CN112568219A - 用于干细胞、脐带血的低温保存液及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种用于干细胞、脐带血的低温保存液及其制备方法，按重量比包括以下物料：NaCl 0.2‑0.6％，Dextran40 3‑6％，DMSO 45‑51％，纯化水43‑48％。并经称量混合后，制得保存液。本品制备流程简单，成分少，对保存细胞的安全性具有更大的保证，安全性高，且细胞复苏活率高，使用效果好。
Description
技术领域
本发明涉及细胞保存液技术领域，特别涉及一种用于干细胞、脐带血的低温保存液及其制备方法。
背景技术
脐带血是指胎儿娩出，将脐带结扎并离断后，残留在胎盘和脐带中的血液。脐带血中含有大量的干细胞，包括造血干细胞和多种其他干细胞，统称为脐带血干细胞。脐带血造血干细胞已经有30多年拯救生命的历史。目前还有多项脐带血在再生医学方面的临床研究，目的是利用脐带血干细胞促进机体组织和器官的损伤修复。
为了方便存储和临床应用，脐带血经过分离制备的过程尽可能的去除红细胞及血浆，其有核细胞成分被富集起来。富集的细胞里即含有多种干细胞，具有自我更新能力及分化为多种成熟细胞的潜能；同时还含有大量的免疫细胞，具有很好的免疫调节和抗感染作用。富集的脐带血细胞最终将被保存在深低温的液氮罐中，处于休眠状态。
而在干细胞、脐带血的保存过程中，需用到低温保存液对其进行防护，以保证细胞复苏活率。但现有的多存在以下缺点：1)同类产品的使用效果不稳定，批次差异大；2)细胞复苏后的活率降低；3)储存条件要求高等，进而导致了一系列的使用问题。因此亟需一种综合性能高的用于干细胞、脐带血的低温保存液。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种用于干细胞、脐带血的低温保存液，对保存细胞的安全性具有更大的保证，安全性高，且细胞复苏活率高。
为了解决上述技术问题，本发明的技术方案为：一种用于干细胞、脐带血的低温保存液，按重量比包括以下物料：NaCl 0.2-0.6％，Dextran40 3-6％，DMSO 45-51％，纯化水43-48％。
作为一优选的实施方式，用于干细胞、脐带血的低温保存液，按重量比包括以下物料：NaCl 0.3-0.5％，Dextran40 4-5％，DMSO 48-50％，纯化水44-46％。
作为一优选的实施方式，用于干细胞、脐带血的低温保存液，按重量比包括以下物料：NaCl 0.398％，Dextran40 4.502％，DMSO 49.499％，纯化水45.601％。
作为一优选的实施方式，用于干细胞、脐带血的低温保存液，按重量比包括以下物料：NaCl 0.408％，Dextran40 4.527％，DMSO 49.796％，纯化水45.269％。
本发明还提供了一种用于干细胞、脐带血的低温保存液的制备方法，简化了生产流程。
一种用于干细胞、脐带血的低温保存液的制备方法，包括以下步骤：(1)按重量比称量各物料；(2)将各物料进行混合，制得保存液。
作为一优选的实施方式，混合的方法为：加入纯化水→加入NaCl溶解→加入Dextran40溶解→缓慢加入DMSO；混合操作标准：混合时不产生析出物，不会放出大量热。
制得保存液后，经全方位质检，以保证产品对于干细胞、脐带血冻存的有效性和安全性。
采用上述技术方案，产品配方中各原料均符合药典级别，配方明确；配方流程简单，成本低，并且简化了生产流程；采用上述配方，产品中成分少，对脐带血干细胞活性的影响小，因此对保存细胞的安全性具有更大的保证；从产品的外观到支原体、病毒等检测进行质检，可保证产品对于干细胞冻存的有效性和安全性；经过本细胞保存液冻存脐带血干细胞的测试实验，细胞复苏活率在90％以上。且本品同种产品较少，市场潜力大。
具体实施方式
下面结合对本发明的具体实施方式作进一步说明。在此需要说明的是，对于这些实施方式的说明用于帮助理解本发明，但并不构成对本发明的限定。此外，下面所描述的本发明各个实施方式中所涉及的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互组合。
实施例1
用于干细胞、脐带血的低温保存液，按重量比包括以下物料：NaCl 0.2％，Dextran40(低分子右旋糖酐)3％，DMSO 51％，纯化水45.8％。
实施例2
用于干细胞、脐带血的低温保存液，按重量比包括以下物料：NaCl 0.6％，Dextran40 6％，DMSO 46％，纯化水47.4％。
实施例3
用于干细胞、脐带血的低温保存液，按重量比包括以下物料：NaCl 0.4％，Dextran40 5％，DMSO 48％，纯化水46.6％。
实施例4
用于干细胞、脐带血的低温保存液，按重量比包括以下物料：NaCl 0.55％，Dextran40 5.56％，DMSO 50.58％，纯化水43.31％。
实施例5
用于干细胞、脐带血的低温保存液，按重量比包括以下物料：NaCl 0.3％，Dextran40 5％，DMSO 50％，纯化水44.7％。
实施例6
用于干细胞、脐带血的低温保存液，按重量比包括以下物料：NaCl 0.5％，Dextran40 4.5％，DMSO 49.5％，纯化水45.5％。
实施例7
