CN112661592A - 一种高纯度番茄红素异构体的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种高纯度番茄红素异构体的制备方法，该制备方法以番茄红素顺反异构体混合物为原料，通过低温反相C18柱和C30柱的联合使用，可以实现七种番茄红素异构体的分离纯化。该方法简单易行，上样量大，所得七种番茄红素异构体的纯度均为97‑99%，可为番茄红素的异构化以及降解机理的研究提供基础。
Description
技术领域
本发明涉及一种高纯度番茄红素异构体的制备方法。
背景技术
番茄红素，属于异戊二烯类化合物，是一种在天然番茄中含量较高的类胡萝卜素，是自然界种最强的抗氧化剂之一。它可以有效的防治因衰老及免疫力下降引起的各种疾病，因而长期以来受到了广泛关注。番茄红素的稳定性较差，除易氧化降解外，番茄红素对光照和温度都较为敏感。在自然番茄中，番茄红素几乎全以全反式的形式存在，但在提取及储藏过程中会出现降解和往顺式转化。由于番茄红素的双键较多，其顺式异构体的数目众多。由于结构高度相似，顺式番茄红素和反式番茄红素的分离较为困难，导致其纯度不高，是公认的技术难题之一。获得高纯度的顺式和反式番茄红素异构体单体，对研究其降解和转化非常重要，进而对番茄红素的产业化具有重要意义。
发明内容
本发明目的在于，提供一种高纯度番茄红素异构体的制备方法，该方法以番茄红素顺反异构体混合物为原料，通过低温反相C18柱和C30柱的联合使用，实现七种番茄红素异构体的分离纯化。该方法简单易行，上样量大，所得七种番茄红素异构体的纯度均为97-99％，可为番茄红素的异构化以及降解机理的研究提供基础。
本发明所述的一种高纯度番茄红素异构体的制备方法，其特征在于按下列步骤进行：
a、称取20mg番茄红素顺反异构体混合物原料，溶于乙酸乙酯含量范围为30％-70％的乙酸乙酯-乙腈混合溶液5mL中，使用有机滤头过滤，待用；
b、取一根反相C18制备色谱柱，规格为长度250mm，内径4.6mm，装填用填料粒径5μm，连接于高效液相色谱仪上，以乙酸乙酯含量为45％-55％的乙酸乙酯-乙腈混合液为流动相，柱温范围-20℃--40℃，流速控制在1.0mL/min，检测波长分别为472nm，平衡色谱柱15min，进样步骤a中的番茄红素样品，分别收集番茄红素顺式和反式异构体的峰，在温度-20℃冷阱下用氮气气流分别吹干，再分别溶于甲醇含量为35％的甲基叔丁基醚-甲醇混合物中，待用；
c、取一根C30制备色谱柱，规格为长度250mm，内径4.6mm，装填用填料粒径5μm，连接于高效液相色谱仪上，以甲醇含量为35％的甲基叔丁基醚-甲醇混合物为流动相，柱温控制在30℃，流速控制在1.0mL/min，检测波长分别为472nm，平衡色谱柱15min，取步骤b中所得样品，进样至平衡好的色谱柱中，分别收集各番茄红素的色谱峰，在温度-20℃冷阱下用氮气气流分别吹干，即得到番茄红素异构体，通过高效液相色谱法测定其纯度97-99％。
其中步骤a中乙酸乙酯-乙腈混合溶液中乙酸乙酯的含量为30％-70％。
步骤b中所述的乙酸乙酯-乙腈混合溶液中乙酸乙酯含量为45％-55％。
本发明所述的一种高纯度番茄红素异构体的制备方法，该制备方法以番茄红素顺反异构体混合物为原料，通过低温反相C18柱和C30柱的联合使用，可以实现七种番茄红素异构体的分离纯化。方法简单易行，上样量大，所得七种番茄红素异构体的纯度均97-99％，为茄红素的异构化以及降解机理的研究提供基础。
附图说明
图1为本发明低温反相C18色谱柱分离番茄红素样品图；
图2为本发明C30色谱柱分离番茄红素样品图，其中2a为15min-21min时间段所收集的组分，图2b为21min-30min时间段所收集的组分。
具体实施方式
下面结合具体实施例，进一步详细阐述本发明。
实施例1
a、称取20mg番茄红素顺反异构体混合物原料，溶于乙酸乙酯含量为30％的乙酸乙酯-乙腈混合溶液5mL中，使用有机滤头过滤，待用；
b、取一根反相C18制备色谱柱，规格为长度250mm，内径4.6mm，装填用填料粒径5μm，连接于高效液相色谱仪上，以乙酸乙酯含量为45％的乙酸乙酯-乙腈混合液为流动相，柱温范围-20℃，流速控制在1.0mL/min，检测波长分别为472nm，平衡色谱柱15min，进样步骤a中的番茄红素样品，分别收集番茄红素顺式和反式异构体的峰，在温度-20℃冷阱下用氮气气流分别吹干，再分别溶于甲醇含量为35％的甲基叔丁基醚-甲醇混合物中，待用；
c、取一根C30制备色谱柱，规格为长度250mm，内径4.6mm，装填用填料粒径5μm，连接于高效液相色谱仪上，以甲醇含量为35％的甲基叔丁基醚-甲醇混合物为流动相，柱温控制在30℃，流速控制在1.0mL/min，检测波长分别为472nm，平衡色谱柱15min，取步骤b中所得样品，进样至平衡好的色谱柱中，分别收集各番茄红素的色谱峰，在温度-20℃冷阱下用氮气气流分别吹干，得到七种番茄红素异构体见图2，再通过高效液相色谱法测定其纯度97-99％。
