CN112595797A - 一种气相色谱法测定阿哌沙班中间体的方法 - Google Patents

Abstract

本发明提出的是一种气相色谱法测定阿哌沙班中间体的方法，首先分别取5‑氯戊酰氯和相应杂质衍生化反应作为储备溶液，再分别量取各储备液配制系统适用性溶液，量取待测产品配制供试品溶液和自身对照溶液；再量取系统适用性溶液注入气相色谱仪，根据色谱图计算各杂质对应的校正因子，最后量取自身对照溶液和供试品溶液进行气相色谱测定，计算校正后的峰面积，从而测定供试品中5‑氯戊酰氯及其相关杂质的含量。本发明能够有效分离5‑氯戊酰氯中的杂质，为控制阿哌沙班中间体质量建立了严格的标准，降低副反应发生的可能性以及产品的杂质水平，对于工业化生产中控制阿哌沙班的原料质量有至关重要的作用，降低生产成本，增加产品竞争力。

Description

一种气相色谱法测定阿哌沙班中间体的方法

技术领域

本发明涉及的是阿哌沙班中间体的质量控制方法，具体涉及一种气相色谱法测定阿哌沙班中间体5-氯戊酰氯的方法，属于医药分析技术领域。

背景技术

阿哌沙班是一种强效、口服有效的可逆、直接、高选择性的Xa因子活性位点抑制剂，其抗血栓活性不依赖抗凝血酶III。阿哌沙班可以抑制游离及与血栓结合的Xa因子，并抑制凝血酶原活性。阿哌沙班对血小板聚集无直接影响，但间接抑制凝血酶诱导的血小板聚集。通过对Xa因子的抑制，阿哌沙班抑制凝血酶的产生，并抑制血栓形成。在动物模型中进行的临床前试验结果显示，阿哌沙班在不影响止血功能的剂量水平下，具有抗栓作用，有效可预防动脉及静脉血栓。

在阿哌沙班的制备方法中，5-氯戊酰氯是一种重要的中间体产物，如发明专利申请CN101967145A公开的阿哌沙班中间体制备方法，其中将三乙胺加入到无水四氢呋喃中，保持在冷却状况下往反应混合液中缓慢滴加5-氯戊酰氯与无水溶剂的混合溶液，滴毕反应液升温进行反应；发明专利申请CN104341336A公开的阿哌沙班中间体制备方法，将芳香胺在惰性溶剂中，以氢氧化钾、碳酸钾、碳酸钠、碳酸氢钠和碳酸氢钾做缚酸剂和环合剂，与5-氯戊酰氯反应一锅法直接获得中间体化合物。然而，现有的制备工艺中对于5-氯戊酰氯的质量控制并无相应的标准体系，也缺少对应的检测和控制手段，急需一种能够精确测定5-氯戊酰氯含量的方法，以实现对该中间体纯度的控制，提高阿哌沙班产品的整体质量。

发明内容

本发明的目的在于克服现有阿哌沙班中间体制备工艺存在的上述缺陷，提出一种气相色谱法测定阿哌沙班中间体5-氯戊酰氯的方法。

本发明的技术解决方案：一种气相色谱法测定阿哌沙班中间体的方法，具体包括如下步骤：

（1）分别取5-氯戊酰氯、4-戊烯酰氯、3-甲基吡啶、4-氯戊酰氯、γ-戊内酯、5-氯戊腈、δ-戊内酯各约1ml，分别滴加至含有5ml甲醇和1ml 3-甲氧基吡啶的25ml量瓶中，混匀后衍生化反应20min，然后加二氯甲烷稀释至刻度，摇匀，作为储备溶液；分别精密量取各储备液0.1ml，置于同一20ml量瓶中，加二氯甲烷稀释至刻度，摇匀，作为系统适用性溶液；

（2）精密量取待测5-氯戊酰氯产品1ml，缓慢滴加至含有5ml甲醇和1ml 3-甲氧基吡啶的25ml容量瓶中，混匀后室温反应20min，然后加二氯甲烷稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；精密量取供试品溶液0.1ml，置于20ml量瓶中，加二氯甲烷稀释至刻度，摇匀，作为自身对照溶液；

