CN112587572B - 壮药五叶泡醇提物作为制备抗痛风性关节炎药物的用途 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了壮药五叶泡醇提物作为制备抗痛风性关节炎药物的用途,所述五叶泡醇提物的提取方法为:取五叶泡加7~10倍量的乙醇提取3~4次,每次2~3小时,提取液合并、滤过、浓缩,得到五叶泡醇提物膏体;再加入临床医学可接受的辅料,制备成胶囊剂、颗粒剂、片剂、丸剂、膏剂等中药剂型。本发明经验证表明,五叶泡醇提物能够降低次黄嘌呤所致高尿酸血症小鼠的血清尿酸水平,具有较好的降尿酸作用,能缓解急性痛风性关节炎相关症状、减轻关节损伤,抑制炎症因子的释放,具有制备防治痛风性关节炎的药物制剂的成药潜力,为开发抗痛风性关节炎药物提供了新的物质基础,具有潜在且巨大的社会效益和经济效益。
Description
技术领域
本发明涉及医药技术领域,具体是壮药五叶泡醇提物作为制备抗痛风性关节炎药物的用途。
背景技术
痛风性关节炎是由于尿酸盐沉积在关节囊、滑囊、软骨、骨质和其他组织中而引起病损及炎性反应。多在夜间发病,受累关节剧痛,首发关节常累及第一跖趾关节,其次为踝、膝等。关节红、肿、热和压痛,全身无力、发热、头痛等。痛风是嘌呤代谢异常致使尿酸合成增加而导致的代谢性疾病。血浆中的尿酸达到饱和,导致尿酸单钠结晶沉积在远端关节周围相对缺乏血管的组织中,这种结晶的出现可导致单关节或者多关节的急性炎性滑膜炎。
随着我国社会经济的发展,人们生活水平的提高、生活习惯的改变,痛风性关节炎发病率呈逐年上升趋势,发病年龄呈现低龄化。痛风性关节炎与心血管疾病、慢性肾脏病及代谢综合征(糖尿病、胰岛素抵抗和肥胖等)密切相关,是危害人类健康的一种严重代谢性疾病。
目前,治疗痛风性关节炎主要是急性期的药物治疗包括大剂量非甾体类抗炎药或者秋水仙碱,以及缓解期的降尿酸治疗。非甾体类抗炎药物是缓解急性痛风症状的首选药物,通过抑制环氧合酶2,减少前列腺素的产生,从而抑制炎性反应,其副作用主要是消化道溃疡、出血和穿孔等。秋水仙碱是治疗痛风急性发作的经典药物,能明显缓解炎性疼痛,大剂量使用时,副作用极大,并且静脉给药有一定的致死率。急性发作的痛风经上述药物治疗无效时,可考虑选择使用促肾上腺皮质激素。缓解期降尿酸药物主要包括黄嘌呤氧化酶抑制剂和促尿酸排泄药物。
中药治疗痛风性关节炎是目前研究的趋势和热点,发展潜力巨大。目前也有发现一些中药材具有抗痛风性关节炎的作用,如专利申请CN110585298A公开了一种具有抗急性痛风性关节炎的药物,该药物的有效成分为短穗兔耳草总提取物浸膏以及短穗兔耳草极性部位浸膏。该药物具有抗急性痛风性关节炎的药物,能很好地治疗痛风性关节炎。专利申请CN102309561A公开了一种用于预防和治疗痛风性关节炎及高尿酸血症的药物组合物,该药物组合物包括瞿麦、威灵仙以及秦艽,能够降低痛风患者血尿酸含量、缓解疼痛、抑制尿酸增高、恢复和改善患者代谢功能以及无毒副作用,用于预防和治疗痛风性关节炎及高尿酸血症。再如,专利申请CN103071134A公开了一种治疗风湿关节疼痛和跌打肿痛的外用制剂,其成分包括买麻藤、松树笔、五味藤、透骨香、两面针、红花、樟脑、土木香、蝙蝠葛、五叶泡、干姜、荷脑;具有活血散瘀、消肿止痛、祛风除湿、疗效显著、作用迅速、安全无毒副的作用。其虽然包含有五叶泡作为原料,但并没有进行醇提得到醇提物,应用范围也不同,该专利针对的治疗对象是风湿关节疼痛和跌打肿痛,并且是作为外用制剂使用的。
壮药五叶泡为蔷薇科植物空心泡Rubus rosaefolius Smith的干燥根及根茎,又名蔷薇莓、五月泡、龙船泡等,为广西壮族常用草药,具有清热解毒、祛风除湿、收敛止血之功效。主要分布于我国广东、海南、广西、湖南等地。空心泡全株可治痢疾、月经不调、月经过多、呕吐、小儿咳嗽、烫伤。其根(倒触伞):辛、微苦,凉,清热解毒,活血止痛,止带、止汗,止咳,止痢。
目前还未见有关于五叶泡提取物在痛风性关节炎方面应用的报道。
发明内容
