CN112585120B - 一种血管紧张素ii受体2拮抗剂的盐型、晶型及其制备方法 - Google Patents

一种血管紧张素ii受体2拮抗剂的盐型、晶型及其制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种血管紧张素II受体2(AT2R)拮抗剂的盐型、晶型及其制备方法，还包括所述盐型和晶型在制备治疗慢性疼痛药物中的应用。

Description

一种血管紧张素II受体2拮抗剂的盐型、晶型及其制备方法
本申请主张如下优先权：
CN201811301892.3，申请日2018.11.02。
技术领域
本发明涉及一种血管紧张素II受体2(AT2R)拮抗剂的盐型、晶型及其制备方法，还包括所述盐型和晶型在制备治疗慢性疼痛药物中的应用。
背景技术
血管紧张素II(AngII)是由血管紧张素I在血管紧张素转化酶的作用下，水解产生的八肽物质,具有调节血压、体液平衡和痛觉感知等作用。血管紧张素受体是以血管紧张素作为配体的G蛋白偶联受体，是肾素-血管紧张素系统的重要组成部分。AngII可激活血管紧张素II受体1(AT1R)和血管紧张素II受体2(AT2R)。其中AT2R在神经系统中与疼痛机制相关,主要表达在背根神经节和三叉神经节。与正常神经相比，受损神经和疼痛神经瘤具有更高的AT2R表达。AT2R激活后通过G蛋白偶联受体活化的第二信使通路，可致敏神经元中的离子通道。敏化作用导致离子通道活化从而使神经元兴奋。AT2R拮抗剂已经通过动物实验、临床实验证明可用于缓解疼痛。
WO 2011088504公开了化合物EMA-401。
Figure BDA0002922340250000011
发明内容
本发明提供式(I)化合物。
Figure BDA0002922340250000012
本发明还提供式(I)化合物的A晶型，其特征在于其X射线粉末衍射图谱在下列2θ角处具有特征衍射峰：3.52±0.20°，6.04±0.20°，18.21±0.20°。
在本发明的一些方案中，上述A晶型的X射线粉末衍射图谱在下列2θ角处具有特征衍射峰：3.52±0.20°，6.04±0.20°，14.40±0.20°，15.11±0.20°，18.21±0.20°，18.46±0.20°，20.12±0.20°，24.13±0.20°。
在本发明的一些方案中，上述A晶型，其XRPD图谱如图1所示。
本发明的一些方案中，上述A晶型的XRPD图谱解析数据如表1所示：
表1
Figure BDA0002922340250000021
在本发明的一些方案中，上述A晶型的差示扫描量热曲线在155.36℃±3℃处具有吸热峰的起始点。
在本发明的一些方案中，上述A晶型的DSC图谱如图2所示。
在本发明的一些方案中，上述A晶型的热重分析曲线在100.00℃±3℃时失重达0.1489％。
在本发明的一些方案中，上述A晶型的TGA图谱如图3所示。
本发明还提供式(I)化合物A晶型的制备方法，包括：
Figure BDA0002922340250000031
(a)将式(I)化合物加入混合溶剂中溶解；
(b)30～50℃下搅拌10～30小时；
(c)过滤后水洗并在30～50℃干燥15～25小时；
其中，所述混合溶剂为丙酮和水的体积比为1:1.5～2.5。
本发明还提供式(I)化合物的B晶型，其特征在于其X射线粉末衍射图谱在下列2θ角处具有特征衍射峰：6.08±0.20°，12.12±0.20°，18.19±0.20°。
本发明还提供式(I)化合物的B晶型，其特征在于其X射线粉末衍射图谱在下列2θ角处具有特征衍射峰：6.08±0.20°，12.12±0.20°，18.19±0.20°，24.31±0.20°，30.50±0.20°。
在本发明的一些方案中，上述B晶型的X射线粉末衍射图谱在下列2θ角处具有特征衍射峰：3.52±0.20°，6.08±0.20°，9.25±0.20°，12.12±0.20°，14.00±0.20°，18.19±0.20°，24.31±0.20°，30.50±0.20°。
在本发明的一些方案中，上述B晶型的XRPD图谱如图4所示。
本发明的一些方案中，上述B晶型的XRPD图谱解析数据如表2所示：
表2
Figure BDA0002922340250000032
在本发明的一些方案中，上述B晶型的差示扫描量热曲线在150.95℃±3℃处具有吸热峰的起始点。
在本发明的一些方案中，上述B晶型的DSC图谱如图5所示。
在本发明的一些方案中，上述B晶型的热重分析曲线其热重分析曲线在120.00℃±3℃时失重达0.0558％。
在本发明的一些方案中，上述B晶型的TGA图谱如图6所示。
本发明还提供式(I)化合物B晶型的制备方法，包括：
(a)将式(I)化合物加入溶剂中使其成悬浊液；
(b)悬浊液35～45℃下搅拌30-60小时；
(c)离心后干燥8～16小时；
其中，所述溶剂选自甲醇、乙醇、乙腈；
或者所述的溶剂为混合溶剂，所述的混合溶剂为丙酮和水的体积比为3:2。
本发明还提供上述A晶型或B晶型在制备治疗慢性疼痛药物中的应用。
本发明还提供式式(I)化合物的制备方法，
Figure BDA0002922340250000041
其包含如下步骤：
Figure BDA0002922340250000042
其中，
R1选择Cl,Br和I；
溶剂F选自正庚烷、二氯甲烷、四氢呋喃、环己烷和二氧六环；
试剂G选自氧化银、硫酸镁、硫酸钙和硫酸钠。
在本发明的一些方案中，上述制备方法包含如下步骤：
Figure BDA0002922340250000051
其中，
溶剂H选自四氢呋喃、甲醇和水；
试剂I选自一水合氢氧化锂和氢氧化钠；
溶剂J选自二氯甲烷；
催化剂K选自N,N-二甲基甲酰胺；
试剂L选自草酰氯；
溶剂M选自二氯甲烷；
试剂N选自吡唑；
试剂O选自N-甲基吗啡啉；
溶剂P选自N,N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、二氯甲烷和四氢呋喃；
试剂Q选自四甲基胍、1,8-二氮杂二环十一碳-7-烯、三乙胺、二异丙基乙胺和2，6-二甲基吡啶。
在本发明的一些方案中，化合物1E和化合物1-0的摩尔比为1.2～5：1。
在本发明的一些方案中，化合物1-4和化合物D1-1的摩尔比为1.1～1.5：1。
在本发明的一些方案中，上述制备方法，其中，制备化合物1-1、1-2和1-3的步骤中，控制反应体系温度范围为25±5℃。
在本发明的一些方案中，化合物1-4的制备包括步骤a和步骤b，步骤a控制反应体系温度范围为25±5℃，步骤b向反应体系中投料时，控制反应体系温度范围为5±5℃，试剂投料完毕后，控制反应体系温度范围为25±5℃。
