CN112646732A - 同时提升银杏叶中内酯a、c和白果内酯含量的促生制剂及其制备方法和应用 - Google Patents

同时提升银杏叶中内酯a、c和白果内酯含量的促生制剂及其制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种同时提升银杏叶中总黄酮含量的促生制剂及其制备方法和应用。本发明所述促生制剂包括以重量份计的以下成分：尖孢镰刀菌4.5‑6.5份、毛霉5.6‑8.0份和尤韦可拟盘多毛孢15‑25份。将菌种分别制得后按比例混合振荡均匀即得。本发明的促生制剂制作方法简单，实用性强。该促生制剂结合多个菌种配制而成，在银杏育苗或栽培的过程中施加到根部或叶片上，能够促使银杏叶中的内酯A、C和白果含量及纯度提升，极大地提高了经济价值和药用价值，具有极大的应用前景。

Description

同时提升银杏叶中内酯A、C和白果内酯含量的促生制剂及其 制备方法和应用
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种同时提升银杏叶中总黄酮含量的促生制剂及其制备方法和应用。
背景技术
银杏是一种古老的药用植物，银杏提取物(Extracts of Ginkgo biloba,EGb)的主要有效成分是黄酮类化合物和萜内酯类化合物，黄酮类化合物约有38种，总含量为22-27％。银杏内酯属于萜类化合物，银杏内酯类化合物包括银杏内酯和白果内酯，总含量为5.4-6.6％，银杏内酯主要包括银杏内酯A、B、C、J和M单体。据文献报道，银杏内酯中各单体的药物功能有一定差异，银杏内酯均为强血小板活化因子拮抗剂，是银杏叶中特殊生理活性的关键成分，其中银杏内酯A、B、C对治疗心脑血管疾病具有显著疗效；而白果内酯对治疗神经系统疾病则药效独特。EGb是目前得到银杏内酯的唯一途径，但受限于含量低、分离纯化困难和来源单一，难以在工业上大批量生产。
发明内容
针对银杏叶中银杏内酯A、C和白果内酯含量含量低，难以大批量生产应用的技术问题，本发明的目的是提供一种同时提升银杏叶中总黄酮含量的促生制剂及其制备方法和应用。
为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
首先，本发明提供一种同时提升银杏叶中内酯A、C和白果内酯含量的促生制剂，所述促生制剂包括以重量份计的以下成分：尖孢镰刀菌4.5-6.5份、毛霉5.6-8.0份和尤韦可拟盘多毛孢15-25份。
优选地，所述促生制剂包括以重量份计的以下成分：尖孢镰刀菌6.5份、毛霉8.0份和尤韦可拟盘多毛孢25份。
其次，本发明提供一种上述促生制剂的制备方法，包括以下步骤：
(1)在改良的PDA培养基上活化尖孢镰刀菌菌种，待菌丝长满培养基表面后打孔，将菌饼接入PDA培养液中，恒温震荡发酵培养6-8天，过滤菌丝球，保留滤液，即得所述尖孢镰刀菌；
(2)在PDA培养基上活化毛霉菌种，待菌丝长满培养基表面后打孔，将菌饼接入PDA培养液中，恒温震荡发酵培养8-10d，过滤菌丝球，保留滤液，即得所述毛霉；
(3)在PDA培养基上活化尤韦可拟盘多毛孢菌种，待菌丝长满培养基表面后打孔，将菌饼接入PDA培养液中，恒温震荡发酵培养9-11d，过滤菌丝球，保留滤液，即得所述尤韦可拟盘多毛孢；
(4)室温下，依次按配比在容器中添加尖孢镰刀菌、毛霉和尤韦可拟盘多毛孢，震荡均匀，即得所述促生制剂。
进一步地，所述步骤(1)中改良的PDA培养基的配方为：马铃薯200克，葡萄糖20克，琼脂15-20克，体积比为20％的银杏树皮提取液1000毫升，自然pH。
进一步地，所述银杏树皮提取液为200克银杏树皮在1升蒸馏水中煮沸0.5小时后去掉树皮制得。
进一步地，所述PDA培养基配方为：马铃薯200克，葡萄糖20克，琼脂15-20克，蒸馏水1000毫升，自然pH；所述PDA培养液配方为：马铃薯200克，葡萄糖20克，蒸馏水1000毫升，自然pH。
最后，本发明还提供一种上述促生制剂在提升银杏叶中内酯A、C和白果内酯含量中的应用。
进一步地，所述应用具体为：将促生制剂在银杏育苗或栽培的过程中施加到根部或叶片上。
进一步地，所述促生制剂可喷施在银杏1年-3年苗的叶片或5年龄以上银杏树的初生叶片上；或撒在银杏苗育苗床上；或以填坑的方式放置在银杏树的根部。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
