类产生重要影响。
艾克曼嗜黏蛋白菌(Akkermansia muciniphila),是一种不形成芽孢、不具有运动性的专性厌氧(Obligate anaerobe)的革兰氏阴性细菌,通常存在于大多数哺乳动物的肠内。
近年来的研究指出,肥胖或糖尿病人肠内的艾克曼嗜黏蛋白菌量较少。另外,在小鼠模式中发现,口服摄取艾克曼嗜黏蛋白菌可以逆转高脂饮食引起的肥胖,原因可能是定殖在肠道的艾克曼嗜黏蛋白菌上的外膜蛋白(Amuc_1100)减少小鼠脂肪堆积并稳定血糖。
然而,由于艾克曼嗜黏蛋白菌专性厌氧的特性,不易生长,还要特殊动物来源的培养基,因此若以外部培养菌体后,再以口服方式补充菌体相对困难。因此,若能以开发能促进艾克曼嗜黏蛋白菌于肠胃道数量的天然组合物,实有其必要。
发明内容
有鉴于此,研究或开发一种天然植物成分的促进艾克曼嗜黏蛋白菌的组合物来有效提升生物体的健康是有其需求的。
本发明的目的在于提供一种促进艾克曼嗜黏蛋白菌(Akkermansia muciniphila)生长的组合物,其包含凉薯发酵物。
在一些实施例中,凉薯发酵物为凉薯与水的培养液经过复数菌种进行发酵所得。
在一些实施例中,培养液为凉薯与水以1:3至1:6的重量比混合所得。
在一些实施例中,复数菌种由啤酒酵母菌(Saccharomyces cerevisiae)、胚芽乳杆菌(Lactobacillus plantarum)及醋酸菌(Acetobacter aceti)所组成。
在一些实施例中,组合物能促进艾克曼嗜黏蛋白菌生长超过3倍。
在一些实施例中,组合物进一步能促进戈氏副拟杆菌(Parabacteroidesgoldsteinii)及双歧杆菌属(Bifidobacterium)细菌生长。
根据一些实施例,本发明提供一种将组合物用于降低个体的体重、体脂肪及腰围的用途。
根据一些实施例,本发明提供一种将组合物用于改善个体的肌肤状况的用途。
在一些实施例中,组合物具有以下功能的至少其中两种:提升肌肤含水量、提升肌肤弹力、减少肌肤皱纹、减少肌肤紫外线色斑以及提升肌肤光泽。
在一些实施例中,个体为身体质量指数(Body Mass Index,BMI)介于24及27之间或是体脂肪率大于25%的个体。
在一些实施例中,组合物另包含木寡糖及菊糖。
在一些实施例中,凉薯发酵物、木寡糖及菊糖的重量比范围为3~5:1~3:1~3。
本发明提供一种促进艾克曼嗜黏蛋白菌生长的凉薯发酵物及其组合物。该凉薯发酵物可作为有效促进艾克曼嗜黏蛋白菌生长的组合物中的成分,该组合物可进一步用于降低个体的体重、体脂肪及腰围,或用于改善个体的肌肤状况。该组合物可具有粉末、颗粒、溶液、或胶囊的剂型,且可制成食品、饮品、医药品、或营养补充剂,藉由口服方式给予个体。
以下将配合图式进一步说明本发明的实施方式,下述所列举的实施例是用以阐明本发明的发明特点及应用,而非以限定本发明的范围,任何熟习此技艺者,在不脱离本发明的精神和范围内,当可做些许更动与润饰,因此本发明的保护范围当视后附的申请专利范围所界定者为准。
附图说明
图1是试管实验中各益生质对艾克曼嗜黏蛋白菌(Akkermansia muciniphila)生长量影响的检测的结果图;
图2是人体实验中的艾克曼嗜黏蛋白菌(Akkermansia muciniphila)检测的结果图;
图3是人体实验中的戈氏副拟杆菌(Parabacteroides goldsteinii)检测的结果图;
图4是人体实验中的双歧杆菌属(Bifidobacterium)菌检测的结果图;
图5是人体实验中的体重检测的结果图;
图6是人体实验中的全身体脂检测的结果图;
图7是人体实验中的躯干体脂检测的结果图;
图8是人体实验中的腰围检测的结果图;
图9是人体实验中的肌肤含水量检测的结果图;
图10是人体实验中的肌肤弹性检测的结果图;
图11是人体实验中的肌肤皱纹检测的结果图;
图12是人体实验中的肌肤紫外线色斑检测的结果图;
图13是人体实验中的肌肤光泽检测的结果图;
图式中「*」代表p值小于0.05,「**」代表p值小于0.01,以及「***」代表p值小于0.001。当「*」越多时,代表统计上的差异越显著。
具体实施方式
以下将描述本案的部分具体实施态样。在不背离本案精神下,本案尚可以多种不同形式的态样来实践,不应将保护范围限于说明书所具体陈述的条件。