（3）精密量取步骤（1）制备的系统适用性溶液1μl注入气相色谱仪，进行气相色谱测定，记录色谱图，根据色谱图中的浓度和峰面积数据进行线性回归，并计算各杂质对应的校正因子；再精密量取步骤（2）制备的自身对照溶液和供试品溶液各1µl注入气相色谱仪，进行气相色谱测定，记录色谱图，根据供试品溶液色谱图中的各杂质峰面积和校正因子，计算校正后的峰面积，从而测定供试品中5-氯戊酰氯及其相关杂质的含量。

进一步的，所述气相色谱仪的测定条件为：采用14% 氰丙基-苯基/86% 二甲基聚硅氧烷填料的毛细管柱，高纯氮气为载气，分流比为50:1，柱流量为2.2ml/min，进样量1μl，进样口温度为250℃；采用氢火焰离子化检测器，工作温度为250℃。

进一步的，所述气相色谱仪进行气相色谱测定的起始温度为80℃，经过第一阶段升温至120℃，而后经过第二阶段升温至140℃，最终经过第三阶段升温至250℃；其中所述第一阶段的初始升温速度为每分钟15-30℃，维持0分钟，再以每分钟20℃的速率升温至120℃，维持5分钟；再以每分钟40℃的速率升温至140℃，维持2分钟，再以每分钟40℃的速率升温至250℃，维持5.75分钟；第二、第三阶段升温速率为每分钟20-55℃。

与现有技术相比，本发明的优点在于：有效分离5-氯戊酰氯中的杂质，为控制阿哌沙班中间体质量建立了严格的标准，从而可以降低副反应发生的可能性以及产品的杂质水平，对于工业化生产中控制阿哌沙班的原料质量有至关重要的作用，并可通过控制中间体质量降低生产成本、增加产品竞争力。

附图说明

附图1是5-氯戊酰氯产品系统适用性典型色谱图。

附图2是5-氯戊酸的气相色谱图。

附图3是空白对照组的气相色谱图。

附图4-1~4-7是5-氯戊酰氯和各杂质各杂质的气相色谱图。

附图5-1~5-7是5-氯戊酰氯和各杂质浓度和峰面积的线性回归曲线图。

具体实施方式

下面结合附图进一步说明本发明的技术方案。以下通过参考附图描述的实施例和相关实验数据仅为示例性的，旨在用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。

（1）杂质列表

针对5-氯戊酰氯制剂的工艺、辅料、降解途径，总结出5-氯戊酰氯中可能出现的杂质，具体见下表：

为分离以上杂质，结合制剂的可查询标准，采用梯度升温分离杂质，优化了样品处理方法，最终确立本发明所述的气相色谱体系，并进行方法学验证。

（2）衍生化条件筛选

由于5-氯戊酰氯易水解生成5-氯戊酸，故而采用甲醇与其衍生化生成5-氯戊酸甲酯，同时考察5-氯戊酸在本品测定条件下的位置，以去除5-氯戊酸对测定的干扰，并以实验中使用试剂为空白对照组，考察空白溶剂出峰位置对测定的干扰。5-氯戊酸和空白对照组的气相色谱图分别如图2和图3所示。

精密量取待测5-氯戊酰氯产品1ml，缓慢滴加至含有5ml甲醇和1ml 3-甲氧基吡啶的25ml容量瓶中，混匀后室温反应20min，然后加二氯甲烷稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液进行气相色谱检测，其气相色谱图如图1所示。

（3）方法学验证总结

该方法的验证项目、可接受的标准和验证结果如下表所示。

其中，线性及校正因子的计算过程如下：分别精密量取5-氯戊酰氯及各杂质对照品适量，通过衍生化反应后加溶剂稀释制成每1ml 约含40μl的溶液，作为各杂质储备液；根据杂质的控制限度，精密量取以上各杂质储备液适量，分别稀释制成各杂质从0.02%至0.6%的范围内的系列线性溶液，精密量取各1μl，分别注入气相色谱仪，记录色谱图，如图4-1~4-7所示。

对各组色谱图中的浓度为横坐标，峰面积为纵坐标进行线性回归，所得线性回归曲线如图5-1~5-7所示。根据各线性回归曲线的斜率校正因子和C/A校正因子，确定各杂质对应的校正因子，如下表所示。