在本发明的一些方案中，溶剂F选自正庚烷，所述正庚烷的体积和化合物1-0的质量比为8.0～10.0：1，试剂G选自氧化银、硫酸镁，所述氧化银、硫酸镁和化合物1-0的摩尔比为1.0～5.0：1。
在本发明的一些方案中，试剂G在投料过程中分批次加入。
在本发明的一些方案中，溶剂H为混合物，选自四氢呋喃和水，所述四氢呋喃和水的体积比为1～2:1，试剂I为一水合氢氧化锂，所述一水合氢氧化锂和化合物1-0的摩尔比为1.0～2.0:1，溶剂J和化合物1-3的质量比为10:1，催化剂K和化合物1-3的摩尔比为0.002～0.004:1，试剂L和化合物1-3的摩尔比为1.2～2.0:1，溶剂M和化合物1-3的质量比为6～10:1，试剂N和化合物1-3的摩尔比为1.0～1.5:1，试剂O和化合物1-3的摩尔比为1.0～1.5:1，溶剂P选自N,N-二甲基甲酰胺，所述选自N,N-二甲基甲酰胺和化合物1-4的质量比为10：1，试剂Q选自四甲基胍，所述选自四甲基胍和化合物1-4的摩尔比为1～1.2：1。
技术效果
本发明化合物在体外展现较好的生物活性，并在多种属中展现了优良的药代性质。其晶型稳定、引湿性弱。
定义和说明
除非另有说明，本文所用的下列术语和短语旨在含有下列含义。一个特定的短语或术语在没有特别定义的情况下不应该被认为是不确定的或不清楚的，而应该按照普通的含义去理解。当本文出现商品名时，旨在指代其对应的商品或其活性成分。
本发明的中间体化合物可以通过本领域技术人员所熟知的多种合成方法来制备，包括下面列举的具体实施方式、其与其他化学合成方法的结合所形成的实施方式以及本领域技术上人员所熟知的等同替换方式，优选的实施方式包括但不限于本发明的实施例。
本发明具体实施方式的化学反应是在合适的溶剂中完成的，所述的溶剂须适合于本发明的化学变化及其所需的试剂和物料。为了获得本发明的化合物，有时需要本领域技术人员在已有实施方式的基础上对合成步骤或者反应流程进行修改或选择。
下面会通过实施例具体描述本发明，这些实施例并不意味着对本发明的任何限制。
本发明所使用的所有溶剂是市售的，无需进一步纯化即可使用。
本发明采用下述缩略词：r.t.代表室温；THF代表四氢呋喃；NMP代表N-甲基吡咯烷酮；MeSO3H代表甲烷磺酸；DME代表乙二醇二甲醚；DCM代表二氯甲烷；Xphos代表2-双环己基膦-2’4’6’-三异丙基联苯；EtOAc代表乙酸乙酯；MeOH代表甲醇；acetone代表丙酮；2-Me-THF代表2-甲基四氢呋喃；IPA代表异丙醇；HATU代表2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯。
化合物经手工或者
Figure BDA0002922340250000061
软件命名，市售化合物采用供应商目录名称。
本发明粉末X-射线衍射(X-ray powder diffractometer,XRPD)方法
仪器型号：布鲁克D8 advance X-射线衍射仪
测试方法：大约10～20mg样品用于XRPD检测。
详细的XRPD参数如下：
光管：Cu,kα,
Figure BDA0002922340250000071
光管电压：40kV，光管电流：40mA
发散狭缝：0.60mm
探测器狭缝：10.50mm
防散射狭缝：7.10mm
扫描范围：3-40deg或4-40deg
步径：0.02deg
步长：0.12秒
样品盘转速：15rpm
本发明差热分析(Differential Scanning Calorimeter,DSC)方法
仪器型号：TA Q2000差示扫描量热仪
测试方法：取样品(～1mg)置于DSC铝锅内进行测试，在50mL/min N2条件下，以10℃/min的升温速率，加热样品从室温到250℃(或280℃)。
本发明热重分析(Thermal Gravimetric Analyzer,TGA)方法
仪器型号：TA Q5000热重分析仪
测试方法：取样品(2～5mg)置于TGA铂金锅内进行测试，在25mL/min N2条件下，以10℃/min的升温速率，加热样品从室温到30℃或失重20％。
本发明动态蒸汽吸附分析(Dynamic Vapor Sorption,DVS)方法
仪器型号：SMS DVS Advantage动态蒸汽吸附仪
测试条件：取样品(10～15mg)置于DVS样品盘内进行测试。
详细的DVS参数如下：
温度：25℃
平衡：dm/dt＝0.01％/min(最短：10min，最长：180min)
干燥：0％RH下干燥120min
RH(％)测试梯级：10％
RH(％)测试梯级范围：0％-90％-0％
引湿性评价分类如下：
Figure BDA0002922340250000072
Figure BDA0002922340250000081
*在25℃和80％RH下的引湿增重
本发明高效液相色谱(High Performance Liquid Chromatograph,HPLC)方法
详细的参数如下：
Figure BDA0002922340250000082
附图说明
图1为式(I)化合物A晶型的Cu-Kα辐射的XRPD谱图；
图2为式(I)化合物A晶型的DSC谱图；
图3为式(I)化合物A晶型的TGA谱图；
图4为式(I)化合物B晶型的Cu-Kα辐射XRPD谱图；
图5为式(I)化合物B晶型的DSC谱图；
图6为式(I)化合物B晶型的TGA谱图；
图7为式(I)化合物B晶型的DVS谱图。
具体实施方式
为了更好的理解本发明的内容，下面结合具体实施例来做进一步的说明，但具体的实施方式并不是对本发明的内容所做的限制。
参考例1：化合物S-A1的制备
Figure BDA0002922340250000091
步骤1：化合物S-A1-1的制备
将氧化银(1.5g,6.6mmol)加到化合物S-扁桃酸(500.0mg,3.3mmol)和溴代环戊烷(49.0g,328.6mmol)的混合液中，然后在20-25℃条件下搅拌反应16小时。将反应液过滤，滤液真空浓缩除去溶剂得到的粗产物经硅胶层析柱(洗脱液：乙酸乙酯/石油醚0-10％)分离纯化得到化合物S-A1-1。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.49-7.40(m,2H),7.38-7.28(m,3H),5.22-5.19(m,1H),4.88(s,1H),4.03-3.99(m,1H),1.89-1.64(m,10H),1.57-1.45(m,6H).MS m/z:311.1[M+Na]+.
