CN112521458B

CN112521458B - 用于检测S.suis 2感染的合成肽Sao355~372及其应用

Info

Publication number: CN112521458B
Application number: CN202011329160.2A
Authority: CN
Inventors: 王晶; 潘秀珍; 高基民; 张会芳; 邹萍; 李娜
Original assignee: Wuxi Maternal and Child Health Hospital
Current assignee: Wuxi Maternal and Child Health Hospital
Priority date: 2019-12-27
Filing date: 2019-12-27
Publication date: 2022-06-21
Anticipated expiration: 2039-12-27
Also published as: CN112521458A; CN111378015A; CN111378015B

Abstract

本发明公开了用于检测S.suis 2感染的合成肽Sao_355～372及其应用。一种用于检测S.suis 2感染的合成肽，氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。所述的合成肽作为包被抗原在制备S.suis 2感染快速辅助诊断试剂盒中应用。本发明提供了一种自行设计的合成肽，通过实验证实，该合成肽能够捕捉到S.suis 2感染后人体外周血中的特异性抗体，可以作为包被抗原应用在S.suis 2感染快速辅助诊断试剂盒中。本发明为S.suis 2的快速辅助诊断提供了新思路，可以降低由于S.suis 2感染诊断不及时造成的死亡，具备潜在的良好临床应用价值。

Description

用于检测S.suis 2感染的合成肽Sao355～372及其应用

分案说明

本申请是申请号为2019113709019,发明名称为”用于检测S.suis 2感染的合成肽及其应用”的分案申请.

技术领域

本发明属于医学检测领域，涉及用于检测S.suis 2感染的合成肽Sao_355～372及其应用。

背景技术

2型猪链球菌(Streptococcus suis serotype 2，S.suis 2)属球菌科、链球菌属(Streptococci)，革兰阳性兼性厌氧菌，是一种重要的人兽共患传染病病原菌。S.suis 2不仅能够感染猪导致急性败血症、脑膜炎、心内膜炎和急性死亡，而且可以通过呼吸道和伤口等传播途径，导致人的感染发病和死亡。本病呈全球性分布，对相关从业人员的健康构成严重威胁，已确定为重要的新发传染病病原体。1998年和2005年分别在我国的江苏省和四川省暴发了大规模S.suis 2感染疫情，患者中出现高比例的、国内外罕见的链球菌中毒性休克综合征(Streptococcal toxic shock syndrome,STSS)。患者病程极为凶险，可出现心脏、肝功能损坏、血细胞破坏及造血系统抑制、脑膜炎、听神经损坏等多器官功能受损表现，多在发病1～3日内死亡^[1-2]。作为一种新现人兽共患传染病病原，S.suis 2流行菌株表现出的高致病性和高病死率特征已经成为全世界关注的公共卫生的焦点^[2-4]，而尽早行相应抗感染治疗可大大降低患者死亡率。迄今为止脑脊液和外周血培养仍然是判断人感染S.suis2的金标准，但血培养易受抗凝剂、抗菌药物、标本采集时间及培养方法等多因素影响，阳性率往往较低，所以建立可靠的检测方法对S.suis 2感染的对症治疗尤为重要。因此，研究S.suis 2的蛋白结构，筛选特异性肽段并建立快速诊断S.suis 2感染的方法，对感染早期的应急处置具有重要临床意义。

Sao蛋白(Surface antigen one)，是Li等在大规模搜寻与S.suis 2强致病性相关的功能蛋白的研究过程中发现蛋白^[5]。它通过C端LPVTG基序锚定在细胞壁表面，具有高度的保守性^[5]。免疫电镜实验证实Sao是一种广泛分布于菌体表面的蛋白，并且Sao蛋白特异性抗体可以和S.suis 2的多种分离株发生特异性反应^[5]。表明Sao蛋白是在S.suis 2感染过程中表达的有效抗原。可见Sao蛋白具有成为S.suis 2感染筛选分子的巨大潜能。实验室前期工作表明，重组Sao蛋白纯化难度大，通过对Sao蛋白一级结构分析，Sao蛋白不稳定系数为42.24，高于阈值40，是不稳定蛋白。在实验过程中遇到了类似易降解问题：蛋白纯化过程中高浓度咪唑洗脱时仍出现蛋白杂带，系重组Sao蛋白降解所致(图1)。因此重组Sao蛋白保存时需加入4种蛋白酶抑制剂PMSF、Pepstantin、Leupeptin和Aprotinin，于4℃仅可稳定一周，-20℃仅可稳定6个月。这些因素阻碍了重组Sao蛋白作为检测标志物的进一步开发。

