CN112661815B - 一种Tirzepatide的纯化方法 - Google Patents
一种Tirzepatide的纯化方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN112661815B CN112661815B CN202011612943.1A CN202011612943A CN112661815B CN 112661815 B CN112661815 B CN 112661815B CN 202011612943 A CN202011612943 A CN 202011612943A CN 112661815 B CN112661815 B CN 112661815B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- solution
- tirzepatide
- purification
- crude peptide
- percent
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
本发明是一种Tirzepatide的纯化方法，属于药物化学技术领域。该纯化方法将Tirzepatide粗肽溶于纯化水中，用氨水调pH8.0至完全溶解，获得粗肽溶液后，通过二步纯化获得Tirzepatide。该纯化方法制备获得的Tirzepatide纯度高，收率高，且操作简单，有利于实现Tirzepatide的规模化制备。本发明方法的收率为70%左右，获得的Tirzepatide纯度99.0%以上，单杂0.15%以下。
Description
技术领域
本发明属于药物化学技术领域，特别涉及一种Tirzepatide的纯化方法。
背景技术
糖尿病是给世界人民带来沉重经济负担的疾病之一。目前糖尿病患者数量增长速度很快，根据世界卫生组织数据，2000年全球糖尿病患者为1.71亿人，而2030年这个数字将变成3.66亿。中国是世界第一糖尿病大国，当前我国糖尿病人群约有9240万，处于糖尿病前期的人群有1.48亿。GLP-1作为肠促胰岛素，既可单方开发，也可与胰岛素做成复方，实现更平稳地降糖，因此复方GLP-1类似物胰岛素制剂将会是短效GLP-1类似物产品的主要卖点之一。不仅如此，GLP-1类似物还具有很好的减肥作用，诺和诺德的减肥针已经获批，在人们强烈的减肥欲望与疗效不佳的现有减肥药形成大矛盾的今天，开发GLP-1类的减肥药也是一个不二的选择。
Tirzepatide是一种大分子多肽类药物，具有胃抑制多肽（GIP）受体和胰高血糖素样肽-1（GLP-1）双重受体激动剂的功效。GIP和GLP-1均为肠道分泌的激素，能够促进胰岛素分泌。在2019年第79届美国糖尿病协会（ADA）大会上公布的一系列数据表明：在2型糖尿病患者中，Tirzepatide改善了β细胞功能和胰岛素敏感性标志物、显著降低血糖水平、显著降低体重、改善胃肠道副作用，同时还改善了非酒精性脂肪性肝炎（NASH）标志物。
Tirzepatide具有以下的结构：
Tyr1-Aib-Glu-Gly-Thr5-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr10-Ser-Ile-Aib-Leu-Asp15-Lys-Ile-Ala-Gln-Lys20(AEEA-AEEA-γGlu-Eicosanedioic acid)-Ala-Phe-Val-Gln-Trp25-Leu-Ile-Ala-Gly-Gly30-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala35-Pro-Pro-Pro-Ser-NH2
由于Tirzepatide的肽链较长、侧链含有较长的修饰、肽序中含有如Ser等合成过程中易异构化的氨基酸而导致粗肽中具有异构体杂质，所以在合成中产生的杂质较多，需要对Tirzepatide粗肽进行进一步的纯化。然而，现有技术中Tirzepatide纯化方法的收率较低，导致Tirzepatide的纯化成为Tirzepatide制备工艺中的难点、Tirzepatide产业化的瓶颈之一。所以，需要探索一种Tirzepatide的纯化方法，以提高Tirzepatide的收率。
发明内容
有鉴于此，本发明的发明目的在于提供一种Tirzepatide的纯化方法。本发明提供的Tirzepatide的纯化方法操作简单，提高了Tirzepatide的收率，更有利于Tirzepatide的工业化大生产。
为了实现本发明的发明目的，本发明采用如下的技术方案：
本发明提供了一种Tirzepatide的纯化方法，其包括：
步骤1：取Tirzepatide粗肽溶于纯化水中，用用氨水调pH8.0至完全溶解，，溶液用0.45μm混合微孔滤膜过滤，获得粗肽溶液。
步骤2：取所述粗肽溶液，经八烷基硅烷键合硅胶色谱柱进行第一次纯化，以A1溶液与B溶液的混合溶液进行梯度洗脱，收集洗脱组分，得第一次纯化物；
步骤3：取所述第一次纯化物，经八烷基硅烷键合硅胶色谱柱进行第二次纯化，以A2溶液与B溶液的混合溶液进行梯度洗脱，收集洗脱组分,得第二次纯化物；
