CN112574182B - 雷公藤大环多胺生物碱有效部位及其制备方法 - Google Patents
雷公藤大环多胺生物碱有效部位及其制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN112574182B CN112574182B CN202011083611.9A CN202011083611A CN112574182B CN 112574182 B CN112574182 B CN 112574182B CN 202011083611 A CN202011083611 A CN 202011083611A CN 112574182 B CN112574182 B CN 112574182B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- macrocyclic polyamine
- alkaloid
- ethyl acetate
- effective part
- alkaloids
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 229930001122 polyamine alkaloid Natural products 0.000 title claims abstract description 68
- 241000830536 Tripterygium wilfordii Species 0.000 title claims abstract description 20
- 235000015398 thunder god vine Nutrition 0.000 title claims abstract description 20
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 10
- OROFOUPCOTVAJQ-UHFFFAOYSA-N celacinnine Natural products C1CCCNC(C=2C=CC=CC=2)CC(=O)NCCCN1C(=O)C=CC1=CC=CC=C1 OROFOUPCOTVAJQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 25
- LSYKFBZWBDMZLQ-NRFANRHFSA-N celabenzine Chemical compound C1([C@H]2NCCCCN(CCCNC(=O)C2)C(=O)C=2C=CC=CC=2)=CC=CC=C1 LSYKFBZWBDMZLQ-NRFANRHFSA-N 0.000 claims abstract description 19
- LSYKFBZWBDMZLQ-UHFFFAOYSA-N celabenzine Natural products C=1C=CC=CC=1C(=O)N(CCCNC(=O)C1)CCCCNC1C1=CC=CC=C1 LSYKFBZWBDMZLQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 17
- CNJPJUFFFBTCBZ-IBGZPJMESA-N celafurine Chemical compound O=C(N1CCCCN[C@@H](CC(=O)NCCC1)c1ccccc1)c1ccoc1 CNJPJUFFFBTCBZ-IBGZPJMESA-N 0.000 claims abstract description 12
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 120
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 36
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 17
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 239000003480 eluent Substances 0.000 claims description 11
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 10
- 239000012046 mixed solvent Substances 0.000 claims description 7
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 235000011114 ammonium hydroxide Nutrition 0.000 claims description 6
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 claims description 6
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 6
- 238000010898 silica gel chromatography Methods 0.000 claims description 6
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 6
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000012043 crude product Substances 0.000 claims description 4
- WGLUMOCWFMKWIL-UHFFFAOYSA-N dichloromethane;methanol Chemical compound OC.ClCCl WGLUMOCWFMKWIL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- IDGUHHHQCWSQLU-UHFFFAOYSA-N ethanol;hydrate Chemical compound O.CCO IDGUHHHQCWSQLU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229920000768 polyamine Polymers 0.000 claims description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229940124599 anti-inflammatory drug Drugs 0.000 claims 1