本案使用Excel软体进行统计分析。数据以平均值±标准差(SD)表示,各组之间的差异以学生t检验(student's t-test)进行分析。
本文中所使用数值为近似值,所有实验数据皆表示在20%的范围内,较佳为在10%的范围内,最佳为在5%的范围内。
本文中所谓「糖度」所指为白利糖度(Degrees Brix,符号°Bx),是测量糖度的单位,代表在20℃情况下,每100克水溶液中溶解的蔗糖克数,可用于判断发酵过程中糖份被转换的程度。
本文中所谓「个体」是指人类或非人的哺乳动物,较佳为人类。
本文中所谓「肌肤」所指为人类或非人的哺乳动物的皮肤,较佳为人类的肌肤。
本文中所谓「凉薯」是指豆科(Fabaceae)豆薯属(Pachyrhizus)的多年生缠绕性草质藤本植物,又称为豆薯、沙葛等别名。
本文中所谓「菊糖」,也叫菊粉,为一种果聚糖,由果糖分子聚合而成,其来源可为植物,例如来至菊科和桔梗科植物。
本文中所谓「木寡糖」是指包含2至7个木糖(xylose)单元的寡糖,其来源可为植物,或由微生物发酵、酵素转化、或化学合成等方式而制得。
如本文中所使用的,用语「啤酒酵母菌(Saccharomyces cerevisiae)」、「胚芽乳杆菌(Lactobacillus plantarum)」以及「醋酸菌(Acetobacter aceti)」分别意欲涵盖那些为熟习此项技术人士可易于获得的啤酒酵母菌、胚芽乳杆菌以及醋酸菌(例如,可购自于国内或国外寄存机构者),或者利用本技艺中所惯用的微生物分离方法而从天然来源中所分离纯化出的啤酒酵母菌、胚芽乳杆菌以及醋酸菌菌株。
依据本发明,食品产品的种类包括但不限于:饮料(beverages)、发酵食品(fermented foods)、烘培产品(bakery products)、健康食品(health foods)以及膳食补充品(dietary supplements)。
下列范例中的实验步骤若无特别叙明,即在室温(25±5℃)、常压(1atm)下进行。
实施例1:固态凉薯发酵物的制备
凉薯(Pachyrhizus erosus)为豆科(Legumen)豆薯属(Pachyrhizus)多年生藤本状草本植物,又称豆薯、葛薯、番葛,农业栽培主要分布在热带地区,包括南美洲的厄瓜多、秘鲁、亚洲的中国台湾、广东、四川、琉球、印尼、越南、菲律宾、马来西亚。本发明使用的凉薯产地并不做限制。凉薯为豆类因根如薯块而得名,凉薯块根可生食或熟食,直径约20-30公分,并可加工制成沙葛粉,有清凉去热的功效。本发明将凉薯进行发酵以获得发酵物。
(1-1):固态凉薯发酵物的制备例1
首先,将凉薯的块根部位彻底清洗,将其打碎成粒径12mm以下的凉薯块根颗粒。将凉薯块根颗粒与水以以1:3-6的重量比例混合均匀以得到原料混合液。然后,将原料混合液80℃-100℃下加热0.5-1小时,得到凉薯培养液。接着,根据凉薯培养液的总重,添加9.0wt%(重量百分比)的葡萄糖于凉薯培养液中,凉薯培养液此时的糖度值为9.0°Bx。
待凉薯培养液冷却至室温后,进行发酵程序,先添加相对于培养液0.05-0.2wt%的啤酒酵母菌(Saccharomyces cerevisiae)(购自食品工业发展研究所生物资源保存及研究中心(BCRC),寄存编号BCRC20271)(国际寄存ATCC26602)于培养液中,进行发酵0.5-2天,以形成第一初发酵物,再添加相对于培养液为0.02-0.1wt%的胚芽乳杆菌(Lactobacillusplantarum)(购自BCRC,寄存编号BCRC910805)(国际寄存DSM33108)于第一初发酵物内,进行发酵0.5-2天以得到形成第二初发酵物,再添加相对于培养液为3.0-7.0wt%的醋酸菌(Acetobacter aceti)(购自BCRC,寄存编号BCRC11688)(国际寄存ATCC15973)于第二初发酵物内,进行发酵2-4天。最后在不移除此该三种菌的情况下,使用设定的糖度范围4.0°Bx±1.0、pH值为3.4±0.3等规格,如检验符合该规格,则判定发酵完成并得到凉薯发酵物。
在本发明的一实施例中,在发酵中所采用的菌种也可为啤酒酵母菌之外的其他同属不同种的酵母菌菌种,胚芽乳杆菌之外的其他同属不同种的乳杆菌菌种以及醋酸菌之外的其他同属不同种的醋杆菌菌种,本发明并不以此为限。
