CN112522145B - 抗氧化链霉菌及其在植物病害防冶中的应用 - Google Patents

抗氧化链霉菌及其在植物病害防冶中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种抗氧化链霉菌菌株Sa‑21，为抗氧化链霉菌(Streptomyces antioxidans)Sa‑21，保藏编号为：CCTCC NO：M 2020423。本发明还同时公开了上述氧化链霉菌菌株Sa‑21的用途，用于抑制番茄早疫病菌(A.solani)；且对植物病原真菌、植物病原细菌均具有抑制作用。

Description

抗氧化链霉菌及其在植物病害防冶中的应用
技术领域
本发明属于微生物生物防冶领域，涉及拮抗番茄早疫病菌抗氧化链霉菌(Streptomyces antioxidans)Sa-21菌株及其在植物病害防冶中的应用。
背景技术
番茄早疫病是由茄链格孢菌(Alternaria solani)侵染引起的病害，为发生在植株茎叶及果实上的一种严重病害。一般年份可导致番茄减产10％～30％，流行年份番茄产量损失可达 30％～40％。此病菌还可以引起马铃薯、辣椒、茄子等多种作物发病。
目前番茄早疫病仍然以加强田间管理和喷施杀菌剂为主要防冶手段。利用有益微生物如酵母菌、芽孢杆菌、放线菌等防治番茄早疫病，具有健康、环保无污染等优点，受到许多科研工作者的关注。放线菌是产生农用抗生素的重要生物资源，其在植物病害生物防治中具有很好的应用前景。而广泛应用的抗生素约70％是由各种链霉菌所产生，如链霉素、土霉素、四环素、氯霉素、红霉素等都是链霉菌产生。
2013100080285的发明《盐屋链霉菌代谢产物在防治菜豆炭疽病菌中的应用》公开了盐屋链霉菌(Streptomyces sioyaensis)107，对菜豆炭疽病菌(Colletotrichumlindemuthianum)和番茄早疫病菌(Alternaria solani)等有抑制作用。
2014106916331的发明《生物防治链霉菌及其应用》公开了链霉菌Lnu-12(Streptomyces sp.lnu-12)，对瓜类枯萎病菌抑制作用最强，对番茄叶霉病菌、番茄早疫病菌有很强的抑制作用，对辣椒根腐病菌有一定的抑制作用。
2014101527708的发明《微黄白链霉菌及其在植物病害防治中的应用》公开了微黄白链霉菌(Streptomyces albidoflavus)SY-FX-14，其对白香瓜瓜腐、辣椒枯萎、番茄早疫、黄瓜炭疽、棉花黄萎、黄瓜灰霉、水稻恶苗、番茄青枯、水稻纹枯、烟草黑胫、小麦根腐、水稻稻瘟、小麦赤霉、油菜菌核、大豆根腐、番茄灰霉、黄瓜褐斑、黄瓜霜霉病原菌均具有明显的抑制生长作用。
2017101913010的发明《一种可可链霉菌生防菌剂产品以及应用》公开了可可链霉菌FN，可应用于防治苹果炭疽叶枯病、苹果斑点落叶病、黄瓜蔓枯病、黄瓜立枯病、番茄早疫病。
发明内容
本发明要解决的问题是提供一种抗氧化链霉菌(Streptomyces antioxidans)Sa-21及其用途，其对番茄早疫病菌具有高拮抗作用。
为了解决上述技术问题，本发明提供一种抗氧化链霉菌菌株Sa-21，为抗氧化链霉菌 (Streptomyces antioxidans)Sa-21，保藏编号为：CCTCC NO：M 2020423。
本发明还同时提供了上述抗 氧化链霉菌菌株Sa-21的用途：抑制番茄早疫病菌(A.solani)。
作为本发明的用途的改进：对植物病原真菌、植物病原细菌均具有抑制作用。
作为本发明的用途的进一步改进：
所述植物病原真菌为杨树枯萎病菌(Fusarium solani)、苦瓜枯萎病菌(Fusariumoxysporum f.sp.momordicae)、苹果轮纹病菌(Botryosphaeria berengeriana f.sppiricola)、西瓜炭疽病菌(Colletotrichum lagenerium)；