目前已报道的关于Sao蛋白的免疫学信息分析较少，基于Sao蛋白免疫优势表位的检测标志物研究未见报道。若能筛选到S.suis 2感染特异表达的优势表位，并研制相应的辅助诊断试剂盒，就能实现S.suis 2感染的快速辅助诊断，这将大幅度降低由于S.suis 2感染诊断不及时造成的死亡。

发明内容

本发明的首要目的是针对上述技术问题，提出一种与S.suis 2感染快速辅助诊断相关的基于Sao蛋白免疫优势表位的检测标志物。

本发明的第二个目的是提供上述Sao蛋白免疫优势表位在制备S.suis 2感染快速辅助诊断试剂盒中的应用。

本发明的第三个目的是提供用于S.suis 2感染快速辅助诊断试剂盒。

本发明的目的是通过下列技术方案实现的：

利用现有的网络资源和生物信息学工具，结合S.suis 2感染与Sao蛋白在菌体表面广泛分布的特点，尤其是Sao蛋白特异性抗体可以和S.suis 2的多种分离株发生特异性反应^[5]这一重要理论，初步设计出10个肽段并合成。分别以10个合成肽为包被抗原，以Sao多抗血清(Anti-Sao)为一抗，通过间接ELISA法筛选具有免疫优势的合成肽。我们发现，其中1个合成肽Sao_355～384能够与Anti-Sao发生强烈反应，说明Sao_355～384在抗S.suis 2感染中诱导了免疫优势的抗体应答。目前没有关于此表位的文献报道。课题组进而以Sao_355～384为检测抗原，以不同来源血清为一抗，分别是S.suis 2感染后人血清为实验组、其他菌(肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌、表皮葡萄球菌等)感染后血清为对照组、正常人阴性血清为阴性对照组，完成间接ELISA检测。数据显示，合成肽Sao_355～384仅与S.suis 2感染后人血清发生强烈反应，而与其他菌感染后血清、正常人血清不发生反应。结果证实，Sao_355～384能够捕捉到S.suis 2感染后人体外周血中的特异性抗体，可以作为S.suis 2感染的检测标志物。

在全抗原中，表位是发挥免疫作用的最小单位。为了获得Sao_355～384中真正发挥免疫作用的核心表位，本课题将合成肽Sao_355～384与载体蛋白偶联，获得了相应抗血清Anti-Sao_355～384。进一步，用此抗血清与覆盖Sao_355～384全长的截断肽进行结合力检测，从而确定Sao_355～384的核心序列。我们发现，表位Sao_355～372与Anti-Sao_355～384的结合能力最强。目前核心序列Sao_355～372也没有相关文献报道。同样，我们以Sao_355～372为检测抗原，以不同来源血清为一抗(血清来源同上)完成间接ELISA检测。数据显示，合成肽Sao_355～372仅与S.suis 2感染后人血清发生强烈反应，而与其他菌感染后血清、正常人血清不发生反应。表明Sao_355～372确实是Sao_355～384的核心表位，与Sao_355～384有相似强度的结合能力，能够捕捉到S.suis 2感染后人体外周血中的特异性抗体，可能成为更加理想的检测标志物。

因此，本课题不仅发现了Sao蛋白的新表位Sao_355～384，而且揭示了其核心表位Sao_355～372，并进一步评估了两者作为S.suis 2感染检测标志物的能力。

一种与S.suis 2感染有关的合成肽Sao_355～384，该合成肽的氨基酸序列具体如下：

SEKQMPSVVNENAVTPEKQMTNKENDNIET(SEQ ID NO.1)。

该合成肽为包含30个氨基酸的肽段，能够与Anti-Sao、S.suis 2感染后人血清发生强烈反应。

一种与S.suis 2感染有关的合成肽Sao_355～372。该合成肽的氨基酸序列具体如下：

SEKQMPSVVNENAVTPEK(SEQ ID NO.2)。

该合成肽为包含18个氨基酸的肽段，能够与Anti-Sao、S.suis 2感染后人血清发生强烈反应。

合成肽Sao_355～384、核心序列Sao_355～372作为包被抗原在制备S.suis 2感染快速辅助诊断试剂盒中应用。

一种S.suis 2感染快速辅助诊断试剂盒，该试剂盒用于检测人感染S.suis 2后血清中的特异性抗体。所述快速辅助诊断试剂盒，该试剂盒含有检测标志物Sao_355～384。