本发明的目的是提供壮药五叶泡醇提物作为制备抗痛风性关节炎药物的用途,本发明首次发现五叶泡醇提物具有明显的调节尿酸活性,能缓解急性痛风性关节炎相关症状、减轻关节损伤,抑制炎症因子的释放,具有制备治疗痛风性关节炎及其相关疾病的药物制剂的成药潜力,且药物制剂的制备方法简单,成本低,成药经济效益好。
本发明通过以下技术方案实现:
壮药五叶泡醇提物作为制备抗痛风性关节炎药物的用途,所述的壮药五叶泡是蔷薇科植物空心泡Rubus rosaefolius Smith的干燥根及根茎。
具体地,所述的五叶泡醇提物是壮药材五叶泡经过乙醇提取得到的提取物。
优选地,所述的五叶泡醇提物的提取方法为:取五叶泡加7~10倍量的乙醇提取3~4次,每次2~3小时,提取液合并、滤过、浓缩,得到五叶泡醇提物膏体,每克膏体相当于10~12g生药。
优选地,所述乙醇的体积分数为90~97%。
本发明所述痛风性关节炎的药物,选择性添加临床医学可接受的辅料,制备成可直接口服的中药制剂。
具体地,所述的中药制剂包括胶囊剂、颗粒剂、片剂、丸剂、膏剂。
所述的辅料包括淀粉、乳糖、微晶纤维素、糊精、磷酸钙、聚乙二醇、羧甲基纤维素钠、羟丙纤维素或交联聚维酮等。
本发明所述的壮药五叶泡醇提物,还可以用于制备治疗痛风性关节炎相关的高尿酸血症、痛风性肾病、动脉粥样硬化、高血压的药物。
本发明的有益效果:
1、本发明经验证表明,五叶泡醇提物具有明显的调节尿酸活性,能够缓解急性痛风性关节炎相关症状、减轻关节损伤,抑制炎症因子的释放,具有制备防治痛风性关节炎的药物制剂的成药潜力,为开发抗痛风性关节炎药物提供了新的物质基础,具有潜在且巨大的社会效益和经济效益。
2、本发明使用的原料为壮药五叶泡,其资源丰富,提取制备方法简单易操作,可大批量制备。
3、本发明分别通过研究五叶泡醇提物对急性痛风性关节炎大鼠关节肿胀度、步态评分、滑膜组织炎症因子、踝关节滑膜组织病理学等方面的影响,有力证明了本发明的五叶泡醇提物能缓解大鼠急性痛风性关节炎相关症状、减轻关节损伤,抑制炎症因子的释放,对大鼠急性痛风性关节炎有一定的保护作用。
附图说明
图1是五叶泡醇提物影响急性痛风性关节炎大鼠踝关节滑膜组织病理学变化的结果(HE,×200);
其中字母A-F表示:A、正常对照组;B、模型对照组;C、秋水仙碱组;D、五叶泡醇提物低剂量组;E、五叶泡醇提物中剂量组;F、五叶泡醇提物高剂量组。
具体实施方式
为了使本发明的技术方案和优点更加清楚,下面结合本发明的实施例,对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述。
实施例1
五叶泡醇提物的提取方法:取五叶泡加8倍量的乙醇提取4次,每次2小时,提取液合并、滤过、浓缩,得到五叶泡醇提物膏体。
实施例2
五叶泡醇提物的提取方法:取五叶泡加9倍量的乙醇提取3次,每次3小时,提取液合并、滤过、浓缩,得到五叶泡醇提物膏体。
实施例3
五叶泡醇提物的提取方法:取五叶泡加10倍量的乙醇提取3次,每次2.5小时,提取液合并、滤过、浓缩,得到五叶泡醇提物膏体。
实施例4
取实施例1制备得到的五叶泡醇提物膏体,加入适量的淀粉、环糊精、微晶纤维素,制成颗粒,低温干燥,压片,包糖衣,制得片剂。
实施例5
取实施例2制备得到的五叶泡醇提物膏体,加入适量的淀粉、环糊精、羧甲基纤维素钠,制成颗粒,低温干燥,取适量装入胶囊,即得胶囊剂。
实施例6
取实施例3制备得到的五叶泡醇提物膏体,加入适量的淀粉、环糊精、微晶纤维素、乳糖,制成颗粒,低温干燥,取适量分装成小袋,即得颗粒剂。
药性试验
本发明通过尿酸钠(monosodiumurate,MSU)诱导的急性痛风性关节炎大鼠模型,观察五叶泡的作用,研究其作用机制,为五叶泡的开发利用提供实验依据。
1 材料
1.1实验动物:SPF级雄性SD大鼠,体重180~220g,由广西医科大学实验动物中心提供,生产许可证号SCXK桂2014-0002。
1.2药物与试剂:五叶泡醇提物,广西壮族自治区中医药研究院化学所制备,五叶泡加8倍量95%乙醇提取3次,每次2小时,提取液合并、滤过、浓缩,每g膏相当于10.29g生药,批号190101;秋水仙碱片,云南植物药业有限公司,批号20181110。上述药物临用时以蒸馏水配成相应浓度。尿酸钠,美国SIGMA公司,批号BCBX0421;TNF-α ELISA试剂盒,天津安诺瑞康生物技术有限公司,批号569191127;IL-1β ELISA试剂盒,天津安诺瑞康生物技术有限公司,批号370191127;IL-6 ELISA试剂盒,天津安诺瑞康生物技术有限公司,批号385191127。其余试剂均为国产分析纯。