所述植物病原细菌为：番茄细菌性叶斑病菌(Pseudomonas syringaepv.tomato)、大豆细菌性斑疹病菌(Xanthomonas campestris pv.glycines)、大豆细菌性斑点菌(Pseudomonas syringae pv.glycinea)、水稻细菌性条斑病菌(Xanthomonasoryzae pv.oryzicola)、野油菜黄单胞菌(Xanthomonas campestris pv.campestris)、烟草青枯病菌(Ralstortia solonacearum)、烟草野火病菌(Pseudomonas syringaepv.tabaci)、水稻白叶枯病菌(Xanthomonas oryzae pv. oryzae)。
本发明针对防治番茄早疫病的化学防治和农业防治日益暴露出来的问题，利用微生物及其次级代谢产物进行番茄早疫病的生物防治成为研究方向。
本发明菌株的保藏信息如下：保藏名称：抗氧化链霉菌Sa-21 Streptomycesantioxidans Sa-21，保藏单位：中国典型培养物保藏中心，保藏地址：中国武汉武汉大学，保藏编号： CCTCC NO：M 2020423，保藏日期为2020年8月14日。
本发明所涉及Sa-21菌株筛选自香樟(Cinnamomum camphora)根际土壤。依据形态特征、生理生化特征和16S rDNA序列，鉴定为抗氧化链霉菌(Streptomyces antioxidans)。即，本发明从香樟根际土壤中筛选出对番茄早疫病菌(A.solani)具有拮抗作用明显的链霉菌菌株，以期为番茄早疫病的生物防治提供具有生防效果的菌株。
抗氧化链霉菌(Streptomyces antioxidans)Sa-21菌株发酵滤液对番茄早疫病菌有显著抑制作用，可以用来防冶番茄早疫病等。Sa-21菌株在高氏一号培养基上培养5d(温度为28℃)，取6mm菌饼测定对番茄早疫病菌(A.solani)的抑制作用，抑菌圈直径可达约50mm(图5)； Sa-21菌株粗浸膏的最低抑制浓度为128μg/mL(图6)。抗菌谱试验结果表明：链霉菌Sa-21 菌株发酵滤液对4种代表性植物病原真菌杨树枯萎病菌(Fusarium solani)、苦瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporum f.sp.momordicae)、苹果轮纹病菌(Botryosphaeriaberengeriana f.sp piricola)、西瓜炭疽病菌(Colletotrichum lagenerium)有一定的抑制作用(见表3)；对8 种植物病原细菌如大豆细菌性斑疹病菌(Xanthomonas campestrispv.glycines)、水稻细菌性条斑病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzicola)、大豆细菌性斑点病菌(Pseudomonas suringae pv. glycinea)等有很强的抑制作用(见表4)。Sa-21菌株发酵滤液10倍稀释液对番茄早疫病的防效可达90％以上(见表5)。链霉菌Sa-21菌株可为微生物源农药开发提供优良的菌株，在番茄、水稻、大豆等作物生物防冶上有较好的应用前景。
附图说明
下面结合附图对本发明的具体实施方式作进一步详细说明。
图1是8株代表性放线菌纯菌株的菌落形态(高氏一号培养基，7d)；
图2是链霉菌Sa-21菌株的菌落和显微形态特征；
图3是链霉菌Sa-21菌株生理生化部分实验结果；
图4是基于16S rDNA序列构建的链霉菌Sa-21菌株进化树；
图5是链霉菌Sa-21菌株菌饼对番茄早疫病菌(A.solani)生长的抑制作用；
左图为6mm高氏一号培养基(对照)，右图为6mm Sa-21菌饼(培养时间5d)。
图6是链霉菌Sa-21菌株不同浓度初浸膏对番茄早疫病菌(A.solani)生长的抑制效果。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此：
