CN112587553B - 一种调节宠物皮肤微生态平衡的组合物及其应用 - Google Patents

一种调节宠物皮肤微生态平衡的组合物及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种调节宠物皮肤微生态平衡的组合物及其应用，其活性成分包括芽孢杆菌代谢产物、壳聚糖和β‑葡聚糖，所述芽孢杆菌代谢产物由分子量小于300kDa的聚谷氨酸钠、分子量大于700kDa的聚谷氨酸钠和芽孢杆菌发酵滤液组成。本发明将益生菌发酵产物应用于宠物皮肤微生态学的研究，提供一种由芽孢杆菌代谢产物与壳聚糖和β‑葡聚糖等组成调节宠物皮肤微生态平衡的组合物，通过小分子量和中分子量的聚谷氨酸钠双重保湿因子调节皮肤表面的水环境，协同芽孢杆菌发酵产物滤液中的皮肤益生元，以及壳聚糖和β‑葡聚糖等，提高皮肤抵抗力，调节宠物皮肤表面微生物群，制备简单、应用效果显著。

Description

一种调节宠物皮肤微生态平衡的组合物及其应用
技术领域
本发明涉及兽药技术领域，更具体地，涉及一种调节宠物皮肤微生态平衡的组合物及其应用。
背景技术
随着人们生活水平的提高，社会人口老龄化的出现，以及现代人的压力也在不断的变大，使得现在国内宠物饲养数量越来越多，宠物医疗也日益引起社会关注，我国宠物医疗在近10年发展迅速。中国的宠物狗数量仅此于美国和巴西，位居世界第三。
宠物的皮肤结构与人类皮肤差异较大，容易引发各种皮肤病。具体而言：1、两者酸碱度有差异：狗的毛发表层由许多细小的鳞片(又称毛鳞片)重叠而成，犬只的毛鳞片pH值为6-8，属于中性毛发组织，而人类的毛鳞片pH值呈弱酸性；2、两者皮肤构造有差异：狗的皮肤表层仅3-5层，而人类的皮肤表层为10-15层，狗的皮肤表层比较薄，免疫力差，容易引发皮肤病。
宠物现有最常见的皮肤病包括真菌性皮肤病、细菌性皮肤病以及复合性皮肤病，其具体病症主要包括脂溢性皮炎、痤疮、特应性皮炎、骚痒等，临床表现包括脱毛、结痂、起皮屑、红肿、脓包和猫咪黑下巴等。
现有技术中，处理皮肤问题是用抗菌药物(如咪康唑、酮康唑)或化学杀菌剂(如洗必泰、吡啶硫酮锌甘宝素和吡啶酮乙醇胺盐等)；但是，这些成分常见的副作用是会引起皮肤灼烧或大量脱皮，具有严重的刺激性。
经查询现有市场产品，尚未见到抑菌效果确切且对皮肤无刺激反应的组合物的相关报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种抑菌效果确切且对皮肤无刺激反应的调节宠物皮肤微生态平衡的组合物。
本发明的另一目的是提供上述调节宠物皮肤微生态平衡的组合物的应用。
本发明采用如下技术方案：
一种治疗宠物抑郁症的药物组合物，其活性成分包括芽孢杆菌代谢产物、壳聚糖和β-葡聚糖。
所所述芽孢杆菌代谢产物由分子量小于300kDa的聚谷氨酸钠、分子量大于700kDa的聚谷氨酸钠和芽孢杆菌发酵滤液组成。
在上述技术方案中，所述分子量小于300kDa的聚谷氨酸钠、分子量大于700kDa的聚谷氨酸钠和芽孢杆菌发酵滤液的质量比为0.05-1：0.05-1：70-99.9。
详细地，在上述技术方案中，所述芽孢杆菌发酵滤液为枯草芽孢杆菌X-003的发酵滤液，所述枯草芽孢杆菌X-003的保藏编号为CCTCCNO：M202048。
在本发明的具体实施方式中，所述枯草芽孢杆菌X-003的发酵滤液的制备方法如下：
S1、将冷冻保藏的枯草芽孢杆菌X-003菌株接种至液体培养基斜面上，在36.5-37.5℃下活化培养24-48h；
S2、将活化后的种子液接种至装有液体培养基的三角瓶内，在36.5-37.5℃下振荡培养3-6天，直至对数生长中期；
S3、将步骤S2得到的发酵液依次经离心和过滤后，即得。
详细地，在上述技术方案中，步骤S1和步骤S2中，所述液体培养基为蛋白胨10g、NaCl 10g、酵母抽提物5g、琼脂20g和蒸馏水1000mL，pH 7.0。
详细地，在上述技术方案中，步骤S3中，所述离心的转速和时间分别为5350-5750rpm和20-30min，所述过滤采用的微孔滤膜孔径为0.22μm。
