CN112522431B

CN112522431B - 一种浒苔性别特异分子标记及其应用

Info

Publication number: CN112522431B
Application number: CN201910885352.2A
Authority: CN
Inventors: 姜鹏; 刘倩纯; 赵瑾; 吴春辉
Original assignee: Institute of Oceanology of CAS
Current assignee: Institute of Oceanology of CAS
Priority date: 2019-09-19
Filing date: 2019-09-19
Publication date: 2022-07-05
Anticipated expiration: 2039-09-19
Also published as: CN112522431A

Abstract

本发明属于海藻分子遗传学领域，涉及一种浒苔性别特异分子标记及其应用。其特征是：浒苔雌配子体和雄配子体DNA特异性分子标记各一个，其核苷酸序列分别为SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2。SEQ ID NO.1由浒苔雌性性别特异扩增引物扩增得到，SEQ ID NO.2由浒苔雄性性别特异扩增引物扩增得到。本发明是通过PCR检测上述的特异性片段来完成，步骤包括待检测浒苔基因组DNA提取，PCR扩增，扩增产物的琼脂糖凝胶电泳检测。该特异性引物设计参考实验室已有高通量数据结果，结合基因组DNA提取，目的片段扩增及回收，利用pGEM‑T vector及大肠杆菌感受态菌株TOP10进行克隆等技术获得。利用该特异性分子标记，可以快速、简单、准确地对大量浒苔藻体的倍性以及配子体的性别进行鉴定，为浒苔生活史研究以及品种选育提供重要的分子工具。

Description

一种浒苔性别特异分子标记及其应用

技术领域

本发明属于海藻分子遗传学领域，涉及一种浒苔性别特异分子标记及其应用。

背景技术

浒苔（Ulva prolifera）属于绿藻门（Chlorophyta）、绿藻纲（Chlorophyceae）、石莼目（Ulvales）、石莼科（Ulvaceae）、石莼属（Ulva），是一种常见的大型绿藻。浒苔富含膳食纤维、必需氨基酸、微量元素和矿物质，营养价值很高，具有食用和药用价值，其人工养殖已经具备一定的规模。作为一种新兴的大型经济海藻，亟待对其生活史类型、繁殖方式、藻体性别等基本的遗传特征开展系统深入的研究，为浒苔的杂交育种奠定理论与方法学基础。

浒苔生活史中存在典型的同型世代交替，由单倍体的配子体世代与二倍体的孢子体世代组成。浒苔的配子体世代是有性世代，具有雌性、雄性两种性别，二者的基因型不同。雌、雄配子体成熟后经有丝分裂可分别产生两鞭毛的雌配子和雄配子，两性配子交配融合后，合子萌发产生二倍体的孢子体。浒苔的孢子体世代是无性世代，不表现性别差异，成熟后经减数分裂产生单倍的四鞭毛的孢子，孢子不经融合单独萌发产生雌、雄配子体。由于浒苔的二倍体孢子体、单倍体雌配子体、单倍体雄配子体具有相同的形态，因此，单纯依据外部形态特征无法对上述三者进行有效区分。

另外，浒苔还有非常多样的繁殖方式，包括有性生殖（两性配子融合）、无性生殖（例如多种类型的孢子）、单性生殖（单性配子不经交配直接萌发）与营养繁殖。其中，除了典型生活史中涉及的经典繁殖方式（例如有性生殖、无性生殖）、还包括多种非典型生活史中涉及的特殊繁殖方式（例如单性生殖、营养细胞直接萌发），这些特殊繁殖方式易于发生、具有明显的育种应用的潜力，但其遗传学基本规律与发生机制仍完全不清楚。其中，关键的技术瓶颈就是缺乏能够对浒苔性别进行快速、准确鉴定的方法。

目前，针对石莼属绿藻，仍然依靠观察其放散生殖细胞的大小、鞭毛数和趋光性来判断其孢子或雌雄配子的类型。上述方法不仅需要建立藻体生殖诱导技术作为前提，而且研究表明，存在很多特例，仍难以形成可靠的通用标准。

首先，通过配子大小无法准确区分雌雄配子。Ulva是同配生殖偏向轻微异配生殖，研究发现，即使同一物种，有的完全同配生殖，有的则不同交配型配子大小不同，因此，配子大小与交配型是不对应的，更多时候要取决于配子的分化程度；其次，通过生殖细胞的鞭毛数与趋光性也无法准确判定母体的世代类型。例如有文献表明，二倍体浒苔有时也会放散两鞭毛的负趋光生殖细胞。

