CN112574945A - 桂溴胺在成牙本质转化中的新用途 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了桂溴胺在成牙本质转化中的新用途，属于生物医学技术领域。本发明发现桂溴胺能够有效的促进牙髓干细胞中ALP酶活性，细胞矿化，牙本质涎磷蛋白（DSPP）和牙本质基质蛋白1（DMP1）的表达。因此，可将桂溴胺用于制备促进牙髓干细胞成牙本质转化的促进剂，实现老药的新用。

Description

桂溴胺在成牙本质转化中的新用途
技术领域
本发明属于生物医学技术领域，尤其涉及一种桂溴胺在成牙本质转化中的新用途。
背景技术
牙髓炎以及根尖周炎是常见的口腔疾病，由于牙髓具有特有的解刨特点，因此其受到损失后难以自行修复，需要采用根管治疗的方式进行治疗，但是根管治疗会对牙本质造成一定的损伤。因此，可通过诱导牙髓干细胞转化为成牙本质细胞来更好的治疗牙髓疾病。
桂溴胺(Cinromide)是一种抗惊厥药，其分子式为C11H12BrNO，其CAS号为58473-74-8。桂溴胺能够抑制上皮中性氨基酸转运蛋白B0AT1。目前，关于桂溴胺在成牙本质转化成的作用尚未见报道。
发明内容
本发明的目的在于提供桂溴胺在成牙本质转化中的新用途。
为实现上述目的，本发明提供了如下技术方案：
其一，本发明提供了桂溴胺在促进牙髓干细胞成牙本质转化中的用途。
优选地，所述用途包括，桂溴胺在促进牙髓干细胞ALP酶活性中的用途。
优选地，所述用途包括，桂溴胺在促进牙髓干细胞细胞矿化中的用途。
优选地，所述用途包括，桂溴胺在促进牙髓干细胞牙本质基质蛋白1和牙本质涎磷蛋白表达中的用途。
其二，本发明提供了桂溴胺在制备促进牙髓干细胞成牙本质转化促进剂中的用途。
优选地，所述用途包括，桂溴胺在制备促进牙髓干细胞ALP酶活性促进剂中的用途。
优选地，所述用途包括，桂溴胺在制备促进牙髓干细胞细胞矿化促进剂中的用途。
优选地，所述用途包括，桂溴胺在制备促进牙髓干细胞牙本质基质蛋白DMP1和牙本质涎磷蛋白DSPP表达中的用途。
其三，本发明提供了一种成牙本质转化促进剂，所述成牙本质转化促进剂是指有效剂量的桂溴胺。
其四，本发明提供了一种成牙本质转化促进剂组合物，其特征在于，所述成牙本质转化促进剂组合物包括有效剂量的桂溴胺，所述桂溴胺是所述成牙本质转化促进剂组合物的唯一有效成分或有效成分之一。
本发明的有益效果是：
本发明发现桂溴胺能够促进牙髓干细胞中ALP酶活性，细胞矿化和牙本质基质蛋白DMP1和牙本质涎磷蛋白DSPP，因此可将桂溴胺用于制备促进牙本质转化的促进剂，从而使牙髓干细胞更好的用于牙髓疾病的治疗，并且实现了老药的新用。
附图说明
图1 ALP酶染色检测结果；
图2 ALP酶定量检测结果；
图3 茜素红染色检测结果；
图4 牙本质基质蛋白1 DMP1和牙本质涎磷蛋白DSPP的Western Blot检测结果。
具体实施方式
为能清楚说明本方案的技术特点，下面通过具体实施方式，对本方案进行阐述。
实施例1
ALP酶染色实验
（1）将生长状态良好的1.5×104第三代人牙髓干细胞接种于6孔板中；
（2）待细胞生长至80%左右融合时，对照组使用完全培养基进行培养，实验组更换为添加有0μM/L，1.5μM/L，3μM/L桂溴胺的成牙本质细胞矿化诱导液（10% FBS α-MEM、50μg/ml抗坏血酸、10mMβ-甘油磷酸钠、0.1μM地塞米松）进行培养，每两天进行一次换液，每组进行3次重复；
（3）培养7天后，去除培养基，使用PBS轻轻的清洗细胞，加入4%多聚甲醛固定细胞30min；
（4）弃去4%多聚甲醛，使用PBS清洗细胞，使用ALP酶染色液避光孵育30min；
（5）去除染色液，使用PBS清洗2次，进行拍照。
得到的实验结果如图1所示，从图中可以看出，添加有3μM/L桂溴胺的牙髓干细胞的ALP酶的染色强度显著的高于未添加桂溴胺的牙髓干细胞的ALP酶的染色强度，说明添加3μM/L桂溴胺能够有效的促进牙髓干细胞中ALP酶的活性。
实施例2