一种S.suis 2感染快速辅助诊断试剂盒，该试剂盒用于检测人感染S.suis 2后血清中的特异性抗体。所述快速辅助诊断试剂盒，该试剂盒含有检测标志物Sao_355～372。

所述快速辅助诊断试剂盒还包括ELISA检测常用的试剂。如包被液、牛血清白蛋白V、PBS缓冲液、HRP-羊抗鼠多克隆血清、终止液、TMB显色液等，还可以含有阴、阳性对照品。

有益效果：

本发明提供了一种自行设计的合成肽，高效液相色谱法分析两种合成肽纯度可分别高达94.92％、92.27％(图2)。合成肽为白色粉末状冻干粉，性质稳定，-20℃条件下可保存数年。通过实验证实，该合成肽能够捕捉到S.suis 2感染后人体外周血中的特异性抗体，可以作为包被抗原应用在S.suis 2感染快速辅助诊断试剂盒中。本发明为S.suis 2的快速辅助诊断提供了新思路，可以降低由于S.suis 2感染诊断不及时造成的死亡，具备潜在的良好临床应用价值。

附图说明

图1Sao蛋白Ni-IDA亲和层析纯化检测

1：诱导的上清；2：流出液；3：30mM咪唑漂洗液；4：60mM咪唑漂洗液；5:90mM咪唑漂洗液；6～9：250mM咪唑洗脱液；箭头：重组Sao蛋白降解所致杂蛋白带。

图2间接ELISA法筛选Sao的免疫优势B细胞表位肽

图3Sao_355～384与不同来源人血清的结合情况

1～23为正常人阴性血清；24为表皮葡萄球菌感染后人血清；25为屎肠球菌感染后人血清；26为肺炎克雷伯菌感染后人血清；27为大肠埃希菌感染后人血清；28～30为猪链球菌感染后不同人的血清。

图4 Anti-Sao_355～384血清效价

图5间接ELISA法筛选Sao_355～384的核心表位

图6 Sao_355～372与不同来源人血清的结合情况

具体实施方式

实施例1：05ZYH33来源的Sao序列信息及线性B细胞表位预测

1.1明确Sao蛋白序列：Sao蛋白全长580个氨基酸，其中，1-29位氨基酸为信号肽，具体序列如SEQ ID NO.3所示。

1.2 Sao蛋白免疫信息学参数预测：利用IEDB网站中的Antibody EpitopePrediction下的Parker Hydrophilicity Prediction、Karplus&Schulz FlexibilityPrediction、Emini Surface Accessibility Prediction、Chou&Fasman Beta-TurnPrediction工具，分别对Sao蛋白的亲水性、柔性、表面可及性和β折叠进行预测，设定阈值，将4种免疫信息学参数预测结果汇总分析。

1.3 Sao蛋白B细胞表位预测：分别利用三种线性B细胞表位预测工具进行预测(Bepipred、COBEpro和ABCpred)，将三种方法预测得到的B细胞表位汇总后比较，取重叠的B细胞表位为候选B细胞表位，结合免疫信息学参数预测结果，筛选Sao蛋白B细胞表位肽。

1.4实验结果

将上述表位预测工具的预测结果作汇总后比较，结合免疫信息学参数预测结果，最终筛选到10个B细胞表位肽，交由吉尔生化(上海)有限公司协助合成。其基本序列见表1。

表1：Sao蛋白10个候选B细胞表位肽氨基酸序列信息

实施例2：间接ELISA法筛选Sao蛋白免疫优势线性B细胞表位肽

2.1 Anti-Sao的制备

取SPF级6～8周龄雌性BALB/c小鼠。首次免疫：将纯化的rSao蛋白(制备方法见王晶,李敏,刘文静,et al.Sao蛋白多克隆抗体制备鉴定及促全血杀菌作用[J].中国公共卫生,2014,30(3):364-367)与弗氏完全佐剂充分乳化，腹部皮下多点注射，免疫剂量为100μg/只；第2次免疫：首次免疫2周后，将rSao蛋白与弗氏不完全佐剂完全乳化，经皮下多点注射，免疫剂量为100μg/只；第3次免疫于第2次免疫后2周进行，剂量和方法同第2次免疫；加强免疫：第3次免疫后2周，用未乳化的rSao蛋白腹腔内注射，免疫剂量为100μg/只。加强免疫7d后自小鼠眼眶后静脉丛取血，分离血清即为Anti-Sao，采用间接ELISA检测Anti-Sao效价。