实施例2
a、称取20mg番茄红素顺反异构体混合物原料，溶于乙酸乙酯含量为70％的乙酸乙酯-乙腈混合溶液5mL中，使用有机滤头过滤，待用；
b、取一根反相C18制备色谱柱，规格为长度250mm，内径4.6mm，装填用填料粒径5μm，连接于高效液相色谱仪上，以乙酸乙酯含量为55％的乙酸乙酯-乙腈混合液为流动相，柱温范围-40℃，流速控制在1.0mL/min，检测波长分别为472nm，平衡色谱柱15min，进样步骤a中的番茄红素样品，分别收集番茄红素顺式和反式异构体的峰，在温度-20℃冷阱下用氮气气流分别吹干，再分别溶于甲醇含量为35％的甲基叔丁基醚-甲醇混合物中，待用；
c、取一根C30制备色谱柱，规格为长度250mm，内径4.6mm，装填用填料粒径5μm，连接于高效液相色谱仪上，以甲醇含量为35％的甲基叔丁基醚-甲醇混合物为流动相，柱温控制在30℃，流速控制在1.0mL/min，检测波长分别为472nm，平衡色谱柱15min，取步骤b中所得样品，进样至平衡好的色谱柱中，分别收集各番茄红素的色谱峰，在温度-20℃冷阱下用氮气气流分别吹干，得到七种番茄红素异构体见图2，通过高效液相色谱法测定其纯度97-99％。
实施例3
a、称取20mg番茄红素顺反异构体混合物原料，溶于乙酸乙酯含量为50％的乙酸乙酯-乙腈混合溶液5mL中，使用有机滤头过滤，待用；
b、取一根反相C18制备色谱柱，规格为长度250mm，内径4.6mm，装填用填料粒径5μm，连接于高效液相色谱仪上，以乙酸乙酯含量为50％的乙酸乙酯-乙腈混合液为流动相，柱温范围-30℃，流速控制在1.0mL/min，检测波长分别为472nm，平衡色谱柱15min，进样步骤a中的番茄红素样品，如图1所示，分别收集15min-21min及21min-30min番茄红素顺式和反式异构体的峰，在温度-20℃冷阱下用氮气气流分别吹干，再分别溶于甲醇含量为35％的甲基叔丁基醚-甲醇混合物中，待用；
c、取一根C30制备色谱柱，规格为长度250mm，内径4.6mm，装填用填料粒径5μm，连接于高效液相色谱仪上，以甲醇含量为35％的甲基叔丁基醚-甲醇混合物为流动相，柱温控制在30℃，流速控制在1.0mL/min，检测波长分别为472nm，平衡色谱柱15min，取步骤b中所得样品，进样至平衡好的色谱柱中，所得色谱图为图2，其中图2a为步骤b中15min-21min时间段所收集的组分，图2b为步骤b中21min-30min时间段所收集的组分，其分离度均较好，得到番茄红素异构体单体，再分别收集各番茄红素的色谱峰，在温度-20℃冷阱下用氮气气流分别吹干，得到七种番茄红素异构体，再通过高效液相色谱法测定其纯度97-99％。
Claims (1)
1.一种高纯度番茄红素异构体的制备方法，其特征在于按下列步骤进行：
a、称取20 mg番茄红素顺反异构体混合物原料，溶于乙酸乙酯含量范围为30%-70%的乙酸乙酯-乙腈混合溶液5 mL中，使用有机滤头过滤，待用；
b、取一根反相C18制备色谱柱，规格为长度250 mm，内径4.6 mm，装填用填料粒径5μm，连接于高效液相色谱仪上，以乙酸乙酯含量为45%-55%的乙酸乙酯-乙腈混合液为流动相，柱温范围-20℃- -40℃，流速控制在1.0 mL/min，检测波长分别为472 nm，平衡色谱柱15min，进样步骤a中的番茄红素样品，分别收集番茄红素顺式和反式异构体的峰，在温度-20℃冷阱下用氮气气流分别吹干，再分别溶于甲醇含量为35%的甲基叔丁基醚-甲醇混合物中，待用；
c、取一根C30制备色谱柱，规格为长度250 mm，内径4.6 mm，装填用填料粒径5μm，连接于高效液相色谱仪上，以甲醇含量为35%的甲基叔丁基醚-甲醇混合物为流动相，柱温控制在30℃，流速控制在1.0 mL/min，检测波长分别为472 nm，平衡色谱柱15 min，取步骤b中所得样品，进样至平衡好的色谱柱中，分别收集各番茄红素的色谱峰，在温度-20℃冷阱下用氮气气流分别吹干，即得到番茄红素异构体，通过高效液相色谱法测定其纯度97-99%。
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| WO2008042338A2 (en) * | 2006-09-28 | 2008-04-10 | Microbia, Inc. | Production of carotenoids in oleaginous yeast and fungi |
| CN104316483A (zh) * | 2014-10-22 | 2015-01-28 | 西安米亿生物科技有限公司 | β-胡萝卜素顺反异构体分离鉴定的方法 |
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