在本发明的具体实施方式中，所述枯草芽孢杆菌X-003的发酵滤液中多糖和多肽的含量分别为1.5-3.8wt％和1.2-2.9wt％。
在本发明的一个优选实施方式中，所述调节宠物皮肤微生态平衡的组合物由以下重量份的组分组成：
Figure BDA0002862620840000031
在本发明的一个具体实施方式中，所述调节宠物皮肤微生态平衡的组合物由以下重量份的组分组成：
Figure BDA0002862620840000032
本发明另一方面还提供了上述组合物在制备调节宠物皮肤微生态平衡的药物中的应用。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
本发明将益生菌发酵产物应用于宠物皮肤微生态学的研究，提供一种由益生菌(芽孢杆菌)代谢产物与壳聚糖和β-葡聚糖等组成调节宠物皮肤微生态平衡的组合物，通过小分子和中分子量的聚谷氨酸钠双重保湿因子调节皮肤表面的水环境，协同芽孢杆菌发酵产物滤液中的皮肤益生元，以及壳聚糖、β-葡聚糖等天然多糖，提高皮肤抵抗力，调节宠物皮肤表面微生物群；其制备工艺简单、应用效果显著，尤其适用于具有脂溢性皮炎、瘙痒症的宠物皮肤。
附图说明
图1a为案例1猫咪黑下巴照片；
图1b为案例1猫咪未处理后下巴大面积变黑、脱毛照片；
图1c为案例1猫咪使用本发明组合物1天后下巴状态的照片；
图2a为案例2两只猫咪中一只的黑下巴照片；
图2b为图2a所示猫咪使用本发明组合物3天后痊愈的下巴照片；
图2c为案例2两只猫咪中另一只的黑下巴照片；
图2d为图2c所示猫咪使用本发明组合物3天后痊愈的下巴照片；
图3a为案例3狗患真菌性皮炎的患处照片；
图3b为图3a所示患病狗使用本发明组合物一周后痊愈的照片。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步的详细说明，以使本领域的技术人员更加清楚地理解本发明。
以下实施例，仅用于说明本发明，但不止用来限制本发明的范围。
基于本发明中的具体实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的情况下，所获得的其他所有实施例，都属于本发明的保护范围。
在本发明实施例中，若无特殊说明，所有原料组分均为本领域技术人员熟知的市售产品。
在本发明实施例中，若未具体指明，所用的技术手段均为本领域技术人员所熟知的常规手段。
在本发明实施例中，所使用的枯草芽孢杆菌X-003已于2002年12月25日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCNO：M202048。
所用的枯草芽孢杆菌X-003的发酵滤液采用如下方法制备：
S1、将冷冻保藏的枯草芽孢杆菌X-003菌株接种到液体培养基(蛋白胨10g，NaCl10g，酵母抽提物5g，琼脂20g，蒸馏水1000mL，pH 7.0)斜面上，37℃下培养24-48h，使其活化；
S2、将步骤S1活化了的种子液接种于装有液体培养基(蛋白胨10g，NaCl 10g，酵母抽提物5g，琼脂20g，蒸馏水1000mL，pH 7.0)的三角瓶内，37℃振荡培养4天(130rpm)，至中对数生长中期；
S3、步骤S2发酵液经5500rpm离心25min，取上清液，经孔径0.22μm的细菌过滤器过滤，除去菌体，制得发酵滤液。
经检测，发酵滤液中多糖和多肽的含量分别为1.8wt％和1.5wt％。
发酵滤液所用原料和仪器：
离心机：KUBOTA5500冷冻离心机，日本久保田。
液体培养基：购于南通凯恒生物科技发展有限公司。
分子量小于300kDa的聚谷氨酸钠：购于武汉骏安生物科技有限公司，规格型号：P-PGA(LM3)。
分子量大于700kDa的聚谷氨酸钠：购于武汉骏安生物科技有限公司，规格型号：Pro-PGA(HM110)。
实施例1
本实施例提供一种调节宠物皮肤微生态平衡的组合物。
1、原料组成
Figure BDA0002862620840000051
2、制备方法
按配比称取各组分，加入到混合罐中，混合均匀，即得。
实施例2
本实施例提供一种调节宠物皮肤微生态平衡的组合物。
1、原料组成
Figure BDA0002862620840000061
2、制备方法
按配比称取各组分，加入到混合罐中，混合均匀，即得。
实施例3
本实施例提供一种调节宠物皮肤微生态平衡的组合物。
1、原料组成
Figure BDA0002862620840000062
2、制备方法
按配比称取各组分，加入到混合罐中，混合均匀，即得。
对比例1
本对比例提供一种调节宠物皮肤微生态平衡的组合物。
1、原料组成
Figure BDA0002862620840000063
2、制备方法
按配比称取各组分，加入到混合罐中，混合均匀，即得。
对比例2
本对比例提供一种调节宠物皮肤微生态平衡的组合物。
1、原料组成
Figure BDA0002862620840000071
2、制备方法
按配比称取各组分，加入到混合罐中，混合均匀，即得。
实验例
1、试验效果对比：
(1)试验试剂
磷酸盐缓冲液(PBS，0.03mol/L)：分别称取2.83g无水磷酸氢二钠和1.36g磷酸二氢钾，加入到1000ml蒸馏水中，待完全溶解后，调pH至7.2-7.4，于121℃下压力蒸气灭菌20min备用。
胰蛋白胨大豆琼脂培养基(TSA)：胰蛋白胨1.5％，大豆蛋白胨0.5％，氯化钠0.5％，琼脂1.6％，用蒸馏水配制而成，调节pH为7.2±0.2，经121℃压力蒸汽灭菌后使用。
(2)试验菌及菌悬液
试验菌：金黄色葡萄球菌ATCC 6538和白色念珠菌ATCC 10231。
菌悬液制备：分别取试验菌菌株第3-14代的营养琼脂培养基斜面新鲜培养物(18-24h)，用5mL磷酸盐缓冲液(PBS，0.03mol/L)洗下菌苔，使菌悬浮均匀后用磷酸盐缓冲液(PBS，0.03mol/L)稀释至浓度为5.0×105CFU/mL-4.5×106CFU/mL，即得金黄色葡萄球菌菌悬液和白色念珠菌菌悬液。
(3)抑菌试验
分别取实施例1-3和对比例1-2所制备的组合物作为抑菌液，同时以磷酸盐缓冲液(PBS，0.03mol/L)做阳性对照液，开展抑菌试验，具体步骤如下：
S1、分别取无菌试管，先加入5.0mL抑菌液或阳性对照液，置于20℃±1℃水浴中，5min后，再加入0.1mL菌悬液，迅速混匀并立即计时；
S2、作用10min后，分别吸取1.0mL混合液，接种至洁净无菌的平皿中，加入胰蛋白胨大豆琼脂培养基(TSA)，按活菌培养计数方法测定存活菌数。
所有活菌培养均在35-37℃下进行，对金黄色葡萄球菌ATCC6538抑菌试验的培养时间为48h，对白色念珠菌ATCC 10231抑菌试验的培养时间为72h，最终观察结果。
各抑菌试验重复三次，并采用下式计算其抑菌率。
抑菌率＝(阳性对照液回收菌落数-抑菌液回收菌落数)/阳性对照液回收菌落数*100％。
(4)抑菌试验结果
抑菌试验结果如下表1-10所示。
表1实施例1组合物作为抑菌液对金黄色葡萄球菌的抑菌结果
Figure BDA0002862620840000081
表2实施例2组合物作为抑菌液对金黄色葡萄球菌的抑菌结果
Figure BDA0002862620840000082
Figure BDA0002862620840000091
表3实施例3组合物作为抑菌液对金黄色葡萄球菌的抑菌结果
Figure BDA0002862620840000092
表4对比例1组合物作为抑菌液对金黄色葡萄球菌的抑菌结果
Figure BDA0002862620840000093
表5对比例2组合物作为抑菌液对金黄色葡萄球菌的抑菌结果
Figure BDA0002862620840000094
表6实施例1组合物作为抑菌液对白色念珠菌的抑菌结果
Figure BDA0002862620840000095
Figure BDA0002862620840000101
表7实施例2组合物作为抑菌液对白色念珠菌的抑菌结果