实施例1、抗氧化链霉菌(Streptomyces antioxidans)Sa-21菌株的筛选和鉴定
1菌株
(1)放线菌菌株：来自不同生境的土壤(例如：水稻田土壤、草坪土壤、香樟地土壤、番茄地土壤等)中分离、纯化、筛选和鉴定，保藏放线菌菌株。
(2)番茄早疫病菌(Alternaria solani，以下均缩写为As)为常规菌株。
2培养基
(1)高氏一号固体培养基：可溶性淀粉20g、KNO3 1g、K2HPO4 0.5g、MgSO4·7H2O 0.5g、NaCl 0.5g、FeSO4·7H2O 0.01g、琼脂20g，水1000mL，pH 7.2～7.4。用于放线菌菌株的分离纯化和鉴定。
(2)高氏一号液体培养基：不加琼脂，其余配方同(1)，用于放线菌菌株的液体发酵培养。
(3)PDA培养基：马铃薯浸出粉6g、葡萄糖20g、琼脂20g，水1000mL，pH 6.0～6.5。用于As的培养。
3实验方法
3.1放线菌菌株的分离纯化和保藏
取干燥土样1g于99mL无菌水中，120r/min摇床上振荡30min。上清液进行梯度稀释(10-2～10-5)，选择合适的浓度(10-4)取100μL均匀涂布于高氏一号培养基平板上，28℃恒温箱培养5-7d，直到出现菌落。挑取具有典型放线菌菌落特征的单菌落转接到另一高氏一号培养基平板上，经3次划线纯化，得纯菌株；将菌株编号，置于4℃冰箱中保存，备用。
3.2拮抗As放线菌菌株的筛选
3.2.1共培养法初筛
将As接种于PDA培养基平板上，活化培养后用打孔器取1菌饼(直径6mm)接种于PDA培养基上，培养4d，备用。将筛选的放线菌菌株菌饼(直径6mm)接种于PDA培养基中间，四周等距离接种8个As菌饼(6mm)，28℃培养5-7d，直至对照培养基(四周等距离接种8个As菌饼，但不接种放线菌菌饼)菌丝长满培养皿，测量抑菌圈。根据抑菌圈有无和大小初步筛选有拮抗作用的放线菌菌株。
3.2.2牛津杯法复筛
取8个As菌饼均匀接种于PDA培养基边缘，中间插入牛津杯，注入200μL放线菌发酵滤液，以高氏一号培养液为空白对照。静置培养4d，实验重复3次，根据抑菌圈大小选择出拮抗作用较强的放线菌菌株。并将其用25％甘油保藏。
3.3最低粗浸膏抑制浓度的测定
3.3.1粗浸膏的制备
菌株发酵液(Sa-21菌株发酵液)的制备方法为：
将菌株(Sa-21菌株)划线接种于高氏一号固体培养基上，培养5d，用打孔器取2个菌株(Sa-21菌株)菌饼(直径6mm)接种于100mL(锥形瓶规格为250mL)高氏一号液体培养基中，初始pH7.4，温度28℃，转速160r.min-1条件下培养72h，得种子液；按照10％接种量将种子液接种于高氏一号液体培养基中(锥形瓶规格为3 000mL，装1 000mL高氏一号液体培养基)，同条件下培养7d即得发酵液。
将所得的菌株发酵液(Sa-21菌株发酵液)在室温下经真空泵抽滤得到滤液，滤液进一步用0.22μm微孔滤膜过滤，将所得滤液用等体积的乙酸乙酯萃取，直到上层乙酸乙酯层无色为止。将得到的乙酸乙酯层合并，在旋转蒸发仪上50℃蒸发浓酸至干，即得菌株发酵液(Sa-21 菌株发酵液)的乙酸乙酯粗浸膏。
3.3.2最低粗浸膏抑制浓度的测定
取As菌饼(6mm)接种于含不同粗浸膏浓度(浓度分别为1，2，4，8，16，32，64， 128，256μg/mL)的PDA培养基中央，以不加粗浸膏的PDA培养基作为空白对照，培养5d (温度为28℃)，测量菌落直径，实验重复3次，测定As不生长的粗浸膏浓度，即为最低粗浸膏抑制浓度。
PDA培养基中粗浸膏浓度的浓度如图6所示，分别为1、2、4、8、16、32、64、128、 256μg/mL。
3.4拮抗As放线菌Sa-21菌株的鉴定
3.4.1形态特征观察
