CN112684035B - 一种螺旋霉素中草酸残留量的检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种螺旋霉素中草酸残留量的检测方法，包括以下步骤：步骤(1)、取草酸适量，加醋酸溶液溶解制成对照品储备液；取对照品储备液适量，加醋酸溶液稀释，制成对照品溶液；步骤(2)、取螺旋霉素适量，用醋酸溶液溶解，制成供试品溶液；步骤(3)、取螺旋霉素适量，加入草酸，用醋酸溶液溶解，制成加标供试品溶液；步骤(4)、依次对对照品溶液、供试品溶液、加标供试品溶液在液相色谱仪中进行液相色谱测定。本发明实现了对螺旋霉素中草酸残留量的高效测定，操作简单、灵敏度好。
Description
技术领域
本发明涉及有机残留物检测领域，特别涉及一种螺旋霉素中草酸残留量的检测方法。
背景技术
高效液相色谱(HPLC)分析方法是用液体作为流动相的色谱法。由于广泛的应用性、出色的分析精确度、色谱设备色谱柱等其他材料的可选范围广等优点，HPLC是目前最有用和使用最广的应用分析技术，被广泛应用于药物的杂质测定研究。
螺旋霉素是一种大环内酯类抗生素，为白色或类白色粉末；味苦；微有引湿性。螺旋霉素分子式为C43H74N2O14，分子量为743.05。
有关研究表明，螺旋霉素性状稳定，有较强抑菌活性和药代动力学特性，且具有持久的抗生素后效应(Post-Antibiotic Effect，PAE)。其主要是通过抑制细菌蛋白质的合成而起到抑制细菌的作用，抗菌谱比较广，包括多种革兰阳性菌、革兰阴性菌，也包括一些寄生虫。它能增强吞噬细胞的吞噬作用，而其副作用明显低于红霉素，主要对一些革兰氏阳性菌(如链球菌、葡萄球菌、肺炎双球菌等)及部分革兰氏阴性菌(如脑膜炎双球菌等)有高度敏感性。此外，螺旋霉素对耐青霉素的致病菌同样具有较好的疗效，因此时至今日螺旋霉素对于一些感染性疾病的治疗仍然具有良好的临床应用和推广价值。尤其是治疗日益增多的AIDS患者出现的隐性孢子虫腹泻，螺旋霉素是较为有效的药物。
目前，在螺旋霉素的生产过程中使用草酸。如果螺旋霉素中草酸含量过高，则会导致未知副作用的产生，并严重影响螺旋霉素的治疗效果。因此，有效维护患者利益，确保药品安全、有效、质量可控，有必要在现有技术基础之上揭示出一种能检出螺旋霉素中草酸含量的检测方法。
发明内容
本发明的目的是提供一种螺旋霉素中草酸残留量的检测方法，解决上述现有技术问题中的一个或者多个。
本发明提供的一种螺旋霉素中草酸残留量的检测方法，包括以下步骤：
步骤(1)、取草酸适量，加醋酸溶液溶解制成对照品储备液；取对照品储备液适量，加醋酸溶液稀释，制成对照品溶液；
步骤(2)、取螺旋霉素适量，用醋酸溶液溶解，制成供试品溶液；
步骤(3)、取螺旋霉素适量，加入草酸，用醋酸溶液溶解，制成加标供试品溶液；
步骤(4)、依次对对照品溶液、供试品溶液、加标供试品溶液在液相色谱仪中进行液相色谱测定。
在某些实施方式中，步骤(1)具体为：
取草酸适量，加醋酸溶液溶解制成浓度为10mg/ml的草酸对照品储备液；
取草酸对照品储备液于容量瓶中，加醋酸溶液稀释，制成浓度为0.8至1.21mg/ml的草酸对照品储备液；
取上述草酸对照品储备液于容量瓶中，用醋酸溶液稀释，制成浓度为95至105μg/ml的草酸对照品溶液。
在某些实施方式中，步骤(1)中醋酸溶液的质量分数为30％。
在某些实施方式中，步骤(2)具体为：
称取螺旋霉素供试品于顶空瓶中，加入醋酸溶液，超声使其溶解，制成浓度为0.01至0.03g/ml的螺旋霉素供试品溶液。
在某些实施方式中，步骤(2)中醋酸的质量分数为30％。
在某些实施方式中，步骤(3)具体为：
称取螺旋霉素供试品于顶空瓶中，加入醋酸溶液后，继续加入草酸对照品储备液，超声使其溶解，制成浓度为0.01至0.03g/ml的螺旋霉素加标供试品溶液，平行配制6份。
在某些实施方式中，步骤(3)中醋酸的质量分数为30％。
在某些实施方式中，步骤(4)中加标供试品中草酸浓度为0.1mg/mL。
在某些实施方式中，步骤(4)中液相色谱仪的色谱柱型号为Phenomenex RezexTMROA-Organic Acid H+(8％)(300*7.8mm)；所述的色谱条件为：柱温为25℃，检测器选自紫外-可见分光检测器，检测波长为210nm，进样体积为10μl，流速为0.5ml/min，流动相为0.005mol/L H2SO4溶液。
在某些实施方式中，步骤(5)还包括对加标供试品溶液进行重复性以及中间精密度测定。
在某些实施方式中，步骤(4)中重复性以及中间精密度测定具体为：取步骤(3)中加标供试品溶液，按照色谱条件进6份样品，记录草酸的峰面积，计算RSD。
在某些实施方式中，还包括对对照品溶液以及供试品溶液进行稳定性考察。
有益效果：本发明实现了对螺旋霉素中草酸残留量的高效测定，操作简单、灵敏度好。
附图说明
图1为对照品溶液的液相色谱图；
图2为供试品溶液的液相色谱图。
具体实施方式
下面结合附图所示的各实施方式对本发明进行详细说明，但应当说明的是，这些实施方式并非对本发明的限制，本领域普通技术人员根据这些实施方式所作的功能、方法、或者结构上的等效变换或替代，均属于本发明的保护范围之内。
除非说明书中有特殊说明，本发明中的各个实施例中的组分、原料均采用分析纯级别。另外，各实施例中的“g”、“mg”分别为重量单位“克”、“毫克”；“ml”为体积单位“毫升”。
实验仪器与试剂
实验仪器：采用Thermo U3000高效液相色谱仪，使用色谱柱型号为PhenomenexRezexTM ROA-Organic Acid H+(8％)(300*7.8mm)；
试剂：草酸、螺旋霉素、硫酸、乙酸；
色谱条件：柱温：25℃,检测器：紫外-可见分光检测器,检测波长：210nm,进样体积：10μl,流速：0.5ml/min,流动相：0.005mol/l H2SO4溶液。
检测步骤：
步骤(1)、取草酸适量，加30％醋酸溶液溶解制成浓度为10mg/ml的草酸对照品储备液①；取对照品储备液①5ml于50ml容量瓶中，加30％醋酸溶液稀释，制成浓度约为1mg/ml的草酸对照品储备液②；取上述对照品储备溶液①1ml于100ml容量瓶中，用30％醋酸溶液定量稀释至刻度即得，制成浓度约为100μg/ml的草酸对照品溶液；
步骤(2)、称取螺旋霉素供试品约0.2g于顶空瓶中，加入10ml 30％醋酸溶液，超声使溶解即得，制成浓度约为0.02g/ml的螺旋霉素供试品溶液；
步骤(3)、称取螺旋霉素供试品约0.2g于顶空瓶中，加入9ml 30％醋酸溶液，并加入上述对照品储备溶液②1ml，超声使溶解即得，制成浓度约为0.02g/ml的螺旋霉素加标供试品溶液，平行配制6份；
步骤(4)、进样精密度测定：取对照品溶液，按照上述色谱条件连续进样6次，记录草酸峰面积，计算RSD，计算结果见表1(进样精密度测定结果)。
表1
在图1中草酸的出峰时间为9.092min，在图2中对应时间未出峰，样品中未检出草酸残留，通过比较供试品以及对照品中草酸出峰大小来判断样品中草酸是否超标，实现对螺旋霉素中所含草酸高效、快速的定性分析。
重复性测定：取加标供试品溶液，按照上述色谱条件连续进6份样品，记录草酸峰面积，计算RSD，计算结果见表2(重复性测定结果)。
表2
中间精密度测定：另一名化验员，取加标供试品溶液，按照上述色谱条件连续进6份样品，记录草酸峰面积，计算RSD，计算结果见表3(中间精密度测定结果)。
表3
溶液稳定性测定：分别取供试品溶液以及对照品溶液，室温放置0、24h、48h后进样，考察供试品溶液以及对照品溶液的稳定性，测定结果见表4(溶液稳定性测定结果)。
表4
综上所述：本发明实现了对螺旋霉素中草酸残留量的高效测定，操作简单、灵敏度好。
以上表述仅为本发明的优选方式，应当指出，对本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明创造构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些也应视为发明的保护范围之内。
Claims (2)
1.一种螺旋霉素中草酸残留量的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤（1）、取草酸适量，加30%醋酸溶液溶解制成浓度为10mg/ml的草酸对照品储备液①；取对照品储备液①适量，加30%醋酸溶液稀释，制成浓度为1mg/ml的草酸对照品储备液②；取对照品储备溶液①，用30%醋酸溶液定量稀释，制成浓度为100μg/ml的草酸对照品溶液；
步骤（2）、取螺旋霉素适量，用30%醋酸溶液溶解，制成浓度为0.02g/ml的螺旋霉素供试品溶液；
步骤（3）、取螺旋霉素适量，加入上述对照品储备溶液②，用30%醋酸溶液溶解，制成浓度为0.02g/ml的螺旋霉素加标供试品溶液，平行配制6份；
步骤（4）、依次对对照品溶液、供试品溶液、加标供试品溶液在液相色谱仪中进行液相色谱测定；
所述加标供试品中草酸浓度为0.1mg/mL；
对加标供试品溶液进行重复性以及中间精密度测定，对对照品溶液以及供试品溶液进行稳定性测定。
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述步骤（4）中液相色谱仪的色谱柱型号为Phenomenex RezexTM ROA-Organic Acid H+（8%），型号为300*7.8mm；柱温为25℃，检测器为紫外-可见分光检测器，检测波长为210nm，进样体积为10μl，流速为0.5ml/min，流动相为0.005mol/L H2SO4溶液。
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