综上所述，由于浒苔具有同型世代交替的生活史类型、以及多样化的繁殖方式，尤其是缺乏必要的遗传学研究积累，使得浒苔的性别鉴定缺乏可靠的判定方法，尤其是在处理大量样本的时候，无法对育种的亲本、后代进行高效、准确地鉴定，给浒苔遗传学研究与杂交育种造成很大困难。

发明内容

本发明的目的是提供一种浒苔性别特异分子标记，可以有效地鉴定浒苔配子体性别，从而填补现有技术的空缺，为浒苔配子体性别鉴定、遗传育种以及从细胞或分子水平上研究浒苔性别分化等问题提供重要的基本方法。

为实现上述目的，本发明采用技术方案为：

(1)根据实验室已有的浒苔雌、雄配子体基因组数据，选定差异性区域，设计多对雌、雄配子体特异引物，以实验室已分离、培养、鉴定的多对浒苔雌雄配子体为材料，对所有引物的扩增效果开展评价，筛选出特异性好、扩增稳定性高的引物；进一步，在培养条件下针对浒苔完整生活史中各阶段对引物的扩增效果进行验证，最终确定浒苔雌性性别特异扩增引物的上游引物为5’-ATTCAATTGCACTCTCGTTGA-3’，下游引物为5’-GGCTGTACTCAACATTCAGAGC-3’；浒苔雄性性别特异扩增引物的上游引物为5’-AGGCCACTTTCGTGTTCATC-3’，下游引物为5’-CGGCTAGCAACTTCCGTAAT-3’。

(2)回收浒苔雌、雄性别特异扩增片段的DNA，利用TaKaRa公司的pGEM-T载体、大肠杆菌（Escherichia coli）感受态菌株TOP10（北京华越洋生物科技有新公司）进行克隆（参照连接转化试剂盒说明书）。挑选含有目的片段的白色菌落进行测序，分别获得浒苔雌、雄性别特异分子标记，其核苷酸序列分别为 SEQ ID NO.1 和SEQ ID NO.2。

本发明利用设计的浒苔雌、雄配子体特异引物分别对浒苔雌、雄配子体中提取的DNA进行PCR扩增。结果表明，用浒苔雌性性别特异扩增引物进行扩增，从浒苔雌配子体基因组中可获得一条316 bp的特异性条带，而以雄配子体基因组为模板，扩增结果为阴性，说明该标记是雌性特异分子标记（SEQ ID NO.1）；用浒苔雄性性别特异扩增引物进行扩增，从浒苔雄配子体基因组中可获得一条205 bp的特异性条带，而以雌配子体基因为模板，扩增结果为阴性，说明该标记是雄性特异分子标记（SEQ ID NO.2）。

与现有方法相比，本发明具有如下有益效果：

1. 本发明提供了一种浒苔雌、雄配子体性别特异分子标记，该分子标记以DNA为模板，可快速、简单、准确、大量地对浒苔配子体性别进行鉴定。而现有方法仍然依靠观察其放散生殖细胞的大小、鞭毛数和趋光性来判断其孢子或雌雄配子的类型。现有方法不仅需要以建立藻体生殖诱导技术作为前提，而且尚未形成可靠的通用标准；而本发明提供的浒苔雌、雄配子体性别特异分子标记，弥补了现有技术的空缺。

2.本发明提供的浒苔雌、雄配子体性别特异分子标记，可为浒苔配子体性别鉴定、浒苔复杂生活史研究和从遗传育种以及从细胞或分子水平上研究浒苔性别分化的遗传育种工作提供重要的分子工具。

附图说明

图1为本发明实施例提供的浒苔性别特异分子标记在浒苔雌、雄配子体（单倍体）以及孢子体（二倍体）中的扩增。M：Trans2K Plus II DNA Marker(北京全式金生物技术有限公司)；mt+：雌配子体；mt-：雄配子体；2n：孢子体。上图为浒苔雌性性别特异扩增引物扩增情况，下图为浒苔雄性性别特异扩增引物扩增情况。

图2为本发明实施例提供的浒苔性别特异分子标记在由雌、雄配子体杂交生成的F1代中的扩增。S1-S10：10个F1代单株；mt-：雄配子体（对照）；mt+：雌配子体（对照）；M：Trans2K Plus II DNA Marker(北京全式金生物技术有限公司)。M左侧泳道为浒苔雌性性别特异扩增引物扩增情况，M右侧泳道为浒苔雄性性别特异扩增引物扩增情况。

