CN112569225B - 非药物幽门杆菌杀菌组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明为一种非药物幽门杆菌杀菌组合物，包括：第一日常食用成分，其中所述第一日常食用成分于溶液状态下，具有分子态及解离态、所述分子态第一日常食用成分用以在pH值小于5之环境下，执行杀除幽门杆菌及抑制所述幽门杆菌之抗坏血酸氧化酶之功能、且所述第一日常食用成分是柠檬酸、苹果酸或其组合；以及第二日常食用成分，系盐类，用以与所述第一日常食用成分构成缓冲组合，并用以中和碳酸氢盐，以利所述第一日常食用成分持续有效进行杀除所述幽门杆菌及抑制所述幽门杆菌抗坏血酸氧化酶之功能，其中所述盐类是柠檬酸盐、苹果酸盐或其组合。

Description

非药物幽门杆菌杀菌组合物
技术领域
本发明有关一种非药物幽门杆菌杀菌组合物。更详细而言，本发明关于一种在pH值小于5之环境下，执行杀除一幽门杆菌及抑制所述幽门杆菌之一抗坏血酸氧化酶之功能之非药物幽门杆菌杀菌组合物。
背景技术
全球幽门螺旋杆菌感染率超过50％，且感染者的10-15％会发展为胃溃疡。95％十二指肠溃疡和80％胃溃疡和幽门螺旋杆菌有关。有1-3％感染者会发展成胃癌。因此，世界卫生组织(WHO)将幽门螺旋杆菌列为1级致癌物(请参照参考文献D(1))。
最近几年对幽门螺旋杆菌在胃黏膜的存活和致病研究，正是医学界藉以观察微生物在黏膜致病(慢性传染(chronic infections))机转之重点。医学界希望藉由黏膜中消灭幽门螺旋杆菌来找黏膜中消灭其他有毒害致病微生物之解决方案。因肠道微生物失调(dysbiosis)常是一些慢性病，如肥胖(obesity)、糖尿病(diabetes)及发炎性疾病(inflammatory diseases)的致病原(请参照参考文献D(1))。
幽门螺旋杆菌是在人类消化道生存的最有趣微生物之一，且和胃十二指肠黏膜(gastroduodenal mucosa)内之活跃的炎症变化(active inflammatory changes)有关(胃部约50-65％相关；十二指肠约95％相关)。据研究显示，幽门螺旋杆菌感染者应完全消灭幽门螺旋杆菌以避免胃溃疡之复发(ulcer recurrence)和并发症(ulcer complications)(请参照参考文献D(2))。
幽门螺旋杆菌是一种聪明的细菌，一旦住进人体胃部，便可以安然地和人体共生。临床发现，幽门螺旋杆菌感染者有80％到90％会有慢性胃炎问题，但仅20％会出现症状，感染者中有15％到20％会引发胃溃疡或十二指肠溃疡，1％到3％带菌者会演变为胃癌，千分之一到万分之一会有胃淋巴癌问题，相较于未感染幽门螺旋杆菌者，罹患胃癌的风险增加6倍之多(请详参考文献D(22))。
有研究报告显示，幽门螺旋杆菌长期寄生在胃黏膜内会导致慢性萎缩性胃炎(chronic atrophic gastritis)且后续引发腺癌(adenocarcinoma)(请参照参考文献D(2))。
关于幽门螺旋杆菌感染疗法之未来趋势展望重点可以下列(1)至(3)点来探讨(请参照参考文献D(3))：
(1)现今疗法之瓶颈
·日益严重之抗药性
·长期服用之健康顾虑。(一个疗程10-14天；每天3-4次)
·抗药性造成单次剂量过高，增加毒副作用。(单一抗生素500-1000mg)
·日益严重之复发性
·抗生素诱发其它病症包括
a.肥胖
b.脂肪肝病
c.第二型糖尿病
·抗生素主要受胃黏膜阻碍而显著影响药效，反而伤肝肾胃。
·抗生素的毒副作用造成就医病患的不适与身体额外负担
*单一幽门螺旋杆菌感染导致癌症之病患(78万)约占全球每年致癌病患的6.2％－非常高的占比。
(2)传统三合一疗法之进阶版：
·加铋剂为“四合一”：提升疗效(“铋剂”主在“尿素酶活性抑制”)
·N-乙酰半胱氨酸(NAC)替代加入“三合一”或单剂使用
·NAC之主要副作用：
a.具高毒副作用且需高剂量
b.有效降低胃黏膜黏度，但易造成溃疡恶化。
(3)最新幽门螺旋杆菌感染疗法之研发方向：
·窄谱(narrow-spectrum)
·非抗生素(non-antibiotic)
幽门螺旋杆菌主要寄生在人类胃部的胃窦黏膜内的上皮细胞之顶部(请参照参考文献D(1)图1)。胃黏膜内的pH为阶梯式(pH-gradient)，主因是上皮细胞顶部会分泌碳酸氢盐(HCO3 -)进入黏膜抗酸并形成胃黏膜内的pH梯度(pH-gradient)(请参照参考文献D(4)摘要)。所以，本案组合物要能有效完全消灭在胃部寄生的幽门螺旋杆菌，必须要在胃黏膜内能抗碱(即抗碳酸氢盐(HCO3 -))且在酸性环境灭菌。再者，胃液(gastric juice)含尿素，幽门螺旋杆菌具尿素酶可将尿素水解来提升微环境的pH，以对抗酸(即氢离子)攻击。一般抗生素的活性多在pH5-8之间，反而需要制酸剂或氢离子帮浦阻断剂(Proton PumpInhibitor,PPI)来抑制胃酸分泌，避免胃部pH过低而不利抗生素的杀菌作用(请参照参考文献D(5)图3)。总而言之，胃黏膜内的碳酸氢盐(HCO3 -)对幽门螺旋杆菌能够寄生在胃黏膜内的上皮细胞之顶部极为重要。另外，尿素酶也是幽门螺旋杆菌能够寄生在胃黏膜内的重要关键之一。
以下说明胃窦黏膜内的“碳酸氢盐障壁(bicarbonate barrier)”：
幽门杆菌在胃窦黏膜(mucus)内上皮细胞(epithelial cell)顶部寄生(colonization)请参照参考文献D(1)图1。
关于胃窦黏膜内的pH梯度(pH-gradient)请参照参考文献D(4)摘要。根据参考文献D(4)，有关消化道黏膜的“碳酸氢盐障壁(bicarbonate barrier)”特性包括pH梯度(pH-gradient)(从腔体到上皮细胞顶部，pH是由低而高)、抗酸(against acid)、抗胃蛋白酶(against pepsin)。第C6页图2(小鼠活体实验)中A组刺激胃壁细胞分泌胃液-使用五肽胃泌素(pentagastrin)、B组抑制胃酸分泌-使用雷尼替丁(ranitidine)。关于在黏膜和上皮细胞顶部之间(mucoepithelial interface)的pH变化，在B组(抑制胃酸分泌)，可观察到pH从7显著快速下降到2-3，经过约20分钟，再快速回升到6-7。第C6页之右栏第4-20行，明确说明分子量(Da)小于400的物质包括离子(ions)和小分子物质(small-sized molecules)经活体实验证实皆能自由穿越黏膜。所以，对分子量小于400的物质包括柠檬酸和抗坏血酸在黏膜内进行灭菌之主要干扰因子应所述是碳酸氢盐(bicarbonate,HCO3 -)。