观察菌落大小、形态、质地、表面等特征。用插片法和埋片法培养Sa-21菌株，光学显微镜和扫描电镜下观察不同培养时间(3d、5d、7d、9d)Sa-21菌株的基内菌丝、气生菌丝和孢子丝等形态特征，并拍照。
3.4.2生理生化特征实验
对Sa-21菌株进行淀粉水解、明胶液化、酪蛋白水解、尿素利用、碳氮源利用等试验。
3.4.3 16S rDNA序列分析
提取目标菌株的基因组DNA，扩增16S rDNA序列，送上海生物工程公司测序。将测序得到的16S rDNA序列(SEQ ID NO:1)提交至GenBank并利用BLAST比对后进行分析，采用MEGA-X软件中Neighbor-Joining法构建系统发育树确定所属的放线菌种类。
4实验结果
4.1放线菌纯菌株的获得
通过分离纯化从不同生境土壤样品中分离纯化共获138株放线菌纯菌株，8株代表性放线菌纯菌株的在高氏一号培养基培养7d的菌落如图1所示。
4.2拮抗As放线菌菌株的筛选
利用共培养法和牛津杯法对138株放线菌纯菌株进行As的抑制效果的初筛和复筛，结果不同放线菌菌株对As作用存在较大差异。经筛选获1株拮抗作用较强的放线菌菌株，编号为 Sa-21菌株，6mm菌饼抑菌圈直径达50±2.4mm，Sa-21菌株分离于香樟根际土壤。
将Sa-21菌株进行了保藏，保藏信息如下：保藏名称：抗氧化链霉菌Sa-21Streptomyces antioxidans Sa-21，保藏单位：中国典型培养物保藏中心，保藏地址：中国武汉武汉大学，保藏编号：CCTCC NO：M 2020423，保藏日期为2020年8月14日。
4.3Sa-21菌株对As的最低粗浸膏抑制浓度
配制含Sa-21菌株不同粗浸膏浓度的PDA培养基，对As的最低粗浸膏抑制浓度。结果见图6，随着粗浸膏浓度的增加，As菌落直径变小，对照菌落直径为74mm，当粗浸膏浓度达128μg/mL，As生长完全被抑制。Sa-21菌株对番茄早疫病菌最低粗浸膏抑制浓度为128μg/mL。
4.4Sa-21菌株的鉴定结果
Sa-21菌株形态特征：高氏一号上28℃培养7d，菌落小、表面呈白色丝绒状；显微镜观察基内菌丝和气生菌丝纤细，成熟的气生菌丝分化形成孢子丝，孢子丝呈螺旋状(图2)；
生理生化试验结果表明：Sa-21菌株呈革兰氏阳性，能水解淀粉、脂肪、明胶、尿素和酪蛋白(表1、图3)；可利用多种氮源，较佳氮源是蛋白胨、硝酸钾和多种氨基酸；可利用多种碳源，利用效果较佳的是鼠李糖、麦芽糖、棉子糖等(表2)；适宜盐浓度为1％，适宜酸碱是pH 7.0～8.0，适宜培养温度是28℃。
表1、链霉菌Sa-21菌株生理生化试验结果
Figure BDA0002819409370000061
注：++++表示能力很强，+++表示能力强，++表示能力中，+表示能力较弱，-表示无。
表2、链霉菌Sa-21菌株碳源、氮源利用试验结果
Figure BDA0002819409370000062
Figure BDA0002819409370000071
注：+++表示生长旺盛，++表示生长良好，+表示生长一般，—表示不生长。
16S rDNA序列分析结果表明：其长度为1406bp，与抗氧化链霉菌(Streptomycesantioxidans)的进化距离最近(图4)，相似性达99.6％。
根据Sa-21菌株的形态特征、生理生化试验结果和16S rDNA序列，结合链霉菌属(Streptomyces)分种检索表和进化树分析，将Sa-21菌株鉴定为抗氧化链霉菌(Streptomyces antioxidans)。
实施例2、抗氧化链霉菌(Streptomyces antioxidans)Sa-21菌株发酵滤液抗菌谱测定 1菌株
(1)抗氧化链霉菌(Streptomyces antioxidans)Sa-21菌株；保藏编号：CCTCC NO：M 2020423。