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 abstract description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 5
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract description 3
- 229940126680 traditional chinese medicines Drugs 0.000 abstract description 2
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 15
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 15
- OROFOUPCOTVAJQ-NSFRLNINSA-N celacinnine Chemical compound C([C@H](NCCCC1)C=2C=CC=CC=2)C(=O)NCCCN1C(=O)\C=C\C1=CC=CC=C1 OROFOUPCOTVAJQ-NSFRLNINSA-N 0.000 description 14
- ATHGHQPFGPMSJY-UHFFFAOYSA-N spermidine Chemical class NCCCCNCCCN ATHGHQPFGPMSJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 229930013930 alkaloid Natural products 0.000 description 11
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 11
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 9
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 9
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 8
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 8
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 6
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 5
- 229930004725 sesquiterpene Natural products 0.000 description 5
- 150000004354 sesquiterpene derivatives Chemical class 0.000 description 5
- CNJPJUFFFBTCBZ-UHFFFAOYSA-N Celafurin Natural products C1=COC=C1C(=O)N(CCCNC(=O)C1)CCCCNC1C1=CC=CC=C1 CNJPJUFFFBTCBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 4
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 4
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 4
- 238000000034 method Methods 0.000 description 4
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 4
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 4
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 4
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 4
- 150000003797 alkaloid derivatives Chemical class 0.000 description 3
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010014025 Ear swelling Diseases 0.000 description 2
- CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N O-Xylene Chemical compound CC1=CC=CC=C1C CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- URLKBWYHVLBVBO-UHFFFAOYSA-N Para-Xylene Chemical group CC1=CC=C(C)C=C1 URLKBWYHVLBVBO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000545405 Tripterygium Species 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 125000003236 benzoyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C(*)=O 0.000 description 2
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- CGIGDMFJXJATDK-UHFFFAOYSA-N indomethacin Chemical compound CC1=C(CC(O)=O)C2=CC(OC)=CC=C2N1C(=O)C1=CC=C(Cl)C=C1 CGIGDMFJXJATDK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 2
- 239000013558 reference substance Substances 0.000 description 2
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 2
