CN112641689B - 一种滋养头皮、防脱发的弗朗鼠李皮发酵液及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种发酵液，具体涉及一种滋养头皮、防脱发的弗朗鼠李皮发酵液及其制备方法。发酵液的制备方法，包括以类植物乳杆菌GUFHSL‑70(CCTCC M 2016002)对弗朗鼠李皮进行发酵。研究发现，经类植物乳杆菌GUFHSL‑70(CCTCC M 2016002)发酵后，弗朗鼠李皮原材料中原有的活性成分、发酵产生的次级代谢产物以及类植物乳杆菌GUFHSL‑70的溶胞物等协同作用，可以更好地滋养头皮、防脱发。

Description

一种滋养头皮、防脱发的弗朗鼠李皮发酵液及其制备方法
技术领域
本发明涉及一种发酵液，具体涉及一种滋养头皮、防脱发的弗朗鼠李皮发酵液及其制备方法。
背景技术
头发是人类健康的重要指标。人们期望具有防脱发、滋养生发等功能效果更好的发用产品。目前市场上已有添加化学成分的防脱类产品，例如传统药物米诺地尔等，若不恰当的使用这类产品，可能会对人体机能产生一定的危害。目前已有开发使用中草药作为药物治疗的替代技术。有些传统炮制工艺及使用方法可能会破坏原料中的有效成分，达不到预期功效。
发明内容
本发明提供一种发酵液，尤其是一种滋养头皮、防脱发的弗朗鼠李皮发酵液，可作为发用产品使用。
本发明首先提供一种滋养头皮、防脱发的弗朗鼠李皮发酵液的制备方法，包括以类植物乳杆菌GUFHSL-70(CCTCC M 2016002)对弗朗鼠李皮进行发酵。
本发明所提及的类植物乳杆菌GUFHSL-70，命名为Lactobacillus paraplantarumGUFHSL-70，该菌株纯培养物已经于2016年01月04日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏单位地址：中国，武汉，武汉大学，保藏号为：CCTCC M 2016002。本发明所提及的类植物乳杆菌GUFHSL-70(CCTCC M 2016002)已在中国专利公布号CN105695363A中公开。
弗朗鼠李皮为鼠李科植物弗朗鼠李树Rhamnus frangula L.(Frangula alnusMiller)的干燥枝皮或干皮。弗朗鼠李皮富含多种活性成分，主要为葡萄糖欧鼠李苷及蒽醌类化合物。由于弗朗鼠李皮中多数有效成分以化合物形式存在，成分非常不稳定，较易分解，且原料价格昂贵，成分以化合物形式存在或者进行无效的分解，都会造成原料的浪费，因此弗朗鼠李皮的实际利用率不高。
本发明人发现，以类植物乳杆菌GUFHSL-70(CCTCC M 2016002)对弗朗鼠李皮进行发酵，既可以充分保留弗朗鼠李皮原材料的主要活性成分，还能够使其中的多种有益成分水解后溶解于发酵液中；进一步经类植物乳杆菌GUFHSL-70的发酵作用，使其中的大分子活性成分分解为更加有利于人体吸收的小分子；另外，通过发酵还产生弗朗鼠李皮中没有或者含量极微的物质，例如很多次级代谢产物。研究发现，经类植物乳杆菌GUFHSL-70(CCTCCM 2016002)发酵后，弗朗鼠李皮原材料中原有的活性成分、发酵产生的次级代谢产物以及类植物乳杆菌GUFHSL-70的溶胞物等协同作用，可以更好地滋养头皮、防脱发。
本发明人还发现，类植物乳杆菌GUFHSL-70(CCTCC M 2016002)对弗朗鼠李皮进行发酵后，使得各种有益成分水解后溶解于发酵液中，经过微生物作用后可以使各种成分更加稳定高效。
在一些具体实施例中，上述滋养头皮、防脱发的弗朗鼠李皮发酵液的制备方法所用培养基为MRS培养基。
具体地，MRS培养基：蛋白胨10.0g/L，牛肉膏10.0g/L，酵母粉5.0g/L，葡萄糖20.0g/L，硫酸镁0.1g/L，醋酸钠5.0g/L，柠檬酸铵2.0g/L，磷酸氢二钾2.0g/L，硫酸锰0.05g/L，吐温-80 1.0g/L；水补足1L。