(2)4种代表性植物病原真菌：杨树枯萎病菌(Fusarium solani)、苦瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporum f.sp.momordicae)、苹果轮纹病菌(Botryosphaeria berengerianaf.sp piricola)、西瓜炭疽病菌(Colletotrichum lagenerium)4种代表性植物病原真菌，用作Sa-21菌株发酵滤液抗真菌谱测定。
(3)8种代表性植物病原细菌：番茄细菌性叶斑病菌(Pseudomonas syringaepv.tomato)、大豆细菌性斑疹病菌(Xanthomonas campestris pv.glycines)、大豆细菌性斑点菌(Pseudomonas syringae pv.glycinea)、水稻细菌性条斑病菌(Xanthomonasoryzae pv.oryzicola)、野油菜黄单胞菌(Xanthomonas campestris pv.campestris)、烟草青枯病菌(Ralstortia solonacearum)、烟草野火病菌(Pseudomonas syringaepv.tabaci)、水稻白叶枯病菌(Xanthomonas oryzae pv. oryzae)这8种代表性植物病原细菌(表4)，用于Sa-21菌株发酵滤液抗细菌谱测定。
2培养基
(1)PDA培养基：马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂粉20g、水1L、pH 6.0～6.5。用于植物病原真菌的培养。
(2)牛肉膏蛋白胨培养基：牛肉膏3g、蛋白胨10g、NaCl 5g、加水至1000mL，pH 调至7.5(牛肉膏蛋白胨琼脂固体培养基加琼脂粉18g)。用于植物病原细菌的培养。
(3)高氏一号培养基：用于Sa-21菌株的发酵种子和发酵培养。
3实验方法
3.1 Sa-21菌株发酵滤液的制备
将Sa-21菌株划线接种于高氏一号固体培养基上，培养5d，用打孔器取2个Sa-21菌株菌饼(直径6mm)接种于100mL(锥形瓶规格为250mL)高氏一号液体培养基中，初始pH7.4，温度28℃，转速160r.min-1条件下恒温振荡培养7d。将发酵液置于50mL离心管中12000 r/min离心10min，上清液用0.22μm有机滤膜过滤，除去残余孢子，得到发酵滤液。
3.2植物病原真菌的活化与培养
将保藏于4℃的4种病原真菌分别接种于PDA培养基中，于28℃活化培养3d。然后转接于新的PDA培养基上于28℃培养5d，用于真菌抗菌谱测定。
3.3植物病原细菌的活化与培养
将保藏于4℃的8种病原细菌分别接种于牛肉膏蛋白胨培养基中，于28℃活化培养2d。然后转接于新的牛肉膏蛋白胨培养基上于28℃培养2d，用于细菌抗菌谱测定。
3.4 Sa-21菌株抗真菌谱的测定
每种植物病原真菌取8个植物病原真菌菌饼(6mm)均匀接种于PDA培养基边缘，中间插入牛津杯，注入200μL放线菌发酵滤液(即，步骤3.1所得的发酵滤液)，以高氏一号培养液为空白对照。静置培养4d，用十字交叉法测量抑菌圈大小，实验重复三次，取平均值。
3.5 Sa-21菌株抗细菌谱的测定
将8种植物病原细菌分别接种于牛肉膏蛋白胨培养液中，摇床活化培养(180r/min、 28℃)，当菌密度达到OD600为0.6时，取100μL菌液均匀涂布于牛肉膏蛋白胨固体培养基上。另取200μL Sa-21菌株的发酵滤液，用牛津杯法测定Sa-21发酵液对8种植物病原细菌的抑制作用。
4实验结果
4.1 Sa-21菌株发酵滤液对4种植物病原真菌的抑制作用
测定结果表明：Sa-21菌株发酵滤液对4种代表性植物病原真菌杨树枯萎病菌(Fusarium solani)、苦瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporum f.sp.momordicae)、苹果轮纹病菌(Botryosphaeria berengeriana f.sp piricola)、西瓜炭疽病菌(Colletotrichumlagenerium)有较好的抑制作用(见表3)。