2.2根据不同B细胞表位肽与Anti-Sao的应答水平，确定优势应答的B细胞线性表位肽。间接ELISA法步骤如下：

2.2.1抗原包被：为确定Sao优势应答的B细胞线性表位肽，ELISA板中分别包被10种候选B细胞线性表位肽、阴性对照蛋白BSA及阳性对照rSao蛋白，之后用Anti-Sao进行检测。用包被液(50mM碳酸钠/碳酸氢钠，pH 9.6)调整抗原包被浓度，每种抗原做2个复孔。将纯化后rSao蛋白、B细胞表位肽浓度调整至1μg/ml，100μl/孔4℃过夜包被酶标板；

2.2.2封闭：含吐温-20的磷酸盐缓冲液(Phosphate Buffered Saline Tween-20,PBST)洗板3次，甩干后每孔加入200μl封闭液(3％BSA溶液),37℃封闭2h；

2.2.3加入一抗：PBST洗板3次，甩干，Anti-Sao按照1：5000稀释，100μl/孔加入酶标板，37℃孵育1h；

2.2.4加入二抗：PBST洗板3次，甩干，HRP标记的山羊抗鼠IgG按照1：4000稀释，100μl/孔加入酶标板，37℃孵育1h；

2.2.5显色：PBST洗板3次，甩干，TMB显色液100μl/孔加入酶标板，避光显色10min；

2.2.6终止反应：酶标板内加入终止液100μl/孔，终止反应；

2.2.7检测：酶标仪检测450nm处吸光度(A)值，待测样本/阴性对照(P/N)≥2.1为阳性。

2.3实验结果

在OD_450nm处，表位肽Sao_355～384的吸光度值显著高于阴性对照蛋白BSA(P<0.0001)，其吸光度值与其他表位肽有显著性差异(P<0.0001)，可见Sao_355～384为Sao的免疫优势表位肽。结果如图2所示。

实施例3：Sao_355～384检测S.suis 2感染

3.1以Sao_355～384为检测抗原，以不同来源血清为一抗，分别是S.suis 2感染后人血清为实验组、其他菌(肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌、表皮葡萄球菌等)感染后血清为对照组、正常人阴性血清为阴性对照组，完成间接ELISA检测。具体步骤如下：

3.1.1抗原包被：ELISA板中包被合成肽Sao_355～384。用包被液(50mM碳酸钠/碳酸氢钠，pH 9.6)调整抗原包被浓度，每种抗原做2个复孔。包被浓度与条件同2.2.1；

3.1.2封闭：封闭液与封闭时间同2.2.2；

3.1.3加入一抗：一抗根据来源不同分为三组。第一组为实验组，为S.suis 2感染后人血清共3份；第二组为其他菌对照组，分别为肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌、表皮葡萄球菌、屎肠球菌感染后人血清共4份；第三组为阴性对照组，是正常人血清共23份，PBST洗板3次，甩干，一抗血清按照1：200稀释，100μl/孔加入酶标板，37℃孵育1h；

3.1.4加入二抗：PBST洗板3次，甩干，HRP标记的山羊抗人IgG按照1：4000稀释，100μl/孔加入酶标板，37℃孵育1h；

3.1.5显色及终止反应同2.2.5、2.2.6；

3.1.6检测：酶标仪检测450nm处吸光度(A)值，待测样本/阴性对照(P/N)≥2.1为阳性。

3.2实验结果

合成肽Sao_355～384仅与S.suis 2感染后人血清发生强烈反应，而与其他菌感染后血清、正常人血清不发生反应，结果如图3所示。

实施例4：免疫优势B细胞表位肽Sao_355～384动物免疫及其抗血清收集

4.1将鉴定出的合成肽Sao_355～384与KLH蛋白偶联，进一步在弗氏佐剂的辅助下，免疫6周龄雌性BALB/c小鼠。交由吉尔生化(上海)有限公司完成。免疫程序如下。

4.1.1首次免疫(第0天)：Sao_355～384-KLH偶联物与等体积弗氏完全佐剂乳化，100μg/次/只，200μl/次/只，腹部皮下多点注射(3-5个点，约50μl/点)；