步骤2：化合物S-A1的制备
将化合物S-A1-1(340.0mg,1.2mmol)溶于四氢呋喃(6.0mL)和水(3.0mL)的混合溶剂中，加入一水合氢氧化锂(283.0mg,11.8mmol)，反应液在20-25℃下搅拌48小时。反应液用1N盐酸调节pH<3后，用乙酸乙酯(20mL x 3)萃取。合并后的有机相用饱和食盐水(50mL)洗涤、无水硫酸钠干燥、真空下浓缩得到的粗产物经硅胶层析柱(洗脱液：0-37.5％石油醚/乙酸乙酯)分离纯化，得到化合物S-A1。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.45-7.34(m,5H),4.93(s,1H),4.07-4.03(m,1H),1.78-1.69(m,6H),1.62-1.48(m,2H).SFC:柱子：ChiralCel OJ-H(150mm*4.6mm,5um)；流动相：A:CO2,B:乙醇[0.05％二乙基胺]；B％:5％-40％5.5min，40％3min，5％1.5min；Rt＝2.321min；95.6％ee.
参考例2：化合物(-)-C1的制备
Figure BDA0002922340250000092
步骤1：化合物C1-2的制备
氮气保护下，将化合物C1-1(200.0g,1.31mol)溶于无水乙醇(1.50L)中。15℃搅拌下依次加入无水碳酸钾(181.1g,1.31mol)和苄溴(268.9g,1.57mol)，再将反应液加热至100℃继续搅拌15小时。反应液冷却到室温后，过滤，滤液在真空下浓缩后得到的油状物。用乙酸乙酯(3.0L)重新溶解后，依次用2N氢氧化钠水溶液(500mL x 2)和饱和食盐水(600mLx 2)洗涤、无水硫酸钠干燥、过滤、真空下浓缩得到粗产物。将粗产物分散在石油醚中，搅拌1小时，过滤得到化合物C1-2。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ10.25(s,1H),7.42-7.34(m,6H),7.21-7.12(m,2H),5.19(s,2H),3.96(s,3H).
步骤2：化合物C1-3的制备
氮气保护下，将化合物C1-2(220.0g,908.08mmol)、2-硝基乙酸乙酯(145.0g,1.09mol)和二乙基胺盐酸盐(149.3g,1.36mol)在无水甲苯(2.1L)中的混合溶液加热至130℃回流15小时，反应生成的水使用Deane-Stark分水器分离。反应液冷却至室温后，真空下浓缩除去甲苯。剩余物重新溶解在二氯甲烷中(500mL)后，用饱和食盐水(1000mL x 2)洗涤、无水硫酸钠干燥、过滤、真空下浓缩得到化合物C1-3，该化合物未经纯化直接用于下一步反应。
步骤3：化合物C1-4的制备
氮气保护下，将上述步骤2中得到的粗品化合物C1-3(430.0g,1.2mol)溶于异丙醇(2.2g,36.0mmol)和氯仿(4.5L)中，混合液冷却至0℃后，搅拌中加入100～200目的硅胶(1.8kg)，然后在1.5小时内分批加入硼氢化钠(201.1g,5.3mol)。反应液升温至15℃后继续搅拌反应12小时。缓慢加入乙酸(210mL)后继续搅拌15分钟，过滤反应液，滤饼用二氯甲烷(500mL)洗涤。合并后的滤液在真空下浓缩后得到的剩余物经硅胶层析柱(洗脱液：6％～10％石油醚/乙酸乙酯)分离纯化，得到化合物C1-4。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.48-7.33(m,5H),7.02-6.97(m,1H),6.94-6.90(m,1H),6.64-6.62(dd,J＝1.6,7.6Hz,1H),5.33-5.30(dd,J＝6.0,9.2Hz,1H),5.19-5.05(m,2H),4.15-4.10(q,J＝7.2Hz,2H),3.91(s,3H),3.44-3.31(m,2H),1.16-1.12(t,J＝7.2Hz,3H).
步骤4：化合物C1-5的制备
15℃下，将化合物C1-4(76.2g,212.04mmol)溶解在乙酸(700mL)中，缓慢加入锌粉(110.9g,1.70mol)并保持反应温度在60-65℃之间，加完后，继续在60℃下搅拌反应2小时。反应液冷却至室温后，过滤，滤饼用乙酸(300mL)洗涤。合并后的滤液在真空下浓缩得到的剩余物重新溶解在二氯甲烷(500mL)中，用饱和碳酸氢钠水溶液(200mL x 2)和饱和食盐水(200mL x 2)洗涤、无水硫酸钠干燥、过滤、真空下浓缩得到粗产物C1-5，该化合物未经纯化直接用于下一步。MS m/z:330.1[M+1]+.
步骤5：化合物C1的制备
15℃氮气保护下，将化合物C1-5(48.9g,149.4mmol)溶解在2N盐酸溶液(500mL)中，随后加入37％甲醛水溶液(36.4g,448.1mmol)，反应液搅拌25小时。过滤，滤饼用水(100mL)洗涤、真空干燥后得到化合物C1的盐酸盐。MS m/z:342.1[M+1]+.
步骤6：化合物(-)-C1和(+)-C1的制备
化合物C1(40.0g,117.2mmol)经手性柱分离得到两个异构体(-)-C1和(+)-C1。
(-)-C1:1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.40-7.38(m,2H),7.33-7.22(m,3H),6.73-6.71(m,2H),4.93-4.92(m,2H),4.17-4.15(q,J＝7.2Hz,2H),4.10-3.93(m,2H),3.79(s,3H),3.62-3.58(m,1H),3.07-3.06(m,1H),2.77-2.65(m,1H),1.21(t,J＝7.2Hz,3H).MS m/z:342.1[M+1]+.[α]＝-23.4.
(+)-C1:1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.43-7.40(m,2H),7.33-7.22(m,3H),6.86(s,2H),5.06-4.95(q,J＝11.2Hz,2H),4.54-4.50(m,1H),4.33-4.21(m,3H),4.07-4.05(m,1H),3.88(s,3H),3.34-3.25(m,1H),3.20-3.14(m,1H),1.30-1.26(t,J＝7.2Hz,3H).MS m/z:342.1[M+1]+.[α]＝+9.8.