在一些具体实施例中，发酵所用的原料中，弗朗鼠李皮与MRS培养基的重量比为5-20∶60-95，可选为5-20∶85，具体例如5∶85、10∶85、20∶85。
在一些具体实施例中，是将弗朗鼠李皮粉碎后加入培养基中进行发酵。通常，粉碎至80-100目。其优点在于此状态下更有利于弗朗鼠李皮活性成分的释放，增加与微生物的接触面积，提高原料的生物利用率。
在一些具体实施例中，既可以用类植物乳杆菌GUFHSL-70的冻干粉直接投入到发酵所用的原料中进行发酵；也可以将类植物乳杆菌GUFHSL-70活化后制成种子液，然后再接入发酵所用的原料中进行发酵。
可采用本领域常用方法制备类植物乳杆菌GUFHSL-70的冻干粉。
可采用本领域常用方法制备类植物乳杆菌GUFHSL-70的种子液。例如具体方法包括：配制MRS液体培养液，高温高压灭菌后，取冷冻保藏的甘油管菌种接种到MRS液体培养基中，封口培养(37℃，48h)。即得到种子液。
在一些具体实施例中，将类植物乳杆菌GUFHSL-70的种子液接入发酵所用的原料中进行发酵；所述种子液、弗朗鼠李皮、MRS培养基的重量比为2-15∶5-20∶60-95；其中，所述种子液中有效活菌数为(1.0-5.0)×108CFU/mL，例如3.0×108CFU/mL。
在一些具体实施例中，是将粉碎的弗朗鼠李皮(例如80-100目)和MRS液体培养基混匀后，灭菌，然后再接入类植物乳杆菌GUFHSL-70的种子液进行发酵。
可采用本领域常用方法进行灭菌，例如126℃、15min高温高压灭菌。
在一些具体实施例中，发酵的温度为34-39℃，例如37℃。
在一些具体实施例中，发酵48-72h后，放气，搅拌(或摇匀)，密封后再发酵48-96h。
在一些具体实施例中，在相对湿度33％-60％，例如相对湿度50％的条件下进行发酵。
在一些具体实施例中，发酵后所得上清液即为本发明所述的滋养头皮、防脱发的弗朗鼠李皮发酵液。为便于保存及后续的使用，还可以进一步将发酵后所得上清液灭菌处理，例如126℃、15min高温高压灭菌。
在一些具体实施例中，发酵后过滤，得到澄清的滤液，再进行灭菌(126℃，15min)处理后过滤，即得到所需的发酵液。
本发明还包括上述制备方法制备的滋养头皮、防脱发的弗朗鼠李皮发酵液。
本发明还提供一种发酵产品，其为由上述方法制备的滋养头皮、防脱发的弗朗鼠李皮发酵液进一步地制得的无细胞无菌液体，或液体的无菌滤液，或无菌上清液，或其浓缩物或干燥产物。
通常，可采用本领域常规方法对所述发酵液进行浓缩或干燥(例如冻干或喷雾干燥)。
本发明还提供上述方法制备的滋养头皮、防脱发的复方发酵液或发酵产品在制备发用产品上的应用，尤其是在制备具有滋养头皮、防脱发的发用产品上的应用。
本发明还提供一种发用产品，包括上述方法制备的滋养头皮、防脱发的弗朗鼠李皮发酵液或发酵产品。进一步地，该发用产品还包括本领域(化妆品领域)可用的原辅料。
实验结果表明，本发明发酵液可以显著地促进头发进入生长期，减少休止期头发的产生，提高头发密度，具有滋养头皮、防脱发的有益效果。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做详细说明。
以下所用类植物乳杆菌GUFHSL-70(CCTCC M 2016002)种子液参照CN105695363A中公开的方法制备，种子液中活菌数在3.0×108CFU/mL左右。
以下所用弗朗鼠李皮粉碎至80目。
以下所述份均指重量份。
以下所用MRS培养基：蛋白胨10.0g/L，牛肉膏10.0g/L，酵母粉5.0g/L，葡萄糖20.0g/L，硫酸镁0.1g/L，醋酸钠5.0g/L，柠檬酸铵2.0g/L，磷酸氢二钾2.0g/L，硫酸锰0.05g/L，吐温-80 1.0g/L，水补足1L。