表3、链霉菌Sa-21菌株发酵滤液对4种植物病原真菌的抑制效果
Figure BDA0002819409370000081
Figure BDA0002819409370000091
4.2 Sa-21菌株发酵滤液对8种植物病原细菌的抑制作用
抗菌谱测定结果表明：Sa-21菌株发酵液对番茄细菌性叶斑病菌(Pseudomonassyringae pv. tomato)、大豆细菌性斑疹病菌(Xanthomonas campestris pv.glycines)、大豆细菌性斑点菌 (Pseudomonas syringae pv.glycinea)、水稻细菌性条斑病菌(Xanthomonas oryzae pv. oryzicola)、野油菜黄单胞菌(Xanthomonas campestrispv.campestris)等8种代表性植物病原细菌均有较强的抑制作用(表4)。
表4、链霉菌Sa-21菌株发酵滤液对8种植物病原细菌的抑制效果
Figure BDA0002819409370000092
发明人经实验发现：盐屋链霉菌(Streptomyces sioyaensis)107、链霉菌 Lnu-12(Streptomyces sp.lnu-12)、可可链霉菌FN对上述8种植物病原细菌抑菌效果极差，远不如本发明。微黄白链霉菌(Streptomyces albidoflavus)SY-FX-14对水稻细菌性条斑病菌、水稻细菌性条斑病菌、大豆细菌性斑点等植物病原细菌的抑菌效果极差，远不如本发明。
实施例3、链霉菌Sa-21菌株发酵滤液对番茄早疫病的防效研究
1病菌和番茄品种
(1)拮抗放线菌：抗氧化链霉菌(Streptomyces antioxidans)Sa-21菌株。
(2)病原菌：番茄早疫病菌(Alternaria solani，以下均缩写为As)
(3)番茄品种：选用对番茄早疫病感病的3个番茄品种(Micro Tom、金珠、亚非1号)。
2培养基
(1)高氏一号固体和液体培养基，用于Sa-21菌株的培养和发酵。
(2)PDA培养基，用于As的培养。
3实验方法
3.1番茄苗的培育
将大小均一饱满的番茄种子于75％酒精中表面消毒30s，无菌水冲洗5次以上，消毒后的种子均匀摆放于铺有滤纸的灭菌培养皿中(每皿约50粒)，每皿加5mL无菌水，26℃黑暗培养至种子露白。播种到盆钵土壤中，置于光培养箱培养40d，培养条件：光照14h、温度26℃，黑暗10h、温度24℃，湿度65％，每天早上浇水，两周喷一次营养液。
3.2番茄早疫病菌的培养
将As病菌点接至PDA培养基上，置于28℃培养箱培养，待菌落布满培养基表面，使用3mm打孔器打出“菌饼”，备用。
3.3 Sa-21菌株发酵滤液稀释液的制备
将Sa-21菌株划线接种于高氏一号固体培养基上，培养5d，用打孔器取2个Sa-21菌株菌饼(直径6mm)接种于100mL(锥形瓶规格为250mL)高氏一号液体培养基中，初始pH7.4，温度28℃，转速160r.min-1条件下培养72h，得种子液；按照10％接种量将种子液接种于高氏一号液体培养基中(锥形瓶规格为250mL，装100mL高氏一号液体培养基)，同条件下培养7d即得发酵液。将发酵液置于50mL离心管中12000r/min离心10min，上清液用0.22 μm有机滤膜过滤，除去残余孢子，得到发酵滤液。发酵滤液按照清水：发酵滤液＝9:1的体积比例进行稀释，得发酵滤液稀释液。
3.4盆栽防效初步研究
3.4.1 As病菌接种和处理
每株番茄幼苗选取4片健康叶片在其背部用接种针划一道伤口，将菌饼于伤口处反复涂抹5次后，用塑料薄膜将菌饼(3mm)固定于伤口处，每片叶片接1个菌饼，保湿24h。将盆栽放置于26℃光照培养箱，7d后将塑料薄膜同菌饼取下，统计发病情况。
试验设置对照组(CK)和处理组(T)，每处理10个生物学重复：
空白对照(CK1)；只接种3mm琼脂块；
接菌对照(CK2)：只接As菌饼(3mm)；