4.1.2第二次免疫(第14天)：Sao_355～384-KLH偶联物与等体积弗氏不完全佐剂乳化，剂量与注射途径同2.1所示；

4.1.3第三次免疫(第28天)：Sao_355～384-KLH偶联物与等体积弗氏不完全佐剂乳化，50μg/次/只，200μl/次/只，腹部皮下多点注射；

4.1.4收集Anti-Sao_355～384血清(第35天)：采用颈椎脱臼法对BALB/c小鼠行安乐死操作，心脏采血法取血，离心后分装。

4.2实验结果

结果如图4所示。

实施例5：Sao_355～384核心表位的筛选

5.1为明确Sao_355～384的核心序列，针对其氨基酸序列设计覆盖Sao_355～384全长的相应截断肽。该截断肽的合成由吉尔生化(上海)有限公司完成。

5.2间接ELISA法筛选Sao_355～384核心表位，具体步骤如下：

5.2.1抗原包被：ELISA板中分别包被5种截断肽、阴性对照蛋白BSA及阳性对照Sao_355～384。用包被液(50mM碳酸钠/碳酸氢钠，pH 9.6)调整抗原包被浓度，每种抗原做2个复孔。包被浓度与条件同2.2.1；

5.2.2封闭：封闭液与封闭时间同2.2.2；

5.2.3加入一抗：PBST洗板3次，甩干，Anti-Sao_355～384血清按照1：4000稀释，100μl/孔加入酶标板，37℃孵育1h；

5.2.4加入二抗：PBST洗板3次，甩干，HRP标记的山羊抗鼠IgG按照1：4000稀释，100μl/孔加入酶标板，37℃孵育1h；

5.2.5显色及终止反应同2.2.5、2.2.6；

5.2.6检测：酶标仪检测450nm处吸光度(A)值，待测样本/阴性对照(P/N)≥2.1为阳性。

5.2实验结果

分析筛选到5个截断肽，其编号及氨基酸序列见表2。各截断肽与Anti-Sao_355～384的反应情况如图5所示。

表2：Sao_355～384对应截断肽氨基酸序列信息

实施例6：Sao_355～372检测S.suis 2感染

6.1以Sao_355～372为检测抗原，以不同来源血清为一抗，分别是S.suis 2感染后人血清为实验组、其他菌(肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌、表皮葡萄球菌等)感染后血清为对照组、正常人阴性血清为阴性对照组，完成间接ELISA检测。具体步骤同实施例3所述。

6.2实验结果

合成肽Sao_355～372仅与S.suis 2感染后人血清发生强烈反应，而与其他菌感染后血清、正常人血清不发生反应。结果如图6所示。

以上已对本发明创造的较佳实施例进行了具体说明，但本发明创造并不限于所述实施例，熟悉本领域的技术人员在不违背本发明创造精神的前提下还可做出种种的等同的变型或替换，这些等同的变型或替换均包含在本申请权利要求所限定的范围内。