实施例1
一种滋养头皮、防脱发的弗朗鼠李皮发酵液的制备方法，其所用原料如下：
弗朗鼠李皮 10份
类植物乳杆菌GUFHSL-70种子液 10份
MRS培养基 85份
具体制备方法如下：
将弗朗鼠李皮粉碎后加入MRS培养基中搅拌均匀；于126℃，15min高温高压灭菌；接入类植物乳杆菌GUFHSL-70种子液，在温度37℃，湿度50％条件下发酵72h；然后放气搅拌10min，密封后继续发酵48h。发酵结束后过滤，得到澄清的滤液，再进行灭菌(126℃，15min)处理后，过滤，即得到所需发酵液。
实施例2
一种滋养头皮、防脱发的弗朗鼠李皮发酵液的制备方法，其所用原料如下：
弗朗鼠李皮 20份
类植物乳杆菌GUFHSL-70种子液 10份
MRS培养基 85份
具体制备方法参照实施例1。
实施例3
一种滋养头皮、防脱发的弗朗鼠李皮发酵液的制备方法，其所用原料如下：
弗朗鼠李皮 5份
类植物乳杆菌GUFHSL-70种子液 10份
MRS培养基 85份
具体制备方法参照实施例1。
实施例4
一种滋养头皮、防脱发的弗朗鼠李皮发酵液的制备方法，其所用原料如下：
弗朗鼠李皮 10份
类植物乳杆菌GUFHSL-70种子液 15份
MRS培养基 85份
具体制备方法参照实施例1。
对比例1
一种发酵液的制备方法，其所用原料如下：
弗朗鼠李皮 10份
酵母菌种子液 10份
MRS培养基 85份
具体制备方法如下：
酵母菌种子液配制方法：配制PDA液体培养基(马铃薯粉6g/L，葡萄糖20g/L，氯霉素0.1g/L，无菌水定容到1L)。将PDA液体培养基经126℃，15min高温高压灭菌冷却至室温后，加入市场购买的酵母菌粉0.1％，28℃培养5d，即得到酵母菌种子液。
将弗朗鼠李皮粉碎后加入MRs液体培养基中搅拌均匀；于126℃，15min高温高压灭菌；接入酵母菌种子液，在温度28℃，湿度50％条件下发酵72h；然后放气搅拌10min，密封后继续发酵48h。发酵结束后过滤，得到澄清的滤液，再进行灭菌(126℃，15min)处理后，过滤，即得到所需发酵液。
对比例2
一种发酵液的制备方法，其所用原料如下：
弗朗鼠李皮 10份
乳酸菌种子液 10份
MRS培养基 85份
具体制备方法如下：乳酸菌种子液配制方法为：配制MRS液体培养基，经126℃，15min高温高压灭菌冷却至室温后，加入市场购买的乳酸菌粉0.01％，37℃培养48h，即得到乳酸菌种子液。
将弗朗鼠李皮粉碎后加入新配制的MRS液体培养基中搅拌均匀；于126℃，15min高温高压灭菌；接入乳酸菌种子液，在温度37℃，湿度50％条件下发酵72h；然后放气搅拌10min，密封后继续发酵48h。发酵结束后过滤，得到澄清的滤液，再进行灭菌(126℃，15min)处理后，过滤，即得到所需发酵液。
对比例3
一种发酵液的制备方法，与实施例1的区别仅在于，将弗朗鼠李皮替换为等量的云南鼠李(拉丁学名：Rhamnus aurea Heppl.)皮(粉碎至80目)。
对比例4
一种混合液，由弗朗鼠李皮10份和MRS培养基85份制成；其制备方法：将弗朗鼠李皮加入MRS培养基中搅拌均匀；于126℃，15min高温高压灭菌，在温度37℃，湿度50％条件下放置72h；然后搅拌10min，密封后继续静置48h。结束后过滤，得到澄清的滤液，再进行灭菌(126℃，15min)处理后，过滤，即得到所需混合液。
对比例5
一种发酵液，由类植物乳杆菌GUFHSL-70种子液10份和MRS培养基85份发酵而成；其制备方法：将类植物乳杆菌GUFHSL-70种子液加入到经126℃、15min灭菌后的MRS液体培养基中，在温度37℃，湿度50％条件下发酵72h；然后放气搅拌10mi，密封后继续发酵48h。发酵后过滤，得到澄清的滤液，再进行灭菌(126℃，15min)处理后，过滤，即得到所需发酵液。
实验例