图3为本发明实施例提供的浒苔性别特异分子标记在由图2中的F1代放散长成的F2代中的扩增。G1-G10：10个F2代单株；mt+：雌配子体（对照）；mt-：雄配子体（对照）；M：Trans2K Plus II DNA Marker(北京全式金生物技术有限公司)。M左侧泳道为浒苔雌性性别特异扩增引物扩增情况，M右侧泳道为浒苔雄性性别特异扩增引物扩增情况。

图4为本发明实施例提供的浒苔性别特异分子标记在浒苔雌配子体亲本及其单性生殖产生的F1代中的扩增。F：雌配子体亲本；F1-F13：13个F1代单株；mt-：雄配子体（对照）；mt+：雌配子体（对照）；BC：空白对照；M：Trans2K Plus II DNA Marker(北京全式金生物技术有限公司)。上图为浒苔雌性性别特异扩增引物扩增情况，下图为浒苔雄性性别特异扩增引物扩增情况。

图5为本发明实施例提供的浒苔性别特异分子标记在浒苔雄配子体亲本及其单性生殖产生的F1代中的扩增。M：Trans2K Plus II DNA Marker(北京全式金生物技术有限公司); m：雄配子体亲本；m1-m10：10个F1代单株； mt+：雌配子体（对照）；mt-：雄配子体（对照）；BC：空白对照。上图为浒苔雌性性别特异扩增引物扩增情况，下图为浒苔雄性性别特异扩增引物扩增情况。

图6为本发明实施例提供的浒苔性别特异分子标记在浒苔二倍体孢子体亲本及其自我循环产生的F1代中的扩增。M：Trans2K Plus II DNA Marker(北京全式金生物技术有限公司); 1：浒苔二倍体孢子体亲本；2-23：22个F1代单株；BC：空白对照。上图为浒苔雌性性别特异扩增引物扩增情况，下图为浒苔雄性性别特异扩增引物扩增情况。

具体实施方式

下面结合具体实施例，对本发明的一种浒苔性别特异分子标记及其应用做进一步详细说明。

实施例1：浒苔配子体性别特异分子标记筛选与设计

针对NCBI中已有的浒苔（Ulva prolifera）基因组原始未注释序列（NC_036137.1），通过对比分析浒苔雌、雄配子体基因组重测序数据，推测性别差异的序列可能分别位于scaffold 107（SDUY01000439.1）与scaffold 115（SDUY01000200.1）。基于生物信息学分析，分别设计了特异性扩增引物。其中，以雌配子体基因组DNA为模板，利用引物对Up1-F（5’-AGATGTATGATTCCTGTGGCTTC-3’）与Up1-R（5’-GCAGCAATAACCAGTATCTTGTC-3’）进行扩增，可以获得包含雌性特异序列的大约1460 bp的核苷酸片段；以雄配子体基因组DNA为模板，利用引物对Up2-F（5’-AGTGAATCAGTACGAAACACCTC-3’）与Up2-R（5’-AGTTCCCAGCTCATACAAATACC-3’）进行扩增，可以获得包含雄性特异序列的大约1850 bp的核苷酸片段。

以实验室已分离、培养、鉴定的多对浒苔雌、雄配子体为材料，利用天根公司的植物基因组DNA提取试剂盒按照说明分别制备其基因组DNA模板，利用引物对Up1-F/Up1-R在所有雌配子体中进行扩增，利用引物对Up2-F/Up2-R在所有雄配子体中进行扩增，将所有扩增产物建克隆测序。基于生物信息学分析，在上述序列范围内，寻找雌、雄性别特异的区域，利用Primer 5软件设计可分别扩增雌、雄性别特异分子标记的引物。引物设计原则是：1）某一性别的特异引物在另一性别的序列范围内无法同源匹配；2）某一性别的特异引物在所有来自同性材料的序列中可完全同源匹配。设计并合成的引物经扩增检验，最终确定浒苔雌、雄特异扩增引物分别为浒苔雌性性别特异扩增引物上游引物：5’-ATTCAATTGCACTCTCGTTGA-3’，浒苔雌性性别特异扩增引物下游引物：5’-GGCTGTACTCAACATTCAGAGC-3’，浒苔雄性性别特异扩增引物上游引物：5’-AGGCCACTTTCGTGTTCATC-3’，浒苔雄性性别特异扩增引物下游引物：5’-CGGCTAGCAACTTCCGTAAT-3’。