- 229930003405 spermidine alkaloid Natural products 0.000 description 2
- 239000008096 xylene Substances 0.000 description 2
- 241000208365 Celastraceae Species 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 206010018367 Glomerulonephritis chronic Diseases 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 238000012449 Kunming mouse Methods 0.000 description 1
- 241000565675 Oncomelania Species 0.000 description 1
- 208000003251 Pruritus Diseases 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000002141 anti-parasite Effects 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 239000003096 antiparasitic agent Substances 0.000 description 1
- 238000004891 communication Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 229910003460 diamond Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010432 diamond Substances 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 229930004069 diterpene Natural products 0.000 description 1
- 150000004141 diterpene derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 210000005069 ears Anatomy 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 description 1
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 1
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 1
- 241000411851 herbal medicine Species 0.000 description 1
- 238000004896 high resolution mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 229960000905 indomethacin Drugs 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 238000002329 infrared spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 230000007803 itching Effects 0.000 description 1
- YIWJEBPTHXRHQF-UHFFFAOYSA-N lunarine Natural products C1=CC(=O)NCCCCNCCCNC(=O)C=CC(C=C23)=CC=C3OC3C12CCC(=O)C3 YIWJEBPTHXRHQF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YIWJEBPTHXRHQF-LLMLIWGDSA-N lunarine Chemical compound C/1=C\C(=O)NCCCCNCCCNC(=O)\C=C\C(C=C23)=CC=C3O[C@H]3[C@@]\12CCC(=O)C3 YIWJEBPTHXRHQF-LLMLIWGDSA-N 0.000 description 1
- 206010025135 lupus erythematosus Diseases 0.000 description 1
- 238000000655 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 1
- 244000045947 parasite Species 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 238000007670 refining Methods 0.000 description 1
- 238000012827 research and development Methods 0.000 description 1
- 201000003068 rheumatic fever Diseases 0.000 description 1
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 229940063673 spermidine Drugs 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 108090000721 thyroid hormone receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000036962 time dependent Effects 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003440 toxic substance Substances 0.000 description 1
- 150000003648 triterpenes Chemical class 0.000 description 1
- 238000002211 ultraviolet spectrum Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
- C07D405/02—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings
- C07D405/06—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings linked by a carbon chain containing only aliphatic carbon atoms
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D255/00—Heterocyclic compounds containing rings having three nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D249/00 - C07D253/00
- C07D255/02—Heterocyclic compounds containing rings having three nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D249/00 - C07D253/00 not condensed with other rings
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
本发明涉及中药及天然药物领域，公开了一种雷公藤大环多胺生物碱有效部位及其制备方法。有效部位含有celacarfurine、celafurine、celabenzine和celacinnine四种大环多胺生物碱，大环多胺生物碱含量≥80.8%，可用于制备抗炎等药物。
Description
技术领域
本发明属于中药和天然药物领域，涉及一种雷公藤大环多胺生物碱有效部位及其制备方法。
背景技术
雷公藤( Tripteryginum Wilfordii Hook. F) 为卫矛科雷公藤属植物，据《全国中草药汇编》记载，雷公藤味苦、性辛、凉，有大毒。具有祛风，解毒，杀虫作用。外用治风湿性关节炎，皮肤发痒，杀蛆虫、孑孓，灭钉螺，毒鼠。临床常用于治疗类风湿性关节炎、慢性肾炎、红斑狼疮等难治性免疫功能亢进疾病。目前报道的雷公藤的主要化学成分有二萜、三萜和生物碱类等成分，生物碱类成分主要包括倍半萜生物碱和大环多胺生物碱两类，其中倍半萜类生物碱占绝大多数（超过150个），大环多胺类生物碱报道极少（4个）（文献：刘莉,闫君,舒积成,刘建群.雷公藤生物碱类成分及其药理活性研究进展[J].天然产物研究与开发,2019,31(12):2170-2181.）。据文献报道，大环多胺生物碱具有抗寄生虫锥虫、质粒DNA断裂和抗肿瘤等作用（Hamilton, Chris J.; Saravanamuthu, Ahilan; Poupat,Christiane; Fairlamb, Alan H.; Eggleston, Ian M.. Time-dependent inhibitorsof trypanothione reductase: Analogues of the spermidine alkaloid lunarine andrelated natural products. Bioorganic & Medicinal Chemistry, 2006; 14(7):2266-2278.）。发明人从雷公藤中分离鉴定了抗炎作用大环多胺生物碱celacarfurine（专利CN111484485A）。为雷公藤大环多胺生物碱的进一步研究开发应用，发明人研究了雷公藤大环多胺生物碱有效部位及其制备方法。本发明首次公开了一种高效率富集、制备高含量雷公藤大环多胺生物碱有效部位的方法。
发明内容
本发明解决的技术问题是提供一种高效率富集、制备高含量雷公藤大环多胺生物碱有效部位的方法，该雷公藤大环多胺生物碱有效部位可用于制备抗炎等药物。
经HPLC检测以及NMR和MS等波谱鉴定，本发明所制备的雷公藤大环多胺生物碱有效部位至少含有celacarfurine（A），celafurine（B），celabenzine（C）和celacinnine（D）（结构见式Ⅰ~Ⅳ）四种大环多胺生物碱，这四种大环多胺生物碱含量比为A：B：C：D= 10：（404~598）：（95~143）：（55~82），含量加和达80.8%以上，即大环多胺生物碱有效部位含量达80.8%以上，符合中药有效部位含量50%以上的技术要求。
本发明通过下述技术方案来实现。
一、提取分离
将雷公藤根切片，加入95%乙醇水溶液，加热回流提取3次，合并提取液，减压浓缩回收乙醇得到总浸膏。将总浸膏用乙酸乙酯溶解数次至不再溶解，得乙酸乙酯溶解部位和乙酸乙酯不溶部位。将乙酸乙酯不溶部位置于2%H2SO4水溶液中，充分搅拌溶解，过滤得到滤液和硫酸不溶浸膏。在滤液中加入氨水中和滤液至pH 10，再用等体积的乙酸乙酯萃取3次，减压浓缩回收乙酸乙酯得大环多胺生物碱粗品，经HPLC检测，大环多胺生物碱含量达51.9%以上。将大环多胺生物碱粗品用硅胶柱层析精制，先用二氯甲烷洗脱，弃去二氯甲烷洗脱液，再用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（V：V=20：1）洗脱，收集二氯甲烷-甲醇洗脱液，减压浓缩蒸去混合溶剂，即得大环多胺生物碱有效部位，经HPLC检测，含量达80.8%以上。
二、大环多胺生物碱含量测定
大环多胺生物碱对照品：celacarfurine（A），celafurine（B），celabenzine（C）和celacinnine（D）以上对照品均为发明人从雷公藤中分离制得；对照品纯度经HPLC检测大于98%；结构（见式Ⅰ~Ⅳ）经核磁共振谱、质谱、红外和紫外光谱等波谱鉴定，波谱数据与文献基本一致，如下。
celacarfurine（A）：淡黄色固体(溶剂氯仿)，根据高分辨质谱（HR-TOF-MS）确定分子式为C21H25N3O4 ([M+H]+，实测值：m/z 384.1919，理论计算值：m/z 384.1918；[M+HCOO]-，实测值：m/z 428.1825，理论计算值：m/z 428.1827)。1H NMR (600MHz, CD3OD)，δ H:Spermidine unit：5.57 (1H, m, H-2), 3.45 (1H, t, J=12.5, H-3a) , 2.41 (1H, t,J=10.8, H-3b) , 3.46 (1H, m, H-6a) , 3.05 (1H, m, H-6b) , 3.49 (1H, m, H-7a), 2.67 (1H, m, H-7b) , 3.51 (1H, m, H-8a) , 2.82 (1H, m, H-8b) , 3.68 (1H, m,H-10a) , 2.90 (1H, m, H-10b) , 2.09 (1H, m, H-11a) , 1.55 (1H, m, H-11b) ,3.73 (1H, m, H-12a) , 2.67 (1H, m, H-12b), Phenyl unit：7.52 (2H, dd, J=8.0,1.8, H-2’, 6’) , 7.32 -7.36(2H, m, H-3’, 5’) , 7.32 -7.36(1H, m, H-4’) ,Furoyl unit：8.02 (1H, s, H-3’’) , 7.73 (1H, br.s, H-5’’) , 6.66 (1H, br.s, H-6’’)。