接着将凉薯发酵物制备成固态凉薯发酵物,其制备方法简述如下。将凉薯发酵物进行干燥程序(例如:热风干燥、冷冻干燥、喷雾干燥)以去除水分。进行干燥程序时,先添加30-50wt%麦芽糊精,于将凉薯发酵物中,以作为赋型剂,搅拌均匀后,确认麦芽糊精完全溶解,此时的凉薯发酵物糖度值为大于23°Bx,将凉薯发酵物以热风干燥、冷冻干燥或喷雾干燥方式去除水分,得到固态凉薯发酵物。固态凉薯发酵物设定的规格为水分<5%。
(1-2):固态凉薯发酵物的制备例2
本发明后续实施例2、实施例3及实施例4所用的固态凉薯发酵物,其制备方法简述如下。首先,将凉薯的块根部位彻底清洗,将其打碎成粒径12mm以下的凉薯块根颗粒。将凉薯块根颗粒与水以1:5的重量比例混合均匀以得到原料混合液。然后,将原料混合液95℃下加热0.5小时,得到凉薯培养液。接着,根据凉薯培养液的总重,添加9.0wt%(重量百分比)的葡萄糖于凉薯培养液中,凉薯培养液此时的糖度值为9.0°Bx。
待凉薯培养液冷却至室温后,进行发酵程序,先添加相对于培养液0.1wt%的啤酒酵母菌(Saccharomyces cerevisiae)(购自食品工业发展研究所生物资源保存及研究中心(BCRC),寄存编号BCRC20271)(国际寄存ATCC26602)于培养液中,进行发酵1天,以形成第一初发酵物,再添加相对于培养液为0.05wt%的胚芽乳杆菌(Lactobacillus plantarum)(购自BCRC,寄存编号BCRC910805)(国际寄存DSM33108)于第一初发酵物内,进行发酵1天以得到形成第二初发酵物,再添加相对于培养液为5.0wt%的醋酸菌(Acetobacter aceti)(购自BCRC,寄存编号BCRC11688)(国际寄存ATCC15973)于第二初发酵物内,进行发酵3天。最后在不移除此该三种菌的情况下,使用设定的糖度范围4.0°Bx±1.0、pH值为3.4±0.3等规格,如检验符合该规格,则判定发酵完成并得到凉薯发酵物,接着将凉薯发酵物制备成固态凉薯发酵物。先添加30wt%麦芽糊精(作为赋型剂)于凉薯发酵物中,搅拌均匀后,确认麦芽糊精完全溶解,此时的凉薯发酵物糖度值为大于23°Bx,将凉薯发酵物以冷冻干燥方式去除水分,得到固态凉薯发酵物。固态凉薯发酵物设定的规格为水分<5%,如检验符合规格,则判定制备完成并得到固态凉薯发酵物,也是实施例2、实施例3及实施例4所用的固态凉薯发酵物。
实施例2:艾克曼嗜黏蛋白菌的益生质试验
木寡糖、果寡糖、菊糖、乳糖醇的来源
本文中实施例所用木寡糖是购自山东龙力生物科技股份有限公司,果寡糖是购自明治株式会社,菊糖是购自Cosucra Groupe Warcoing,乳糖醇是购自宏伟生物科技股份有限公司。但此些糖类的来源并不做限制。
艾克曼嗜黏蛋白菌来源与样品制备
艾克曼嗜黏蛋白菌的来源可分离自人体自愿者的肠道,也可直接购自财团法人食品工业发展研究所。在以下实施例中,艾克曼嗜黏蛋白菌是购自财团法人食品工业发展研究所(Bioresource Collection and Research Center,BCRC),编号BCRC81048。
进行活化程序将艾克曼嗜黏蛋白菌活化。将艾克曼嗜黏蛋白菌冻管,以10%的植菌量接种于脑心培养基(Brain Heart Infusion,又称BHI培养基)中并厌氧培养于37℃下48小时,以活化艾克曼嗜黏蛋白菌,即可进行后续益生质实验。
为辨识有益于艾克曼嗜黏蛋白菌生长的营养物质,将预培养的艾克曼嗜黏蛋白菌依3%的接种量(约1x104 CFU/mL)加入含有1%(w/w)候选益生质的脑心培养基中(体积5mL),于厌氧环境中37℃培养48小时,培养后以稀释涂抹法(Spresding Method)涂盘计数菌量。该候选益生质为木寡糖(实验组1)、乳糖醇(实验组2)、菊糖(实验组3)、果寡糖(实验组4)、或固态凉薯发酵物(实验组5)。作为对照,另外将艾克曼嗜黏蛋白菌培养于不含候选益生质的脑心培养基(控制组)。
图一显示前述各种候选益生质对艾克曼嗜黏蛋白菌生长的影响,本实验使用稀释涂抹法,计算培养48小时后,艾克曼嗜黏蛋白菌的菌数。依据图一,控制组的菌数为6.50logCFU/ml,相当于1x106.5 CFU/ml;实验组1的艾克曼嗜黏蛋白菌的菌数为6.75log CFU/ml,相当于1x106.75 CFU/ml;实验组2的艾克曼嗜黏蛋白菌的菌数为6.67log CFU/ml,相当于1x106.67CFU/ml;实验组3的艾克曼嗜黏蛋白菌的菌数为6.53log CFU/ml,相当于1x106.53CFU/ml;实验组4的艾克曼嗜黏蛋白菌的菌数为6.53log CFU/ml,相当于1x106.53 CFU/ml;实验组5的艾克曼嗜黏蛋白菌的菌数为6.73log CFU/ml,相当于1x106.73 CFU/ml。