25μl PCR反应体系包括：10.5 μl ddH₂O，12.5 μl 2×DreamTaq Green PCRMaster Mix（Thermo Scientific），1.0 μl 引物（20 μM），1.0 μl 模板 DNA（约30 ng/μl）。

浒苔雌性性别特异扩增引物的PCR扩增程序为：94℃×5 min；94℃×30 s、52℃×30 s、72℃×1 min，35个循环；72℃×10 min；4℃保存。

浒苔雄性性别特异扩增引物的PCR扩增程序为：94℃×5 min；94℃×30 s、54℃×30 s、72℃×1 min，35个循环；72℃×10 min；4℃保存。

PCR产物经1.5%琼脂糖凝胶电泳检测，切胶回收目的条带，经克隆测序获得浒苔雌性性别特异扩增引物扩增产物316 bp，即浒苔雌性特异分子标记（SEQ ID NO.1），浒苔雄性性别特异扩增引物扩增产物205 bp，即浒苔雄性特异分子标记（SEQ ID NO.2）。

SEQ ID NO.1：

ATTCAATTGCACTCTCGTTGAGGGTGTGATGACACACAACATGAAACAGTTTGTCATCGATGGCAACAAATGTGTCCTCAATCGGCCATCTGCGGATCAAAAAGTGGATGACAGTGTTTTTGAAGAGCATGAGGTTTACGCGATTGATGTGGTCGTAAGTACAGGTGCGACTGTAACTATTTGTGGCTTACGATGTGGGCATTCTCTTCTGTGCTGTGACCTCACACATGTGTTGATCCAGGTGAAGGAAAGGCAAAGGTTCTGAACGAAAAACAGACCGCAGTTTTCAAGCGTGCTCTGAATGTTGAGTACAGCC

（a）序列特征：

●长度：316 bp

●类型：碱基序列

●链型：单链

●拓扑结构：线性

（b）分子类型：DNA

（c）假设：否

（d）反义：否

（e）最初来源：浒苔（Ulva prolifera）

序列结构特点：无

SEQ ID NO.2：

AGGCCACTTTCGTGTTCATCATTGACTCATGCTCCTTACGCAGGAGATGGAAAAGCTCGAGTGGTAGATGAGAAGCAAACCACAGTGTTCAAAAGAGCTCTGAACGTGGAATACAGCTTGAAGATGAAGTCTTCGCGAACGATATTGTCTGACGTTGACAAAAAGTATCCATGCATGCCATTCCCATTACGGAAGTTGCTAGCCG

（a）序列特征：

●长度：205 bp

●类型：碱基序列

●链型：单链

●拓扑结构：线性

（b）分子类型：DNA

（c）假设：否

（d）反义：否

（e）最初来源：浒苔（Ulva prolifera）

序列结构特点：无

利用浒苔雌、雄特异扩增引物，按照上述扩增程序，分别扩增浒苔雌配子体（单倍体）、雄配子体（单倍体）、以及孢子体（二倍体），结果如图1所示：

在浒苔雌配子体（单倍体）中，雌性特异分子标记（SEQ ID NO.1）的扩增结果均为阳性，得到316 bp特征性条带，而雄性特异分子标记（SEQ ID NO.2）的扩增结果为阴性；

在浒苔雄配子体（单倍体）中，雄性特异分子标记（SEQ ID NO.2）的扩增结果均为阳性，得到205 bp特征性条带，而雌性特异分子标记（SEQ ID NO.1）的扩增结果为阴性；

在浒苔孢子体（二倍体）中，雌性特异分子标记（SEQ ID NO.1）与雄性特异分子标记（SEQ ID NO.2）的扩增结果均为阳性，316 bp与205 bp两条特征性条带为共显。

实施例2：在浒苔典型生活史中利用性别特异分子标记检测各世代的倍性与性别

选择已鉴定的浒苔雌、雄配子体各一个单株做为亲本，分别利用切段法诱导生殖细胞的形成与放散。具体步骤包括：将藻体用无菌刀片切成1-2毫米的藻段，置于培养皿中，加入VSE培养液，转入光照培养箱，设置培养温度20℃、光暗周期14 h/10 h（L : D）、光强约100 μmol photons • m^-2• s^-1进行生殖诱导，大约2-3天后可看到生殖细胞从藻段中释放出来。分别吸取来自雌、雄配子体的生殖细胞，在新培养皿中等量混合，加入VSE培养液（用消毒海水配制，含NaNO₃ 0.5 mmol/L；Na₂HPO₄0.03 mmol/L；Na₂EDTA 0.01 mmol/L；FeSO₄ 1umol/L；MnCl₂0.1 μmol/L；VB₁ 0.2 mg/L；生物素 1 μg/L；VB₁₂ 1 μg/L），按照上述相同培养条件下继续培养，经发育生成F1代藻体。随机挑选F1代总计52个单株（编号为S1-S52），利用天根公司的植物基因组DNA提取试剂盒按照说明分别制备各单株的基因组DNA模板，根据实施例1获得的浒苔性别特异分子标记、以及扩增程序，逐一进行扩增检测，部分样本（S1-S10）的检测结果如图2所示，结果表明，所有单株均为标记双显，说明单株均为雌、雄配子受精发育后形成的二倍体。