参考例3：化合物D1的制备
Figure BDA0002922340250000111
步骤1：化合物D1-1的制备
将丙酮(21.2L)加入50L的反应釜中，启动搅拌，然后依次将起始原料D1-0(2.69kg)，碳酸钾(3.48kg)和溴化苄(3.39kg)加入到反应釜中，反应液在55～60℃搅拌18小时左右。反应液降温至10～20℃，减压抽滤，滤饼用丙酮洗涤(2L，1.5L)。将滤液转入旋转蒸发仪，在外温40-45℃下减压浓缩，所得粗品溶于乙酸乙酯(26L)中，依次用13L水洗两次(每次6.5L)、13L饱和氯化钠水溶液两次(每次6.5L)，有机相用无水硫酸钠(1.5kg)干燥，过滤，滤液在外温40-45℃下减压浓缩，与另一批次合并处理，所得粗品继续加入30L石油醚，在外温0-5℃下搅拌21小时，过滤，滤饼用4L石油醚洗涤两次(每次2L)，所得滤饼经硅胶柱层析(洗脱剂：0-10％乙酸乙酯/石油醚)分离纯化，得到化合物D1-1。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ10.25(s,1H),7.41-7.36(m,6H),7.17-7.07(m,2H),5.19(s,2H),3.95(s,3H)。
步骤2：化合物D1-3的制备
将四氢呋喃(5.0L)加入50L的反应釜中，启动搅拌，然后依次将起始原料D1-2(3.21kg)和四甲基胍(1.31kg)加入到反应釜中，降温，滴加原料A-1(2.3kg)的四氢呋喃(4.8L)溶液，并保持内温不超10℃，反应液在20～30℃搅拌16小时左右。反应液在外温35-40℃下减压浓缩，所得粗品溶于乙酸乙酯(20L)中，依次用8L10％的柠檬酸水溶液洗、10L饱和氯化钠水溶液两次(每次5L)，有机相用无水硫酸钠(1.0kg)干燥，过滤，滤液在外温35-40℃下减压浓缩，所得粗产物经硅胶柱层析(洗脱剂：0-30％乙酸乙酯/石油醚)分离纯化，得到化合物D1-3。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.38-7.32(m,5H),7.08-7.03(m,2H),6.94-6.91(m,1H),4.98(s,2H),3.90(s,3H),3.84(s,3H),1.39(s,9H)。
步骤3：化合物D1-4的制备
将双(1,5-环辛二烯)-三氟甲磺酸铑(I)(249.20mg)和(+)-1,2-双[(2S,5S)-2,5-二乙基-1-亚磷基]苯(210.40mg)溶于甲醇(20mL)中，混合液在氮气保护下搅拌15分钟，在氩气氛围下加入到化合物D1-3(200g)的甲醇(1L)溶液中，用氩气置换三次，用氢气置换三次，反应液在氢气(50psi)氛围和20～25℃条件下搅拌18小时。减压除去有机溶剂，所得粗产物合并其他批次，通过硅胶过滤，得到化合物D1-4。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.54-7.46(m,2H),7.41-7.35(m,3H),7.03-7.00(m,1H),6.90-6.86(m,1H),6.76-6.74(m,1H),5.35-5.32(m,1H),5.05(s,2H),4.49-4.44(m,1H),3.90(s,3H),3.62(s,3H),3.06-2.95(m,2H),1.39(s,9H)。SFC:柱子：Lux Cellulose-2(150mm*4.6mm,3um)；流动相：B:异丙醇[0.05％乙基胺]；B％:5％-40％5.5min，40％3min，5％1.5min；Rt＝3.247min；97.8％ee.
步骤4：化合物D1-5的制备
将一水合氢氧化锂(0.76kg)溶于水(16.0L)中，滴加化合物A-4(3.69kg)的四氢呋喃(10.6L)溶液，并保持内温不超过15℃，反应液在10～20℃条件下搅拌18小时。用饱和柠檬酸水溶液调节pH至5左右，减压除去有机溶剂，所得粗产物加入到16.0L乙酸乙酯中，分液，有机相用10％的柠檬酸水溶液洗涤(8L)，10％的氯化钠水溶液洗涤三次(每次6.0L)，1.0kg无水硫酸钠干燥，过滤，减压除去有机溶剂，得到化合物D1-5。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.49-7.33(m,5H),7.03-7.00(m,1H),6.90-6.86(m,1H),6.76-6.74(m,1H),5.47-5.45(m,1H),5.11(s,2H),4.49-4.44(m,1H),3.90(s,3H),3.06-2.95(m,2H),1.39(s,9H)。
步骤5：化合物D1-6的制备
将乙酸乙酯(4.0L)加入到10L三口瓶中，干冰乙醇冷却，冲入氯化氢气体(900.0g)，继续加入1L乙酸乙酯稀释成4M氯化氢乙酸乙酯溶液，备用。将化合物A-5(1.5kg)溶于乙酸乙酯(10.0L)中，加入4M的氯化氢乙酸乙酯溶液，并保持内温不超过10℃，反应液在5～15℃条件下搅拌2小时。加入6.0L异丙醚，反应液在5～10℃条件下继续搅拌16小时。过滤，滤饼用异丙醚洗涤两次(每次1.2L)，得到化合物D1-6。
1H NMR(400MHz,CD3OD):δ7.49-7.44(m,2H),7.37-7.33(m,3H),7.09-7.04(m,2H),6.83-6.80(m,1H),5.19-5.07(m,2H),4.18-4.14(m,1H),3.93(s,3H),3.33-3.28(m,1H),2.90-2.84(m,1H)。
步骤6：化合物D1的制备
将化合物D1-6(2.24kg)平均分成8个批次(302.56g)游离，每个批次加入水(4.8L)中，滴加碳酸钠(53.96g)的水(302.5mL)溶液，反应液搅拌0.5小时，合并过滤后的滤饼，用水(6.2L)洗涤一次。将游离后的滤饼加入到水(22.0L)中，依次加入85％的磷酸(850.0mL)和37％的甲醛水溶液(900.0mL)，反应液升温至55～65℃条件下继续搅拌16小时。滴加乙酸钠(988.7g)的水(3.0L)溶液，调节pH至3左右，过滤，滤饼用水洗涤四次(每次6.0L)，用丙酮洗涤一次(12.0L)，真空干燥，得到化合物D1。
1H NMR(400MHz,CD3OD):δ7.49-7.30(m,5H),7.02-6.93(m,2H),5.04(s,2H),4.30-4.20(m,2H),3.89(s,3H),3.74-3.70(m,1H),3.54-3.48(m,1H),2.92-2.84(m,1H)。
实施例1：式(I)化合物的制备
Figure BDA0002922340250000131
步骤1：化合物I-1的制备
将化合物(-)-C1(155.00mg,454.00μmol)和化合物S-A1(90.00mg,408.60μmol)溶于二氯甲烷(5.00mL)中，依次加入HATU(259.00mg,681.00μmol)和二异丙基乙基胺(118.00mg,912.54μmol,159.46μL)，反应液在20-25℃继续搅拌16小时。反应液倒入15mL水中，分液，水相用二氯甲烷萃取3次(20mL*3)，合并后的有机相用30mL饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥，真空干燥得到粗品。通过硅胶柱层析(洗脱剂：0-50％石油醚/乙酸乙酯)分离纯化，得到化合物I-1。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:7.50-7.20(m,10H),6.84(m,1H),6.66(d,J＝8.0Hz,0.5H),6.43(d,J＝12.0Hz,0.5H),5.50-5.48(m,0.5H),5.32(d,J＝8.0Hz,1H),5.07-4.76(m,3H),4.60(d,J＝16.0Hz,0.5H),4.51-4.45(m,1H),4.18-4.07(m,2H),3.84(d,J＝12Hz,3H),3.66-3.61(m,0.5H),3.55-3.40(m,1H),3.17-3.11(m,0.5H),2.99-2.93(m,0.5H),2.74-2.68(m,0.5H),1.90-1.70(m,5H),1.60-1.57(m,3H),1.29-1.17(m,3H).MSm/z＝544.4[M+H]+.SFC:柱子：ChiralPak AD-3(150mm*4.6mm,3μm)；流动相：A:CO2,B:异丙醇[0.05％二乙基胺]；B％:5％-40％5.5min，40％3min，5％1.5min；Rt＝5.034min；86.3％de.