序列表

<110> 无锡市妇幼保健院

<120> 用于检测S.suis 2感染的合成肽Sao355~372及其应用

<160> 3

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 30

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 1

Ser Glu Lys Gln Met Pro Ser Val Val Asn Glu Asn Ala Val Thr Pro

1 5 10 15

Glu Lys Gln Met Thr Asn Lys Glu Asn Asp Asn Ile Glu Thr

20 25 30

<210> 2

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 2

Ser Glu Lys Gln Met Pro Ser Val Val Asn Glu Asn Ala Val Thr Pro

1 5 10 15

Glu Lys

<210> 3

<211> 580

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

Met Asn Thr Lys Lys Trp Arg Thr Ser Leu Leu Ile Pro Gly Ile Val

1 5 10 15

Leu Phe Gly Thr Val Ala Leu Val Asn Asn Val Ser Ala Gln Glu Val

20 25 30

Lys Asn Thr Ile Ile Ser Ala Lys Gln Pro Asp Gly Gly Gln Ala Thr

35 40 45

Ser Lys Ala Val Asn Val Lys Ile Pro Ala Val Val Arg Leu Phe Gly

50 55 60

Arg Glu Leu Leu Glu Asn Glu Phe Lys Phe Glu Leu Arg Glu Ala Asn

65 70 75 80

Gly Glu Glu Leu Pro Val Leu Asp Thr Ala Gln Asn Thr Lys Glu Gly

85 90 95

Gln Val Arg Phe Lys Asn Leu Ser Phe Asp Lys Pro Gly Lys Tyr Trp

100 105 110

Tyr Thr Ile Ser Glu Val Lys Asp Glu Leu Gly Gly Ile Glu Tyr Asp

115 120 125

Ser Lys Tyr Ile Val Ala Lys Ile Thr Val Glu Asp Arg Asn Gly Gln

130 135 140

Leu Gln Ala Met Ile Glu Phe Ile Asp Asn Asp Asn Val Phe Asn Asn

145 150 155 160

Phe Tyr Thr Pro Ala Pro Ala Ala Ala Ser Leu Ser Ile Lys Lys Val

165 170 175

Leu Glu Gly Arg Thr Leu Asn Thr Gly Glu Phe Glu Phe Val Leu Lys

180 185 190

Asn Glu Lys Gly Asp Glu Ile Glu Lys Val Ser Asn Gln Ala Asp Gly

195 200 205

Ser Val Asn Phe Ser Ala Leu Thr Phe Thr Lys Glu Gly Thr Tyr Thr

210 215 220

Tyr Thr Val Ser Glu Val Asp Gly Gly Leu Gly Asp Ile Ile Tyr Asp

225 230 235 240

Lys Ser Asp Ile Lys Ala Thr Val Thr Val Lys Asp Asn Asn His Gly

245 250 255

Gln Leu Val Ser Thr Val Thr Tyr Glu Asn Ser Asp Gln Ile Phe Glu

260 265 270

Asn Ile Leu Asn Pro Gly Lys Leu Ile Ala Pro Thr Thr Asp Ser Val

275 280 285

Ile Thr Asp Asn Glu Val Ser Lys Glu Ala Met Thr Gly Lys Glu Lys

290 295 300

Gly Asn Ile Glu Pro Leu Lys Glu Gln Ile Ala Asn Glu Glu Lys Asp

305 310 315 320

Asn Ile Glu Ala Ser Glu Lys Gln Met Pro Ser Ile Val Asn Asp Met

325 330 335

Val Val Thr Pro Glu Lys Gln Met Thr Asn Lys Glu Asn Asp Lys Val

340 345 350

Val Ile Ser Glu Lys Gln Met Pro Ser Val Val Asn Glu Asn Ala Val

355 360 365

Thr Pro Glu Lys Gln Met Thr Asn Lys Glu Asn Asp Asn Ile Glu Thr

370 375 380

Ser Glu Lys Gln Met Pro Ser Val Val Asn Glu Asn Ala Val Thr Pro

385 390 395 400

Glu Lys Gln Met Thr Asn Lys Glu Lys Asp Asn Ile Glu Thr Ser Glu

405 410 415

Lys Gln Met Pro Ser Ile Val Asn Asp Met Val Val Thr Pro Gln Glu

420 425 430

Gln Met Ala Asn Lys Glu Asn Asp Lys Val Val Ile Ser Glu Lys Gln

435 440 445

Met Pro Ser Ile Val Asn Asp Met Val Val Thr Pro Gln Glu Gln Met

450 455 460

Ala Asn Lys Glu Asn Asp Lys Val Glu Thr Ser Glu Lys Gln Met Pro

465 470 475 480

Val Asn Glu Lys Asp Asn Ala Val Thr Pro Glu Lys Gln Met Ala Asn

485 490 495

Lys Glu Lys Glu Asn Ile Glu Thr Ser Lys Lys Gln Ile Pro Val Asn

500 505 510

Glu Asn Asn Gln Asn Gly Thr Val Glu Glu Asn Ser Asn Thr Lys Pro

515 520 525

Thr Thr Glu Lys Thr Asp Lys Gln Glu Thr Ser Thr Phe Lys Thr Glu

530 535 540

Thr Ala Lys Gln Ile Leu Pro Val Thr Gly Glu Lys Gly Ser Leu Trp

545 550 555 560

Leu Leu Thr Ser Gly Ile Ile Gly Leu Ala Ile Ala Leu Phe Thr Arg

565 570 575

Lys Arg Lys Leu

580

Claims

1.一种用于检测Streptococcus suis serotype 2感染的合成肽Sao_355~372，其特征在于该合成肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

2.权利要求1所述的合成肽Sao_355~372在制备Streptococcus suis serotype 2感染快速辅助诊断试剂盒中应用。

3.一种Streptococcus suis serotype 2感染快速辅助诊断试剂盒，其特征在于该试剂盒含有权利要求1所述的合成肽Sao_355~372。

4.根据权利要求3所述的Streptococcus suis serotype 2感染快速辅助诊断试剂盒，其特征在于所述快速辅助诊断试剂盒还包括ELISA检测常用的试剂：包被液、牛血清白蛋白V、PBS缓冲液、HRP-羊抗鼠多克隆血清、终止液、TMB显色液。

5.根据权利要求4所述的Streptococcus suis serotype 2感染快速辅助诊断试剂盒，其特征在于所述快速辅助诊断试剂盒还包括阴、阳性对照品。