因此，找到一种能在胃黏膜内抗碳酸氢盐(HCO3 -)且在酸性环境灭菌的组合物对于有效消灭在胃部寄生的幽门螺旋杆菌至关紧要。(请参照有机酸杀格兰氏阴性菌-A reviewof the effects of dietary organic acids fed to swine(2015)之图1和第4/11页右栏第8～20行)(格兰氏阴性菌包括幽门螺旋杆菌)。
发明内容
本发明之一面向系提供一种非药物幽门杆菌杀菌组合物，包括：一第一日常食用成分，其中所述第一日常食用成分于一溶液状态下，具有一分子态及一解离态、所述分子态第一日常食用成分用以在pH值小于5之环境下，执行杀除一幽门杆菌及抑制所述幽门杆菌之一抗坏血酸氧化酶之功能、且所述第一日常食用成分是柠檬酸、苹果酸或其组合；一第二日常食用成分，用以中和一碳酸氢盐，且所述有机酸是柠檬酸、苹果酸或其组合；一盐类，用以与所述柠檬酸、苹果酸或其组合构成一缓冲组合，其中所述盐类是柠檬酸盐、苹果酸盐或其组合；以及一第三日常食用成分，用以在第一及第二日常食用成分存在条件下，更彻底执行杀除所述幽门杆菌，其中所述第三日常食用成分为一抗坏血酸。
本发明之另一面向系提供一种非药物幽门杆菌杀菌组合物，包括：一第一日常食用成分，其中所述第一日常食用成分系由一有机酸及其盐类所组成之一缓冲组合、所述第一日常食用成分用以中和一碳酸氢盐，且用以在pH值小于5之环境下，执行杀除一幽门杆菌及抑制所述幽门杆菌之一抗坏血酸氧化酶之功能、且所述有机酸是是柠檬酸、苹果酸或其组合；以及一第二日常食用成分，用以在所述第一日常食用成分存在条件下，更彻底执行杀除所述幽门杆菌，其中所述第二日常食用成分为一抗坏血酸。
本发明之另一面向系提供一种非药物幽门杆菌杀菌组合物，包括：一第一日常食用成分，其中所述第一日常食用成分于一溶液状态下，具有一分子态及一解离态、所述分子态第一日常食用成分用以在pH值小于5之环境下，执行杀除一幽门杆菌及抑制所述幽门杆菌之一抗坏血酸氧化酶之功能、且所述第一日常食用成分是柠檬酸、苹果酸或其组合；以及一第二日常食用成分，系一盐类，用以与所述第一日常食用成分构成一缓冲组合，并用以中和一碳酸氢盐，以利所述第一日常食用成分持续有效进行杀除所述幽门杆菌及抑制所述幽门杆菌抗坏血酸氧化酶之功能，其中所述盐类是柠檬酸盐、苹果酸盐或其组合。
附图说明
本发明的上述目的及优点在参阅以下详细说明及所附图式之后对所属技术领域中具有通常知识者将变得更显而易见。
图1显示pH3.0、4.0、5.0之柠檬酸缓冲组合加/不加抗坏血酸以及磷酸缓冲组合加/不加抗坏血酸之幽门螺旋杆菌抗菌实验。
图2显示pH3.0之柠檬酸缓冲组合加抗坏血酸之幽门螺旋杆菌抗菌实验。
图3显示pH3.0、4.0、5.0之苹果酸缓冲组合、乳酸缓冲组合、柠檬酸缓冲组合以及磷酸缓冲组合之幽门螺旋杆菌抗菌实验。
图4显示pH3.0、4.0、5.0之苹果酸缓冲组合加抗坏血酸、乳酸缓冲组合加抗坏血酸、柠檬酸缓冲组合加抗坏血酸以及磷酸缓冲组合加抗坏血酸之幽门螺旋杆菌抗菌实验。
具体实施方式
以下为本发明的实施例
(一)实验仪器
灭菌釜Autoclave(FD50R,Zealway,USA)
微量离心机Microcentrifuge(SpectrafugeTM 24D,Labnet,USA)
电子微量天平Electronic Microbalance(XR 205SM-DR,Precisa,Switzerland)
电子天平Electronic Balance(PB1502-S,Mettler Toledo,USA)
pH计pH Meter(Delta 320,Mettler Toledo,USA)
恒温震荡培养箱Orbital Shaker Incubator(721SR,HIPOINT,中国台北)
生物安全柜Biological Safety Cabinets(Ever Win Technology,中国台北)无认证台制
多孔盘光谱分析仪Microplate reader(
Figure GDA0003727377550000071
Nano,BMG Labtech,Germany)
纯水机Water Purification system(Polycon DIU-3,Scienpak Enterprise,中国台北)
定量吸管Pipette 10-100μL(
Figure GDA0003727377550000072
manual 825,Socorex,Switzerland)
定量吸管Pipette 20-200μL(
Figure GDA0003727377550000073
manual 825,Socorex,Switzerland)
定量吸管Pipette 100-1000μL(
Figure GDA0003727377550000074
manual 825,Socorex,Switzerland)
血清瓶Serum Bottle 1000mL(Schott,Germany)
血清瓶Serum Bottle 500mL(Schott,Germany)
血清瓶Serum Bottle 50mL(Schott,Germany)
烧杯Beaker 1000mL(Kimax,USA)
烧杯Beaker 500mL(Kimax,USA)
烧杯Beaker 100mL(Kimax,USA)
搅拌子Stirrer(Dogger,中国台北)
△型玻璃涂抹棒Glass Triangle-headed Cell Spreader(Dogger,中国台北)
酒精灯Alcohol Burner(Dogger,中国台北)
厌氧缸AnaeroPack Jar(MGC
Figure GDA0003727377550000075
Mitsubishi Gas Chemical,Japan)
(二)实验耗材
分注吸管尖Pipetmen tips 10-200μL(
Figure GDA0003727377550000081
USA)
分注吸管尖Pipetmen tips 100-1000μL(
Figure GDA0003727377550000082
USA)
微量离心管Microcentrifuge Tubes 1.5mL(Jet
Figure GDA0003727377550000083
China)
离心管Centrifuge Tubes 15mL(Jet
Figure GDA0003727377550000084
China)
离心管Centrifuge Tubes 50mL(Jet
Figure GDA0003727377550000085
China)
培养皿Cell and Tissue Culture Dishes 9.0cm(Jet