接着藉由公式:实验组菌数(CFU/ml)/控制组菌数(CFU/ml)来计算各实验组的菌数增减倍数。依此公式,相较于控制组,使菌数有提升的候选益生质包括木寡糖(实验组1)、乳糖醇(实验组2)、菊糖(实验组3)、果寡糖(实验组4)、固态凉薯发酵物(实验组5),其菌数分别提升1.8倍、1.6倍、1.1倍、1.1倍及1.7倍。此结果说明木寡糖、乳糖、菊糖、果寡糖、固态凉薯发酵物任一者皆可促进艾克曼嗜黏蛋白菌的生长。但以木寡糖、乳糖及固态凉薯发酵物的效果较明显。
实施例3:促进艾克曼嗜黏蛋白菌生长的组合物
为评估前述艾克曼嗜黏蛋白菌益生质的不同组合对艾克曼嗜黏蛋白菌生长的促进作用,将预培养的艾克曼嗜黏蛋白菌依3%(约1x104 CFU/mL)的接种量加入含1%(w/w)组合物(实验组6)的脑心培养基(体积5mL),于37℃与厌氧条件下培养48小时,培养后以稀释涂抹法涂盘计数菌量。脑心培养基中的组合物具有下列组成:0.5%固态凉薯发酵物、0.25%木寡糖、及0.25%菊糖。作为对照,另外将艾克曼嗜黏蛋白菌培养于不含前述组合物的脑心培养基(控制组)。
图1显示前述组合物对艾克曼嗜黏蛋白菌生长的影响。依据图1,控制组的菌数为6.50log CFU/ml,相当于1x106.5 CFU/ml;实验组6的菌数为7.02log CFU/ml,相当于1x107.02 CFU/ml;相比控制组,组合物的添加显著提升艾克曼嗜黏蛋白菌的菌数3.3倍。因此,可得知于固态凉薯发酵物、木寡糖、及菊糖的组合在重量比为3~5:1~3:1~3的情况下,能最有效促进艾克曼嗜黏蛋白菌的生长,即便菊糖在图1所示的促生长效果最低,仅有1.1倍。
由于此组合物提升艾克曼嗜黏蛋白菌生长的能力最佳,因此以此组合物进行后续的人体实验。
实施例4:组合物的生理效果
本实施例探讨连续服用含有200mg固态凉薯发酵物、100mg木寡糖、及100mg菊糖的组合物胶囊对受试者的生理影响,其中受试者符合此些条件,(1)年龄范围落于25-60岁、(2)轻度肥胖族群或体脂肪过高族群。其中,轻度肥胖族群是指身体质量指数(Body MassIndex,BMI)藉于24及27之间的族群,体脂肪过高是指体脂肪率大于25%(男性)或大于30%(女性)。
使八位受试者连续四周、每日口服该组合物,剂量为400mg/人/天,并于服用前及服用四周后评估该些受试者的肠胃道菌相变化、体态变化以及肌肤状态等数值,详细的各项检测方式如下所述。
(4-1)肠胃道菌相变化检测方式
在此实验中,选择艾克曼嗜黏蛋白菌、戈氏副拟杆菌及双歧杆菌属作为检测菌相变化的标的,以下说明此些菌种所反映的生理意义。
艾克曼嗜黏蛋白菌(Akkermansia muciniphila),是艾克曼菌(Akkermansia)属的一种细菌,是一种存在于人类肠道肠粘液层的肠内细菌,是Muriel Derrien等人于2004年提出的一种新的艾克曼菌细菌。
已知艾克曼嗜黏蛋白菌大量地存在于非肥胖型人类,而在肥胖型人类的肠道中则仅有少量存在。另外,经报导,相较于一般小鼠,在肥胖模型小鼠及2型糖尿病模型小鼠中,艾克曼嗜黏蛋白菌亦较少。可参见例如:Proc Natl Acad Sci USA.2013May 28;110(22):9066-71.,该文献的全文并于此处以供参考。
经报导,艾克曼嗜黏蛋白菌的丙酸类代谢产物(metabolite propionate)能调控禁食诱导脂肪因子(fasting-induced adipose factor,简称FIAF)、G蛋白偶联受体43(GProtein Coupled Receptor 43,GPR43)、组蛋白去乙酰酶(histone deacetylases)、过氧化物酶体增殖物活化受体γ(Peroxisome proliferator-activated receptor gamma)的表现,这些因子分别是转录因子调节、细胞周期控制、脂防分解和饱腹感的重要调节因子。可参见例如:mBio.2014Aug 12;5(4):e01438-14.,该文献的全文并于此处以供参考。