13C NMR (150MHz, CD3OD) ，δC: Spermidine unit： 73.65 (C-2), 38.81 (C-3),169.33 (C-4), 44.43 (C-6), 36.11 (C-7), 46.54 (C-8), 41.16 (C-10), 26.53 (C-11), 43.35 (C-12), 169.25 (C-13) ，Phenyl unit：δC: 137.28 (C-1’), 127.66 (C-2’), 128.20 (C-3’), 128.38 (C-4’), 128.20 (C-5’), 127.66 (C-6’)，Furoyl unit：δC: 163.41 (C-1’’), 121.14 (C-2’’), 142.92 (C-3’’), 143.33 (C-5’’), 110.50(C-6’’)。波谱数据与文献（专利CN111484485A）一致。
celafurine（B）：白色针晶（甲醇）根据高分辨质谱（HR-TOF-MS）确定分子式为C21H27N3O3([M+H]+，实测值：m/z 370.2141，理论计算值：m/z 370.2125；1H NMR(600MHz，CD3OD)，δH:Spermidine unit： 3.89–4.01 (1H，m，H-2)， 2.53–2.68 (1H，m，H-3a)， 2.25–2.36 (1H，m，H-3b)， 3.58–3.68 (1H，m，H-6a)， 3.41–3.58 (1H，m，H-6b)， 1.87–2.09(2H，m，H-7)， 3.31–3.41 (1H，m，H-8a)， 2.90–3.13 (1H，m，H-8b)， 3.35–3.60 (2H，m，H-10)， 1.72–1.86 (1H，m，H-11a)， 1.56–1.72 (1H，m，H-11b)， 1.33–1.56 (2H，m，H-12) ,2.36–2.49 (2H，m，H-13)。 Phenyl unit： 7.30(2H，d，J=7.4Hz，H-2’，6’)，7.33(2H，dd，J=7.4, 7.0Hz，H-3’，5’)，7.23(1H，m，H-4’)，Furoyl unit：7.87(1H，s，H-3’’)，7.57(1H，m，H-5’’)，6.64(1H，m，H-6’’)。 13C NMR(150MHz，CD3OD)，δC:Spermidine unit：62.14(C-2)，37.70(C-3)，175.12(C-4)，44.23(C-6)，25.66(C-7)，45.85(C-8)，46.78(C-10)，25.09(C-11)，28.73(C-12)，46.41(C-13)，Phenyl unit：144.52(C-1’)，127.42(C-2’)，129.70(C-3’)，122.36(C-4’)，129.70(C-5’)，127.42(C-6’)，Furoyl unit：166.74(C-1’’)，129.70(C-2’’)，144.80(C-3’’)，144.63(C-5’’)，111.01(C-6’’)。
celabenzine（C）：白色方晶(溶剂甲醇)，根据高分辨质谱（HR-TOF-MS）确定分子式为C23H29N3O2([M+H]+，实测值：m/z 380.2320，理论计算值：m/z380.2333；1H NMR(600MHz，CD3OD)，δH:Spermidine unit：3.94(1H，m，H-2)，2.53(1H，dd，J=11.9，4.6Hz，H-3a)， 2.20–2.29 (1H，m，H-3b)， 3.05–3.73 (6H，m，H-6，8，10)， 1.83–1.94 (2H，m，H-7)， 2.05–2.15(1H，m，H-11a)， 1.60-1.72 (1H，m，H-11b) ， 1.19–1.34 (2H，m，H-12)， 2.35–2.47 (2H，m，H-13)，Phenyl unit： 7.26–7.34 (4H，m，H-2’，3’，5’，6’)， 7.19–7.26 (1H，m，H-4’)，Benzoyl unit: 7.40–7.50 (3H，m，H-3’’，5’’，7’’)， 7.34–7.39 (2H，m，H-4’’，6’’)。13CNMR(150MHz，CD3OD)，δC:Spermidine unit：62.04(C-2)，37.68(C-3)，175.11(C-4)，43.73(C-6)，25.33(C-7)，45.73(C-8)，46.78(C-10)，25.10(C-11)，28.78(C-12)，46.60(C-13)，Phenyl unit：144.78(C-1’)，127.42(C-2’)，129.68(C-3’)，127.25(C-4’)，129.68(C-5’)，127.42(C-6’)，Benzoyl unit:173.87(C-1’’)，137.90(C-2’’)，127.25(C-3’’)，129.68(C-4’’)，130.67(C-5’’)，129.68(C-6’’)，127.25(C-7’’)。
celacinnine（D）：白色针晶(溶剂甲醇)，根据高分辨质谱（HR-TOF-MS）确定分子式为C25H31N3O2([M+H]+，实测值：m/z406.2488，理论计算值：m/z406.2489；1H NMR(600MHz，CD3OD)，δH: Spermidine unit：3.95(1H，m，H-2) ，2.60(1H，dd，J=16.1，8.3，H-3a) ，2.29(1H，dd，J=16.1， 6.7Hz，H-3b)， 3.55–3.70 (2H，m，H-6) ， 1.33–2.10 (6H，m，H-7，11，12)， 3.33–3.40 (1H，m，H-8a)， 3.01–3.14 (1H，m，H-8b)， 3.44–3.55 (2H，m，H-10)，2.35–2.45 (2H，m，H-13)，Phenyl unit： 7.28–7.46 (4H，m，H-2’，3’，5’，6’)，7.24(1H，t，J=7.1Hz，H-4’)，Cinnamoyl unit：7.04(1H，d，J=15.4Hz，H-2’’) ， 7.55–7.67 (3H，m，H-3’’，5’’，9’’)， 7.28–7.46 (3H，m，H-6’’，7’’，8’’)。