1.3 主要仪器:Multiskan go全波长多功能酶标仪(美国Thermo Fisher 公司),Leica DM2500显微成像分析系统(德国Leica仪器有限公司)。
2 方法
2.1 分组给药与造模
将SD雄性大鼠随机分为:正常对照组、模型组、阳性药对照组(秋水仙碱片,0.6mg/kg)、五叶泡醇提物低、中、高剂量组(1.5g、3g、6g生药/kg),每组10只。各组灌胃给药,正常对照组和模型组灌胃给予等体积蒸馏水,每天1次,连续14天,于第12天造模后继续给药2天。第12天每组大鼠均采用腹腔注射10%水合氯醛进行麻醉,将大鼠右踝关节轻弯成直角,以45°方向从右踝关节背侧刺入胫腓骨之间的关节腔,有落空感后将25mg/mL尿酸钠溶液0.2ml注入踝关节腔,以关节囊对侧鼓起作为注射成功的标准。正常对照组以0.2ml生理盐水作替代。
2.2 关节肿胀度的测量
于造模前、造模后24h、48h用软卷尺测量大鼠右踝关节相同部位周径,每次重复测量3次,取平均值。关节肿胀度=造模后踝关节周径-造模前踝关节周径。
2.3 步态观察及评分
造模后24h、48h进行步态观察评分:0分为正常步态;1分为轻度跛行,右膝关节略有弯曲;2分为明显跛行,右下肢只接触地面;3分为严重跛行,右下肢离开地面,三足步态。
2.4 大鼠踝关节滑膜组织炎症因子的检测
第14天处死大鼠后快速分离出踝关节滑膜组织,加入液氮研磨粉碎,加入适量生理盐水研匀,3000 r/min离心10min,取上清液,按照 ELISA 试剂盒说明书检测TNF-α、IL-1β、IL-6水平。
2.5 大鼠踝关节滑膜组织病理学观察
取第14天处死大鼠的踝关节滑膜组织固定于10%福尔马林溶液中,用8%硝酸溶液脱钙处理后,常规石蜡切片,HE染色,显微镜下观察。
3 结果
3.1五叶泡醇提物对急性痛风性关节炎大鼠关节肿胀度的影响
造模后24h,与模型组比较,五叶泡醇提物中、高剂量组大鼠关节肿胀度明显降低(P<0.05或P<0.01)。造模后48h,与模型组比较,五叶泡醇提物中、高剂量组大鼠关节肿胀度明显降低(P<0.05或P<0.01)。五叶泡醇提物低剂量组大鼠关节肿胀度与模型组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结果见表1所示。
与模型组比较,*P<0.05,**P<0.01。
3.2 五叶泡醇提物对急性痛风性关节炎大鼠步态评分的影响
结果见表2所示。造模后24h,与模型组比较,五叶泡醇提物中、高剂量组大鼠步态评分明显降低(P<0.05或P<0.01)。造模后48h,与模型组比较,五叶泡醇提物中、高剂量组大鼠步态评分明显降低(P<0.05)。五叶泡醇提物低剂量组大鼠步态评分与模型组比较差异无统计学意义(P>0.05)。
与模型组比较,*P<0.05,**P<0.01。
3.3 五叶泡醇提物对急性痛风性关节炎大鼠滑膜组织炎症因子的影响
结果见表3所示。造模后模型组大鼠踝关节滑膜组织TNF-α、IL-1β、IL-6含量较正常组显著升高(P<0.01)。与模型组比较,五叶泡醇提物中、高剂量组大鼠踝关节滑膜组织TNF-α含量显著降低(P<0.01) ,五叶泡醇提物高剂量组大鼠踝关节滑膜组织IL-1β、IL-6含量显著降低(P<0.05)。
与模型组比较,*P<0.05,**P<0.01。
3.4 五叶泡醇提物对急性痛风性关节炎大鼠踝关节滑膜组织病理学的影响
结果如图1所示。正常对照组大鼠滑膜细胞分布均匀,排列整齐,无充血水肿、无炎性细胞浸润;模型组大鼠滑膜组织充血水肿,大量炎性细胞浸润,滑膜细胞增生;五叶泡醇提物高剂量组与秋水仙碱组,滑膜组织轻度充血水肿,少量炎性细胞浸润,滑膜细胞增生减轻;五叶泡醇提物中剂量组滑膜组织充血水肿减轻,滑膜细胞有增生,炎性细胞浸润较模型组减少;五叶泡醇提物低剂量组大鼠滑膜组织充血水肿较明显,较多的炎细胞浸润。