本发明的促生制剂制作方法简单，实用性强。该促生制剂结合多个菌种配制而成，在银杏育苗或栽培的过程中施加到根部或叶片上，能够改变银杏的生物学特性，促进银杏的生长，提高银杏抵御不良环境的能力，还可以促进银杏有效成分的合成和积累，促使银杏叶中的内酯A含量由原来的0.02％提高至0.076％，纯度从63％提高至99.8％，内酯C含量由原来的0.016％提高至0.078％，纯度从67％提高至99.1％，白果内酯含量由原来的0.035％提高至0.089％，纯度从59％提高至89.7％，极大地提高了经济价值和药用价值，具有较好的应用前景。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
以下实施例中所使用的材料均可自常规途径购买得到。
实施例1
一种同时提升银杏叶中内酯A、C和白果内酯含量的促生制剂，其包括以重量份计的以下成分：尖孢镰刀菌4.5份、毛霉5.6份和尤韦可拟盘多毛孢15份。
实施例2
一种同时提升银杏叶中内酯A、C和白果内酯含量的促生制剂，其包括以重量份计的以下成分：尖孢镰刀菌5.5份、毛霉6.8份和尤韦可拟盘多毛孢20份。
实施例3
一种同时提升银杏叶中内酯A、C和白果内酯含量的促生制剂，其包括以重量份计的以下成分：尖孢镰刀菌6.5份、毛霉8.0份和尤韦可拟盘多毛孢25份。
制备例
一种上述促生制剂的制备方法，包括以下步骤：
(1)在改良的PDA培养基上活化尖孢镰刀菌菌种，待菌丝长满培养基表面后，用打孔器在长满菌丝的培养基上打孔，将菌饼接入装有100mL PDA培养液的250mL三角瓶中，每瓶接入3个菌丝块；置于恒温震荡培养箱中，温度28℃，120r/min发酵培养6-8天，4层无菌纱布过滤菌丝球，保留滤液，即得所述尖孢镰刀菌；
所述改良的PDA培养基的配方为：马铃薯200克，葡萄糖20克，琼脂15-20克，体积比为20％的银杏树皮提取液(由200克银杏树皮在1升蒸馏水中煮沸0.5小时后去掉树皮制得)1000毫升，自然pH。
(2)在PDA培养基上活化毛霉菌种，待菌丝长满培养基表面后，用打孔器在长满菌丝的培养基上打孔，将菌饼接入装有100mL PDA培养液的250mL三角瓶中，每瓶接入3个菌丝块；置于恒温震荡培养箱中，温度28℃，145r/min发酵培养8-10d，4层无菌纱布过滤菌丝球，保留滤液，即得所述毛霉；
(3)在PDA培养基上活化尤韦可拟盘多毛孢菌种，待菌丝长满培养基表面后，用打孔器在长满菌丝的培养基上打孔，将菌饼接入装有200mL PDA培养液的500mL三角瓶中，每瓶接入3个菌丝块；置于恒温震荡培养箱中，温度28℃，200r/min发酵培养9-11d，4层无菌纱布过滤菌丝球，保留滤液，即得所述尤韦可拟盘多毛孢；
(4)室温下，依次按配比在容器中添加尖孢镰刀菌、毛霉和尤韦可拟盘多毛孢，震荡均匀，即得所述促生制剂。
其中PDA培养基配方为：马铃薯200克，葡萄糖20克，琼脂15-20克，蒸馏水1000毫升，自然pH；PDA培养液配方为：马铃薯200克，葡萄糖20克，蒸馏水1000毫升，自然pH。
实验例
(1)实验材料
处理1：实施例1制备的促生制剂；
处理2：实施例2制备的促生制剂；
处理3：实施例3制备的促生制剂；
对照1：空白对照。
对照2：仅含尖孢镰刀菌4.5份的促生制剂；
对照3：仅含毛霉5.6份的促生制剂；
对照4：仅含尤韦可拟盘多毛孢15份的促生制剂；
具体实验设置如下表所示：
表1具体实验设置
尖孢镰刀菌 毛霉 尤韦可拟盘多毛孢
处理1 4.5份 5.6份 15份
处理2 5.5份 6.8份 20份
处理3 6.5份 8.0份 25份
对照1 / / /
对照2 4.5份 / /
对照3 / 5.6份 /
对照4 / / 15份
(2)实验方法：
于3-4月，将处理1-3和对照1-4所述的促生制剂第一次喷施在银杏1年-3年苗的叶片或5年龄以上银杏树的初生叶片上，5月第二次喷施。喷施量以叶片开始滴水后停止喷施为准。
(3)结果测定：
银杏内酯A、C和白果内酯的检测按国林业行业标准LY/T 1699--2007执行。
结果如下表所示。
表2不同处理下银杏叶中内酯A、C和白果内酯含量和纯度对比
Figure BDA0002855338060000051
由表2数据可知，施用本发明的促生制剂后，银杏叶中内酯A、C和白果内酯的含量和纯度均有显著提高，从而提升银杏叶的药用价值，具有极大的应用前景。