13C NMR(150MHz，CD3OD)，δC:Spermidine unit：62.33(C-2)，37.67(C-3)，175.06(C-4)，44.54(C-6)，26.88(C-7)，46.71(C-8)，47.98(C-10)，25.23(C-11)，29.12(C-12)，46.78(C-13)，Phenyl unit：143.81(C-1’)，129.02(C-2’)，129.70(C-3’)，128.23(C-4’)，129.70(C-5’)，129.02(C-6’)，Cinnamoyl unit：168.29(C-1’’)，118.49(C-2’’)，144.79(C-3’’)，136.53(C-4’’)，127.43(C-5’’)，129.70(C-6’’)，129.02(C-7’’)，129.70(C-8’’)，127.43(C-9’’)。
celafurine（B）、celabenzine（C）和celacinnine（D）波谱数据与文献（Kupchan SM , Hintz H P J , Smith R M , Karim A, Cass M W, Court W A, Yatagai M.Celacinnine, a novel macrocyclic spermidine alkaloid prototype. Journal ofthe Chemical Society Chemical Communications, 1974; 9(9):329-330. 以及KuehneP , Guggisberg A , Hesse M . Syntheses and Chiroptical Properties of the 13‐membered spermidine alkaloids ‐(S)‐celacinnine, (0)‐(S)‐celabenzine, ‐(S)‐celafurine, and (+)‐(S)‐viburnine[J]. Helvetica Chimica Acta, 1997, 80(6):1802-1808.）基本一致。
式Ⅰ：celacarfurine（A）结构。
式Ⅱ：celafurine（B）结构。
式Ⅲ：celabenzine结构。
式Ⅳ：celacinnine结构。
供试品：大环多胺生物碱粗品，大环多胺生物碱有效部位。
HPLC色谱条件：采用Diamonsil C18(4.6mm×250mm，5μm)色谱柱，流动相：水（A）—甲醇（B），梯度洗脱（0~50min，10% B→100%B）。进样量20μl，柱温25℃，流速1ml/min，检测波长210nm。
测定结果：大环多胺生物碱粗品和有效部位中四种大环多胺生物碱（celacarfurine（A），celafurine（B），celabenzine（C）和celacinnine（D））含量加和分别达51.9%和80.8%以上，从而表明大环多胺生物碱有效部位含量均超过了50%的技术要求，HPLC色谱图见附图1。
三、二甲苯致小鼠耳肿胀模型抗炎作用评价
称取实施例1和实施例2大环多胺生物碱有效部位，用2 %丙二醇水溶液溶解。取昆明种小鼠，雌雄各半，体重18-22g，随机均分成模型组，有效部位给药组，阳性对照药吲哚美辛给药组，每组10只。各给药组按10mg/kg剂量灌胃给药，模型组给等体积2%丙二醇水溶液。连续给药3天，末次给药后1小时，将20μl二甲苯涂于小鼠右耳廓两面致炎, 左耳不涂为对照。1小时后将小鼠处死，剪下双耳, 用直径6mm 的打孔器分别在同一部位打下圆耳片, 称重。以左右耳片重量差作为肿胀度, 计算抑制率。结果（表1）表明有效部位具有显著的抗炎活性。
表1. 有效部位对二甲苯致小鼠耳肿胀模型影响结果(±S，n=10)
* 与模型组比较P < 0.01。
与现有技术比较，本发明创造性体现如下：1、大环多胺生物碱有效部位及其制备方法未见报道，本发明首次公开了一种雷公藤大环多胺生物碱有效部位及其制备方法；2、据文献报道，雷公藤生物碱类成分主要包括倍半萜生物碱和大环多胺生物碱两类，其中倍半萜类生物碱占绝大多数（超过150个），大环多胺类生物碱报道极少（4个）。本发明方法采用总生物碱酸提取和柱层析技术，有效除去了大量的倍半萜类生物碱，高效率富集了大环多胺生物碱，使大环多胺生物碱粗品含量达51.9%%以上，有效部位含量达80.8%以上，有效部位中这四种大环多胺生物碱含量比为A：B：C：D= 10：（404~598）：（95~143）：（55~82），具有意想不到的优良效果和非显而易见性；3、本发明采用提取、萃取和柱层析技术制备的雷公藤大环多胺生物碱有效部位含量高达80.8%以上，工艺简洁，适合大规模制备，具有显著的进步性和较好的应用前景。
附图说明
附图1：大环多胺生物碱有效部位HPLC色谱图（图中A：celacarfurine；B：celafurine；C：celabenzine；D：celacinnine）。
具体实施方式
下面通过实施例作进一步描述，但本发明并不限于实施例所述范围。
实施例1：
将雷公藤干燥根119千克切片，加入95%乙醇400升，于70℃加热回流提取3次（1.5×1.5×1小时）。合并提取液，减压浓缩回收溶剂得浸膏12千克。浸膏用乙酸乙酯溶解多次，合并乙酸乙酯溶液，减压浓缩回收溶剂得乙酸乙酯部位1.87 千克，乙酸乙酯不溶部位7.5千克。将乙酸乙酯不溶部位7.5 千克置于15升2%H2SO4溶液中充分搅拌溶解，过滤得到滤液和不溶浸膏。在滤液中加入氨水中和滤液至pH 10，然后用等体积的乙酸乙酯萃取3次，合并有机相，减压浓缩回收乙酸乙酯，得大环多胺生物碱粗品29.7克，取样经HPLC检测，测得celacarfurine（A），celafurine（B），celabenzine（C）和celacinnine（D）四种大环多胺生物碱含量加和达55.7%。
称取大环多胺生物碱粗品10克，上硅胶柱层析（硅胶300克），先用二氯甲烷2.8升洗脱，弃去洗脱液，再用二氯甲烷：甲醇（V：V=20：1）3.5升洗脱，收集洗脱液，减压浓缩蒸去混合溶剂，得大环多胺生物碱有效部位4.3克，取样经HPLC检测，测得celacarfurine（A），celafurine（B），celabenzine（C）和celacinnine（D）四种大环多胺生物碱含量加和达89.8%，这四种大环多胺生物碱含量比，A：B：C：D= 10：499：118：67。
实施例2：