步骤2：化合物I的制备
将化合物I-1(163.00mg,299.83μmol)溶于四氢呋喃(3.00mL)中，加入氢氧化锂(72.00mg,3.01mmol)的水(1.50mL)溶液，反应液在15-20℃继续搅拌48小时。反应液中加入1M的盐酸水溶液，调节pH<4，用乙酸乙酯萃取(15mL*3)，合并后的有机相用30mL饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥，减压除去有机溶剂，所得粗产物通过硅胶柱层析(洗脱剂：0-20％二氯甲烷/甲醇)分离纯化，所得化合物再次通过手性柱分离，得到化合物I。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ7.53-7.16(m,10H),7.00-6.80(m,1.5H),6.68(d,J＝8.0Hz,0.5H),5.36(d,J＝12.0Hz,1H),5.01-4.66(m,3H),4.41(d,J＝24.0Hz,0.5H),4.30(d,J＝24Hz,0.5H),4.13-3.95(m,1H),3.79(s,3H),2.84-2.79(m,1H),2.68-2.64(m,1H),2.39-2.27(m,1H),1.80-1.38(m,8H).MS m/z:516.3[M+1]+.SFC:柱子：Chiralpak AD-3(100mm*4.6mm,3μm)；流动相：B:异丙醇[0.05％二乙基胺]；B％:5％-40％4.5min,40％2.5min,5％1min；Rt＝4.198min；100.0％de.
实施例2.式(I)化合物的A晶型的制备：
Figure BDA0002922340250000141
步骤1：化合物1-1和1-2的制备
将正庚烷(8.0L)加入到50L的反应釜中，启动搅拌，依次将起始原料1-0(1.0kg)，溴代环戊烷(3.4kg)，硫酸镁(1.0kg)，氧化银(2.0kg)加入到反应釜中，反应液在20～30℃搅拌19小时左右，补加硫酸镁(0.3kg)和氧化银(0.7kg)，反应液在20～30℃继续搅拌反应46小时左右。反应液经硅胶(100-200目，2.0kg)在桌面式抽滤漏斗减压抽滤，滤饼用12.0L二氯甲烷分三次洗涤，每次加二氯甲烷4.0L。将滤液转入旋转蒸发仪，在外温35-40℃下减压浓缩，得到化合物1-1和1-2的混合物，该混合物不经进一步纯化直接用于下一步反应。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.49-7.43(m,2H),7.40-7.29(m,3H),4.95(s,1H),4.04-3.96(m,1H),3.72(s,3H),1.81-1.69(m,6H),1.58-1.46(m,2H)。
步骤2：化合物1-3的制备
将四氢呋喃(5.3L)加入到50L反应釜中，启动搅拌，将化合物1-1和1-2的混合物(1.3kg)加入，加入一水合氢氧化锂(0.3kg)的水(2.7L)溶液，反应液在20～30℃下继续搅拌4小时。向反应液中加入正庚烷(10.5L)，搅拌10分钟，分液，水相用2M氯化氢水溶液调pH至3-4，用16.0L二氯甲烷萃取两次，每次8.0L，合并后的有机相用无水硫酸钠(1.0kg)干燥，过滤，滤液在外温35-40℃下减压浓缩得到化合物1-3。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.41-7.29(m,5H),4.88(s,1H),4.00-3.94(m,1H),1.74-1.57(m,6H),1.52-1.43(m,2H)。
步骤3：化合物1-4的制备
将二氯甲烷(12.0L)加入到50L反应釜中，加入化合物1-3(1.2kg)，启动搅拌，加入N,N-二甲基甲酰胺(12.0g)，滴加草酰氯(1.04kg)，滴加在1.5小时内完成，反应液在20～30℃搅拌1小时。将反应液在外温35-40℃下减压浓缩，得到的粗品备用。将二氯甲烷(8.0L)加入50L反应釜中，氮气置换两次，启动搅拌，依次加入吡唑(0.4kg)和N-甲基吗啡啉(0.7kg)，降温至0-10℃，氮气置换一次，将上述粗品溶于二氯甲烷(4.0L)中配制成溶液，缓慢滴加入反应釜中，滴加完毕后，氮气置换一次，反应液升温至20～30℃继续搅拌16小时左右。将反应液依次用10.0L 1M硫酸水溶液洗两次(每次5.0L)、11.0L饱和碳酸氢钠水溶液洗两次(每次5.5L)、7.0L水洗一次、8.0L饱和氯化钠溶液洗一次，有机相用无水硫酸钠(0.5kg)干燥，过滤，滤液在外温35-40℃下减压浓缩得到粗品。将粗品分散于7.2L正己烷中，反应液升温至65～75℃搅拌2小时，降温至15～25℃，继续搅拌16小时。过滤，滤饼用正己烷洗涤两次(每次600.0mL)，滤饼在外温20-30℃下减压干燥5小时，得到化合物1-4。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.24(d,J＝2.8Hz,1H),7.73(s,1H),7.59(d,J＝6.8Hz,2H),7.41-7.27(m,3H),6.43(dd,J＝1.5,2.8Hz,1H),6.36(s,1H),4.21-3.98(m,1H),1.87-1.67(m,6H),1.57-1.43(m,2H)。
步骤4：式(I)化合物的A晶型的制备
将N,N-二甲基甲酰胺(12.0L)加入到50L反应釜中，启动搅拌，依次加入化合物D-1(1220.3g)和四甲基胍(493.8g)，反应液在15～25℃下搅拌1小时，将化合物1-4(1211.6g)加入到反应釜中，反应液在15～25℃继续搅拌17小时。将反应液倒入12.0L水中，用2M盐酸水溶液调pH至3，用24.0L乙酸乙酯萃取两次(每次12.0L)，合并后的有机相用12.0L水洗三次(每次4.0L)，饱和氯化钠水溶液(3.0L)洗一次，无水硫酸钠(500.0g)干燥，过滤，滤液在35～40℃条件下减压浓缩得到粗品。将丙酮(4.0L)、水(8.0L)和粗品依次加入到50L反应釜中，反应液35～45℃搅拌20小时，过滤，滤饼用8.0L水洗涤两次(每次4.0L)，滤饼于在40℃条件下用真空干燥箱干燥21小时，得式(I)化合物的A晶型。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.68(brs,1H),7.48-7.30(m,10H),6.95-6.70(m,2H),5.38-5.21(m,1.5H),4.96-4.69(m,3.5H),4.42-4.32(m,1H),4.10-3.95(m,1H),3.80(s,3H),3.39-3.36(m,0.5H),3.24-3.19(m,0.5H),2.88-2.70(m,0.5H),2.48-2.42(m,0.5H),1.73-1.48(m,8H)。LCMS(ESI)m/z:516.0[M+1]+。