Claims (8)

1.一种同时提升银杏叶中内酯A、C和白果内酯含量的促生制剂，其特征在于，所述促生制剂包括以重量份计的以下成分：尖孢镰刀菌4.5-6.5份、毛霉5.6-8.0份和尤韦可拟盘多毛孢15-25份。
2.根据权利要求1所述的一种同时提升银杏叶中内酯A、C和白果内酯含量的促生制剂，其特征在于，所述促生制剂包括以重量份计的以下成分：尖孢镰刀菌6.5份、毛霉8.0份和尤韦可拟盘多毛孢25份。
3.一种如权利要求1或2所述的同时提升银杏叶中内酯A、C和白果内酯含量的促生制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)在改良的PDA培养基上活化尖孢镰刀菌菌种，待菌丝长满培养基表面后打孔，将菌饼接入PDA培养液中，恒温震荡发酵培养6-8天，过滤菌丝球，保留滤液，即得所述尖孢镰刀菌；
(2)在PDA培养基上活化毛霉菌种，待菌丝长满培养基表面后打孔，将菌饼接入PDA培养液中，恒温震荡发酵培养8-10d，过滤菌丝球，保留滤液，即得所述毛霉；
(3)在PDA培养基上活化尤韦可拟盘多毛孢菌种，待菌丝长满培养基表面后打孔，将菌饼接入PDA培养液中，恒温震荡发酵培养9-11d，过滤菌丝球，保留滤液，即得所述尤韦可拟盘多毛孢；
(4)室温下，依次按配比在容器中添加尖孢镰刀菌、毛霉和尤韦可拟盘多毛孢，震荡均匀，即得所述促生制剂。
4.根据权利要求3所述的一种提升银杏叶中内酯A、C和白果内酯含量的促生制剂的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中改良的PDA培养基的配方为：马铃薯200克，葡萄糖20克，琼脂15-20克，体积比为20％的银杏树皮提取液1000毫升，自然pH。
5.根据权利要求4所述的一种提升银杏叶中内酯A、C和白果内酯含量的促生制剂的制备方法，其特征在于，所述银杏树皮提取液为200克银杏树皮在1升蒸馏水中煮沸0.5小时后去掉树皮制得。
6.根据权利要求3所述的一种提升银杏叶中内酯A、C和白果内酯含量的促生制剂的制备方法，其特征在于，所述PDA培养基配方为：马铃薯200克，葡萄糖20克，琼脂15-20克，蒸馏水1000毫升，自然pH；所述PDA培养液配方为：马铃薯200克，葡萄糖20克，蒸馏水1000毫升，自然pH。
7.一种如权利要求1或2所述的促生制剂在提升银杏叶中内酯A、C和白果内酯含量中的应用。
8.根据权利要求7所述的促生制剂在提升银杏叶中内酯A、C和白果内酯含量中的应用，其特征在于，所述应用具体为：将促生制剂在银杏育苗或栽培的过程中施加到根部或叶片上。
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Assignor: HUNAN University OF SCIENCE AND ENGINEERING

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Denomination of invention: Growth promoting preparation for simultaneously increasing the content of lactone A, C and Bilobalide in ginkgo biloba leaves and its preparation method and application

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