CN112557664B - Cryab在急性肾损伤检测中的应用及检测试剂盒 - Google Patents

Cryab在急性肾损伤检测中的应用及检测试剂盒 Download PDF

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Abstract

本发明公开了CRYAB在急性肾损伤检测中的应用及检测试剂盒，αB‑晶状体蛋白可作为检测标志物用于急性肾损伤检测，针对该发现，制作了相应的检测试剂盒。本发明有助于解决现存于医药领域中的问题，即不能在早期阶段检测急性肾损伤的严重性，从而及时以有效疗法来治疗患者。

Description

CRYAB在急性肾损伤检测中的应用及检测试剂盒
技术领域
本发明属于医药领域，具体涉及αB晶状体蛋白在检测缺血再灌注肾损伤及程度的用途。
背景技术
急性肾损伤(Acute kidney injury,AKI)是由于不同原因引起的临床常见、发病率和死亡率极高的肾脏疾病。中国每年AKI发病达400-600万，相关死亡30-50万。目前对AKI只有透析等辅助治疗手段，没有有效的早期诊断方法和治疗药物。急性肾损伤最早出现在近端肾小管上皮细胞，并表现为各种形式的细胞死亡。迄今尚无有效治疗急性肾损伤的药物，临床治疗手段多采用支持治疗，因此早期诊断和早期治疗是最好的防治急性肾损伤的策略。
目前可用于早期检测AKI的工具缺乏敏感性和特异性，因此，寻找早期生物标志物越来越受到重视。而且，这些新的生物标志物可能是用于早期检测AKI的潜在工具，并且也可以用于区分不同程度的肾损伤，从而确定检测由于严重的AKI发作而有风险发展慢性肾疾病的患者。因此，开发有效的生物标志物将有助于对损伤进行分级，并且检测具有慢性肾疾病发展风险的那些患者。
在临床实践中，AKI诊断的确定是基于血清肌酐的升高并且通过评估肾小球滤过率(GFR)进行。尽管血清肌酐用于在慢性肾疾病患者中、在AKI患者中进行肾功能评估，但是因为以下三点原因它并不是一个好的指示剂：1)大量肾组织可能被损伤，但不伴随血清肌酐升高，在肾移植供体中存在明显的实例，其失去50％的肾实质，并且在血清肌酐水平中并不存在任何变化；2)血清肌酐浓度取决于许多非肾因素，如被体重、人种、性别、年龄、药物消耗、肌肉代谢和蛋白摄取影响，血清肌酐的升高以滞后形式发生。关于GFR测定，这可能由于肾和非肾损伤而被改变，例如，血容量不足或在传入小动脉中血管收缩或血管舒张程度的改变，这与肾损伤并不相关。所有这些因素使发展AKI的患者的早期干预难以进行，并且后果是不能达到更好的预后。
生物标志物是一种生物分子，其内源性产生并且可能是用于检测异常生物学过程的客观指示物。此外，其可以有助于检测药理干预是否可用于减少由病理过程导致的损伤。目前研究虽然提出了多种用于急性肾损伤检测的蛋白和生物化学标志物，然而仅用一种生物标志物难以同时提高诊断的敏感性和特异性，有必要组合运用它们或继续寻找新型的具有早期诊断的潜力并且用于AKI损伤分级的生物标志物。
据报道，急性肾损伤可以激活热休克反应，其中之一是热休克蛋白家族(Hsp)表达的增加，其有助于恢复细胞稳态。αB-晶状体蛋白(αB-crystallin,CRYAB)属于小分子热休克蛋白家族，即分子量在12-34kD中间，具有分子伴侣作用。具体而言，α晶状体蛋白家族包括αA和αB晶状体蛋白，αA晶状体蛋白主要存在于晶状体，在胸腺和脾脏有少量表达。αB晶状体蛋白在多种器官、组织、细胞中表达，在发挥应激反应中发挥重要作用。
发明内容
本发明所要解决的技术问题为：如何解决现有技术中不能早期检测AKI和不能对肾脏遭受的肾损伤的程度进行分级的问题。
本发明的技术方案为：αB-晶状体蛋白作为检测标志物在制备用于急性肾损伤检测试剂盒中的应用，αB-晶状体蛋白的氨基酸序列如下：MDIAIHHPWIRRPFFPFHSPSRLFDQFFGEHLLESDLFPTSTSLSPFYLRPPSFLRAPSWFDTGLSEMRLEKDRFSVNLDVKHFSPEELKVKVLGDVIEVHGKHEERQDEHGFISREFHRKYRIPADVDPLTITSSLSSDGVLTVNGPRKQVSGPERTIPITREEKPAVTAAPKK(SEQ IDNo.1)。