定量ALP酶活性检测
（1）将生长状态良好的1.5×104第三代人牙髓干细胞接种于6孔板中；
（2）待细胞生长至80%左右融合时，对照组使用完全培养基进行培养，实验组更换为添加有0μM/L，1.5μM/L，3μM/L桂溴胺的成牙本质细胞矿化诱导液（10% FBS α-MEM、50μg/ml抗坏血酸、10mMβ-甘油磷酸钠、0.1μM地塞米松）进行培养，每两天进行一次换液，每组进行3次重复；
（3）培养7天后，去除培养基，使用PBS轻轻的清洗细胞，在每个孔中加入200μl的TritonX-100，置于冰上放置30min；
（4）裂解后将细胞收集中EP管中，调整离心机参数为4℃，12000r/min，离心5min；
（5）离心结束后，收集上清，在96孔板的小孔中加入10μl上清，40μl检测缓冲液，50μl显色底物；
（6）轻轻的拍打混匀后，再405nm下检测OD值，计算ALP酶活性。
得到的实验结果如图2所示，其中，0μM/L组的ALP酶相对活性为4.010±0.232，1.5μM/L组的ALP酶相对活性为4.614±0.196，3μM/L组的ALP酶相对活性为6.607±0.314，从上述数据可以看出，添加1.5μM/L或3μM/L桂溴胺均能够有效的促进牙髓干细胞的ALP酶活性，且差异均具有统计学意义。其中，3μM/L桂溴胺的促进效果较为显著。
实施例3
茜素红染色检测
（1）将生长状态良好的1.5×104第三代人牙髓干细胞接种于6孔板中；
（2）待细胞生长至80%左右融合时，对照组使用完全培养基进行培养，实验组更换为添加有0μM/L，1.5μM/L，3μM/L桂溴胺的成牙本质细胞矿化诱导液（10% FBS α-MEM、50μg/ml抗坏血酸、10mMβ-甘油磷酸钠、0.1μM地塞米松）进行培养，每两天进行一次换液，每组进行3次重复；
（3）培养14天后，去除培养基，使用PBS轻轻的清洗细胞，加入4%多聚甲醛固定细胞30min；
（4）弃去4%多聚甲醛，使用PBS清洗细胞，使用茜素红染色液避光孵育30min；
（5）去除染色液，使用PBS清洗2次，进行拍照。
得到的实验结果如图3所示，从图中可以看出，加入.5μM/L和3μM/L桂溴胺均能够促进牙髓干细胞的矿化。其中，3μM/L桂溴胺的促进效果较为明显。
实施例4
Western Blot检测
（1）将生长状态良好的1.5×104第三代人牙髓干细胞接种于6孔板中；
（2）待细胞生长至80%左右融合时，对照组使用完全培养基进行培养，实验组更换为添加有0μM/L，1.5μM/L，3μM/L桂溴胺的成牙本质细胞矿化诱导液（10% FBS α-MEM、50μg/ml抗坏血酸、10mMβ-甘油磷酸钠、0.1μM地塞米松）进行培养，每两天进行一次换液，每组进行3次重复；
（3）培养7天后，去除培养基，使用PBS轻轻的清洗细胞，加入100μl RIPA细胞裂解液；
（4）将细胞刮下后，收集裂解液至EP管中，冰上裂解30min，1200rpm/min离心20min，吸取上清至新的EP管中；
（5）使用BCA法测量蛋白浓度，制成蛋白样品，100℃加热5min；
（6）配置5%浓缩胶和12%分离胶，插入15孔的梳子，制备好胶板后，进行加样；
（7）加样结束后，恒压80V至溴酚蓝至分离胶，120V至溴酚蓝至分离胶底部；
（8）将PVDF膜置于甲醇中浸泡15s，活化后安装电转夹，恒流250mA 1.5h；
（9）将PVDF膜取出置于5%脱脂奶粉中，封闭1h；
（10）配置牙本质涎磷蛋白（DSPP）和牙本质基质蛋白1（DMP1），GAPDH一抗，孵育后，4℃孵育过夜；
（11）使用TBST漂洗PVDF膜3次，每次10min；
（12）取出PVDF膜，放入稀释好的二抗中，室温条件下孵育60min；
（13）使用TBST再次漂洗PVDF膜3次，每次10min；
（14）避光条件下，对PVDF膜进行显像后保存图像。
得到的结果如图4所示，从图中可以看出，桂溴胺能够有效的促进牙本质涎磷蛋白（DSPP）和牙本质基质蛋白1（DMP1）的表达。