处理1(T1)：在番茄叶片上先喷洒发酵滤液稀释液至液体从叶片滴落，喷洒6次，每次间隔半小时，6h后接种As菌饼番茄叶片伤口上；
处理2(T2)：先接种As菌饼到番茄叶片伤口上，6h后在番茄叶片上喷洒发酵滤液稀释液至液体从叶片滴落，喷洒6次，每次间隔半小时；
处理3(T3)：将发酵滤液浇到土壤至湿润，并在番茄叶片上先喷洒发酵滤液稀释液至液体从叶片滴落，喷洒3次，每次间隔一个小时，6h后接种As菌饼至番茄叶片伤口上。
待病情发展趋于稳定后，记录并统计发病情况。以叶片为单位调查病情，番茄早疫病病情分0～4级标准如下：
0级：无病斑；
1级：病斑面积占羽状叶面积的1/4以下；
2级：病斑面积占羽状叶面积的1/4～1/2；
3级：病斑面积占羽状叶面积的1/2～3/4，近一半小叶枯死；
4级：病斑面积占羽状叶面积的3/4以上，一半以上或全面小叶枯死。
病情指数(％)＝∑(病级×各病级株数)/(4×总株数)×100
相对防效(％)＝(CK2病情严重度-处理病情严重度)/CK2病情严重度×100
4实验结果
实验结果如表5所示：Sa-21菌株发酵滤液处理可显著降低番茄早疫病的病情指数。处理 3对番茄早疫病具有较好的防治效果，对Micro Tom(小番茄)、金珠、亚非1号这3个番茄品种相对防效均达到了90％以上，即将发酵滤液稀释液同时浇到土壤中和喷洒到叶片上，防效最佳。
表5、放线菌Sa-21菌株发酵滤液对番茄早疫病的相对防效
Figure BDA0002819409370000111
注：不同小写字母表示在P<0.05水平存在显著差异
最后，还需要注意的是，以上列举的仅是本发明的若干个具体实施例。显然，本发明不限于以上实施例，还可以有许多变形。本领域的普通技术人员能从本发明公开的内容直接导出或联想到的所有变形，均应认为是本发明的保护范围。
序列表
<110> 浙江师范大学
<120> 抗氧化链霉菌及其在植物病害防冶中的应用
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1406
<212> DNA
<213> 2 Ambystoma laterale x Ambystoma jeffersonianum
<400> 1
aaacatgcag tcgaacgatg aaccggtttc ggccggggat tagtggcgaa cgggtgagta 60
acacgtgggc aatctgccct gcactctggg acaagccctg gaaacggggt ctaataccgg 120
atatgactgc cgaccgcatg gtctggtggt ggaaagctcc ggcggtgcag gatgagcccg 180
cggcctatca gcttgttggt ggggtgatgg cctaccaagg cgacgacggg tagccggcct 240
gagagggcga ccggccacac tgggactgag acacggccca gactcctacg ggaggcagca 300
gtggggaata ttgcacaatg ggcgcaagcc tgatgcagcg acgccgcgtg agggatgacg 360
gccttcgggt tgtaaacctc tttcagcagg gaagaagcgc gagtgacggt acctgcagaa 420
gaagcgccgg ctaactacgt gccagcagcc gcggtaatac gtagggcgca agcgttgtcc 480
ggaattattg ggcgtaaaga gctcgtaggc ggcttgtcgc gtcggatgtg aaagcccggg 540
gcttaactcc gggtctgcat tcgatacggg caggctagag ttcggtaggg gagatcggaa 600
ttcctggtgt agcggtgaaa tgcgcagata tcaggaggaa caccggtggc gaaggcggat 660