供试品溶液的色谱图中如显杂质峰，按校正后的峰面积（4-戊烯酰氯乘以校正因子2.51、3-甲基吡啶乘以校正因子0.69、5-氯戊腈乘以校正因子0.86、δ-戊内酯乘以校正因子0.72）计算，质量控制标准如下：4-戊烯酰氯、3-甲基吡啶、4-氯戊酰氯、5-氯戊酰氯、5-氯戊腈、δ-戊内酯不得大于对照溶液的主峰面积的0.4倍（0.2%），γ-戊内酯不大于对照溶液的主峰面积的0.6倍（0.3%）；其他杂质不得大于对照溶液主峰面积的0.2倍（0.1%），杂质峰面积的和按校正后的峰面积计算不得大于对照溶液主峰面积的4倍（2.0%）。

验证结果表明本方法检测结果的各项指标均符合中国药典2015年版的要求，适宜于检测5-氯戊酰氯的有关物质。

以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其实用新型构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。

Claims (7)

1.一种气相色谱法测定阿哌沙班中间体的方法，其特征在于，该方法具体包括如下步骤：

（1）分别取5-氯戊酰氯、4-戊烯酰氯、3-甲基吡啶、4-氯戊酰氯、γ-戊内酯、5-氯戊腈、δ-戊内酯各约1ml，分别滴加至含有5ml甲醇和1ml 3-甲氧基吡啶的25ml量瓶中，混匀后衍生化反应20min，然后加二氯甲烷稀释至刻度，摇匀，作为储备溶液；分别精密量取各储备液0.1ml，置于同一20ml量瓶中，加二氯甲烷稀释至刻度，摇匀，作为系统适用性溶液；

（2）精密量取待测5-氯戊酰氯产品1ml，缓慢滴加至含有5ml甲醇和1ml 3-甲氧基吡啶的25ml容量瓶中，混匀后室温反应20min，然后加二氯甲烷稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；精密量取供试品溶液0.1ml，置于20ml量瓶中，加二氯甲烷稀释至刻度，摇匀，作为自身对照溶液；

（3）精密量取步骤（1）制备的系统适用性溶液1μl注入气相色谱仪，进行气相色谱测定，记录色谱图，根据色谱图中的浓度和峰面积数据进行线性回归，并计算各杂质对应的校正因子；再精密量取步骤（2）制备的自身对照溶液和供试品溶液各1µl注入气相色谱仪，进行气相色谱测定，记录色谱图，根据供试品溶液色谱图中的各杂质峰面积和校正因子，计算校正后的峰面积，从而测定供试品中5-氯戊酰氯及其相关杂质的含量。

2.根据权利要求1所述的一种气相色谱法测定阿哌沙班中间体的方法，其特征在于，所述气相色谱仪的测定条件为：采用14% 氰丙基-苯基/86% 二甲基聚硅氧烷填料的毛细管柱，高纯氮气为载气，分流比为50:1，柱流量为2.2ml/min，进样量1μl，进样口温度为250℃。

3.根据权利要求1所述的一种气相色谱法测定阿哌沙班中间体的方法，其特征在于，所述气相色谱仪采用氢火焰离子化检测器，工作温度为250℃。

4.根据权利要求1所述的一种气相色谱法测定阿哌沙班中间体的方法，其特征在于，所述气相色谱仪进行气相色谱测定的起始温度为80℃，经过第一阶段升温至120℃，而后经过第二阶段升温至140℃，最终经过第三阶段升温至250℃。

5.根据权利要求4所述的一种气相色谱法测定阿哌沙班中间体的方法，其特征在于，所述第一阶段的初始升温速度为每分钟15-30℃，维持0分钟；再以每分钟20℃的速率升温至120℃，维持5分钟；再以每分钟40℃的速率升温至140℃，维持2分钟；再以每分钟40℃的速率升温至250℃，维持5.75分钟。

6.根据权利要求4所述的一种气相色谱法测定阿哌沙班中间体的方法，其特征在于，所述第二阶段升温速率为每分钟20-55℃。

7.根据权利要求4所述的一种气相色谱法测定阿哌沙班中间体的方法，其特征在于，所述第三阶段升温速率为每分钟20-55℃。

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