步骤4：取所述第二次纯化物经减压旋蒸浓缩、冷冻干燥，得到Tirzepatide成品。
所述A1溶液为0.1%-0.2%氨水水溶液，高氯酸调pH=2..0-3.0；
所述A2溶液为10mmol/L-15mmol/L氯化钠水溶液，氢氧化钠调pH=7.5-8.5；
所述B溶液为100%乙腈；
作为优选，步骤2中所述A1溶液与所述B溶液的体积分数比为72％:28％→53％:47％，梯度洗脱时间为50min-60min；
作为优选，步骤3中所述A2溶液与所述B溶液的体积分数比为67％:33％→47％:53％，梯度洗脱时间为50min-60min；
作为优选，步骤2和步骤3中所述第一次纯化和第二次纯化的流速为50ml/min。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
本发明提供一种纯化Tirzepatide的方法，该方法将Tirzepatide粗肽溶于纯化水中，用氨水调pH8.0至完全溶解，获得粗肽溶液后，通过二步纯化获得Tirzepatide。收率为70%左右，纯度99.0%以上，单杂0.15%以下。
具体实施方式
本发明公开了一种Tirzepatide的纯化方法。本领域技术人员可以参考本文内容，实施该方法，特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明内。本发明的纯化方法已经通过较佳的实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文的方法和应用进行改动或适当 变更与组合，来实现和应用本发明技术。
本发明提供的一种Tirzepatide的纯化方法中所用到的试剂和原料均可由市场购得。
为了使本技术领域的技术人员能够更好地理解本发明的技术方案，下面结合实施例，进一步阐述本发明：
实施例1：Tirzepatide粗肽纯化
固相合成Tirzepatide，粗肽纯度为72%。
样品处理：将12.2g固体粗肽溶于纯水中，用20%氨水水溶液调pH=8.0左右，搅拌使样品完全溶解后用0.45u滤膜过滤，收集滤液备用。
第一步纯化:
纯化条件：色谱柱：以八烷基硅烷键合硅胶为固定相的色谱柱，柱子直径和长度为：50mm×250mm。流动相：A1相：0.1%氨水水溶液，高氯酸调pH=2.0；B相：100%乙腈，流速：50mL/min，检测波长：220nm。梯度：B％：28％→47％，50min。
纯化过程：将色谱柱用50％的乙腈溶液冲洗干净后上样，上样量为2.5g。上样完毕后，进行洗脱，线性梯度洗脱50min。收集目的峰，得到纯度大于92%以上馏分，将收集的目的峰馏分加入等体积的纯化水稀释一倍后作为第二步纯化样品。
第二步纯化：
纯化条件：色谱柱：以八烷基硅烷键合硅胶为固定相的色谱柱，柱子直径和长度为：50mm×250mm。流动相：A1相：为10mmol/L氯化钠水溶液，氢氧化钠调pH=7.5；B相：100%乙腈，流速：50mL/min，检测波长：220nm。梯度：B％：33％→53％，50min。
纯化过程：将色谱柱用50％的乙腈溶液冲洗干净后上样，上样量为2.0g。上样完毕后，进行洗脱，线性梯度洗脱50min。收集目的峰，得到纯度大于99%，单杂小于0.15%的馏分，将收集的目的峰馏分于水温不超过34℃的条件下减压旋蒸浓缩 至约20mg/mL后进行冷冻干燥，即可得到纯度为99.1%的Tirzepatide4.2g，纯化收率为68.4%。
实施例2：Tirzepatide粗肽纯化
固相合成Tirzepatide，粗肽纯度为68%。
样品处理：将10.5g固体粗肽溶于纯水中，用20%氨水水溶液调pH=8.0左右，搅拌使样品完全溶解后用0.45u滤膜过滤，收集滤液备用。
第一步纯化:
纯化条件：色谱柱：以八烷基硅烷键合硅胶为固定相的色谱柱，柱子直径和长度为：50mm×250mm。流动相：A1相：0.15%氨水水溶液，高氯酸调pH=2.5；B相：100%乙腈，流速：50mL/min，检测波长：220nm。梯度：B％：28％→47％，55min。
纯化过程：将色谱柱用50％的乙腈溶液冲洗干净后上样，上样量为2.5g。上样完毕后，进行洗脱，线性梯度洗脱55min。收集目的峰，得到纯度大于92%以上馏分，将收集的目的峰馏分加入等体积的纯化水稀释一倍后作为第二步纯化样品。
第二步纯化：
纯化条件：色谱柱：以八烷基硅烷键合硅胶为固定相的色谱柱，柱子直径和长度为：50mm×250mm。流动相：A1相：为15mmol/L氯化钠水溶液，氢氧化钠调pH=8.0；B相：100%乙腈，流速：50mL/min，检测波长：220nm。梯度：B％：33％→53％，55min。
纯化过程：将色谱柱用50％的乙腈溶液冲洗干净后上样，上样量为2.0g。上样完毕后，进行洗脱，线性梯度洗脱55min。收集目的峰，得到纯度大于99%，单杂小于0.15%的馏分，将收集的目的峰馏分于水温不超过34℃的条件下减压旋蒸浓缩至约20mg/mL后进行冷冻干燥，即可得到纯度为99.2%的Tirzepatide3.8g，纯化收率为72.6%。