Figure GDA0003727377550000086
China)
细胞培养多孔盘Cell and Tissue Culture Plates 48well(Jet
Figure GDA0003727377550000087
China)
细胞培养多孔盘Cell and Tissue Culture Plates 96well(Jet
Figure GDA0003727377550000088
China)
针筒过滤器Syringe Driven Filter 0.22μm(PVDF membrane,Jet
Figure GDA0003727377550000089
China)
注射针筒Disposable Syringe 1mL(Terumo,Japan)
微好氧包Genbox Microaer(Ref.96125,bioMérieux,France)
(三)实验药品
尿素Urea(Nihon Shiyaku,中国台北)
柠檬酸Citric Acid(Nihon Shiyaku,中国台北)
柠檬酸钠Sodium Citrate(Nihon Shiyaku,中国台北)
磷酸二氢钾Potassium Dihydrogen Phosphate(Nihon Shiyaku,中国台北)
磷酸一氢钠Sodium Hydrogen Phosphate(Nihon Shiyaku,中国台北)
苹果酸DL-Malic acid(Shun Ching Raw Material,中国台北)
苹果酸钠Sodium DL-Malate(Gemfont,中国台北)
乳酸Lactic acid(Alfa Aesar,USA)
乳酸钠Sodium Lactate(Hsin Eing,中国台北)
碳酸氢钠Sodium hydrogen carbonate(Shimakyu yakuhin,Japan)
氯化钠Sodium Chloride(Nihon Shiyaku,中国台北)
盐酸Hydrogen Chloride(Nihon Shiyaku,中国台北)
氢氧化钠Sodium Hydroxide(Nihon Shiyaku,中国台北)
布鲁氏菌培养基BBLTM Brucella broth(BD Biosciences,USA)
琼脂BactoTM Agar(BD Biosciences,USA)
特级马血清Donor Equine Serum(Hyclone,USA)
抗坏血酸L-Ascorbic acid(Sigma,USA)
(四)实验方法
实施例一
幽门螺旋杆菌抗菌实验(检测时间点:0/20/40/60分钟，三重复)：柠檬酸缓冲组合加/不加抗坏血酸以及磷酸缓冲组合加/不加抗坏血酸
菌种及培养方法
实验使用菌株为Helicobacter pylori strain 26695(ATCC700392)，继代培养使用Brucella固体培养基(Brucella broth 28g/L,Agar 15g/L and10％(v/v)Horse serum,pH7.0)，以画线法种菌后在潮湿的厌氧箱中以37℃静置培养72小时，使用微好氧包(Genboxmicroaer,BioMérieux,96125)。
将0.22μm注射型过滤器过滤之各培养液备用。将含10mg/mL NaHCO3之Brucellabroth加入继代培养72小时后的幽门螺旋杆菌，细菌浓度调至107-108CFU/mL作为菌液，将菌液与各培养液以1：1混合置于潮湿的厌氧箱中以37℃静置培养，使用微好氧包(Genboxmicroaer,BioMérieux,96125)。
柠檬酸缓冲溶液以柠檬酸和柠檬酸钠依照pH值以不同比例混合而成，无法调制的部分则用HCl和NaOH调制固定pH值。磷酸缓冲溶液以KH2PO4和Na2HPO4依照pH值以不同比例混合而成，无法调制的部分则用HCl和NaOH调制固定pH值。纯培养液的pH值用HCl和NaOH调制。各培养液以上述方法调至固定pH值后，额外添加抗坏血酸至固定浓度，菌液与各培养液组成如下：
菌液：(Brucella broth 28g/L,NaHCO3 10g/L and 10mM Urea)。
第一组：N3(Brucella broth 28g/L and 10mM Urea,pH3.0)。
第二组：N3V3000(Brucella broth 28g/L and 10mM Urea,pH3.0)+(6000mg/LVitamin C)。
第三组：N4(Brucella broth 28g/L and 10mM Urea,pH4.0)。
第四组：N4V3000(Brucella broth 28g/L and 10mM Urea,pH4.0)+(6000mg/LVitamin C)。
第五组：N5(Brucella broth 28g/L and 10mM Urea,pH5.0)。
第六组：N5V3000(Brucella broth 28g/L and 10mM Urea,pH5.0)+(6000mg/LVitamin C)。
第七组：P3(Brucella broth 28g/L,0.1M Phosphate buffered saline(PBS)and10mM Urea,pH3.0)。
第八组：P3V3000(Brucella broth 28g/L,0.1M Phosphate buffered saline(PBS)and 10mM Urea,pH3.0)+(6000mg/L Vitamin C)。
第九组：P4(Brucella broth 28g/L,0.1M Phosphate buffered saline(PBS)and10mM Urea,pH4.0)。
第十组：P4V3000(Brucella broth 28g/L,0.1M Phosphate buffered saline(PBS)and 10mM Urea,pH4.0)+(6000mg/L Vitamin C)。
第十一组：P5(Brucella broth 28g/L,0.1M Phosphate buffered saline(PBS)and 10mM Urea,pH5.0)。
第十二组：P5V3000(Brucella broth 28g/L,0.1M Phosphate buffered saline(PBS)and 10mM Urea,pH5.0)+(6000mg/L Vitamin C)。
第十三组：C3(Brucella broth 28g/L,0.1M Citrate buffer and 10mM Urea,pH3.0)。