进一步，随机挑选F1代单株，继续利用切段法、按照上述设置相同条件诱导其生殖细胞的形成与放散。在相同培养条件下继续培养，经发育生成F2代藻体。随机挑选F2代总计58个单株（编号为G1-G58），利用天根公司的植物基因组DNA提取试剂盒按照说明分别制备各单株的基因组DNA模板，根据实施例1获得的浒苔性别特异分子标记、以及扩增程序，逐一进行扩增检测，部分样本（G1-G10）的检测结果如图3所示，结果表明，所有单株均为标记单显，说明单株均为二倍体经减数分裂后形成的雌、雄配子体，其中，雌配子体（mt+）为G2、G4号单株，雄配子体（mt-）为G1、G3、G5、G6、G7、G8、G9、G10号单株。

上述结果表明，本发明的浒苔性别特异分子标记，可用于检测浒苔典型生活史中个体的倍性以及配子体阶段的性别。

实施例3：在浒苔非典型生活史——配子体单性生殖中利用性别特异分子标记检测倍性与性别

浒苔的繁殖方式非常多样，除了典型生活史，还存在多种非典型生活史，其最基本的遗传学规律，包括藻体倍性的变化特征，尚待阐明。研究发现，能够产生双鞭毛、正趋光生殖细胞的浒苔藻体（推测是配子体），也可以不经细胞融合、而是单独萌发生成新藻体。但是，针对这个过程，从未有分子鉴定的结果可以证明，具体方面有：1）亲本是否为单倍体配子体；2）该非典型生活史过程是否没有倍性的变化，后代仍然是同一性别的单倍体配子体；3）雌、雄配子体是否均可完成该生活史，还是仅单一性别可以完成。

为了回答上述问题，我们选择已鉴定的浒苔雌配子体、雄配子体各一个单株做为亲本，均单独培养，按照上述实施例记载分别利用切段法和前述相同条件诱导亲本形成配子并放散，然后，在相同培养条件下继续单独培养，经发育生成F1代藻体。

随机挑选雌配子体亲本（编号为F）产生的F1代总计13个单株（编号为F1-F13），利用天根公司的植物基因组DNA提取试剂盒按照说明分别制备各单株的基因组DNA模板，根据实施例1获得的浒苔性别特异分子标记、以及扩增程序，逐一进行扩增检测，检测结果如图4所示，结果表明，所有F1代单株均于316 bp得到特征性条带，均为雌配子体，与亲本F一致。

随机挑选雄配子体亲本（编号为m）产生的F1代总计10个单株（编号为m1-m10），利用天根公司的植物基因组DNA提取试剂盒按照说明分别制备各单株的基因组DNA模板，根据实施例1获得的浒苔性别特异分子标记、以及扩增程序，逐一进行扩增检测，检测结果如图5所示，结果表明，所有F1代单株均于205 bp得到特征性条带，均为雄配子体，与亲本m一致。

上述结果表明，本发明的浒苔性别特异分子标记，可用于检测浒苔非典型生活史中个体的倍性以及配子体阶段的性别。浒苔配子体产生的配子，可以不经两性融合、直接萌发形成与亲本基因型一致的子代。另外，还首次证实，浒苔雌、雄配子体均有这种配子体单性生殖的能力。

实施例4：在浒苔非典型生活史——孢子体自我循环中利用性别特异分子标记检测倍性与性别

有研究发现，在极少情况下，浒苔二倍体孢子体也可以产生双鞭毛、负趋光的生殖细胞，并萌发生成新藻体。但是，针对这个过程，从未有分子鉴定的结果可以证明，具体方面有：1）亲本是否要经过减数分裂，产生的这种生殖细胞究竟是单倍、还是二倍；2）生成的新藻体是什么倍性。