将雷公藤干燥根30千克切片，加入95%乙醇100升，于70℃加热回流提取3次（1.5×1.5×1小时）。合并提取液，减压浓缩回收溶剂得浸膏3.1千克。浸膏用乙酸乙酯溶解多次，合并乙酸乙酯溶液，减压浓缩回收溶剂得乙酸乙酯部位0.5 千克，乙酸乙酯不溶部位1.9千克。将乙酸乙酯不溶部位1.9 千克置于3.8升2%H2SO4溶液中充分搅拌溶解，过滤得到滤液和不溶浸膏。在滤液中加入氨水中和滤液至pH 10，然后用等体积的乙酸乙酯萃取3次，合并有机相，减压浓缩回收乙酸乙酯，得大环多胺生物碱粗品7.8克，取样经HPLC检测，测得celacarfurine（A），celafurine（B），celabenzine（C）和celacinnine（D）四种大环多胺生物碱含量加和达56.1%。
称取大环多胺生物碱有效部位粗品5克，上硅胶柱层析（硅胶150克），先用二氯甲烷1.4升洗脱，弃去洗脱液，再用二氯甲烷：甲醇（V：V=20：1）1.8升洗脱，收集洗脱液，减压浓缩蒸去混合溶剂，得大环多胺生物碱有效部位2.4克，取样经HPLC检测，测得celacarfurine（A），celafurine（B），celabenzine（C）和celacinnine（D）四种大环多胺生物碱含量加和达80.8%，这四种大环多胺生物碱含量比，A：B：C：D= 10：459：110：63。
实施例3：
将雷公藤干燥根20千克切片，加入95%乙醇67升，于70℃加热回流提取3次（1.5×1.5×1小时）。合并提取液，减压浓缩回收溶剂得浸膏1.9千克。浸膏用乙酸乙酯溶解多次，合并乙酸乙酯溶液，减压浓缩回收溶剂得乙酸乙酯部位0.3 千克，乙酸乙酯不溶部位1.2千克。将乙酸乙酯不溶部位1.2 千克置于2.5升2%H2SO4溶液中充分搅拌溶解，过滤得到滤液和不溶浸膏。在滤液中加入氨水中和滤液至pH 10，然后用等体积的乙酸乙酯萃取3次，合并有机相，减压浓缩回收乙酸乙酯，得大环多胺生物碱粗品5.2克，取样经HPLC检测，测得celacarfurine（A），celafurine（B），celabenzine（C）和celacinnine（D）四种大环多胺生物碱含量加和达51.9%。
称取大环多胺生物碱有效部位粗品5克，上硅胶柱层析（硅胶150克），先用二氯甲烷1.4升洗脱，弃去洗脱液，再用二氯甲烷：甲醇（V：V=20：1）1.8升洗脱，收集洗脱液，减压浓缩蒸去混合溶剂，得大环多胺生物碱有效部位2.3克，取样经HPLC检测，测得celacarfurine（A），celafurine（B），celabenzine（C）和celacinnine（D）四种大环多胺生物碱含量加和达85.6%，这四种大环多胺生物碱含量比，A：B：C：D= 10：404：95：55。
实施例4：
将雷公藤干燥根10千克切片，加入95%乙醇33升，于70℃加热回流提取3次（1.5×1.5×1小时）。合并提取液，减压浓缩回收溶剂得浸膏1.0千克。浸膏用乙酸乙酯溶解多次，合并乙酸乙酯溶液，减压浓缩回收溶剂得乙酸乙酯部位0.17 千克，乙酸乙酯不溶部位0.64千克。将乙酸乙酯不溶部位0.64 千克置于1.3升2%H2SO4溶液中充分搅拌溶解，过滤得到滤液和不溶浸膏。在滤液中加入氨水中和滤液至pH 10，然后用等体积的乙酸乙酯萃取3次，合并有机相，减压浓缩回收乙酸乙酯，得大环多胺生物碱粗品2.6克，取样经HPLC检测，测得celacarfurine（A），celafurine（B），celabenzine（C）和celacinnine（D）四种大环多胺生物碱含量加和达55.9%。
称取大环多胺生物碱有效部位粗品2克，上硅胶柱层析（硅胶150克），先用二氯甲烷0.56升洗脱，弃去洗脱液，再用二氯甲烷：甲醇（V：V=20：1）0.72升洗脱，收集洗脱液，减压浓缩蒸去混合溶剂，得大环多胺生物碱有效部位0.85克，取样经HPLC检测，测得celacarfurine（A），celafurine（B），celabenzine（C）和celacinnine（D）四种大环多胺生物碱含量加和达90.3%，这四种大环多胺生物碱含量比，A：B：C：D= 10：598：143：82。
Claims (2)
1.雷公藤大环多胺生物碱有效部位的制备方法，其特征在于，有效部位制备过程如下：将雷公藤根切片，加入95%乙醇水溶液，加热回流提取3次，合并提取液，减压浓缩回收乙醇得到总浸膏；将总浸膏用乙酸乙酯溶解数次至不再溶解，得乙酸乙酯溶解部位和乙酸乙酯不溶部位；将乙酸乙酯不溶部位置于2%H2SO4水溶液中，充分搅拌溶解，过滤得到滤液和硫酸不溶浸膏；在滤液中加入氨水中和滤液至pH 10，再用等体积的乙酸乙酯萃取3次，减压浓缩回收乙酸乙酯得大环多胺生物碱粗品，将大环多胺生物碱粗品用硅胶柱层析精制，先用二氯甲烷洗脱，弃去二氯甲烷洗脱液，再用体积比为20：1的二氯甲烷-甲醇混合溶剂洗脱，收集二氯甲烷-甲醇洗脱液，减压浓缩蒸去混合溶剂，得大环多胺生物碱有效部位。
2.按照权利要求1所述的制备方法制得的雷公藤大环多胺生物碱有效部位，其特征在于，有效部位中含有celacarfurine、celafurine、celabenzine和celacinnine四种大环多胺生物碱，这四种大环多胺生物碱在有效部位中的含量加和≥80.8%，质量比为celacarfurine：celafurine：celabenzine：celacinnine = 10：（404~598）：（95~143）：（55~82），该有效部位可用于制备抗炎药物；其中，
式Ⅰ：celacarfurine结构；
式Ⅱ：celafurine结构；
式Ⅲ：celabenzine结构；
式Ⅳ：celacinnine结构。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202011083611.9A CN112574182B (zh) | 2020-10-12 | 2020-10-12 | 雷公藤大环多胺生物碱有效部位及其制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202011083611.9A CN112574182B (zh) | 2020-10-12 | 2020-10-12 | 雷公藤大环多胺生物碱有效部位及其制备方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN112574182A CN112574182A (zh) | 2021-03-30 |
| CN112574182B true CN112574182B (zh) | 2023-08-04 |
Family
ID=75120140