实施例3：式(I)化合物B晶型的制备
约50mg式(I)化合物A晶型加入适量的甲醇。将样品液置于磁力搅拌器上(40℃)搅拌2天。将得到的有固体体系离心得到沉淀，溶液在室温下挥发溶剂结晶。随后放置在真空干燥箱中室温下干燥过夜，得式(I)化合物的B晶型。
约50mg式(I)化合物A晶型加入适量的乙醇。将样品液置于磁力搅拌器上(40℃)搅拌2天。将得到的有固体体系离心得到沉淀，溶液在室温下挥发溶剂结晶。随后放置在真空干燥箱中室温下干燥过夜，得式(I)化合物的B晶型。
约50mg式(I)化合物A晶型加入适量的乙腈。将样品液置于磁力搅拌器上(40℃)搅拌2天。将得到的有固体体系离心得到沉淀，溶液在室温下挥发溶剂结晶。随后放置在真空干燥箱中室温下干燥过夜，得式(I)化合物的B晶型。
约50mg式(I)化合物A晶型加入适量的混合溶剂丙酮:水(3:2)。将样品液置于磁力搅拌器上(40℃)搅拌2天。将得到的有固体体系离心得到沉淀，溶液在室温下挥发溶剂结晶。随后放置在真空干燥箱中室温下干燥过夜，得式(I)化合物的B晶型。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.68(brs,1H),7.48-7.30(m,10H),6.95-6.70(m,2H),5.38-5.21(m,1.5H),4.96-4.69(m,3.5H),4.42-4.32(m,1H),4.10-3.95(m,1H),3.80(s,3H),3.39-3.36(m,0.5H),3.24-3.19(m,0.5H),2.88-2.70(m,0.5H),2.48-2.42(m,0.5H),1.73-1.48(m,8H)。
LCMS(ESI)m/z:516.0[M+1]+。
实施例4：式(I)化合物B晶型的吸湿性研究
实验材料：
SMS DVS Advantage动态蒸汽吸附仪
实验方法：
取式(I)化合物B晶型10～15mg置于DVS样品盘内进行测试。
实验结果：
式(I)化合物B晶型的DVS谱图如图所示，ΔW＝0.05327％。
实验结论：
式(I)化合物B晶型在25℃和80％RH下的吸湿增重为0.05327％，几乎无引湿性。
实施例5：式(I)化合物B晶型的固体稳定性试验
依据《原料药与制剂稳定性试验指导原则》(中国药典2015版四部通则9001)，考察式(I)化合物B晶型在高温(60℃，敞口)，高湿(室温/相对湿度92.5％，敞口)及光照(总照度1.2×106Lux·hr/近紫外200w·hr/m2，敞口)条件下的稳定性。
根据影响因素和加速试验条件，准确称取化合物B晶型约5mg，一式两份，置于40mL玻璃样品瓶的底部，摊成薄薄一层。分别放置在高温(60℃)、高湿(92.5％湿度，室温)、高温高湿(40℃/75％湿度、60℃/75％湿度)和光照稳定性条件下。敞口条件在在铝箔纸上扎些小孔，保证样品能与环境空气充分接触；强光照条件下放置的样品用螺纹瓶盖密封。在高温(60℃)和高湿(92.5％湿度，室温)条件下放置的样品于第5天，10天取样检测(XRPD和纯度)，在高温高湿(40℃/75％湿度、60℃/75％湿度)条件下放置的样品于第10天，1个月，2个月，3个月取样检测(XRPD和纯度)，光照射条件下放置的样品于总光照度达到1.2×106Lux·hr时取样检测，检测结果与0天的初始检测结果进行比较，试验结果见下表3所示：
表3式(I)化合物B晶型的固体稳定性试验结果
Figure BDA0002922340250000171
结论：式(I)化合物B晶型在影响因素高温、高湿、强光照条件以及加速条件下具有良好的晶型和化学稳定性。
实施例6：式(I)化合物的hAT2受体结合实验
试剂：
溶液与缓冲液
缓冲液
50mM Tris
100mM NaCl
5mM MgCl2
0.1％BSA
蛋白酶抑制剂混合物，不含乙二胺四乙酸-1片(Roche#11873580001)(50mL加一片)
pH 7.4
实验方法与步骤：
1.化合物的配置
参考配体PD123319和测试化合物用DMSO制备成750μM的母液；把每个化合物配置成8个浓度梯度(最高浓度为750uM,3倍稀释)，并加入10ul/孔到384孔板的母版里。
SPA beads用缓冲液配置成25mg/ml的母液；
同位素[125I]-Sar1-Ile8-Angiotensin II加纯水配置50uCi/ml的母液。
2.膜的配置
HEK-293细胞过表达hAT2的细胞膜用缓冲液制备成2.5mg/ml。
3.具体操作
用ECHO从母板中吸入200nl的化合物到测试384板的每个孔。ZPE加入等体积的DMSO。(测试化合物在反应中的浓度将稀释250倍)。
配置50ml含有10μg/μl的磁珠、0.05μg/μl的AT2膜溶液，置于摇床上混匀。(100rpm,30min)。测试板中最终含有1.25μg/孔的hAT2膜，250μg/孔的磁珠。
用Multidrop Combi移液器把3.2的膜混合液加入到化合物测试板，每孔加入25μl。
用50uCi/ml的同位素[125I]-Sar1-Ile8-Angiotensin II母液用缓冲液制备成0.2nM的溶液，用Multidrop Combi移液器把0.2nM的125I加入到化合物测试板中，每孔加入25μl的体积。125I同位素的终浓度是0.1nM。
把配置好的测试板置于摇床上，200rpm，室温过夜。
测试板用离心机离心，1200rpm,1min
将离心后的测试板用Microbeta读数。
实验结果：见表4。
表4.式(I)化合物的体外评价
化合物编号 hAT2 IC<sub>50</sub>(nM)
EMA-401 53.2
(I) 4.1
结论：结果显示式(I)化合物与EMA-401相比具有良好的体外活性。
实施例6：式(I)化合物的动力学溶解度的测定