戈氏副拟杆菌(Parabacteroides goldsteinii),是拟杆菌属(Parabacteroides)属的一种细菌,为革兰氏阴性的专性厌氧菌。
根据报导指出,补充此菌的能使老鼠肠道细胞间更为紧密,降低肠漏的现象,肠道发炎状态也可得到改善。并且可降低老鼠体重、减缓胰岛素阻抗,以及增加脂肪代谢,棕色脂肪的活化。由此得知,此菌可做为改善代谢症候群的研究标的。可参见例如:Gut.2019Feb;68(2):248-262,该文献的全文并于此处以供参考。
双歧杆菌属(Bifidobacterium)为革兰氏阳性的厌氧菌,双歧杆菌是一种重要的肠道有益微生物。双歧杆菌作为一种生理性有益菌,对人体健康具有生物屏障、营养作用、抗肿瘤作用、免疫增强作用、改善胃肠道功能、抗衰老等多种重要的生理功能。
肠胃道菌相变化实验进行方法
在上述受试者于第0周(服用上述组合物胶囊前)及第4周(服用上述组合物胶囊后)进行受试者肠道菌相检测。
检测方式可以是采集受试者粪便检体后,对粪便进行DNA萃取,并进行16S核糖体基因(16S ribosomal gene)的定量即时聚合酶链反应(quantitative real-timepolymerase chain reaction,qRT-PCR),透过以知菌的引子序列来检测常见肠内菌的菌数比例。检测方式也可以将粪便进行DNA萃取后,对检体进行微生物体16S扩增子定序(16SAmplicon Sequencing),其中特别是针对16SDNA其中的V3-V4区域进行放大,接着以次世代定序(Next Generation Sequencing(NGS))的方式,并进行后续的定序分析。
本实施例是以次世代定序方式进行,由图尔思生物科技股份有限公司进行微生物体16S扩增子定序(16S Amplicon Sequencing),将粪便样本行DNA萃取后,使用由Illumina(Illumina,San Diego,USA)开发的16S宏基因组测序文库制备方案进行16S rRNA基因扩增子测序。简言之,将粪便萃取的DNA采用靶向16S rRNA基因的V3/V4可变区的引子扩增:16S扩增子PCR正向引子(V3区域)TCGTCGGCAGCGTCAGATGTGTATAAGAGACAGCCTACGGGNGGCWGCAG(SEQUENCE ID NO:1);16S扩增子PCR反向引子(V4区域)GTCTCGTGGGCTCGGAGATGTGTATAAGAGACAGGACTACHVGGGTATCTAATCC(SEQUENCE ID NO:2)进行PCR扩增16S rRNA基因的可变区V3-V4(rRNA基因中的第341至805位)(参考Herlemann等人,ISME J.2011Oct;5(10):1571-9.;其中W=A/T、H=A/C/T、V=G/C/A、N=G/A/T/C)。完成扩增DNA的序列及建库,依据MiSeqReagent Kit v3(Illumina,Wilmington,DE,USA)建双端库(pair-end library),并于Illumina系统进行高通量定序。定序完成后得到的原始数据(Raw Data),会经由成对序列拼接(Raw Tags)、过滤得到Clean Tags,再进行去除嵌合体得到可用于后续分析的有效数据(Effective Tags)。接着基于有效数据进行相似度(大于97%)OTUs(OperationalTaxonomic Units)聚类和物种分类分析。根据OTUs聚类结果对代表序列做物种注释,得到对应的物种资讯和基于物种的丰度(Abundance)分布情况,分析检体内的菌种种类及各菌种比例。
其中,某特定菌种比例在服用前(第0周)及服用后(第4周)的菌种比例变化,是透过以下公式计算:某菌数占检体内所有菌数的比例(第4周)/某菌数占检体内所有菌数的比例(第0周)。若数值大于1,则表示某菌在某生物体中的菌种比例上升,又可称为某菌在某生物体中的相对丰度提升。
参照图2,将服用前(第0周)的艾克曼嗜黏蛋白菌(Akkermansia muciniphila)菌种比例作为1,持续4周服用上述含本发明的组合物的胶囊后,艾克曼嗜黏蛋白菌菌种比例为2.13(第4周),相当于菌种比例提升2.13倍。