进一步地，本发明还提供了一种检测急性肾损伤标志物的试剂盒，含有抗αB-晶状体蛋白的抗体，所述αB-晶状体蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。
进一步地，所述抗体为抗αB-晶状体蛋白的单克隆抗体或多克隆抗体。
进一步地，含有捕获抗体和检测抗体，所述捕获抗体为经标记的抗αB-晶状体蛋白的多克隆抗体或单克隆抗体，所述检测抗体为经辣根过氧化物酶标记的抗αB-晶状体蛋白的单克隆或多克隆二抗。
进一步地，所述经标记的抗αB-晶状体蛋白的多克隆抗体或单克隆抗体是指经放射性同位素、荧光素或酶底物标记的抗αB-晶状体蛋白的多克隆抗体或单克隆抗体。
进一步地，还包括固相载体，所述捕获抗体固化在固相载体上。
进一步地，检测抗体的显色试剂、抗αB-晶状体蛋白标准品、样本稀释液、洗涤缓冲液、包被缓冲液、温育缓冲液。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
αB-晶状体蛋白定量能够对由局部缺血(ischemia)的时期延长而引起的损伤的强度进行分级，这对于临床实践是重要的，从而可以检测遭受严重肾损伤的那些患者，这又允许进行适当的随访并且因此这是有重大意义的，原因在于其可以避免或减少慢性肾疾病并发症。根据αB-晶状体蛋白作为急性肾损伤检测标志物制备了用于急性肾损伤检测的试剂盒中。
附图说明
图1.在假外科手术，经双侧肾动脉缺血25分钟再灌注1天和3天的小鼠中的肾功能参数血清尿素氮(BUN)水平变化。*p<0.05对比Sham组数据。
图2.对经假外科手术，经双侧肾动脉缺血25分钟再灌注72h的小鼠中的肾皮质行组织学切片，并用免疫组化分析CryAB的表达量。对CryAB的平均光密度值IOD采用Image-Pro plus 6.0软件分析。
图3.分别在25和30分钟小鼠肾脏缺血模型中，蛋白质印迹分析再灌注6,12,24h和72h的肾皮质CryAB表达量。
图4.在25分钟小鼠肾脏缺血模型中，蛋白质印迹分析再灌注6,12和24h的肾皮质HSP70,HSP90和CryAB表达量。
具体实施方式
下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为从商业渠道购买得到的。
实施例1.为了证实αB-晶状体蛋白作为AKI的敏感和早期生物标志物，我们使用了小鼠的肾局部缺血/再灌注(I/R)模型。整个研究中一直使用8-12周龄雄性C57BL/6小鼠。将小鼠给予50-60mg/kg戊巴比妥腹腔注射，50ug/kg丁丙诺啡皮下注射进行麻醉，置于恒温监测手术毯上平衡体温至36.5-37℃。小鼠左侧取腹部至脊柱1/3(靠近脊柱)处行1-1.5cm纵行手术切口；右侧取相同位置沿肋骨1-1.5cm横行切口。分别逐层进入腹腔，用棉签挤出肾脏，钝性分离肾蒂周围组织，暴露肾血管后将肾脏还纳腹腔，待体温稳定后，小鼠左侧卧位夹闭右侧肾血管，开始计时25分钟，见肾脏颜色从鲜红变为深紫红色后将右肾还纳腹腔；再取右侧卧位夹闭左侧肾血管，同样计时并确认肾脏变色后还纳腹腔，且保证两侧肾血管夹闭时间间隔1分钟以内。此外，包括进行了假外科手术(sham surgery)的组作为对照。手术完毕缝合伤口给予0.5ml生理盐水腹腔注射补充血容量，继续于恒温监测毯上观察直至完全苏醒。
为了确定定量CryAB水平作为AKI生物标志物，使用24只小鼠，将其分到4个组中，每组包括6只小鼠；使对照组和小鼠进行25分钟的双侧局部缺血，将它们分别进行6,12,24和72小时的再灌注。留取肾皮质组织并提取组织总蛋白。对标本进行免疫印迹检测并分析αB-晶状体蛋白在急性肾损伤不同阶段的表达变化。
实施例2.在所有的组中，通过测量血清尿素氮、肌酐来评估肾功能。血清尿素氮检测，混匀小鼠血清样品(同时设立标准品对照和空白去离子水对照)与BUN color Reagent和BUN Acid Reagent，95℃加热10分钟，置于冰水中3-5分钟，充分混匀后检测520nm吸光度值，绘制标准曲线，计算各样品血清尿素氮值。