4 结论
痛风急性发作是由于尿酸生成过多或尿酸排泄减少导致尿酸盐沉积,主要损伤部位集中在关节和肾。通过向大鼠关节腔注入MSU建立急性痛风性关节炎模型,效率高且其病理表现与临床极为相似,已被作为经典的急性痛风性关节炎造模法。
本实验模型复制后模型组大鼠右踝关节明显肿胀,跛行,严重者呈三足步态;病理结果显示,模型组大鼠滑膜细胞增生,大量炎性细胞浸润,说明模型复制成功。给予五叶泡醇提物后,大鼠关节肿胀度、步态评分明显降低,病理结果显示五叶泡醇提物可使大鼠滑膜细胞增生减轻、炎性细胞浸润减少,说明五叶泡醇提物可缓解大鼠急性痛风性关节炎相关症状、减轻关节损伤。
许多研究证实炎症因子IL-1β、IL-6 和TNF-α等在痛风性关节炎发展过程中发挥关键作用。IL-1β 和TNF-α是调节炎症的始动因素和重要的调节剂,在中性粒细胞和巨噬细胞的趋化、激活过程中起重要作用。IL-1β能够激活下游通路,使氧自由基、白三烯、前列腺素等炎性物质的释放增多,进而表现出局部关节红、肿、热、痛。IL-6能增加滑膜炎性细胞浸润,在痛风性关节炎急性期呈明显高表达。TNF-α不仅直接引起炎症反应还可刺激产生IL-1β、IL-6等,加速炎症进展。
本试验中,模型组大鼠滑膜组织TNF-α、IL-1β、IL-6含量明显升高,五叶泡醇提物能明显降低大鼠滑膜组织TNF-α、IL-1β、IL-6含量,说明五叶泡醇提物可能是通过抑制炎性因子的释放,减轻滑膜炎症反应,从而缓解大鼠急性痛风性关节炎的发展。
综上所述,五叶泡醇提物能缓解大鼠急性痛风性关节炎相关症状、减轻关节损伤,对大鼠急性痛风性关节炎有一定的保护作用,其可能是通过抑制炎症因子的释放来发挥保护作用。
Claims (4)
1.壮药五叶泡醇提物作为制备抗痛风性关节炎药物的用途,所述的壮药五叶泡是蔷薇科植物空心泡Rubus rosaefolius Smith的干燥根及根茎;
所述的五叶泡醇提物是壮药材五叶泡经过乙醇提取得到的提取物,所述的五叶泡醇提物的提取方法为:取五叶泡加7~10倍量的乙醇提取3~4次,每次2~3小时,提取液合并、滤过、浓缩,得到五叶泡醇提物膏体,每克膏体相当于10~12g生药;所述乙醇的体积分数为90~97%。
2.根据权利要求1所述的壮药五叶泡醇提物作为制备抗痛风性关节炎药物的用途,其特征在于:所述痛风性关节炎的药物,添加临床医学可接受的辅料,制备成可直接口服的中药制剂。
3.根据权利要求2所述的壮药五叶泡醇提物作为制备抗痛风性关节炎药物的用途,其特征在于:所述的中药制剂包括胶囊剂、颗粒剂、片剂、丸剂、膏剂。
4.根据权利要求1所述的壮药五叶泡醇提物作为制备抗痛风性关节炎药物的用途,其特征在于:还可以用于制备治疗痛风性关节炎相关的高尿酸血症的药物。
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HPLC法测定五叶泡中没食子酸的含量;兰保强等;《药学研究》;20160515;第35卷(第05期);第267-268、294页 * |
五叶泡质量标准研究;饶伟源等;《中医药导报》;20160930;第22卷(第18期);第60页左栏第1段、右栏第1段,第61页左栏第1段、表1,第62页右栏第6段 * |
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Legal Events
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PB01 | Publication | ||
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SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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GR01 | Patent grant | ||
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