参照图3,将服用前(第0周)的戈氏副拟杆菌(Parabacteroides goldsteinii)菌种比例作为1,持续4周服用上述含本发明的组合物的胶囊后,戈氏副拟杆菌菌种比例为5.72(第4周),相当于菌种比例提升5.72倍。
参照图4,将服用前(第0周)的双歧杆菌属(Bifidobacterium)菌种比例作为1,持续4周服用上述含本发明的组合物的胶囊后,双歧杆菌属菌种比例为16.87(第4周),相当于菌种比例提升16.87倍。
透过受试者粪便检体的定序检测,分析本发明组合物对于调节人体菌相的能力,特别是对于轻度肥胖或体脂肪过高受试者的肠胃道菌相的能力,由以上结果可知,于服用含有200mg固态凉薯发酵物、100mg菊糖及100mg木寡糖的本发明组合物后,受试者肠胃道内的艾克曼嗜黏蛋白菌、戈氏副拟杆菌、双歧杆菌属比例明显增加。
(4-2)人体体态变化检测
再次说明,此处进行体组成变化检测的受试者与前述(3-1)肠胃道菌相变化的受试者为同批。
受试者于第0周(服用上述组合物胶囊前)及第4周(服用上述组合物胶囊后)进行体重、全身体脂率、躯干体脂率、腰围的检测,各项数值的量测方式如下所述。
体重、全身体脂率和躯干体脂率是利用体重体脂计(TANITA四肢与躯干体组成计,型号BC-545F)进行检测,而腰围是以皮尺进行量测,详细来说,除去受试者腰部覆盖衣物,受试者保持轻松站立,双手自然下垂,检测者将皮尺绕过受试者腰部,调整高度,以肚脐为水平量测点,同时注意皮尺与地面保持平,并紧贴、不挤压皮肤,受试者维持正常呼吸。在吐气结束时,量取腰围数值。
需要特别说明的是,第0周的量测结果与第4周的量测结果之间的统计学显著差异是藉由Excel软体中的student t-test来统计分析。
请参阅图5。于试验前(即图5中第0周),所有受试者的平均体重为74.0公斤,而在试验后(即图5中第4周),所有受试者的平均体重为73.6公斤。换言之,经过4周每日服用一颗含有200mg固态凉薯发酵物、100mg菊糖及100mg木寡糖的本发明组合物后,受试者的平均体重下降0.6公斤。基此,本发明组合物能降低体重,特别是降低轻度肥胖或体脂肪过高受试者的体重。
请参阅图6。于试验前(即图6中第0周),所有受试者的平均全身体脂率为28.2%,而在试验后(即图6中第4周),所有受试者的平均全身体脂率为27.5%。换言之,经过4周每日服用一颗含有200mg固态凉薯发酵物、100mg菊糖及100mg木寡糖的本发明组合物后,受试者的平均全身体脂率下降0.7%。基此,本发明组合物能降低全身体脂率,特别是降低轻度肥胖或体脂肪过高受试者的全身体脂率。
请参阅图7。于试验前(即图7中第0周),所有受试者的平均躯干体脂率为23.6%,而在试验后(即图7中第4周),所有受试者的平均躯干体脂率为22.7%。换言之,经过4周每日服用一颗含有200mg固态凉薯发酵物、100mg菊糖及100mg木寡糖的本发明组合物后,受试者的平均躯干体脂率下降0.9%。基此,本发明组合物能降低躯干体脂率,特别是降低轻度肥胖或体脂肪过高受试者的躯干体脂率。
请参阅图8。于试验前(即图8中第0周),所有受试者的平均腰围为88.4公分,而在试验后(即图8中第4周),所有受试者的平均腰围为85.5公分。换言之,经过4周每日服用一颗含有200mg凉薯发酵物、100mg菊糖及100mg木寡糖的本发明组合物后,受试者的平均腰围下降2.9公分,相当于下降1.14英寸。基此,本发明组合物能降低平均腰围,特别是降低轻度肥胖或体脂肪过高受试者的平均腰围。
因此,本发明含有凉薯发酵物、菊糖及木寡糖的组合物具有降低体重、降低全身体脂率、降低躯干体脂率及腰围的功效,特别是降低轻度肥胖或体脂肪过高受试者的体重、全身体脂率、躯干体脂率及腰围。
(4-3)肌肤各项数值变化检测
再次说明,此处进行肌肤各项数值变化检测的受试者与前述(3-1)肠胃道菌相变化的受试者为同批。
实验进行方式:在上述受试者于第0周(服用上述的组合物的胶囊前)及第4周(服用上述的组合物的胶囊后)后,依据不同检测项目,使用对应的仪器及测量方式,纪录脸部肌肤的数值。
于服用前、后进行检测时,受试者会先进行脸部清洁,且受试者所在的测试区域的温度与湿度为一致,以减少外界的温湿度等因素会对皮肤所造成的影响。
检测项目:将分别对肌肤进行肌肤含水量、肌肤弹性、肌肤皱纹、肌肤紫外线色斑、肌肤光泽的检测。
肌肤含水量检测方式