第十四组：C3V3000(Brucella broth 28g/L,0.1M Citrate buffer and10mMUrea,pH3.0)+(6000mg/L Vitamin C)。
第十五组：C4(Brucella broth 28g/L,0.1M Citrate buffer and 10mM Urea,pH4.0)。
第十六组：C4V3000(Brucella broth 28g/L,0.1M Citrate buffer and10mMUrea,pH4.0)+(6000mg/L Vitamin C)。
第十七组：C5(Brucella broth 28g/L,0.1M Citrate buffer and 10mM Urea,pH5.0)。
第十八组：C5V3000(Brucella broth 28g/L,0.1M Citrate buffer and10mMUrea,pH5.0)+(6000mg/L Vitamin C)。
将依检测时间培养后的各培养液分别以生理食盐水做10倍率连续稀释后，将各倍率菌液以涂盘法涂至继代培养用的Brucella固体培养基中，在潮湿的厌氧箱中以37℃静置培养72小时，使用微好氧包(Genbox microaer,BioMérieux,96125)，最后计算各培养液之活菌数。
实施例二
幽门螺旋杆菌抗菌实验(检测时间点:0/20/40/60分钟，三重复)：柠檬酸缓冲组合加抗坏血酸
菌种及培养方法
实验使用菌株为Helicobacter pylori strain 26695(ATCC700392)，继代培养使用Brucella固体培养基(Brucella broth 28g/L,Agar 15g/L and10％(v/v)Horse serum,pH7.0)，以画线法种菌后在潮湿的厌氧箱中以37℃静置培养72小时，使用微好氧包(Genboxmicroaer,BioMérieux,96125)。将0.22μm注射型过滤器过滤之各培养液备用。将含10mg/mLNaHCO3之Brucella broth加入继代培养72小时后的幽门螺旋杆菌，细菌浓度调至107-108CFU/mL作为菌液，将菌液与各培养液以1：1混合置于潮湿的厌氧箱中以37℃静置培养，使用微好氧包(Genbox microaer,BioMérieux,96125)。
柠檬酸缓冲溶液以柠檬酸和柠檬酸钠依照pH值以不同比例混合而成，无法调制的部分则用HCl和NaOH调制固定pH值。磷酸缓冲溶液以KH2PO4和Na2HPO4依照pH值以不同比例混合而成，无法调制的部分则用HCl和NaOH调制固定pH值。纯培养液的pH值用HCl和NaOH调制。各培养液以上述方法调至固定pH值后，额外添加抗坏血酸至固定浓度，菌液与各培养液组成如下：
第一组：C3V3000(Brucella broth 28g/L,0.1M Citrate buffer and 10mMUrea,pH3.0)+(6000mg/L Vitamin C)。
第二组：C3V6000(Brucella broth 28g/L,0.1M Citrate buffer and 10mMUrea,pH3.0)+(12000mg/L Vitamin C)。
第三组：C3V9000(Brucella broth 28g/L,0.1M Citrate buffer and 10mMUrea,pH3.0)+(18000mg/L Vitamin C)。
将依检测时间培养后的各培养液分别以生理食盐水做10倍率连续稀释后，将各倍率菌液以涂盘法涂至继代培养用的Brucella固体培养基中，在潮湿的厌氧箱中以37℃静置培养72小时，使用微好氧包(Genbox microaer,BioMérieux,96125)，最后计算各培养液之活菌数。尿素之添加请详见参考文献D(6)和D(7)；NaHCO3之添加请详见参考文献D(5)、D(8)和D(9)。
实施例三
幽门螺旋杆菌抗菌实验(检测时间点:0/20/40/60分钟)：苹果酸缓冲组合、乳酸缓冲组合、柠檬酸缓冲组合以及磷酸缓冲组合
菌种及培养方法
实验使用菌株为Helicobacter pylori strain 26695(ATCC700392)，继代培养使用Brucella固体培养基(Brucella broth 28g/L,Agar 15g/L and10％(v/v)Horse serum,pH7.0)，以画线法种菌后在潮湿的厌氧箱中以37℃静置培养72小时，使用微好氧包(Genboxmicroaer,BioMérieux,96125)。将0.22μm注射型过滤器过滤之各培养液备用。将含10mg/mLNaHCO3之Brucella broth加入继代培养72小时后的幽门螺旋杆菌，细菌浓度调至107-108CFU/mL作为菌液，将菌液与各培养液以1：1混合置于潮湿的厌氧箱中以37℃静置培养，使用微好氧包(Genbox microaer,BioMérieux,96125)。
柠檬酸缓冲溶液以柠檬酸和柠檬酸钠依照pH值以不同比例混合而成，无法调制的部分则用HCl和NaOH调制固定pH值。苹果酸与乳酸缓冲溶液以苹果酸、苹果酸钠或乳酸、乳酸钠依照相同方式配制。磷酸缓冲溶液以KH2PO4和Na2HPO4依照pH值以不同比例混合而成，无法调制的部分则用HCl和NaOH调制固定pH值。纯培养液的pH值用HCl和NaOH调制。各培养液以上述方法调至固定pH值后，额外添加抗坏血酸至固定浓度，菌液与各培养液组成如下：
菌液：(Brucella broth 28g/L,NaHCO3 10g/L and 10mM Urea)。
第一组：M3(Brucella broth 28g/L,0.1M Malic Acid buffer and 10mM Urea,pH3.0)。
第二组：M4(Brucella broth 28g/L,0.1M Malic Acid buffer and 10mM Urea,pH4.0)。
第三组：M5(Brucella broth 28g/L,0.1M Malic Acid buffer and 10mM Urea,pH5.0)。
第四组：L3(Brucella broth 28g/L,0.1M Lactic acid buffer and 10mM Urea,pH3.0)。
第五组：L4(Brucella broth 28g/L,0.1M Lactic acid buffer and 10mM Urea,pH4.0)。
第六组：L5(Brucella broth 28g/L,0.1M Lactic acid buffer and 10mM Urea,pH5.0)。