Claims (10)

1.桂溴胺在促进牙髓干细胞成牙本质转化中的用途。
2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述用途包括，桂溴胺在促进牙髓干细胞ALP酶活性中的用途。
3.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述用途包括，桂溴胺在促进牙髓干细胞细胞矿化中的用途。
4.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述用途包括，桂溴胺在促进牙髓干细胞牙本质基质蛋白1和牙本质涎磷蛋白表达中的用途。
5.桂溴胺在制备促进牙髓干细胞成牙本质转化促进剂中的用途。
6.根据权利要求5所述的用途，其特征在于，所述用途包括，桂溴胺在制备促进牙髓干细胞ALP酶活性促进剂中的用途。
7.根据权利要求5所述的用途，其特征在于，所述用途包括，桂溴胺在制备促进牙髓干细胞细胞矿化促进剂中的用途。
8.根据权利要求5所述的用途，其特征在于，所述用途包括，桂溴胺在制备促进牙髓干细胞牙本质基质蛋白1和牙本质涎磷蛋白表达促进剂中的用途。
9.一种成牙本质转化促进剂，其特征在于，所述成牙本质转化促进剂是指有效剂量的桂溴胺。
10.一种成牙本质转化促进剂组合物，其特征在于，所述成牙本质转化促进剂组合物包括有效剂量的桂溴胺，所述桂溴胺是所述成牙本质转化促进剂组合物的唯一有效成分或有效成分之一。
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Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110664993A (zh) * 2019-10-22 2020-01-10 南方医科大学南方医院 纤维蛋白原γ链在牙齿再生领域的新用途及其试剂盒

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110664993A (zh) * 2019-10-22 2020-01-10 南方医科大学南方医院 纤维蛋白原γ链在牙齿再生领域的新用途及其试剂盒

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
HII SIEW CHING等: "Expression of Odontogenic and Osteogenic Markers in DPSCs and SHED: A Review", 《CURR STEM CELL RES THER》 *
ROBERT J.PERCHALSKI等: "Simultaneous determination of the anticonvulsants, cinromide (3-bromo-N-ethylcinnamamide), 3-bromocinnamamide, and carbamazepine in plasma by high-performance liquid chromatography", 《JOURNAL OF CHROMATOGRAPHY B: BIOMEDICAL SCIENCES AND APPLICATIONS》 *
沈鼎烈: "《临床癫痫学》", 30 September 1994, 上海科学技术出版社 *

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