使用购自德国Courage+Khazaka electronic公司的肌肤含水量检测探头CM825(C+K Multi Probe Adapter System,Germany)对同一受试者在服用前(第0周)与服用后(第4周)的面部肌肤进行检测。该检测探头是基于电容的原理进行测量。当水分含量发生变化时,皮肤的电容值亦发生变化,故可通过测定皮肤电容值,分析皮肤表面的含水量。
请参阅图9,该图是受试者在服用本发明组合物(含有200mg固态凉薯发酵物、100mg菊糖及100mg木寡糖)4周后的肌肤(上脸颊处)含水量改善情况,具体而言,将服用本发明组合物前的肌肤含水量视为1(即100%),使用服用本发明组合物(测试组)后,受试者肌肤含水量为1.066(即106.6%),即平均显著提升6.6%。
由此可见,本发明的组合物能提升肌肤含水量,因此具提升肌肤保湿的效果。
肌肤弹力(elasticity)检测方式
使用购自德国Courage+Khazaka electronic公司的肌肤弹力检测探头MPA580(C+K Multi Probe Adapter System,Germany)对同一受试者在服用前(第0周)与服用后(第4周)的面部肌肤进行检测。测试原理是基于吸力和拉伸原理,在被测试的皮肤表面产生一个负压将皮肤吸进一个测试探头内,透过光学测试系统检测皮肤被吸进探头内的深度,并以内建软体分析计算皮肤弹力。
请参阅图10,该图是受试者在服用本发明组合物(含有200mg固态凉薯发酵物、100mg菊糖及100mg木寡糖)4周后的肌肤弹力状态改善情况,具体而言,将服用本案组合物前的肌肤弹力视为1(即100%),服用本案组合物后,受试者肌肤弹力为1.128(即112.8%),即平均显著增加12.8%。
由此可见,本发明的组合物具提升肌肤弹力的效果。
肌肤皱纹(wrinkle)检测方式
使用美国Canfield公司所贩售的VISIA高阶数位肤质检测仪进行检测,透过高解析度的相机镜头对同一受试者在测试前与测试后的面部肌肤进行拍摄,藉由标准白光照射、侦测皮肤阴影的变化,即可侦测纹理位置并得到数值,可代表皮肤的皱纹程度。
请参阅图11,该图是受试者在服用本发明组合物(含有200mg固态凉薯发酵物、100mg菊糖及100mg木寡糖)4周后的肌肤皱纹数量改善情况,具体而言,将服用本案组合物前的肌肤皱纹数量视为1(即100%),服用本案组合物后,受试者肌肤皱纹数量为0.775(即77.5%),即平均显著减少22.5%。
由此可见,本发明的组合物具减少皱纹数量的效果。
肌肤紫外线色斑检测方式
使用美国Canfield所贩售的VISIA高阶数位肤质检测仪对同一受试者在服用前与服用后的面部肌肤进行检测。该仪器是以UV光进行脸部肌肤拍摄。紫外线可被黑色素吸收,提高色素斑的显现度,侦测肉眼不可见的表皮层黑色素斑。测量数值越高,说明紫外线色斑越多。
请参阅图12,该图是受试者在服用本发明组合物(含有200mg固态凉薯发酵物、100mg菊糖及100mg木寡糖)4周后的肌肤紫外线色斑改善情况,具体而言,将服用本案组合物前的肌肤紫外线色斑数量视为1(即100%),服用本案组合物后,受试者肌肤紫外线色斑数量为0.963(即96.3%),即平均显著减少3.7%。
由此可见,本发明的组合物具减少肌肤紫外线色斑的效果。
肌肤光泽检测方式
使用德国Courage+Khazaka electronic公司的肌肤光泽度检测探头GlossymeterGL200(C+K Multi Probe Adapter System,Germany)对同一受试者在使用面膜前与后的面部肌肤进行检测该仪器是由照射到皮肤表面的光的直接反射和散反射来进行测试与计算。当测量数值越高,说明皮肤越具有光泽。
请参阅图13,该图是受试者在服用本发明组合物(含有200mg固态凉薯发酵物、100mg菊糖及100mg木寡糖)4周后的肌肤光泽改善情况,具体而言,将服用本案组合物前的肌肤光泽视为1(即100%),服用本案组合物后,受试者肌肤光泽为1.073(即107.3%),即平均显著增加7.3%。
由此可见,本发明的组合物具提升肌肤光泽的效果。
综合以上,本发明揭露能有利于艾克曼嗜黏蛋白菌生长的多种益生质及其组合。该些益生质可作为有效促进艾克曼嗜黏蛋白菌生长的组合物中的成分,该组合物可例如用作体外细菌培养的培养基添加物,或用作促进个体(如人体)肠道内艾克曼嗜黏蛋白菌增殖的产品。该组合物可具有粉末、颗粒、溶液、或胶囊的剂型,且可制成食品、饮品、医药品、或营养补充剂,藉由口服方式给予个体。