第七组：P3(Brucella broth 28g/L,0.1M Phosphate buffered saline(PBS)and10mM Urea,pH3.0)。
第八组：P4(Brucella broth 28g/L,0.1M Phosphate buffered saline(PBS)and10mM Urea,pH4.0)。
第九组：P5(Brucella broth 28g/L,0.1M Phosphate buffered saline(PBS)and10mM Urea,pH5.0)。
第十组：C3(Brucella broth 28g/L,0.1M Citrate buffer and 10mM Urea,pH3.0)。
第十一组：C4(Brucella broth 28g/L,0.1M Citrate buffer and 10mM Urea,pH4.0)。
第十二组：C5(Brucella broth 28g/L,0.1M Citrate buffer and 10mM Urea,pH5.0)。
将依检测时间培养后的各培养液分别以生理食盐水做10倍率连续稀释后，将各倍率菌液以涂盘法涂至继代培养用的Brucella固体培养基中，在潮湿的厌氧箱中以37℃静置培养72小时，使用微好氧包(Genbox microaer,BioMérieux,96125)，最后计算各培养液之活菌数。
实施例四
幽门螺旋杆菌抗菌实验(检测时间点:0/20/40/60分钟)：苹果酸缓冲组合加抗坏血酸、乳酸缓冲组合加抗坏血酸、柠檬酸缓冲组合加抗坏血酸以及磷酸缓冲组合加抗坏血酸
菌种及培养方法
实验使用菌株为Helicobacter pylori strain 26695(ATCC700392)，继代培养使用Brucella固体培养基(Brucella broth 28g/L,Agar 15g/L and10％(v/v)Horse serum,pH7.0)，以画线法种菌后在潮湿的厌氧箱中以37℃静置培养72小时，使用微好氧包(Genboxmicroaer,BioMérieux,96125)。将0.22μm注射型过滤器过滤之各培养液备用。将含10mg/mLNaHCO3之Brucella broth加入继代培养72小时后的幽门螺旋杆菌，细菌浓度调至107-108CFU/mL作为菌液，将菌液与各培养液以1：1混合置于潮湿的厌氧箱中以37℃静置培养，使用微好氧包(Genbox microaer,BioMérieux,96125)。
柠檬酸缓冲溶液以柠檬酸和柠檬酸钠依照pH值以不同比例混合而成，无法调制的部分则用HCl和NaOH调制固定pH值。苹果酸与乳酸缓冲溶液以苹果酸、苹果酸钠或乳酸、乳酸钠依照相同方式配制。磷酸缓冲溶液以KH2PO4和Na2HPO4依照pH值以不同比例混合而成，无法调制的部分则用HCl和NaOH调制固定pH值。纯培养液的pH值用HCl和NaOH调制。各培养液以上述方法调至固定pH值后，额外添加抗坏血酸至固定浓度，菌液与各培养液组成如下：
菌液：(Brucella broth 28g/L,NaHCO3 10g/L and 10mM Urea)。
第一组：M3V3000(Brucella broth 28g/L,0.1M Malic Acid buffer and10mMUrea,pH3.0)+(6000mg/L Vitamin C)。
第二组：M4V3000(Brucella broth 28g/L,0.1M Malic Acid buffer and10mMUrea,pH4.0)+(6000mg/L Vitamin C)。
第三组：M5V3000(Brucella broth 28g/L,0.1M Malic Acid buffer and10mMUrea,pH5.0)+(6000mg/L Vitamin C)。
第四组：L3V3000(Brucella broth 28g/L,0.1M Lactic acid buffer and10mMUrea,pH3.0)+(6000mg/L Vitamin C)。
第五组：L4V3000(Brucella broth 28g/L,0.1M Lactic acid buffer and10mMUrea,pH4.0)+(6000mg/L Vitamin C)。
第六组：L5V3000(Brucella broth 28g/L,0.1M Lactic acid buffer and10mMUrea,pH5.0)+(6000mg/L Vitamin C)。
第七组：P3V3000(Brucella broth 28g/L,0.1M Phosphate buffered saline(PBS)and 10mM Urea,pH3.0)+(6000mg/L Vitamin C)。
第八组：P4V3000(Brucella broth 28g/L,0.1M Phosphate buffered saline(PBS)and 10mM Urea,pH4.0)+(6000mg/L Vitamin C)。
第九组：P5V3000(Brucella broth 28g/L,0.1M Phosphate buffered saline(PBS)and 10mM Urea,pH5.0)+(6000mg/L Vitamin C)。
第十组：C3V3000(Brucella broth 28g/L,0.1M Citrate buffer and 10mMUrea,pH3.0)+(6000mg/L Vitamin C)。
第十一组：C4V3000(Brucella broth 28g/L,0.1M Citrate buffer and10mMUrea,pH4.0)+(6000mg/L Vitamin C)。
第十二组：C5V3000(Brucella broth 28g/L,0.1M Citrate buffer and10mMUrea,pH5.0)+(6000mg/L Vitamin C)。
将依检测时间培养后的各培养液分别以生理食盐水做10倍率连续稀释后，将各倍率菌液以涂盘法涂至继代培养用的Brucella固体培养基中，在潮湿的厌氧箱中以37℃静置培养72小时，使用微好氧包(Genbox microaer,BioMérieux,96125)，最后计算各培养液之活菌数。
(五)实验结果
实施例一
实施例一的结果请见表一及图1。
表一
Figure GDA0003727377550000171
实施例二
实施例二的结果请见表二及图2。
表二
Figure GDA0003727377550000172
实施例三
实施例三的结果请见表三及图3。
表三