Figure BDA0002862620840000102
表8实施例3组合物作为抑菌液对白色念珠菌的抑菌结果
Figure BDA0002862620840000103
表9对比例1组合物作为抑菌液对白色念珠菌的抑菌结果
Figure BDA0002862620840000104
表10对比例2组合物作为抑菌液对白色念珠菌的抑菌结果
Figure BDA0002862620840000105
Figure BDA0002862620840000111
分析表1-10的结果可知，本发明实施例所制备的组合物作为抑菌液对金黄色葡萄球菌和白色念珠菌的效果明显好于对比例所制备的组合物，且实施例所制备的组合物对金黄色葡萄球菌和白色念珠菌的抑菌率均大于90％，抑菌效果显著。
典型案例
以实施例3所制备的组合物作为抑菌液作用于有黑下巴的猫咪和有真菌性皮肤病的狗，一天2次，具体如下所述。
案例1
猫咪黑下巴发现时只有毛发黯黑(如图1-a所示)，未经处理，2周后，下巴已经大面积变黑，并伴有脱毛现象(如图1-b所示)；使用组合物1天后，黑色部分已经基本清除(如图1-c所示)。
案例2
两只猫咪的下巴和唇周均出现脱毛和部分毛色变黑的症状(如图2-a和图2-c所示)，诊断为由细菌和真菌感染引起的皮肤病，使用组合物3天后，都已经痊愈(如图2-b和图2-d所示)。
案例3
如图3-a所示，狗耳朵和身体后腹部结痂、部分毛发脱落，诊断为真菌性皮炎；每天涂抹实施例3所制备的组合物2次，一周后，如图3-b所示，均已痊愈。
最后，本发明的方法仅为较佳的实施方案，并非用于限定本发明的保护范围。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (7)

1.一种调节宠物皮肤微生态平衡的组合物，其特征在于，
其活性成分由芽孢杆菌代谢产物、壳聚糖和β-葡聚糖组成；
所述芽孢杆菌代谢产物由分子量小于300kDa的聚谷氨酸钠、分子量大于700kDa的聚谷氨酸钠和芽孢杆菌发酵滤液组成；
所述芽孢杆菌发酵滤液为枯草芽孢杆菌X-003的发酵滤液，所述枯草芽孢杆菌X-003的保藏编号为CCTCCNO：M202048；
所述组合物由以下重量份的组分组成：
Figure FDA0004117836790000011
2.根据权利要求1所述的调节宠物皮肤微生态平衡的组合物，其特征在于，
所述分子量小于300kDa的聚谷氨酸钠、分子量大于700kDa的聚谷氨酸钠和芽孢杆菌发酵滤液的质量比为0.05-1:0.05-1:70-99.9。
3.根据权利要求1所述的调节宠物皮肤微生态平衡的组合物，其特征在于，
所述枯草芽孢杆菌X-003的发酵滤液的制备方法如下：
S1、将冷冻保藏的枯草芽孢杆菌X-003菌株接种至液体培养基斜面上，在36.5-37.5℃下活化培养24-48h；
S2、将活化后的种子液接种至装有液体培养基的三角瓶内，在36.5-37.5℃下振荡培养3-6天，直至对数生长中期；
S3、将步骤S2得到的发酵液依次经离心和过滤后，即得。
4.根据权利要求3所述的调节宠物皮肤微生态平衡的组合物，其特征在于，
步骤S1和步骤S2中，所述液体培养基为蛋白胨10g、NaCl 10g、酵母抽提物5g、琼脂20g和蒸馏水1000mL，pH 7.0；
和/或，步骤S3中，所述离心的转速和时间分别为5350-5750rpm和20-30min，所述过滤采用的微孔滤膜孔径为0.22μm。
5.根据权利要求1-4任一项所述的调节宠物皮肤微生态平衡的组合物，其特征在于，
所述枯草芽孢杆菌X-003的发酵滤液中多糖和多肽的含量分别为1.5-3.8wt％和1.2-2.9wt％。
6.根据权利要求1所述的调节宠物皮肤微生态平衡的组合物，其特征在于，
由以下重量份的组分组成：
Figure FDA0004117836790000021
7.权利要求1-6任一项所述的组合物在制备调节宠物皮肤微生态平衡的药物中的应用。
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