用于干细胞、脐带血的低温保存液，按重量比包括以下物料：NaCl 0.45％，Dextran40 4.55％，DMSO 48.75％，纯化水46.25％。
实施例8
用于干细胞、脐带血的低温保存液，按重量比包括以下物料：NaCl 0.446％，Dextran40 4.727％，DMSO 48.889％，纯化水45.938％。
实施例9
用于干细胞、脐带血的低温保存液，按重量比包括以下物料：NaCl 0.408％，Dextran40 4.527％，DMSO 49.796％，纯化水45.269％。
实施例10
用于干细胞、脐带血的低温保存液，按重量比包括以下物料：NaCl 0.398％，Dextran40 4.502％，DMSO 49.499％，纯化水45.601％。
以上实施例均采用下述制备方法：包括以下步骤：(1)按重量比称量各物料；(2)将各物料进行混合，制得保存液。
混合的顺序、方法为：加入纯化水→加入NaCl溶解→加入Dextran40溶解→缓慢加入DMSO；
混合过程中的操作标准为：混合时不产生析出物，不会放出大量热。
研发过程如下：
将DMSO、低分子右旋糖酐和生理盐水按照不同比例混合，DMSO含量45％-55％，低分子右旋糖酐含量3％-15％；并且按照不同的混合顺序进行溶液混合，观察产品物理变化，是否有大量放热、有析出物出现；
而经过试验发现下述方式最优：称量→加入纯化水→加入NaCl溶解→加入低分子右旋糖酐溶解→缓慢加入DMSO，操作流程保障原料混合时不产生析出物，不会放出大量热；
严格把控细胞冻存液的质量控制，产品过滤后检测：细菌内毒素小于0.06EU/mL、无菌、支原体阴性等，进而保障冻存液产品质量合格；
进而研究不同配比细胞冻存液对细胞的冻存效果；探究相应的冻存程序：1)程序降温；2)直接-80℃、-196℃冻存等对细胞的冻存效果；
经上述研究实验后，结果发现本品在上述配方范围内可保证细胞复苏活率在90％以上。进而，获得了本品细胞冻存液最佳配方及制备方法。
以上结合对本发明的实施方式作了详细说明，但本发明不限于所描述的实施方式。对于本领域的技术人员而言，在不脱离本发明原理和精神的情况下，对这些实施方式进行多种变化、修改、替换和变型，仍落入本发明的保护范围内。
Claims (6)
1.一种用于干细胞、脐带血的低温保存液，其特征在于,按重量比包括以下物料：NaCl0.2-0.6％，Dextran40 3-6％，DMSO 45-51％，纯化水43-48％。
2.根据权利要求1所述的用于干细胞、脐带血的低温保存液，其特征在于,按重量比包括以下物料：NaCl 0.3-0.5％，Dextran40 4-5％，DMSO 48-50％，纯化水44-46％。
3.根据权利要求1所述的用于干细胞、脐带血的低温保存液，其特征在于，按重量比包括以下物料：NaCl 0.398％，Dextran40 4.502％，DMSO 49.499％，纯化水45.601％。
4.根据权利要求1所述的用于干细胞、脐带血的低温保存液，其特征在于，按重量比包括以下物料：NaCl 0.408％，Dextran40 4.527％，DMSO 49.796％，纯化水45.269％。
5.一种如权利要求1-4中任一项所述的用于干细胞、脐带血的低温保存液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)按重量比称量各物料；(2)将各物料进行混合，制得保存液。
6.根据权利要求5所述的用于干细胞、脐带血的低温保存液的制备方法，其特征在于，混合的方法为：加入纯化水→加入NaCl溶解→加入Dextran40溶解→缓慢加入DMSO；混合操作标准：混合时不产生析出物，不会放出大量热。
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Address after: Room 201, Building 13, No. 6055, Jinhai Road, Fengxian District, Shanghai, 201403 Applicant after: Zhongbo Ruikang (Shanghai) Biotechnology Co.,Ltd. Address before: 100176 room 301-33, floor 3, building 15, zone 2, yard 31, Kechuang 13th Street, Beijing Economic and Technological Development Zone, Daxing District, Beijing (Yizhuang group, high-end industrial area of Beijing Pilot Free Trade Zone) Applicant before: Zhongbo Ruikang (Beijing) Biomedical Technology Co.,Ltd. |
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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| GR01 | Patent grant | ||
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