Figure GDA0003727377550000173
Figure GDA0003727377550000181
实施例四
实施例四的结果请见表四及图4。
表四
Figure GDA0003727377550000182
由实施例一的结果可知，本案pH值小于5的柠檬酸缓冲组合在碳酸氢盐环境具杀菌效用。传统上皆认为柠檬酸不但无杀幽门螺旋杆菌效果，并且有反向趋势(请详参考文献D(10)：柠檬酸显著增强幽门螺旋杆菌尿素酶活性且环境pH非关键因素之第1766页左栏第26-35行和图1)。本案以pH值小于5的柠檬酸缓冲组合作为幽门螺旋杆菌杀菌剂之组合成分，可谓第一次在pH值小于5的碳酸氢盐环境使用柠檬酸做为杀幽门螺旋杆菌成份且其具杀菌效用，极具新颖性和进步性。
pH值小于5的柠檬酸缓冲组合加抗坏血酸在碳酸氢盐环境具显著「剂量关系(dosedependent)」杀菌效用。此外，经由比较C3与C3V3000、C4与C4V3000，可观察到抗坏血酸对柠檬酸缓冲组合之杀菌具明显「加乘效用(synergistic effect)」。
相反地，磷酸缓冲组合或水在有碳酸氢盐之环境不具杀菌效能，添加抗坏血酸亦无杀菌和「加乘效用」。
依据实施例一的实验结果，于实施例二进行不同浓度的抗坏血酸搭配pH3之柠檬酸缓冲组合来验证不同浓度抗坏血酸的杀菌加乘效用以及20分钟内有效杀菌的最适浓度。
有效杀菌(Bactericidal Activity)通常定义为在特定的培养时间(通常为20到24小时)相对于接种密度，菌落形成单位的数量减少99.9％(请参照Goldman's CecilMedicine(Twenty Fourth Edition),2012)。
实施例二之图2的活菌数从7Log10(CFU/mL)下降到3Log10(CFU/mL)，已达99.9％的杀菌效用。关于不同浓度抗坏血酸在pH3的杀菌加乘效用，C3(无抗坏血酸)无法在60分钟内有效杀菌；C3V3000(3000mg/L抗坏血酸)在60分钟内有效杀菌；C3V6000(6000mg/L抗坏血酸)在40分钟内有效杀菌；C3V9000(9000mg/L抗坏血酸)在20分钟内有效杀菌且在60分钟内有效灭菌。
实施例一及实施例二证明pH值小于5的柠檬酸缓冲组合加抗坏血酸在碳酸氢盐环境具有杀菌效用，所述杀菌效用呈现「剂量依赖(dose dependent)」，且抗坏血酸对柠檬酸缓冲组合之杀菌具明显「加乘效用(synergistic effect)」，且在pH等于3时有较佳缓冲容量(buffer capacity)(请详参考文献D(11)，故具较佳灭菌效用。这是「新发现」且「非显而易见」。
由实施例三及实施例四的结果可知，本案pH值小于5的苹果酸缓冲组合在碳酸氢盐环境具杀菌效用。传统上皆认为苹果酸不但无杀幽门螺旋杆菌效果，并且有反向趋势(请详柠檬酸和苹果酸皆能在酸性环境增强幽门螺旋杆菌尿素酶活性(Effect of differentorganic acids(citric,malic and ascorbic)on intragastric urease activity,2005之Summary中的Conclusions以及图1及2图2))。本案以pH值小于5的柠檬酸或苹果酸缓冲组合作为幽门螺旋杆菌杀菌剂之组合成分，可谓第一次在pH值小于5的碳酸氢盐环境使用柠檬酸或苹果酸做为杀幽门螺旋杆菌成份且其具杀菌效用，极具新颖性和进步性。
此外，经由比较实施例三及实施例四，可观察到抗坏血酸对柠檬酸或苹果酸缓冲组合之杀菌具明显「加乘效用(synergistic effect)」。
相反地，磷酸缓冲组合或水在有碳酸氢盐之环境不具杀菌效能，添加抗坏血酸亦无杀菌和「加乘效用」。
pH值小于5的柠檬酸或苹果酸缓冲组合在碳酸氢盐环境具显著「剂量关系(dosedependent)」杀菌效用。
依据实施例之C3、C3V3000、C4V3000以及M3、M3V3000、M4V3000可观察到pH小于5的缓冲组合在60分钟后的pH值和杀菌结果。
请参照参考文献D(1)第292页图3，其显示幽门螺旋杆菌体内之抗坏血酸氧化酶活性和pH之关连性。幽门螺旋杆菌体内有两种抗坏血酸氧化酶：细胞间质抗坏血酸氧化酶和细胞内膜抗坏血酸氧化酶(请详参考文献D(12))。所述关连性显示这两类抗坏血酸氧化酶活性在pH4-5之间同时呈现较弱活性(请详参考文献D(12)图3)，有利抗坏血酸杀菌(请参照第[0074]段)。
因柠檬酸和苹果酸具抗坏血酸氧化酶活性抑制效能，所以在pH小于5时，抗坏血酸展现明显杀菌之加乘效用。磷酸缓冲组合和水明显不具抗坏血酸氧化酶活性抑制效能，添加等剂量抗坏血酸仍无法展现杀菌之效用(请参照实施例一、二、三及四的图式和表中60分钟后的pH值和杀菌结果)。
幽门杆菌是少数同时具备尿素酶和抗坏血酸氧化酶之降解作用极强的微生物(请详参考文献D(12)表1)。幽门杆菌抗坏血酸氧化酶与pH的关系请详参考文献D(12)图3。
如本案实验所示，幽门螺旋杆菌难消灭之主因在其寄生环境是黏膜上皮细胞且所述细胞因受环境氯离子(chloride ion)置换诱导(exchange induction)而分泌碳酸氢盐(HCO3 -)抗酸(请参照参考文献D(13)图2)。
胃黏膜在低pH环境较不利幽门螺旋杆菌游动(mobility)(请参照参考文献D(14)摘要)，有利本案缓冲组合物在黏膜内杀菌和灭菌。
当本案之缓冲组合pH等于3时，其在胃窦之pH小于3，有利抑制胃酸分泌(参考文献D(15)第422页PH CHANGES)，即等同抑制上皮细胞的碳酸氢盐分泌(胃部的氯离子藉由交换作用引导上皮细胞释出碳酸氢盐以便在黏膜内抗酸(请参照参考文献D(13)图2)，故有利杀菌和灭菌。
柠檬酸之实测pKa等于3.1，柠檬酸的标准pKa等于3.12(请参照参考文献D(11))，因而柠檬酸缓冲组合在pH等于3时呈现相当强的缓冲容量(buffer capacity)。
因此，pH等于3是杀菌和灭菌关键，在此pH条件呈现的缓冲容量(buffercapacity)亦是关键，在此pH条件能有效抑制抗坏血酸氧化酶活性是另一关键。在此pH条件添加抗坏血酸是快速杀菌的最关键(加乘效用)。抗坏血酸搭配柠檬酸或苹果酸缓冲组合在pH等于3时，会快速在黏膜内形成酸性环境(pH等于3)，有利杀菌和灭菌。
本案柠檬酸或苹果酸缓冲组合(pH＝3)在胃窦之pH应略小于3且不致显著改变胃窦之低pH环境(请参照参考文献D(16)图1)，有助抑制胃酸分泌(即抑制氯离子分泌)。因胃窦pH小于3而抑制胃酸分泌(抑制胃酸分泌类似制酸剂的作用，但不造成pH上升此点和制酸剂完全不同(请参照参考文献D(15))，也间接抑制上皮细胞的碳酸氢盐之持续性分泌，有利本案之柠檬酸或苹果酸缓冲组合在酸性微环境杀菌和灭菌。