为了回答上述问题，我们通过广泛采集，筛选到具有该生活史类型的浒苔二倍体孢子体，选择一个单株做为亲本，在单独培养的情况下，按照上述实施例记载分别利用切段法和前述相同条件诱导生殖细胞形成并放散，然后，在相同培养条件下继续单独培养，经发育生成F1代藻体。

随机挑选二倍体亲本（编号为1）产生的F1代总计22个单株（编号为2-23），利用天根公司的植物基因组DNA提取试剂盒按照说明分别制备各单株的基因组DNA模板，根据实施例1获得的浒苔性别特异分子标记、以及扩增程序，逐一进行扩增检测，检测结果如图6所示，结果表明，所有F1代单株均为标记双显、均为二倍体孢子体，与亲本一致。

上述结果再次表明，本发明的浒苔性别特异分子标记，可用于检测浒苔非典型生活史中个体的倍性以及配子体阶段的性别。浒苔二倍体孢子体可以不经减数分裂，产生二倍体的生殖细胞，直接萌发形成与亲本基因型一致的二倍体孢子体，在整个生活史过程中，没有倍性的变化，是二倍体孢子体的自我循环。

序列表

<110> 中国科学院海洋研究所

<120> 一种浒苔性别特异分子标记及其应用

<160> 2

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 316

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 1

attcaattgc actctcgttg agggtgtgat gacacacaac atgaaacagt ttgtcatcga 60

tggcaacaaa tgtgtcctca atcggccatc tgcggatcaa aaagtggatg acagtgtttt 120

tgaagagcat gaggtttacg cgattgatgt ggtcgtaagt acaggtgcga ctgtaactat 180

ttgtggctta cgatgtgggc attctcttct gtgctgtgac ctcacacatg tgttgatcca 240

ggtgaaggaa aggcaaaggt tctgaacgaa aaacagaccg cagttttcaa gcgtgctctg 300

aatgttgagt acagcc 316

<210> 2

<211> 205

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 2

aggccacttt cgtgttcatc attgactcat gctccttacg caggagatgg aaaagctcga 60

gtggtagatg agaagcaaac cacagtgttc aaaagagctc tgaacgtgga atacagcttg 120

aagatgaagt cttcgcgaac gatattgtct gacgttgaca aaaagtatcc atgcatgcca 180

ttcccattac ggaagttgct agccg 205

Claims

1.一种浒苔雌、雄性别特异扩增引物，其特征在于：

浒苔雌性性别特异扩增引物的上游引物为5’-ATTCAATTGCACTCTCGTTGA-3’，下游引物为5’-GGCTGTACTCAACATTCAGAGC-3’；浒苔雄性性别特异扩增引物的上游引物为5’-AGGCCACTTTCGTGTTCATC-3’，下游引物为5’-CGGCTAGCAACTTCCGTAAT-3’。

2.按权利要求1所述的浒苔雌、雄性性别特异扩增引物的应用，其特征在于：所述引物在扩增浒苔雌、雄性分子标记用于对浒苔倍性以及配子体的性别进行鉴定中的应用。

3.一种浒苔性别特异分子标记，其特征在于：浒苔雌配子体的性别特异性标记为SEQID NO.1中碱基序列所示；

雄配子体的性别特异性标记为SEQ ID NO.2中碱基序列所示。

4.按权利要求3所述的浒苔性别特异分子标记，其特征在于：

以权利要求1所述的浒苔雌、雄性性别特异扩增引物分别对浒苔雌、雄配子体中提取的DNA进行PCR扩增；

以雌配子体基因组为模板、雌性性别特异扩增引物进行扩增，获得一条316 bp的特异性条带，获得SEQ ID NO.1中所示的雌性特异分子标记，以雄配子体基因组为模板、雄性性别特异扩增引物进行扩增，扩增结果为阴性；

以雄配子体基因组为模板、雄性性别特异扩增引物进行扩增，获得一条205 bp的特异性条带，获得SEQ ID NO.2中所示的雄性特异分子标记，以雌配子体基因组为模板、雄性性别特异扩增引物进行扩增，扩增结果为阴性。

5.一种权利要求3所述浒苔性别特异分子标记的应用，其特征在于：所述浒苔雌、雄性分子标记用于对浒苔倍性以及配子体的性别进行鉴定中的应用。

6.一种权利要求3所述浒苔性别特异分子标记的应用，其特征在于：

所述分子标记应用于浒苔生活史，对鉴定浒苔各种生活史类型中的倍性变化中的应用。

7.一种权利要求3所述浒苔性别特异分子标记的应用，其特征在于：所述分子标记应用于浒苔的品种选育中。