实验样品：实施例1-4制备的发酵液，对比例1-3、5制备的发酵液，对比例4制备的混合液。
实验方法：参考实验室方法(发用产品12周育发功效测试方案)，选择根据AlviArmani分型脱发程度达到2级到4级的受试者34名，年龄范围24-50周岁，在头上选取区域，刮掉毛发，每日涂抹实验样品。受试者在使用测试产品前、连续使用4周、连续使用8周和连续使用12周后，分别测试生长期头发比例、休止期头发比例、头发密度。头发密度为直径为1.7cm的圆形头皮试验区的检查结果。
实验结果见下表1-3：
Figure BDA0002865513990000071
Figure BDA0002865513990000081
Figure BDA0002865513990000091
注：表1-3中，**表示P≤0.01，与初始值相比，差异极显著。*表示P≤0.05，与初始值相比，差异显著。未标注的表示差异不显著。
由以上实验数据可知：实施例1-4发酵液的效果明显优于对比例1-5，由此可见弗朗鼠李皮与类植物乳杆菌混合发酵，得到的发酵液其防脱发效果最为明显。
实施例1与实施例2、3相比，实施例1的效果最好，与实施例4相比，其作用效果相差不大，说明本发明混合发酵物按照一定的比例进行发酵既能保证效果最佳还能有效控制原料不必要的浪费。
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (12)

1.一种滋养头皮、防脱发的弗朗鼠李皮发酵液的制备方法，其特征在于，包括将保藏编号为CCTCC M 2016002的类植物乳杆菌GUFHSL-70的种子液接入发酵所用的原料中进行发酵；所述发酵在温度34-39℃、相对湿度33％-60％的条件下进行；所用培养基为MRS培养基；所用弗朗鼠李皮粉碎至80-100目；发酵所用的原料中，所述种子液、弗朗鼠李皮、MRS培养基的重量比为(10-15):(5-20):85；其中，所述种子液中有效活菌数为3.0×108CFU/mL。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述种子液、弗朗鼠李皮、MRS培养基的重量比为10:10:85。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述种子液、弗朗鼠李皮、MRS培养基的重量比为10:20:85。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述种子液、弗朗鼠李皮、MRS培养基的重量比为10:5:85。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述种子液、弗朗鼠李皮、MRS培养基的重量比为15:10:85。
6.根据权利要求1-5任一项所述的制备方法，其特征在于，所述发酵在相对湿度50％的条件下进行。
7.根据权利要求1-5任一项所述的制备方法，其特征在于，所述发酵的温度为37℃。
8.一种滋养头皮、防脱发的弗朗鼠李皮发酵液，其特征在于，是由权利要求1-7任一项所述方法制备得到的。
9.根据权利要求8所述滋养头皮、防脱发的弗朗鼠李皮发酵液，其特征在于，所述弗朗鼠李皮发酵液为发酵后所得上清液。
10.一种发酵产品，其为由权利要求1-7任一项所述方法制备的滋养头皮、防脱发的弗朗鼠李皮发酵液进一步地制得的无细胞无菌液体，或液体的无菌滤液，或无菌上清液，或其浓缩物或干燥产物。
11.一种发用产品，其特征在于，包括权利要求8或9所述的滋养头皮、防脱发的弗朗鼠李皮发酵液或权利要求10所述的发酵产品。
12.根据权利要求11所述发用产品，其特征在于，所述发用产品还包括化妆品领域可用的原辅料。
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