ctctgggccg atactgacgc tgaggagcga aagcgtgggg agcgaacagg attagatacc 720
ctggtagtcc acgccgtaaa cgttgggaac taggtgtggg cgacattcca cgttgtccgt 780
gccgcagcta acgcattaag ttccccgcct ggggagtacg gccgcaaggc taaaactcaa 840
aggaattgac gggggcccgc acaagcggcg gagcatgtgg cttaattcga cgcaacgcga 900
agaaccttac caaggcttga catacaccgg aaaactctgg agacagggtc ccccttgtgg 960
tcggtgtaca ggtggtgcat ggctgtcgtc agctcgtgtc gtgagatgtt gggttaagtc 1020
ccgcaacgag cgcaaccctt gttctgtgtt gccagcatgc ctttcggggt gatggggact 1080
cacaggagac tgccggggtc aactcggagg aaggtgggga cgacgtcaag tcatcatgcc 1140
ccttatgtct tgggctgcac acgtgctaca atggccggta caatgagctg cgaagccgtg 1200
aggtggagcg aatctcaaaa agccggtctc agttcggatt ggggtctgca actcgacccc 1260
atgaagtcgg agtcgctagt aatcgcagat cagcattgct gcggtgaata cgttcccggg 1320
ccttgtacac accgcccgtc acgtcacgaa agtcggtaac acccgaagcc ggttggccca 1380
acccttgtgg agggagccgt cgaaag 1406

Claims (3)

1.抗氧化链霉菌菌株Sa-21，其特征在于：为抗氧化链霉菌（Streptomyces antioxidans）Sa-21，保藏编号为：CCTCC NO：M 2020423。
2.如权利要求1所述的抗 氧化链霉菌菌株Sa-21的用途，其特征在于：抑制番茄早疫病菌（A. solani）。
3.根据权利要求2所述的抗 氧化链霉菌菌株Sa-21的用途，其特征在于：对植物病原真菌、植物病原细菌均具有抑制作用；
所述植物病原真菌为：杨树枯萎病菌（Fusarium solani）、苦瓜枯萎病菌（Fusarium oxysporum f.sp. momordicae）、苹果轮纹病菌（Botryosphaeria berengeriana f. sppiricola）和西瓜炭疽病菌（Colletotrichum lagenerium）；
所述植物病原细菌为：番茄细菌性叶斑病菌（Pseudomonas syringae pv. tomato）、大豆细菌性斑疹病菌（Xanthomonas campestris pv. glycines）、大豆细菌性斑点菌（Pseudomonas syringae pv. glycinea）、水稻细菌性条斑病菌（Xanthomonas oryzae pv. oryzicola）、野油菜黄单胞菌（Xanthomonas campestris pv.campestris）、烟草青枯病菌（Ralstortia solonacearum）、烟草野火病菌（Pseudomonas syringae pv. tabaci）和水稻白叶枯病菌（Xanthomonas oryzae pv. oryzae）。
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