血清肌酐检测，配置标准品0，66.3，132.6，198.9，265.2μM。配置200ul工作液0.96％氢氧化钠：0.83％苦味酸＝1:1，37℃水浴3分钟，加入20μL标准品或样品，计时20秒读取510nm吸光度值，再计时60秒读取第二次吸光度值，绘制标准曲线，计算样品血清肌酐。
为了研究CryAB是否在肾中的局部缺血过程中被诱导，评估在肾组织提取物中的CryAB的蛋白水平。
实施例3.细胞蛋白提取：收集细胞(35mm培养皿为例)，收集培养液1000g离心5分钟，弃上清，1×PBS洗涤细胞并收集于同一离心管中1000g离心5分钟，弃上清。加入100μl蛋白裂解液，充分覆盖所有贴壁细胞，用干净的刮棒将细胞及裂解液刮于一侧并移入上述离心管，裂解片刻，15000g离心5分钟收集上清备用。
蛋白浓度测定及免疫印迹分析：样品稀释10倍，按照上述方法配制标准品。根据A液、B液50:1的比例混合配制工作液，将工作液按照每孔200μL加于96孔板中，并分别加入标准品及稀释样品各10μL，分别重复2副孔，60℃暖箱孵育1小时后，取出冷却5分钟，采用GENios plate-reader检测595nm波长吸光度值，绘制标准曲线并计算蛋白浓度(μg/μL)。将蛋白在95℃变性10分钟，在12％SDS-PAGE凝胶中电泳分离(恒压模式，电压150V，时间55分钟)。活化PVDF膜浸润于甲醇中数秒后转移入1×转膜缓冲液(190mM甘氨酸，2mM Tris碱，SDS 0.1％，200mL甲醇)中。恒流模式(电流300mA)转膜120分钟。在室温，用5％封闭试剂在TBST(Tris缓冲盐水和吐温)中进行封闭。在封闭步骤后，将膜在4℃用抗CryAB一级抗体(1:200,sc-22744,Santa Cruz Biotechnology),HSP70一级抗体(1:1000,4873s,CellSignaling Technology)，HSP90一级抗体(1:1000,8165s,Cell Signaling Technology)温育。温育后，将膜用TBS-T洗涤三次，每次洗涤10分钟。随后，将1:5000的与过氧化物酶缀合的IgG山羊抗兔二级抗体(1:3000,7074,Cell Signaling Technology)或过氧化物酶缀合的IgG山羊抗大鼠二级抗体(1:3000,7077,Cell Signaling Technology)与膜在室温温育60分钟，并且将膜再次洗涤3次。使用商购的Super Signal West Pico化学发光试剂盒检测CryAB等蛋白的量，并且扫描获得的条带进行图像灰度分析。
结果
1.缺血再灌注损伤模型小鼠肾功能的变化
1)肾脏组织病理损伤程度
C57BL/6小鼠经双侧肾动脉缺血25分钟手术及假手术处理，分别于手术后6,12,24,72h对肾皮质组织进行HE染色，然后通过综合评价近端小管结构改变程度、单个核细胞浸润程度、毛细血管破裂红细胞渗出程度对肾脏组织病理损伤程度打分(表1)，可以看出在整个检测时间段都有肾脏不同程度损伤(*p<0.05对比Sham组数据)。
表1不同组别小鼠肾缺血再灌注后组织病例分数
Figure BDA0002757710640000051
2)血清尿素氮水平
C57BL/6小鼠经双侧肾动脉缺血25分钟手术及假手术处理，分别于手术后1天和3天通过小鼠尾部取血10μL，检测血清尿素氮变化情况。图1显示，假手术组小鼠血清尿素氮水平低于30mg/dL；肾动脉缺血25分钟手术组小鼠血清尿素氮迅速升高，于再灌注1天内升至约140mg/dL，且肾功能持续恶化，至再灌注3天时血清尿素氮水平达到约180mg/dL。
3)血清肌酐水平
C57BL/6小鼠经双侧肾动脉缺血25分钟手术及假手术处理，分别于手术后6,12,24,72h处死小鼠并通过腹主动脉留取血标本，检测血清肌酐变化情况。表2显示，与血清尿素氮变化水平一致，假手术组小鼠血清肌酐处于正常水平；肾动脉缺血手术组小鼠血清肌酐在6和12h未监测到明显升高，于再灌注24h内显著升高至约61.9μmol/L，且肾功能持续恶化，至再灌注72h时血清肌酐水平达到约79.6μmol/L(*p<0.05对比Sham组数据)。
表2小鼠经双侧肾动脉缺血手术处理血清肌酐水平变化(μmol/L)
Figure BDA0002757710640000052
2.CryAB在缺血再灌注损伤模型肾皮质中的表达
免疫组织化学方法检测CryAB在肾皮质中的表达情况。CryAB在正常小鼠肾脏中表达量极低，其平均相对表达量自缺血25分钟再灌注3天显著上调(图2)。C57BL/6小鼠经双侧肾动脉缺血25分钟手术及假手术处理，分别于手术后6,12,24,72h处死小鼠，对肾皮质切片进行免疫组化检测CryAB表达，发现在6h起即有CryAB蛋白的明显表达(*p<0.05对比Sham组数据)。
表3小鼠经双侧肾动脉缺血手术处理CryAB在肾皮质中的表达变化(IOD)
Figure BDA0002757710640000061
C57BL/6小鼠经双侧肾动脉缺血25分钟手术处理，于恢复灌注后6h(I25mR6h)、12h(I25mR12h)和24h(I25mR24h)处死小鼠，或者经双侧肾动脉缺血30分钟手术处理，于恢复灌注后72h(I30mR72h)处死小鼠提取肾脏皮质蛋白，免疫印迹检测CryAB蛋白表达情况。在25分钟小鼠肾脏缺血模型中，CryAB平均相对表达量自再灌注6h持续上调，分别增加为假手术组的2.27、3.33和17.5倍(图3)；在30分钟小鼠肾脏缺血模型中，CryAB平均相对表达量自再灌注72h较假手术组增加12.2倍。
结果分析
首先，我们评估了不同时期的双侧局部缺血和再灌注对肾功能的影响。小鼠经历了局部缺血，发展了肾功能不全，由血清尿素氮和肌酐的进行性升高证实，如在图1，表1和表2中所显示。在本研究中发现肾损伤的经典标志物肌酐的水平只有在24h后可检测到明显的升高，然而自6h即发生了肾脏损伤。
通过光学显微镜评估的组织学损伤是确定由局部缺血/再灌注诱导的损伤程度的黄金标准。光学显微镜研究揭示不同的双侧局部缺血和再灌注诱导了与引起的局部缺血再灌注时间相应的不同程度的肾小管损伤，如在图2每组的代表性图象中所显示。损伤的特征在于刷状缘的损失、肾小管扩张、细胞脱附和管型形成等。局部缺血的时期越长，发展的肾小管损伤程度越大。
为了评估CryAB是否在不同时期的局部缺血再灌注过程中在肾组织中被诱导，确定其在肾组织中的蛋白质水平。如在图3中显示，在来自进行缺血再灌注手术的每只小鼠的肾组织中，CryAB蛋白水平都显著增加，并且CryAB表达的增加与诱导的损伤的程度成比例。
我们同时比较了大分子量热休克蛋白比如HSP70,HSP90在肾脏缺血再灌注损伤后的表达，发现它们的表达没有明显的提高，C57BL/6小鼠经双侧肾动脉缺血25分钟手术处理，于恢复灌注后6h(I25mR6h)、12h(I25mR12h)和24h(I25mR24h)处死小鼠，提取肾脏皮质蛋白，免疫印迹检测HSP70,HSP90,CryAB蛋白表达情况(图4)。CryAB平均相对表达量与图3中趋势一致；HSP70和HSP90蛋白表达量在肾脏缺血再灌注各个时间点未有明显变化，显示了小分子量热休克蛋白CryAB可以更好的用于检测缺血再灌注肾损伤及程度。
综上，小分子量热休克蛋白CryAB可以用于检测缺血再灌注肾损伤及程度，针对该研究成果，可以开发相应的检测CryAB的试剂盒。
检测CryAB的试剂盒，应该至少含有抗αB-晶状体蛋白的抗体，所述αB-晶状体蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。
进一步地，含有捕获抗体和检测抗体，所述捕获抗体为经标记的抗αB-晶状体蛋白的多克隆抗体或单克隆抗体，所述检测抗体为经辣根过氧化物酶标记的抗αB-晶状体蛋白的单克隆或多克隆二抗。
所述经标记的抗αB-晶状体蛋白的多克隆抗体或单克隆抗体是指经放射性同位素、荧光素或酶底物标记的抗αB-晶状体蛋白的多克隆抗体或单克隆抗体。
还包括固相载体，所述捕获抗体固化在固相载体上。
还包括检测抗体的显色试剂、抗αB-晶状体蛋白标准品、样本稀释液、洗涤缓冲液、包被缓冲液、温育缓冲液等。
检测时，直接或穿刺收取大出血、造影剂、外伤、器官移植、休克、动脉搭桥术等原因引起的肾脏缺血再灌注损伤病人的肾组织。
小鼠肾脏缺血再灌注模型损伤程度依据肾皮质组织HE染色结果判断，再灌注6h后HE染色结果即显示肾脏组织损伤(表1)，CryAB蛋白表达也在再灌注6h后即表达增加(表3)，而血肌酐和尿素氮水平仅在再灌注24h后显示有所增加(图1和表2)。
病人组织HE染色过程复杂且费时较长，选用免疫杂交方式检测CryAB表达量的变化可有效预测肾损伤的程度。
特异性、灵敏度检测：因为所有缺血再灌注6h后小鼠肾皮质HE染色均显示肾损伤并且CryAB水平均增加，因此应该灵敏度和特异度为100％。
(1)当缺血再灌注肾损伤样本中的CryAB的含量为假手术组的2.27倍以上时判定为阳性，此外则判定为阴性。这种判定方法适用于对样本的初步筛查及初步筛查结果的进一步确认。
(2)这种生物标志物的检测方法还可以用于评估肾损伤治疗方法的有效性，具体为将治疗前样本与治疗后样本中CryAB的含量进行对比，根据比对结果评估治疗方法的有效性。
(3)上述治疗方法的有效性的具体评估过程为：如果治疗后样本中的生物标志物的浓度与治疗前样本相比发现下降或者维持不变，则表明治疗有效：如果发现升高，则表明无效。
序列表
<110> 河南大学
<120> CRYAB在急性肾损伤检测中的应用及检测试剂盒
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 175
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 1
Met Asp Ile Ala Ile His His Pro Trp Ile Arg Arg Pro Phe Phe Pro
1 5 10 15
Phe His Ser Pro Ser Arg Leu Phe Asp Gln Phe Phe Gly Glu His Leu
20 25 30
Leu Glu Ser Asp Leu Phe Pro Thr Ser Thr Ser Leu Ser Pro Phe Tyr
35 40 45
Leu Arg Pro Pro Ser Phe Leu Arg Ala Pro Ser Trp Phe Asp Thr Gly
50 55 60
Leu Ser Glu Met Arg Leu Glu Lys Asp Arg Phe Ser Val Asn Leu Asp
65 70 75 80
Val Lys His Phe Ser Pro Glu Glu Leu Lys Val Lys Val Leu Gly Asp
85 90 95
Val Ile Glu Val His Gly Lys His Glu Glu Arg Gln Asp Glu His Gly
100 105 110
Phe Ile Ser Arg Glu Phe His Arg Lys Tyr Arg Ile Pro Ala Asp Val
115 120 125
Asp Pro Leu Thr Ile Thr Ser Ser Leu Ser Ser Asp Gly Val Leu Thr
130 135 140
Val Asn Gly Pro Arg Lys Gln Val Ser Gly Pro Glu Arg Thr Ile Pro
145 150 155 160
Ile Thr Arg Glu Glu Lys Pro Ala Val Thr Ala Ala Pro Lys Lys
165 170 175

Claims (1)

1.肾皮质组织中的αB-晶状体蛋白作为检测标志物在制备用于缺血再灌注肾损伤检测试剂盒中的应用，所述αB-晶状体蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。
CN202011208102.4A 2020-11-03 2020-11-03 Cryab在急性肾损伤检测中的应用及检测试剂盒 Active CN112557664B (zh)

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CA3052786A1 (en) * 2017-02-07 2018-08-16 Essenlix Corporation Compressed open flow assay and use

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