胃黏膜内上皮细胞的碳酸氢盐(HCO3 -)分泌和胃部氯离子浓度呈正相关(请参照参考文献D(17)图4)。
观察实施例一，关键是「60分钟pH值」，「60分钟pH值」代表黏膜和上皮细胞顶部之间(mucoepithelial interface)的pH。
本案pH等于3的柠檬酸缓冲组合和柠檬酸缓冲组合加抗坏血酸具有效杀菌和灭菌能力(60分钟内灭菌)，且pH等于3的抗坏血酸搭配柠檬酸缓冲组合可在20分钟内有效杀菌。碳酸氢钠(NaHCO3)添加正凸显这关键的黏膜和上皮细胞顶部之间(mucoepithelialinterface)的pH变化。
综上所述(实施例一、二及四)可知，本案pH等于3之柠檬酸或苹果酸缓冲组合搭配抗坏血酸中，抗坏血酸具胃黏膜的修复和保护作用(请参照参考文献D(18)摘要)、抗坏血酸具降黏性(mucolysis)(请参照参考文献D(19)摘要)、且抗坏血酸在pH等于3之柠檬酸或苹果酸缓冲组合显著起到快速杀菌之效用和显著加乘效用。胃窦在pH小于3时会抑制胃酸分泌(请参照参考文献D(15)第422页PH CHANGES)，有利杀菌和灭菌。C3V9000(柠檬酸缓冲组合搭配抗坏血酸)可有效消灭幽门杆菌，为较佳灭菌组合。
关于幽门螺旋杆菌日益增强的抗药性，本案缓冲组合物(抗坏血酸搭配柠檬酸或苹果酸缓冲组合)是特意从大自然找到杀菌的组合，而非刻意以人为方式合成。幽门螺旋杆菌的抗药性成因为幽门螺旋杆菌可经由基因交换或染色体突变产生抗药性(请详参考文献D(20)和D(21))。幽门螺旋杆菌在复制时可自然发生基因突变(Gene mutation)，此时若同时使用抗生素，则多中选精便易产生抗药性突变种而同时易于进行大量复制(请详参考文献D(20)和D(21))。幽门螺旋杆菌在pH6-8的环境会分裂繁殖，此环境正是抗生素有效杀菌的最适pH环境，这应所述是造成抗生素有日趋严重抗药性的主因(请详参考文献(D5))。本案缓冲组合物(抗坏血酸搭配柠檬酸或苹果酸缓冲组合)主要在pH等于3的环境杀菌，所以基本上，幽门螺旋杆菌在此环境不会分裂繁殖，应不可能产生抗药性突变种。
由于本发明的非药物幽门杆菌杀菌组合物不含抗生素成分，较无抗药性和食安之疑虑。
本发明实属难能的创新发明，深具产业应用价值，援依法提出申请。此外，本发明可以由所属技术领域中具有通常知识者做任何修改，但不脱离如所附申请专利范围所要保护的范围。
实施例
1.一种非药物幽门杆菌杀菌组合物，包括：
一第一日常食用成分，其中所述第一日常食用成分包含于一溶液状态下，具有一分子态及一解离态、所述分子态第一日常食用成分用以在pH值小于5之环境下，执行杀除一幽门杆菌及抑制所述幽门杆菌之一抗坏血酸氧化酶之功能、且所述第一日常食用成分是柠檬酸、苹果酸或其组合；
一第二日常食用成分，用以中和一碳酸氢盐，且所述有机酸是柠檬酸、苹果酸或其组合；
一盐类，用以与所述柠檬酸、苹果酸或其组合构成一缓冲组合，其中所述盐类是柠檬酸盐、苹果酸盐或其组合；以及
一第三日常食用成分，用以在第一及第二日常食用成分存在条件下，更彻底执行杀除所述幽门杆菌，其中所述第三日常食用成分为一抗坏血酸。
2.如实施例1所述之非药物幽门杆菌杀菌组合物，其中所述抗坏血酸的浓度为3000-9000ppm。
3.如实施例1-2所述之非药物幽门杆菌杀菌组合物，其中所述抗坏血酸的浓度为9000ppm。
4.如实施例1-3所述之非药物幽门杆菌杀菌组合物，其中所述盐类是柠檬酸钠、苹果酸钠或其组合。
5.一种非药物幽门杆菌杀菌组合物，包括：
一第一日常食用成分，其中所述第一日常食用成分系由一有机酸及其盐类所组成之一缓冲组合、所述第一日常食用成分用以中和一碳酸氢盐，且用以在pH值小于5之环境下，执行杀除一幽门杆菌及抑制所述幽门杆菌之一抗坏血酸氧化酶之功能、且所述有机酸是是柠檬酸、苹果酸或其组合；以及
一第二日常食用成分，用以在所述第一日常食用成分存在条件下，更彻底执行杀除所述幽门杆菌，其中所述第二日常食用成分为一抗坏血酸。
6.如实施例5所述之非药物幽门杆菌杀菌组合物，其中所述非药物幽门杆菌杀菌组合物的pH值小于5。
7.如实施例5-6所述之非药物幽门杆菌杀菌组合物，其中所述非药物幽门杆菌杀菌组合物的pH值介于3-5。
8.如实施例5-7所述之非药物幽门杆菌杀菌组合物，其中所述非药物幽门杆菌杀菌组合物的pH值为3。
9.一种非药物幽门杆菌杀菌组合物，包括：
一第一日常食用成分，其中所述第一日常食用成分包含于一溶液状态下，具有一分子态及一解离态、所述分子态第一日常食用成分用以在pH值小于5之环境下，执行杀除一幽门杆菌及抑制所述幽门杆菌之一抗坏血酸氧化酶之功能、且所述第一日常食用成分是柠檬酸、苹果酸或其组合；以及
一第二日常食用成分，系一盐类，用以与所述第一日常食用成分构成一缓冲组合，并用以中和一碳酸氢盐，以利所述第一日常食用成分持续有效进行杀除所述幽门杆菌及抑制所述幽门杆菌抗坏血酸氧化酶之功能，其中所述盐类是柠檬酸盐、苹果酸盐或其组合。
10.如实施例9所述之非药物幽门杆菌杀菌组合物，其中所述非药物幽门杆菌杀菌组合物的pH值为3。
参考文献：
D(1):Factors that mediate colonization of the human stomach byHelicobacter pylori(2014)
D(2):Breakdown of the mucus layer by H.pylori(1994)
D(3):Future perspective for potential Helicobacter pylori eradicationtherapies(2018)
D(4):Gastroduodenal mucus bicarbonate barrier:protection against acidand pepsin(2005)
D(5):The life and death of Helicobacter pylori(1998)
D(6):Urea Protects Helicobacter(Campylobacter)pylori From theBactericidal Effect of Acid(1990).
D(7):Helicobacter pylori Requires an Acidic Environment To Survive inthe Presence of Urea(1995)
D(8):Gastric mucosal protective mechanisms:roles of epithelialbicarbonate and mucus secretions(1984).
D(9):Gastric mucus and bicarbonate secretion in relation to mucosalprotection.(1981)
D(10):Citric acid-enhanced Helicobacter pylori urease activity invivo is unrelated to gastric emptying(2001)
D(11):The buffering capacity of citrate buffer(http://www.fgsc.net/ fgn42/nozawa.html)
D(12):Investigation of Helicobacter pylori ascorbic acid oxidatingactivity(1995)
D(13):Acid Transport through Gastric Mucus(2004)
D(14):Helicobacter pylori moves through mucus by reducing mucinviscoelasticity(2009)
D(15):Progress report:Inhibition of gastric secretion by the pyloricantrum(1974)
D(16):Comparison of gastric body and antral pH:a 24hour ambulatorystudy in healthy volunteers(1989)
D(17):Three distinct mechanisms of HCO3 secretion in rat distal colon(2004)
D(18):Vitamin C,Gastritis,and Gastric Disease:a historical review andUpdate(2012)
D(19):Mucolysis by Ascorbic Acid and Hydrogen Peroxide on CompactMucin Secreted in Pseudomyxoma Peritonei(2011)
D(20):Helicobacter pylori Mutations Conferring Resistance toFluoroquinolones and Clarithromycin among Dyspeptic Patients Attending aTertiary Hospital,Tanzania(2019)
D(21):幽门螺旋杆菌根除失败原因及对策[二.内部因素(Hp本身因素)-(一)Hp的抗药性)]-感染控制杂志(Nosocomial Infection Control Journal,NICJ)(16:5民95.10；页276-282)(2006)
D(22):含铋剂四合一疗法可提升幽门螺旋杆菌除菌率。(2017)。

Claims (5)

1.一种杀菌组合物作为制备用于杀除在胃部的胃黏膜寄生的幽门杆菌的药物的应用，所述胃部分泌胃液，所述胃液包含尿素，所述胃黏膜包含碳酸氢盐，所述杀菌组合物的pH值介于3-5，且所述杀菌组合物包括：
第一日常食用成分，其中所述第一日常食用成分于溶液状态下，具有分子态及解离态、所述分子态第一日常食用成分用以在pH值小于5的环境下，执行杀除幽门杆菌及抑制所述幽门杆菌之抗坏血酸氧化酶之功能、且所述第一日常食用成分为柠檬酸、苹果酸或其组合；
第二日常食用成分，用以中和所述碳酸氢盐，在pH值小于5的环境下持续有效进行杀除所述幽门杆菌及抑制所述幽门杆菌抗坏血酸氧化酶的功能，且所述第二日常食用成分为柠檬酸、苹果酸或其组合；
盐类，用以与所述柠檬酸、苹果酸或其组合构成缓冲组合，其中所述盐类为柠檬酸盐、苹果酸盐或其组合；以及
第三日常食用成分，用以在所述缓冲组合存在条件下，且在pH值小于5的环境下抑制所述幽门杆菌抗坏血酸氧化酶的功能，使所述第三日常食用成分呈现杀菌效用与杀菌加乘效用，更彻底执行杀除所述幽门杆菌，且所述杀菌加乘效用在所述缓冲组合存在条件下呈现剂量关系，其中所述第三日常食用成分为抗坏血酸，且所述抗坏血酸的浓度为3000-9000ppm，以及所述杀菌组合物在60分钟灭菌。
2.根据权利要求1所述的应用，其中所述抗坏血酸的浓度为9000ppm。
3.根据权利要求1所述的应用，其中所述盐类为柠檬酸钠、苹果酸钠或其组合。
4.一种杀菌组合物作为制备用于杀除在胃部的胃黏膜寄生的幽门杆菌的药物的应用，所述胃部分泌胃液，所述胃液包含尿素，所述胃黏膜包含碳酸氢盐，所述杀菌组合物的pH值介于3-5，且所述杀菌组合物包括：
第一日常食用成分，其中所述第一日常食用成分由有机酸及其盐类所组成的缓冲组合、所述第一日常食用成分用以中和所述碳酸氢盐，且用以在pH值小于5的环境下，执行杀除幽门杆菌及抑制所述幽门杆菌的抗坏血酸氧化酶的功能、且所述有机酸为柠檬酸、苹果酸或其组合；以及
第二日常食用成分，用以在所述第一日常食用成分存在条件下，抑制所述幽门杆菌抗坏血酸氧化酶的功能，使所述第二日常食用成分呈现杀菌效用与杀菌加乘效用，更彻底执行杀除所述幽门杆菌，且所述杀菌加乘效用在所述第一日常食用成分存在条件下更呈现剂量关系，其中所述第二日常食用成分为抗坏血酸，且所述抗坏血酸的浓度为3000-9000ppm，以及所述杀菌组合物在60分钟灭菌。
5.根据权利要求4所述的应用，其中所述杀菌组合物的pH值为3，且在所述抗坏血酸的浓度为9000ppm下60分钟灭菌。
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Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0914040A1 (en) * 1995-11-28 1999-05-12 Michael D. Wider Antimicrobial composition and methods of use therefor
CN102526013A (zh) * 2010-12-31 2012-07-04 常州高新技术产业开发区三维工业技术研究所有限公司 一种药物组合物及其应用
CN103648482A (zh) * 2011-07-15 2014-03-19 根特大学 阴道内递送系统
WO2019019758A1 (zh) * 2018-05-03 2019-01-31 共生地球生物科技有限公司 多重pH缓冲配方与尿素酶活性抑制剂的组合物及其用途

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
PL3334440T3 (pl) * 2015-08-11 2021-11-02 Akeso Biomedical, Inc. Kompozycje hamujące tworzenie biofilmu wspierające przyrost masy ciała u zwierząt gospodarskich

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0914040A1 (en) * 1995-11-28 1999-05-12 Michael D. Wider Antimicrobial composition and methods of use therefor
CN102526013A (zh) * 2010-12-31 2012-07-04 常州高新技术产业开发区三维工业技术研究所有限公司 一种药物组合物及其应用
CN103648482A (zh) * 2011-07-15 2014-03-19 根特大学 阴道内递送系统
WO2019019758A1 (zh) * 2018-05-03 2019-01-31 共生地球生物科技有限公司 多重pH缓冲配方与尿素酶活性抑制剂的组合物及其用途

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* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
"Citric acid inhibits growth of Helicobacter pylori in vitro: a new strategy for eradication";Zazgornik, J 等;《WIENER KLINISCHE WOCHENSCHRIFT》;20111231;第123卷(第1期);参见摘要 *
"幽门螺旋菌与胃液pH值关系的探讨";王启之等;《中国微生态学杂志》;19911231;第3卷(第3期);参见第54页右栏第2段 *

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