将待测化合物溶解在DMSO中，以制备10mmol/L的原液。用移液管(EppendorfResearch公司)将980μL溶出介质加入到2mL的螺旋盖的玻璃管形瓶中。将20μL各受试化合物的原液以及QC样品添加到相当于pH 7.4的动力学检测溶液的缓冲溶液中。受试化合物和DMSO溶液的终浓度分别是为200μM和2％。药瓶压盖。最大浓度的理论值为200μM。室温下以每分钟880转的速度旋转摇动该混合物24小时。将小瓶离心30分钟，每分钟13000转。用数字移液管将200μL上清液加入到96-孔板中。用高效液相色谱法光谱测定的受试化合物的溶解度，实验结果见表5。
表5.式(I)化合物的动力学溶解度的测定
化合物 溶解度(μM)@pH＝7.4
EMA401 191.7
(I) >200.0
结论：结果显示式(I)化合物具有良好的溶解度(在pH＝7.4)。
实施例7：式(I)化合物的人肝微粒体CYP抑制实验
研究项目的是采用每个同工酶的特异性探针底物来评价待测化合物对人肝微粒体细胞色素P450同工酶(CYP1A2、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6和CYP3A4)的抑制性。
混合人肝微粒体(pooled HLM,n≥50)购自Corning Inc.(Steuben,New York,USA)或者其他有资质的供应商，使用前都储存在低于-60℃冰箱。
将稀释好的系列浓度的待测化合物工作液加入到含有人肝微粒体、探针底物和循环体系的辅助因子的孵育体系中，甲醇含量约为终孵育体系的1％(v/v)。不含待测化合物而含有溶剂的对照作为酶活性对照(100％)。分析物在样品中的浓度采用液相色谱-串联质谱(LC/MS/MS)方法进行测定。使用样品(空白溶剂、阳性对照抑制剂或者待测化合物)浓度的平均值进行计算。应用SigmaPlot(V.11)对待测化合物平均百分比活性对浓度作非线性回归分析。通过三参数或四参数反曲对数方程来计算IC50值。实验结果见表6。
表6.式(I)化合物的人肝微粒体CYP抑制实验
Figure BDA0002922340250000191
结论：式(I)化合物对五个CYP同工酶没有抑制作用，或抑制作用均较弱，预示在人体内发生药物-药物相互作用的可能性较少。
实施例8：式(I)化合物在CACO-2细胞的双向渗透性研究
测定待测化合物在Caco-2细胞的双向渗透性，并且测试待测化合物是否被外排转运。
实验方法：
储备液的配制
将化合物溶解于二甲基亚砜(DMSO)或其他适宜的溶剂，配制成合适浓度的储备液。
合适的内标(internal standard,IS)溶解于乙腈(acetonitrile，ACN)或其它有机溶剂作为终止液，具体信息将在研究报告中描述。
纳多洛尔(nadolol)、美托洛尔(metoprolol)、地高辛(digoxin)、雌激素酮3-硫酸钾(estrone3-sulfate potassium，E3S)和GF120918在本研究中分别作为低渗对照化合物、高渗对照化合物、P-糖蛋白(P-gp)底物、乳腺癌耐药蛋白(BCRP)底物和外排转运体抑制剂。这些化合物的储备液用DMSO配制，储存于≤-30℃，6个月内使用有效。
给药液和接收液的配制
本研究使用HBSS(Hanks Balanced Salt Solution)含10mM HEPES(2-[4-(2-羟乙基)-1-哌嗪]乙磺酸)作为转运缓冲液(pH 7.40±0.05)。给药液以及接收液的配制方法见下表7。
表7.给药液及接收液的配制方法
Figure BDA0002922340250000201
细胞培养
Caco-2细胞用MEM培养基(Minimum Essential Media)培养，培养条件为37±1℃，5％CO2和饱和湿度。之后将细胞接种于Corning Transwell-96孔板里，接种密度为1×105细胞/cm2，然后将细胞置于二氧化碳培养箱中培养21-28天后用于转运实验，期间每隔四到五天更换一次培养基。
转运实验
化合物给药浓度为2、10和100μM，在含有或不含10 0含GF120918的条件下双向(A-B和B-A方向)给药，每个给药浓度做三个平行。Digoxin和E3S的测试浓度分别为10和5μM，在含有或不含10μM GF120918的条件下双向给药；nadolol和metoprolol测试浓度均为2μM，在不含10μM GF120918的条件下单向(A-B方向)给药，三个对照化合物也均做三个平行。
将给药液、接收液和转运缓冲液置于37℃预孵育30分钟。细胞层用转运缓冲液润洗两遍。将给药液和接收液分别加入到对应的细胞板孔位(每个顶端和基底端孔分别加样75和250μL)。加样后，将细胞板置于37±1℃，5％CO2和饱和湿度的培养箱中孵育120分钟。
样品收集信息见下表8。
表8.样品收集信息
样品类型 每孔收样体积(μL) 终止液的体积(μL) 转运缓冲液的体积(μL)
A-B给药端 50 250 100
A-B接收端 150 250 0
A-B细胞裂解 50 200 150
B-A给药端 50 250 100
B-A接收端 50 250 100
B-A细胞裂解 50 200 150
T0 50 250 100
所有的化合物漩涡震荡后，于3220×g，20℃离心20分钟，转移适量体积的上清液到样品分析板，封板后化合物若不立即分析则储存于2-8℃。采用LC/MS/MS的方法进行分析，具体的化合物处理方法见研究报告。
细胞膜完整性测试
荧光黄检测实验(Lucifer Yellow Rejection Assay)用于测试Caco-2细胞的完整性。每块细胞板随机选取6个细胞孔，分别加入100μM荧光黄，荧光黄检测实验与转运实验同时进行。孵育120分钟后，取荧光黄样品，在425/528nm(激发/发射)波谱处检测样品中荧光黄的相对荧光强度(the relative fluorescence unit,RFU)。
样品分析
待测化合物和对照化合物nadolol、metoprolol、digoxin及E3S在样品中的浓度均采用液相色谱-串联质谱(LC/MS/MS)方法进行测定。分析物和内标的保留时间、色谱图采集和色谱图的积分采用软件Analyst(AB Sciex,Framingham,Massachusetts,USA)进行处理，实验结果见表9。