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202011083611.9A Active CN112574182B (zh) | 2020-10-12 | 2020-10-12 | 雷公藤大环多胺生物碱有效部位及其制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN112574182B (zh) |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102603852A (zh) * | 2011-01-25 | 2012-07-25 | 苏州宝泽堂医药科技有限公司 | 一种雷公藤红素的制备方法 |
| CN103524591A (zh) * | 2012-07-05 | 2014-01-22 | 广西大学 | 一种雷公藤有效成分的制备方法 |
| CN104788532A (zh) * | 2015-04-30 | 2015-07-22 | 成都健腾生物技术有限公司 | 一种雷公藤甲素的提取制备方法 |
| CN105601700A (zh) * | 2016-01-07 | 2016-05-25 | 江西中医药大学 | 从雷公藤中制备雷公藤乙素的方法 |
| CN111484485A (zh) * | 2019-05-16 | 2020-08-04 | 江西中医药大学 | 抗炎大环多胺生物碱celacarfurine |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8048914B2 (en) * | 2004-02-09 | 2011-11-01 | Pharmagenesis, Inc. | Methods for isolation of triptolide compounds from Tripterygium wilfordii |
| US20100104675A1 (en) * | 2008-10-28 | 2010-04-29 | Pablo Kizelsztein | Method Of Treating Demyelinating Central Nervous System Diseases |
-
2020
- 2020-10-12 CN CN202011083611.9A patent/CN112574182B/zh active Active
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102603852A (zh) * | 2011-01-25 | 2012-07-25 | 苏州宝泽堂医药科技有限公司 | 一种雷公藤红素的制备方法 |
| CN103524591A (zh) * | 2012-07-05 | 2014-01-22 | 广西大学 | 一种雷公藤有效成分的制备方法 |
| CN104788532A (zh) * | 2015-04-30 | 2015-07-22 | 成都健腾生物技术有限公司 | 一种雷公藤甲素的提取制备方法 |
| CN105601700A (zh) * | 2016-01-07 | 2016-05-25 | 江西中医药大学 | 从雷公藤中制备雷公藤乙素的方法 |
| CN111484485A (zh) * | 2019-05-16 | 2020-08-04 | 江西中医药大学 | 抗炎大环多胺生物碱celacarfurine |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 中药雷公藤有效部位的提取纯化方法研究进展;田振 等;2011年中国药学大会暨第11届中国药师周论文集;1-9 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN112574182A (zh) | 2021-03-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| WO2019091287A1 (zh) | 一种中药组合物中八种成分的分离方法 | |
| CN105294623B (zh) | 一种倍半萜内酯类化合物、其制备方法以及应用 | |
| CN109694366B (zh) | 一种分离提纯甘木通有效成分的方法 | |
| CN112574182B (zh) | 雷公藤大环多胺生物碱有效部位及其制备方法 | |
| CN104382968A (zh) | 穿心莲总内酯提取方法、穿心莲总内酯药物组合物及用途 | |
| CN108912049B (zh) | 从高乌头中提取的二萜类生物碱化合物及制备方法和应用 | |
| CN104193758A (zh) | 一种从墨旱莲中提取蟛蜞菊内酯类单体化合物的制备方法 | |
| CN105175252A (zh) | 一种二萜类化合物及其制备方法与应用 | |
| CN115010618B (zh) | 一种可降尿酸的金色酰胺醇酯分离纯化方法及其应用 | |
| CN111440184B (zh) | 一种制备高纯度鼠尾草酚的方法 | |
| CN105198951A (zh) | 一种四环二萜类化合物及其制备方法与应用 | |
| CN114605422B (zh) | 一对对映体生物碱二聚体类化合物及其制备方法和应用 | |
| CN114106008B (zh) | 一种从丹参中提取分离的二萜醌类化合物及其方法和应用 | |
| CN105152921A (zh) | 一种三环二萜类化合物及其制备方法与应用 | |
| CN104557958A (zh) | 一种大花还亮草生物碱甲和大花还亮草生物碱乙的制备工艺及其对肿瘤细胞的细胞毒作用 | |
| CN110407785B (zh) | 从万年蒿中提取分离倍半萜内酯类化合物的方法 | |
| CN114573456A (zh) | 一种贝壳杉烷型二萜化合物及其制备方法和应用 | |
| CN114133422A (zh) | 一种葫芦烷三萜类化合物及其制备方法和应用 | |
| CN109456163B (zh) | 一种具有对称结构的环烯酮类化合物及其制备方法和应用 | |
| CN102146114B (zh) | 一种丹参酮ⅱa的制备方法 | |
| CN113402529B (zh) | 三聚愈创木烷型倍半萜类化合物及其制备方法和应用 | |
| CN112480203B (zh) | 一种醉茄内酯类化合物及其制备方法和应用 | |
| CN117771237B (zh) | 一种松香烷型二萜化合物的用途和制备方法 | |
| CN110372717B (zh) | 从万年蒿中提取分离木脂素类化合物的方法 | |
| CN108530509B (zh) | 一种升麻素苷-升麻三萜苷缩合物及其分离纯化方法及用途 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |