CN112526128A - 一种快速检测多种病毒或病原体污染的检测试纸 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种快速检测多种病毒或病原体污染的检测试纸,试纸由取样垫、结合垫、反应显色垫、吸水垫和支撑板组成,所述取样垫和吸水垫分别设置于支撑板上且位于支撑板上相对的两侧,样品垫和吸水垫均为吸水材料。结合垫上含有生物素化的抗病毒抗体和抗兔lgG抗体,所述反应显色垫的材料为硝酸纤维素膜,其表面上设有含有非特异性兔IgG的阳性对照标记,还设有多种复合特异性抗病毒抗体标记,每一标记上都含有亲和素化的纳米胶体金颗粒。所述阳性对照标记及其他特异性抗体标记之间相互间隔。本发明通过组合多种复合抗体和多种特异性病毒抗体标记,可以同时对多个病毒或病原体污染进行检测,提高检测效率,有效的降低检测成本。
Description
技术名称
一种快速检测多种病毒或病原体污染的检测试纸
技术领域
本发明涉及一种快速检测多种病毒或病原体污染的检测试纸,属于病毒快速侦检领域。
背景技术
病毒是一种具有细胞感染性的亚显微粒子,它实际上就是由一个保护性的外壳包裹的一DNA或者RNA,借由感染的机制,这些简单的生物体可以利用宿主的细胞系统进行自我复制,但无法独立生长和复制。目前,对于一些病毒的检测诊断方法有酶联免疫法(ELISA)、化学发光法、金标层析法、生物芯片等方法检测,但这些检测诊断方法存在用时较长、价格昂贵、操作复杂的缺点。同时现有的大部分病毒检测试纸,只能用于检测一种病毒,其检测效率比较低。所以,如何设计一种可以同时检测多种病毒的检测试纸,成为我们当前要解决的重要问题。
发明内容
为解决上述背景技术中提出的问题,本发明提供如下技术方案:
一种快速检测多种病毒或病原体污染的检测试纸条,其特征是,包括取样垫、结合垫、反应显色垫、吸水垫和支撑板,所述取样垫、结合垫、反应显色垫和吸水垫由左至右依次设在支撑板上,所述取样垫和吸水垫分别设置于支撑板上相对的两侧;所述取样垫的右侧为结合垫,邻边有衔接重叠区域;结合垫右侧紧邻为反应显色垫,前者覆盖后者邻边,吸水垫位于反应显色垫的右侧,且覆盖反应显色区邻边;取样垫由吸水材料制成,用于承载待检测物;吸水垫由吸水材料制成。
进一步的,所述结合垫上含有生物素化的抗兔lgG抗体,浓度为10-30ug/ml。
进一步的,所述结合垫上还包含有生物素化的抗RNA抗体、生物素化的抗DNA抗体或其他生物素化的抗病毒抗体,所述生物素化的抗RNA抗体的浓度为30-50ug/ml,生物素化的抗DNA抗体浓度为30-50ug/ml,其他生物素化的抗病毒抗体单个浓度为50-100ug/ml。
进一步的,所述反应显色垫的材料为硝酸纤维素膜,硝酸纤维素膜表面上设有阳性对照标记。所述硝酸纤维素膜表面上还设有特异性的抗RNA抗体标记、特异性的抗DNA抗体标记或其他特异性的抗病毒抗体标记,每一标记上都含有亲和素化的纳米胶体金颗粒,浓度为50-100ug/ml。
进一步的,所述阳性对照标记、特异性的抗RNA抗体标记、特异性的抗DNA抗体标记、其他特异性的抗病毒抗体标记之间相互间隔。
进一步的,所述阳性对照标记上含有非特异性兔IgG,浓度为10-30ug/ml。
进一步的,所述特异性的抗RNA抗体标记上含有特异性抗RNA抗体,浓度为30-50ug/ml。
进一步的,所述特异性的抗DNA抗体标记上含有特异性抗DNA抗体,浓度为30-50ug/ml。
进一步的,所述其他特异性的抗病毒抗体标记上分别含有高特异性的抗病毒抗体,如流感病毒抗体、SARs病毒抗体或冠状病毒抗体,单个浓度为50-100ug/ml。
进一步的,所述支撑板为不吸水材料,如PVC、透明塑料薄膜或其它硬质材料。
当待检测的样品稀释液加载到取样垫上时,若待检样本中存在病毒或病原体污染,如流感病毒,冠状病毒,病原DNA或病原RNA,其首先与结合垫上生物素化的抗病毒抗体,生物素化的抗RNA抗体或生物素化的抗DNA抗体结合,形成复合物,包括(1)流感病毒-抗流感病毒抗体-生物素,或(2)冠状病毒-抗冠状病毒抗体-生物素,或(3)病原DNA-抗DNA抗体-生物素,或(4)病原RNA-抗RNA抗体-生物素。结合垫上还含有生物素化的抗兔lgG抗体,上述复合物和生物素化的抗兔lgG抗体通过毛细作用向前层析,继续往吸水垫方向流动到含有亲和素化的胶体金的反应显色垫上。上述复合物分别与喷涂在反应显色垫上不同标记上的特异性抗流感病毒抗体、特异性抗冠状病毒抗体、特异性抗病原DNA抗体、或特异性抗病原RNA抗体结合,形成不同类型的“特异性抗病毒抗体-病毒-抗病毒抗体-生物素-亲和素-胶体金”结合物。固化于不同标记上的特异性抗病毒抗体将会富集相应的病毒,阳性时胶体金大量聚集,进而在相应的标记上显示肉眼可见红色,通过不同标记上的胶体金显色及其显色颜色深浅可以鉴别不同的病毒污染及其污染程度。同时生物素化的抗兔lgG抗体继续向前层析,与阳性对照标记上固化的兔lgG结合反应形成“兔lgG-抗兔lgG抗体-生物素-亲和素-胶体金”结合物,在阳性对照标记上形成肉眼可见红色。在毛细作用下,阳性对照标记会吸附层析过来的抗兔IgG,一定会显色,如果其没有显色,那么表明这次检测结果是无效的。而若待检测物中不含有如流感病毒,冠状病毒,病原DNA或病原RNA等病毒或病原体污染,则不形成结合物,只有阳性对照标记上形成肉眼可见红色,其他标记不产生颜色变化。
有益效果
与现有技术相比,本发明所能达到的有益效果是:
1.无需仪器设备,无需专业检测人员来进行,操作非常简单,直观的感受病毒的感染情况,用最简单的试纸颜色就能呈现结果。
2.通过组合多种复合抗体和多种特异性病毒抗体显示标记,可以同时对多个病毒或病原体污染进行检测,提高检测效率,有效的降低检测成本。
3.针对目前市面上试纸检测装置快速但敏感性不够的缺点,本发明引用了生物素和亲和素大大增强了检测的敏感性。当对检测结果有更精确的要求时,也可以通过生物素和亲和素放大级别的化学发光来靠酶标仪或分光光度计来进行更为精确的测定,或在反应最后将反应显色垫上的颜色与标准的结果比对表或卡比较。测试方法简单,检测速度快,检测效果明显,可作为初步筛查的重要手段。
4.本发明通过检测病毒和病毒的DNA或者RNA使得检测的范围和结果更具全面性和准确性。病毒的检测不仅涵盖了病毒的蛋白检测也包括了病毒的核酸检测。病毒的蛋白检测提高了检测结果的准确性,病毒的核酸检测提高了检测结果的敏感性。
5.本发明可以通过检测试纸的颜色变化来初步判断有无感染病毒,这种初筛型的试纸材料,即可以做成单独的检测试纸,可以用在口罩或其他的防护设备上,通过颜色变化,帮助判断口罩或防护设备的寿命以及是否感染上病毒。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图,对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述,所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。
实施例:
一种快速检测多种病毒或病原体污染的检测试纸条,其特征是,包括取样垫、结合垫、反应显色垫、吸水垫和支撑板,所述取样垫、结合垫、反应显色垫和吸水垫由左至右依次设在支撑板上,所述取样垫和吸水垫分别设置于支撑板上相对的两侧;所述取样垫的右侧为结合垫,邻边有衔接重叠区域;结合垫右侧紧邻为反应显色垫,前者覆盖后者邻边,吸水垫位于反应显色垫的右侧,且覆盖反应显色区邻边;取样垫由吸水材料制成,用于承载待检测物;吸水垫由吸水材料制成。
所述结合垫上含有生物素化的抗兔lgG抗体,浓度为10-30ug/ml。
所述结合垫上还包含有生物素化的抗RNA抗体、生物素化的抗DNA抗体或其他生物素化的抗病毒抗体,所述生物素化的抗RNA抗体的浓度为30-50ug/ml,生物素化的抗DNA抗体浓度为30-50ug/ml,其他生物素化的抗病毒抗体单个浓度为50-100ug/ml。
所述反应显色垫的材料为硝酸纤维素膜,硝酸纤维素膜表面上设有阳性对照标记。所述硝酸纤维素膜表面上还设有特异性的抗RNA抗体标记、特异性的抗DNA抗体标记或其他特异性的抗病毒抗体标记,每一标记上都含有亲和素化的纳米胶体金颗粒,浓度为50-100ug/ml。
所述阳性对照标记、特异性的抗RNA抗体标记、特异性的抗DNA抗体标记、其他特异性的抗病毒抗体标记之间相互间隔。
所述阳性对照标记上含有非特异性兔IgG,浓度为10-30ug/ml。
所述特异性的抗RNA抗体标记上含有特异性抗RNA抗体,浓度为30-50ug/ml。
所述特异性的抗DNA抗体标记上含有特异性抗DNA抗体,浓度为30-50ug/ml。
所述其他特异性的抗病毒抗体标记上分别含有高特异性的抗病毒抗体,如流感病毒抗体、SARs病毒抗体或冠状病毒抗体,单个浓度为50-100ug/ml。
所述支撑板为不吸水材料,如PVC、透明塑料薄膜或其它硬质材料。
在本发明的一个具体实施例中,检测条的结合垫上喷涂有生物素标记的鼠抗新型冠状病毒抗体和生物素标记的鼠抗流感病毒抗体两种抗体,浓度分别为50ug/ml。硝酸纤维素膜上设有两个标记,即与羊抗新型冠状病毒特异性反应的抗体标记,和与羊抗流感病毒特异性反应的抗体标记,浓度分别为50ug/ml。两个标记上还分为喷涂有亲和素化的胶体金颗粒,浓度为50ug/ml。同时结合垫上还喷涂有生物素化的抗兔lgG抗体,浓度为10ug/ml,硝酸纤维素膜上的阳性对照标上喷涂有非特异性兔lgG,浓度为10ug/ml。我们应用该检测条检测了鸡胚冠状病毒培养上清和流感病毒培养上清的病毒是否阳性。应用无病毒感染的鸡胚上清作为对照。图4为应用快速检测多种病毒或病原体污染的检测试纸检测鸡胚培养流感病毒(H1N1株)和新型冠状病毒(COVID-19)的结果。
A.1x10-3稀释的没有接种任何病毒的正常鸡胚(37度2天)上清一滴(~20微升)加到样品垫上,室温5分钟后的结果;
B.1x10-3稀释的接种新型冠状病毒的鸡胚(37度2天)上清一滴(~20微升)加到样品垫上,室温5分钟后的结果:
C.1x10-5稀释的接种流感病毒的鸡胚(37度2天)上清一滴(~20微升)加到样品垫上,室温5分钟后的结果;
D.应用PCR扩增技术检测了不同稀释度的新型冠状病毒(COVID-19)的鸡胚(37度2天)上清中新型冠状病毒mRNA的转录,证明鸡胚上清中含有高浓度新型冠状病毒;
E.应用PCR扩增技术检测了不同稀释度的流感病毒(H1N1)的鸡胚(37度2天)上清中流感病毒mRNA的转录,证明鸡胚上清中含有高浓度流感病毒(H1N1)
结果显示,测试条检测结果与新型冠状病毒和流感病毒的PCR扩增技术检测结果完全一致。
在本次实施例中,待检样本中的新型冠状病毒、流感病毒首先与生物素化的鼠抗新型冠状病毒、生物素化的鼠抗流感病毒抗体反应,通过毛细作用向吸水垫方向移动,然后和硝酸纤维素膜上的与羊抗新型冠状病毒特异性反应的抗体和与羊抗流感病毒特异性反应的抗体结合,在两个不同标记上分别形成两种结合物,即(1)与羊抗新型冠状病毒特异性反应的抗体-新型冠状病毒-鼠抗新型冠状病毒抗体-生物素-亲和素-胶体金结合物,以及(2)与羊抗流感病毒特异性反应的抗体-流感病毒-鼠抗流感病毒抗体-生物素-亲和素-胶体金结合物。胶体金会在两个不同抗体上标记上大量富集而形成颜色。同时结合垫上喷涂化有生物素化的抗兔lgG抗体,硝酸纤维素膜上的阳性对照标上喷涂有兔lgG。生物素化的抗兔lgG抗体继续向前层析,与阳性对照标记上的兔lgG结合反应形成“兔lgG-抗lgG抗体-生物素-亲和素-胶体金”结合物,在阳性对照标记上形成肉眼可见红色。阳性对照标记一定会显色,如果其没有显色,那么表明这次检测结果是无效的。而若待检测物中不含有如流感病毒,新型冠状病毒等病毒或污染物,则不形成结合物,只有阳性对照标记上形成肉眼可见红色,其他标记不产生颜色变化。
所述阴性结果应该排除以下因素干扰,查看检测方法是否有误。
所述阳性结果应该排除以下因素干扰:其他病毒交叉污染。
基于以上颜色对结果的判断还包括以下四种情况:
1、阴性检测测试结果应为阴性结果,否则说明环境不合格;
2、阳性对照测试结果应为阳性结果,否则说明试纸失效;
3、测试三次均为阴性结果,判定测试结果为阴性;
4、至少有一次测试为阳性结果,判定测试结果为阳性。
在本次实施例中,检测条的结合垫上喷涂了生物素化的鼠抗新型冠状病毒抗体和生物素化的鼠抗流感病毒抗体两种抗体,在实际应用中也可以是生物素化的抗RNA抗体、生物素化的抗DNA抗体或其他生物素化的抗病毒抗体的任意组合。此次实施例中硝酸纤维素膜上的抗体标记有两个,分别是可以与羊抗新型冠状病毒特异性反应的抗体标记和与羊抗流感病毒特异性反应的抗体标记,在实际应用中也可以是特异性抗RNA抗体、特异性抗DNA或其他的特异性抗病毒抗体的任意组合。本试纸对病毒的检测不仅可以涵盖病毒的蛋白检测也可以涵盖病毒的核酸检测。病毒的蛋白检测提高了检测结果的准确性,病毒的核酸检测提高了检测结果的敏感性。当对检测结果有更精确的要求时,也可以通过生物素和亲和素放大级别的化学发光来靠酶标仪或分光光度计来进行更为精确的测定,或在反应最后将反应显色垫上的颜色与标准的结果比对表或卡比较。测试方法简单,检测速度快,检测效果明显,可作为初步筛查的重要手段。
本发明可以通过检测试纸的颜色变化来初步判断有无感染病毒,这种初筛型的试纸材料,即可以做成单独的检测试纸,可以用在口罩或其他的防护设备上,通过颜色变化,帮助判断口罩或防护设备的寿命以及是否感染上病毒。
本专利涉及的试纸虽然便于患者自检,可以通过简便的检测方法得到结果,但只能作为一个病毒感染筛查的手段,仍然不能完全排除多种因素引起的伪阳性及伪阴性。故需要以试纸的结果与临床症状,还有结合医师的经验来最终判断结果,检测阳性及时就医。
最后应说明的是:以上所述仅为本发明的优选实施例而已,并不用于限制本发明,尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明,对于本领域的技术人员来说,其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改,或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内,所作的任何修改、等同替换、改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。
附图说明
图1是本发明一种快速检测多种病毒或病原体污染的检测试纸结构示意图。粗体箭头表明液体流动方向。
附图标记说明:110、取样垫;120、结合垫;130、反应显色垫;100、吸水垫
图2是本发明一种快速检测多种病毒或病原体污染的检测试纸的一个具体实施例的实物图。
图3是本发明一种快速检测多种病毒或病原体污染的检测试纸的简要理论指导图。
图4是本发明一种快速检测多种病毒或病原体污染的检测试纸的一个实施例用来检测鸡胚培养流感病毒(H1N1株)和新型冠状病毒(COVID-19)的结果。
Claims (10)
1.一种快速检测多种病毒或病原体污染的检测试纸,其特征是,包括取样垫、结合垫、反应显色垫、吸水垫和支撑板,所述取样垫、结合垫、反应显色垫和吸水垫由左至右依次设在支撑板上,所述取样垫和吸水垫分别设置于支撑板上相对的两侧;所述取样垫的右侧为结合垫,邻边有衔接重叠区域;结合垫右侧紧邻为反应显色垫,前者覆盖后者邻边,吸水垫位于反应显色垫的右侧,且覆盖反应显色区邻边;取样垫由吸水材料制成,用于承载待检测物;吸水垫由吸水材料制成。
2.根据权利要求1所述的一种快速检测多种病毒或病原体污染的检测试纸,其特征在于:所述结合垫上含有生物素化的抗兔lgG抗体,浓度为10-30ug/ml。
3.根据权利要求1所述的一种快速检测多种病毒或病原体污染的检测试纸,其特征在于:所述结合垫上还包含有生物素化的抗RNA抗体、生物素化的抗DNA抗体或其他生物素化的抗病毒抗体,所述生物素化的抗RNA抗体的浓度为30-50ug/ml,生物素化的抗DNA抗体浓度为30-50ug/ml,其他生物素化的抗病毒抗体单个浓度为50-100ug/ml。
4.根据权利要求1所述的一种快速检测多种病毒或病原体污染的检测试纸,其特征在于:所述反应显色垫的材料为硝酸纤维素膜,硝酸纤维素膜表面上设有阳性对照标记。所述硝酸纤维素膜表面上还设有特异性的抗RNA抗体标记、特异性的抗DNA抗体标记或其他特异性的抗病毒抗体标记,每一标记上都含有亲和素化的纳米胶体金颗粒,浓度为50-100ug/ml。
5.根据权利要求4所述的一种快速检测多种病毒或病原体污染的检测试纸,其特征在于:所述阳性对照标记、特异性的抗RNA抗体标记、特异性的抗DNA抗体标记、其他特异性的抗病毒抗体标记之间相互间隔。
6.根据权利要求4所述的一种快速检测多种病毒或病原体污染的检测试纸,其特征在于:所述阳性对照标记上含有非特异性兔IgG,浓度为10-30ug/ml。
7.根据权利要求4所述的一种快速检测多种病毒或病原体污染的检测试纸,其特征在于:所述特异性的抗RNA抗体标记上含有特异性抗RNA抗体,浓度为30-50ug/ml。
8.根据权利要求4所述的一种快速检测多种病毒或病原体污染的检测试纸,其特征在于:所述特异性的抗DNA抗体标记上含有特异性抗DNA抗体,浓度为30-50ug/ml。
9.根据权利要求4所述的一种快速检测多种病毒或病原体污染的检测试纸,其特征在于:所述其他特异性的抗病毒抗体标记上分别含有高特异性的抗病毒抗体,如流感病毒抗体、SARs病毒抗体或冠状病毒抗体,单个浓度为50-100ug/ml。
10.根据权利要求1所述的一种快速检测多种病毒或病原体污染的检测试纸,其特征在于:所述支撑板为不吸水材料,如PVC、透明塑料薄膜或其它硬质材料。
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