实施例3：Tirzepatide粗肽纯化
固相合成Tirzepatide，粗肽纯度为65%。
样品处理：将16.7g固体粗肽溶于纯水中，用20%氨水水溶液调pH=8.0左右，搅拌使样品完全溶解后用0.45u滤膜过滤，收集滤液备用。
第一步纯化:
纯化条件：色谱柱：以八烷基硅烷键合硅胶为固定相的色谱柱，柱子直径和长度为：50mm×250mm。流动相：A1相：0.2%氨水水溶液，高氯酸调pH=3.0；B相：100%乙腈，流速：50mL/min，检测波长：220nm。梯度：B％：28％→47％，60min。
纯化过程：将色谱柱用50％的乙腈溶液冲洗干净后上样，上样量为2.5g。上样完毕后，进行洗脱，线性梯度洗脱60min。收集目的峰，得到纯度大于92%以上馏分，将收集的目的峰馏分加入等体积的纯化水稀释一倍后作为第二步纯化样品。
第二步纯化：
纯化条件：色谱柱：以八烷基硅烷键合硅胶为固定相的色谱柱，柱子直径和长度为：50mm×250mm。流动相：A1相：为20mmol/L氯化钠水溶液，氢氧化钠调pH=8.5；B相：100%乙腈，流速：50mL/min，检测波长：220nm。梯度：B％：33％→53％，60min。
纯化过程：将色谱柱用50％的乙腈溶液冲洗干净后上样，上样量为2.0g。上样完毕后，进行洗脱，线性梯度洗脱60min。收集目的峰，得到纯度大于99%，单杂小于0.15%的馏分，将收集的目的峰馏分于水温不超过34℃的条件下减压旋蒸浓缩至约20mg/mL后进行冷冻干燥，即可得到纯度为99.3%的Tirzepatide5.4g，纯化收率为66.7%。
以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出的是，上述优选实施方式不应视为对本发明的限制，本发明的保护范围应当以权利要求所限定的范围为准。对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明的精神和范围内，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (1)
1.一种Tirzepatide的纯化方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤1：取Tirzepatide粗肽溶于纯化水中，用用氨水调pH8.0至完全溶解，溶液用0.45μm混合微孔滤膜过滤，获得粗肽溶液；
步骤2：取所述粗肽溶液，经八烷基硅烷键合硅胶色谱柱进行第一次纯化，以A1溶液与B溶液的混合溶液进行梯度洗脱，收集洗脱组分，得第一次纯化物；
步骤3：取所述第一次纯化物，经八烷基硅烷键合硅胶色谱柱进行第二次纯化，以A2溶液与B溶液的混合溶液进行梯度洗脱，收集洗脱组分,得第二次纯化物；
步骤4：取所述第二次纯化物经减压旋蒸浓缩、冷冻干燥，得到Tirzepatide成品，所述A1溶液为0.1%-0.2%氨水水溶液，高氯酸调pH=2.0-3.0；
所述A2溶液为10mmol/L-15mmol/L氯化钠水溶液，氢氧化钠调pH=7.5-8.5；
所述B溶液为100%乙腈；
步骤2中所述A1溶液与所述B溶液的体积分数比为72％:28％→53％:47％，梯度洗脱时间为50min-60min；
步骤3中所述A2溶液与所述B溶液的体积分数比为67％:33％→47％:53％，梯度洗脱时间为50min-60min；
步骤2和步骤3中所述第一次纯化和第二次纯化的流速为50mＬ/min。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202011612943.1A CN112661815B (zh) | 2020-12-30 | 2020-12-30 | 一种Tirzepatide的纯化方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202011612943.1A CN112661815B (zh) | 2020-12-30 | 2020-12-30 | 一种Tirzepatide的纯化方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN112661815A CN112661815A (zh) | 2021-04-16 |
| CN112661815B true CN112661815B (zh) | 2022-12-27 |
Family
ID=75411211
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202011612943.1A Active CN112661815B (zh) | 2020-12-30 | 2020-12-30 | 一种Tirzepatide的纯化方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN112661815B (zh) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN116710462A (zh) | 2021-01-20 | 2023-09-05 | 维京治疗公司 | 用于治疗代谢病症和肝病的组合物和方法 |