虽然本发明的技术内容已经以较佳实施例揭露如上,然其并非用以限定本发明,任何熟习此技艺者,在不脱离本发明的精神所作些许的更动与润饰,皆应涵盖于本发明的范畴内,因此本发明的保护范围当视后附的申请专利范围所界定者为准。
【序列表】
<110> 大江生医股份有限公司
<120> 促进艾克曼嗜黏蛋白菌生长的组合物及其用途
<130> 123
<160> 2
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 50
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 人工序列
<220>
<221> misc_feature
<222> (42)..(42)
<223> n is a, c, g, or t
<400> 1
tcgtcggcag cgtcagatgt gtataagaga cagcctacgg gnggcwgcag 50
<210> 2
<211> 55
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 人工序列
<400> 2
gtctcgtggg ctcggagatg tgtataagag acaggactac hvgggtatct aatcc 55
Claims (7)
1.一种凉薯发酵物用于制备施加在个体上使所述个体中的艾克曼嗜黏蛋白菌(Akkermansia muciniphila)生长提升的组合物的用途,其特征在于,所述组合物包含所述凉薯发酵物,以及所述凉薯发酵物为凉薯与水以1:3至1:6的重量比混合加热后,再添加0.05-0.2 wt%的啤酒酵母菌(Saccharomyces cerevisiae)并进行发酵0.5-2天,然后再添加0.02-0.1 wt%的胚芽乳杆菌(Lactobacillus plantarum)并再次进行发酵0.5-2天,最后再添加3.0-7.0 wt%的醋酸菌(Acetobacter aceti)并再次进行发酵2-4天而制得。
2.如权利要求1所述的用途,其中所述凉薯发酵物于所述个体服用后能使所述个体中的所述艾克曼嗜黏蛋白菌的生长提升超过1.7倍。
3.如权利要求1所述的用途,其中所述组合物进一步能促进所述个体的肠道内戈氏副拟杆菌(Parabacteroides goldsteinii)及双歧杆菌属(Bifidobacterium)细菌生长提升,其中所述组合物另包含木寡糖及菊糖,所述凉薯发酵物、所述木寡糖及所述菊糖的重量比范围为3~5:1~3:1~3。
4.一种将如权利要求1所述的组合物用于制备降低个体的体重、体脂肪及腰围组合物的用途,其中所述降低个体的体重、体脂肪及腰围组合物另包含木寡糖及菊糖,所述凉薯发酵物、所述木寡糖及所述菊糖的重量比范围为3~5:1~3:1~3。
5.一种将如权利要求1所述的组合物用于制备改善个体的肌肤状况组合物的用途,其中所述改善个体的肌肤状况组合物另包含木寡糖及菊糖,所述凉薯发酵物、所述木寡糖及所述菊糖的重量比范围为3~5:1~3:1~3。
6.如权利要求5所述的用途,其中所述改善个体的肌肤状况组合物具有以下所述功能的至少其中两种:提升肌肤含水量、提升肌肤弹力、减少肌肤皱纹、减少肌肤紫外线色斑以及提升肌肤光泽。
7.如权利要求4所述的用途,其中所述个体为身体质量指数(Body Mass Index, BMI)介于24及27之间或是体脂肪率大于25%的个体。
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KR101566320B1 (ko) * | 2015-08-27 | 2015-11-05 | 정용문 | 봉선화, 영실, 마카, 비파나무 잎 및 얌빈 뿌리 복합발효추출물을 포함하는 피부 재생, 진정 및 자극완화용 화장료조성물 |
KR20180063910A (ko) * | 2016-10-31 | 2018-06-14 | 상주시 | 피부 미백 기능성을 가진 얌빈 추출물 |
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