表9.式(I)化合物在CACO-2细胞的双向渗透性研究
Figure BDA0002922340250000211
Figure BDA0002922340250000221
结论：测试结果显示相对于EMA-401，式(I)化合物的渗透性有所改善，有利于化合物的吸收。

Claims (16)

1.式（I）化合物的A晶型，其特征在于其X射线粉末衍射图谱在下列2θ角处具有特征衍射峰：3.52±0.20°，6.04±0.20°，14.40±0.20°，15.11±0.20°，18.21±0.20°，18.46±0.20°，20.12±0.20°，24.13±0.20°
Figure 199352DEST_PATH_IMAGE001
。
2.根据权利要求1所述的A晶型，其XRPD图谱如图1所示。
3.根据权利要求1或2所述的A晶型，其差示扫描量热曲线在155.36℃±3℃处具有吸热峰的起始点。
4.根据权利要求3所述的A晶型，其DSC图谱如图2所示。
5.根据权利要求1或2所述的A晶型，其热重分析曲线在100.00℃±3℃时失重达0.1489%。
6.根据权利要求5所述的A晶型，其TGA图谱如图3所示。
7.式（I）化合物A晶型的制备方法，包括：
（a）将式（I）化合物加入混合溶剂中溶解；
（b）30~50℃下搅拌10~30小时；
（c）过滤后在30~50℃干燥15~25小时；
其中，所述混合溶剂为丙酮和水的体积比为1 : 1.5~2.5。
8.式（I）化合物的B晶型，其特征在于其X射线粉末衍射图谱在下列2θ角处具有特征衍射峰：3.52±0.20°，6.08±0.20°，9.25±0.20°，12.12±0.20°，14.00±0.20°，18.19±0.20°，24.31±0.20°，30.50±0.20°。
9.根据权利要求8所述的B晶型，其XRPD图谱如图4所示。
10.根据权利要求8所述的B晶型，其差示扫描量热曲线在150.95℃±3℃处具有吸热峰的起始点。
11.根据权利要求10所述的B晶型，其DSC图谱如图5所示。
12.根据权利要求8所述的B晶型，其热重分析曲线在120.00℃±3℃时失重达0.0558%。
13.根据权利要求12所述的B晶型，其TGA图谱如图6所示。
14.式（I）化合物B晶型的制备方法，包括：
（a）将式（I）化合物加入溶剂中使其成悬浊液；
（b）悬浊液35~45℃下搅拌30-60小时;
（c）离心后干燥8~16小时；
其中，所述溶剂选自甲醇、乙醇、乙腈；
或者所述的溶剂为混合溶剂，所述的混合溶剂为丙酮和水的体积比为3:2。
15.根据权利要求1~6任意一项所述A晶型或权利要求8~13任意一项所述B晶型在制备慢性疼痛药物中的应用。
16.式（I）化合物的制备方法，
Figure 178810DEST_PATH_IMAGE002
其包含如下步骤：
Figure 958547DEST_PATH_IMAGE003
步骤1：化合物1-1和1-2的制备
将正庚烷8.0 L加入到50 L的反应釜中，启动搅拌，依次将1.0 kg起始原料1-0，3.4 kg溴代环戊烷，1.0 kg硫酸镁，2.0 kg氧化银加入到反应釜中，反应液在20~30℃搅拌19小时，补加0.3 kg硫酸镁和0.7 kg氧化银，反应液在20~30℃继续搅拌反应46小时；反应液经100-200目硅胶2.0 kg在桌面式抽滤漏斗减压抽滤，滤饼用12.0 L二氯甲烷分三次洗涤，每次加二氯甲烷4.0 L；将滤液转入旋转蒸发仪，在外温35-40℃下减压浓缩，得到化合物1-1和1-2的混合物，该混合物不经进一步纯化直接用于下一步反应；
步骤2：化合物1-3的制备
将四氢呋喃5.3 L加入到50 L反应釜中，启动搅拌，加入化合物1-1和1-2的混合物1.3kg，加入含0.3 kg一水合氢氧化锂和2.7 L水形成的溶液，反应液在20~30℃下继续搅拌4小时；向反应液中加入正庚烷10.5 L，搅拌10分钟，分液，水相用2M氯化氢水溶液调pH至3-4，用16.0 L二氯甲烷萃取两次，每次8.0 L，合并后的有机相用无水硫酸钠1.0 kg干燥，过滤，滤液在外温35-40 ℃下减压浓缩得到化合物1-3；
步骤3：化合物1-4的制备
将二氯甲烷12.0 L加入到50 L反应釜中，加入1.2 kg化合物1-3，启动搅拌，加入N,N-二甲基甲酰胺12.0 g，滴加草酰氯1.04 kg，滴加在1.5小时内完成，反应液在20~30℃搅拌1小时；将反应液在外温35-40℃下减压浓缩，得到的粗品备用；将二氯甲烷8.0 L加入50 L反应釜中，氮气置换两次，启动搅拌，依次加入吡唑0.4 kg和N-甲基吗啡啉0.7 kg，降温至0-10℃，氮气置换一次，将上述粗品溶于二氯甲烷4.0 L中配制成溶液，缓慢滴加入反应釜中，滴加完毕后，氮气置换一次，反应液升温至20~30℃继续搅拌16小时；将反应液依次用10.0L 1M硫酸水溶液洗两次，每次5.0 L，11.0 L饱和碳酸氢钠水溶液洗两次，每次5.5 L，7.0 L水洗一次，8.0 L饱和氯化钠溶液洗一次，有机相用无水硫酸钠0.5 kg干燥，过滤，滤液在外温35-40℃下减压浓缩得到粗品；将粗品分散于7.2 L正己烷中，反应液升温至65~75℃搅拌2小时，降温至15~25℃，继续搅拌16小时；过滤，滤饼用正己烷洗涤两次，每次600.0 mL，滤饼在外温20-30℃下减压干燥5小时，得到化合物1-4；
步骤4：式（I）化合物的A晶型的制备
将N,N-二甲基甲酰胺12.0 L加入到50 L反应釜中，启动搅拌，依次加入1220.3 g化合物D-1和493.8 g四甲基胍，反应液在15~25℃下搅拌1小时，将1211.6 g化合物1-4加入到反应釜中，反应液在15~25℃继续搅拌17小时；将反应液倒入12.0 L水中，用2M盐酸水溶液调pH至3，用24.0 L乙酸乙酯萃取两次，每次12.0 L，合并后的有机相用12.0 L水洗三次，每次4.0 L，饱和氯化钠水溶液3.0 L洗一次，无水硫酸钠500.0 g干燥，过滤，滤液在35~40℃条件下减压浓缩得到粗品；将丙酮4.0 L、水8.0 L和粗品依次加入到50 L反应釜中，反应液35~45℃搅拌20小时，过滤，滤饼用8.0 L水洗涤两次，每次4.0 L，滤饼于在40 ℃条件下用真空干燥箱干燥21小时，得式（I）化合物的A晶型。
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