| WO2023089594A1 (en) | 2021-11-22 | 2023-05-25 | Sun Pharmaceutical Industries Limited | Process for the preparation of tirzepatide or pharmaceutically acceptable salt thereof |
| CN116693629B (zh) * | 2023-08-07 | 2023-10-31 | 杭州湃肽生化科技有限公司 | 替尔泊肽的纯化方法 |
| CN117736273B (zh) * | 2023-12-08 | 2024-05-07 | 广东省卓肽医药有限公司 | 一种替尔泊肽的纯化方法 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105777872A (zh) * | 2014-12-16 | 2016-07-20 | 深圳翰宇药业股份有限公司 | 一种萨摩鲁肽的纯化方法 |
| CN110903355A (zh) * | 2019-10-31 | 2020-03-24 | 成都圣诺生物制药有限公司 | 一种Tirzepatide的制备方法 |
-
2020
- 2020-12-30 CN CN202011612943.1A patent/CN112661815B/zh active Active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105777872A (zh) * | 2014-12-16 | 2016-07-20 | 深圳翰宇药业股份有限公司 | 一种萨摩鲁肽的纯化方法 |
| CN110903355A (zh) * | 2019-10-31 | 2020-03-24 | 成都圣诺生物制药有限公司 | 一种Tirzepatide的制备方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN112661815A (zh) | 2021-04-16 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN112661815B (zh) | 一种Tirzepatide的纯化方法 | |
| CN108640985B (zh) | 一种纯化索玛鲁肽的方法 | |
| CN108794618B (zh) | 一种纯化利拉鲁肽的方法 | |
| EP2813514B1 (en) | Method for purifying solid-phase synthetic crude liraglutide | |
| CN105777872B (zh) | 一种萨摩鲁肽的纯化方法 | |
| CN108689905B (zh) | 一种维格列汀杂质化合物及其制备方法、检测方法和用途 | |
| CN105017381A (zh) | 一种纯化利拉鲁肽的方法 | |
| CN103613655A (zh) | 一种低成本纯化艾塞那肽的方法 | |
| CN110785427B (zh) | 一种长链多肽的纯化方法 | |
| CN102219849B (zh) | 一种大规模分离纯化艾塞那肽的方法 | |
| CN109354622A (zh) | 一种索玛鲁肽纯化专用填料及其纯化方法 | |
| CN112724241A (zh) | 一种阿巴帕肽的纯化方法 | |
| CN103275209A (zh) | 制备利拉鲁肽的方法 | |
| CN114369142A (zh) | 一种纯化醋酸去氨加压素的方法 | |
| CN112175068B (zh) | 一种司美格鲁肽的纯化方法 | |
| CN111410687B (zh) | 一种长效glp-1化合物 | |
| CN110734472B (zh) | 一种具有二肽基肽酶-4抑制活性的寡肽及其应用 | |
| CN111363024A (zh) | 多肽的纯化方法 | |
| CN103965291A (zh) | 奥曲肽、奥曲肽醋酸盐的制备方法 | |
| WO2020114002A1 (zh) | 一种glp-1类似多肽的纯化方法 | |
| CN116444645A (zh) | 一种替西帕肽制备方法 | |
| CN113624898B (zh) | 一种手性镇痛类多肽药物的纯化方法 | |
| EP3502121A1 (en) | Polymyxin b sulphate crystal and preparation method therefor | |
| CN111848777A (zh) | 纯化索玛鲁肽的方法 | |
| CN109580833B (zh) | 一种西格列汀原料及制剂中对映异构体杂质的测定方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |