CN112500440A - 一种从甜叶菊中提取莱鲍迪苷a的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种从甜叶菊中提取莱鲍迪苷A的方法，通过将甜叶菊干叶浸提后得到浸提液；再将所述浸提液上样至装填有分子印迹复合材料的分离柱，洗脱剂洗脱后，得到莱鲍迪苷A的纯品；其中所述分子印迹复合材料包括石墨烯的载体和分子印迹聚合物。本发明所述方法不仅工艺简单，操作性强，而且产品纯度和收率都很高。
Description
技术领域
本发明涉及分离提纯领域，尤其涉及一种从甜叶菊中提取莱鲍迪苷A的方法。
背景技术
甜叶菊(Stevia rebaudiana Bertoni)又称甜草、甜菊等，原产于巴拉圭、巴西等国家，其叶含有甜菊糖苷，甜菊糖苷是一种高甜度、低热量的新型天然甜味剂，主要是从菊科植物甜叶菊的叶子中提取的几种甜叶菊糖苷的混合物，主要成分是Rebaudioside A(RA)—莱鲍迪苷A。由于来自甜叶菊的甜菊糖苷类化合物因其甜度高、热量低、无毒性、耐高温、耐酸碱和水溶性好等优点，因此受到了科学界、产业界等多个领域的广泛重视，其中含量相对丰富的莱鲍迪苷A(甜菊糖苷RA)、甜菊糖等已广泛应用于饮料、食品、调味剂、酒类、乳制品等食品加工领域。
随着甜菊糖苷的需求不断扩大，提高甜菊糖苷的产量越来越显得重要，特别是能提高甜菊糖苷RA的产量。统工艺中李玉秀等人报道了，用不同的醇溶液(甲醇、乙醇、乙醇-水)提取甜菊糖苷的方法。但传统的加热和回流方法能耗大，后续采用丙酮析晶，挥发性强，并且氧化铝柱层析分离纯化分离效果低，最终纯度仅为90％。
发明内容
基于背景技术存在的技术问题，本发明提出了一种从甜叶菊中提取莱鲍迪苷A的方法，该方法不仅工艺简单，操作性强，而且产品纯度和收率都很高。
本发明提出的一种从甜叶菊中提取莱鲍迪苷A的方法，包括如下步骤：
将甜叶菊干叶浸提后得到浸提液；
将所述浸提液上样至装填有分子印迹复合材料的分离柱，洗脱剂洗脱后，得到莱鲍迪苷A的纯品；
其中，所述分子印迹复合材料包括石墨烯的载体和分子印迹聚合物；
所述分子印迹聚合物以莱鲍迪苷A为模板分子，以丙烯酰胺为功能单体、以乙二醇二甲基丙烯酸酯为交联剂，以乙腈为致孔剂。
优选地，所述分子印迹复合材料是通过下述方法制备得到：
(1)将氧化石墨烯与3-(异丁烯酰氧)丙基三甲氧基硅烷进行偶联反应，得到乙烯基功能化的氧化石墨烯；
(2)将乙烯基功能化的氧化石墨烯与莱鲍迪苷A、丙烯酰胺、乙二醇二甲基丙烯酸酯、偶氮二异丁腈和乙腈进行聚合，得到未除去模板的分子印迹聚合物；
(3)将未除去模板的分子印迹聚合物用洗脱液进行洗脱，脱出莱鲍迪苷A，即得到所述分子印迹复合材料。
优选地，步骤(1)具体包括：将氧化石墨烯分散于乙醇中，加入3-(异丁烯酰氧)丙基三甲氧基硅烷，升温至70-90℃后搅拌反应3-5h，蒸干溶剂后，洗涤，干燥，得到乙烯基功能化的氧化石墨烯。
优选地，氧化石墨烯与3-(异丁烯酰氧)丙基三甲氧基硅烷质量体积比为1g:0.1-1mL。
优选地，步骤(2)具体包括：将乙烯基功能化的氧化石墨烯分散在乙腈中，加入莱鲍迪苷A、丙烯酰胺、乙二醇二甲基丙烯酸酯和偶氮二异丁腈混匀，充氮除氧后密封，加热至40-70℃后反应18-24h，得到未除去模板的分子印迹聚合物。
优选地，莱鲍迪苷A与乙烯基功能化的氧化石墨烯的质量比为1:2-5；莱鲍迪苷A、丙烯酰胺、乙二醇二甲基丙烯酸酯的质量比为1:2-8:20-30；偶氮二异丁腈的用量是丙烯酰胺质量的1-20％；莱鲍迪苷A、乙腈的质量体积比为1g:200-400mL。
优选地，步骤(3)具体包括：将未除去模板的分子印迹聚合物研磨成粉，用甲醇和乙酸的混合液进行洗脱，除去模板分子莱鲍迪苷A，得到所述分子印迹复合材料。
优选地，所述“将甜叶菊干叶浸提后得到浸提液”具体包括：将甜叶菊干叶粉碎后，按照料液比1:4-6加入去离子水中，室温下以300-400W的功率超声辅助提取10-20min，过滤后，得到浸提液。
优选地，所述浸提液中莱鲍迪苷A的浓度为0.5-5mg/mL。
优选地，所述洗脱剂为体积分数40-60％的乙醇水溶液。
本发明中，先通过对甜叶菊进行浸提，除去较低极性的杂质，实现了对甜菊糖苷的初步纯化；此后利用对莱鲍迪苷A具有较高选择性和分离效率的分子印迹复合材料进行色谱筛选，实现了对莱鲍迪苷A高效的分离纯化。
本发明中，所述分子印迹复合材料之所以对莱鲍迪苷A具有较高选择性和分离效率，是因为其是通过在氧化石墨烯表面接枝有乙烯基团，该接枝有乙烯基团的氧化石墨烯可与功能单体丙烯酰胺以及模板分子在一定条件下进行聚合得到。一方面，由于氧化石墨烯参与聚合反应后可以有效控制分子印迹聚合物的形貌呈现，提高其比表面积和吸附效率，另一方面，功能单体丙烯酰胺与模板分子之间具有亲和作用，因此大大改善了该分子印迹复合材料对模板分子(莱鲍迪苷A)的选择性，之后再进行洗脱获取分子印迹复合材料后，可以专一性识别模板分子(莱鲍迪苷A))，具有更加显著的模板分子识别能力和分离效率。
具体实施方式
下面，通过具体实施例对本发明的技术方案进行详细说明。
实施例1
本发明提出的一种从甜叶菊中提取莱鲍迪苷A的方法，其包括如下步骤：
S1、将甜叶菊干叶粉碎至30目后，按照料液比1:5加入500mL去离子水中，室温下超声辅助提取15min(超声功率360W，每工作10s，停5s)，过滤，滤渣拧干后重复提取两次，合并滤液，得到茶褐色提取液，即为浸提液；
S2、将10mL所述浸提液以0.1mL/min的流速上样至装填有100mg分子印迹复合材料的分离柱，先采10mL纯水进行洗脱，除去杂质，再采用3mL乙醇水(1:9，v/v)混合溶剂进行洗脱，除去甜菊糖S，最后采用3mL乙醇水(1:1，v/v)混合溶剂进行洗脱，收集洗脱液，得到莱鲍迪苷A的纯品；
在该实施例中，所述分子印迹复合材料是通过下述方法制备得到：
(1)制备乙烯基功能化的氧化石墨烯
将1g鳞片石墨和120mL浓硫酸、15mL浓磷酸混匀后，搅拌条件下加入6g KMnO4，完毕后在30℃水浴中搅拌反应1h，再缓慢滴加H2O2(30wt％)溶液，直至反应液变为金黄色，加入盐酸离心洗涤，再用去离子水洗涤直至pH呈中性，过滤，干燥，得到氧化石墨烯；将1g氧化石墨烯加入到30mL乙醇中超声分散均匀，再加入0.5mL 3-(异丁烯酰氧)丙基三甲氧基硅烷，升温至80℃后保温搅拌反应4h，蒸干溶剂后，用乙醇洗涤3次，60℃下真空干燥过夜，得到乙烯基功能化的氧化石墨烯；
(2)制备分子印迹复合材料：
将1g乙烯基功能化的氧化石墨烯分散在100mL乙腈中，再加入0.3g莱鲍迪苷A、1.5g丙烯酰胺和7.5g乙二醇二甲基丙烯酸酯，室温下磁力搅拌1h，再加入0.15g偶氮二异丁腈，通氮气排空氧气后超声(超声功率300W)处理1h，密封条件下在60℃水浴中热引发聚合反应20h，形成聚合物；
将所述聚合物研磨成粉，过100目筛后，通过索氏萃取，用甲醇/乙酸(9/1，v/v)的混合溶剂进行洗涤，除去模板分子莱鲍迪苷A，直到洗涤液中检测不到模板分子，再用甲醇洗涤至中性，60℃下真空干燥，即得到所述分子印迹复合材料。
对上述莱鲍迪苷A的纯品进行HPLC分析，其纯度为95.9％，回收率分别为91.3％。
莱鲍迪苷A的回收率(R，％)按下式计算：
式中，m0和m1分别为吸附到分离柱上的莱鲍迪苷A的量和洗脱下来的莱鲍迪苷A的量。
实施例2
本发明提出的一种从甜叶菊中提取莱鲍迪苷A的方法，其包括如下步骤：
S1、将甜叶菊干叶粉碎至40目后，按照料液比1:6加入500mL去离子水中，室温下超声辅助提取10min(超声功率360W，每工作10s，停5s)，过滤，滤渣拧干后重复提取两次，合并滤液，得到茶褐色提取液，即为浸提液；
S2、将10mL所述浸提液以0.1mL/min的流速上样至装填有100mg分子印迹复合材料的分离柱，先采10mL纯水进行洗脱，除去杂质，再采用3mL乙醇水(1:9，v/v)混合溶剂进行洗脱，除去甜菊糖S，最后采用3mL乙醇水(1:1，v/v)混合溶剂进行洗脱，收集洗脱液，得到莱鲍迪苷A的纯品；
在该实施例中，所述分子印迹复合材料是通过下述方法制备得到：
(1)制备乙烯基功能化的氧化石墨烯
将1g鳞片石墨和120mL浓硫酸、15mL浓磷酸混匀后，搅拌条件下加入6g KMnO4，完毕后在30℃水浴中搅拌反应1h，再缓慢滴加H2O2(30wt％)溶液，直至反应液变为金黄色，加入盐酸离心洗涤，再用去离子水洗涤直至pH呈中性，过滤，干燥，得到氧化石墨烯；将1g氧化石墨烯加入到30mL乙醇中超声分散均匀，再加入0.5mL 3-(异丁烯酰氧)丙基三甲氧基硅烷，升温至80℃后保温搅拌反应4h，蒸干溶剂后，用乙醇洗涤3次，60℃下真空干燥过夜，得到乙烯基功能化的氧化石墨烯；
(2)制备分子印迹复合材料：
将1g乙烯基功能化的氧化石墨烯分散在200mL乙腈中，再加入0.5g莱鲍迪苷A、4g丙烯酰胺和10g乙二醇二甲基丙烯酸酯，室温下磁力搅拌1h，再加入0.8g偶氮二异丁腈，通氮气排空氧气后超声(超声功率300W)处理1h，密封条件下在70℃水浴中热引发聚合反应18h，形成聚合物；
将所述聚合物研磨成粉，过100目筛后，通过索氏萃取，用甲醇/乙酸(9/1，v/v)的混合溶剂进行洗涤，除去模板分子莱鲍迪苷A，直到洗涤液中检测不到模板分子，再用甲醇洗涤至中性，60℃下真空干燥，即得到所述分子印迹复合材料。
对上述莱鲍迪苷A的纯品进行HPLC分析，其纯度为96.2％，回收率分别为89.0％。
实施例3
本发明提出的一种从甜叶菊中提取莱鲍迪苷A的方法，其包括如下步骤：
S1、将甜叶菊干叶粉碎至40目后，按照料液比1:4加入500mL去离子水中，室温下超声辅助提取20min(超声功率400W，每工作10s，停5s)，过滤，滤渣拧干后重复提取两次，合并滤液，得到茶褐色提取液，即为浸提液；
S2、将10mL所述浸提液以0.1mL/min的流速上样至装填有100mg分子印迹复合材料的分离柱，先采10mL纯水进行洗脱，除去杂质，再采用3mL乙醇水(1:9，v/v)混合溶剂进行洗脱，除去甜菊糖S，最后采用3mL乙醇水(1:1，v/v)混合溶剂进行洗脱，收集洗脱液，得到莱鲍迪苷A的纯品；
在该实施例中，所述分子印迹复合材料是通过下述方法制备得到：
(1)制备乙烯基功能化的氧化石墨烯
将1g鳞片石墨和120mL浓硫酸、15mL浓磷酸混匀后，搅拌条件下加入6g KMnO4，完毕后在30℃水浴中搅拌反应1h，再缓慢滴加H2O2(30wt％)溶液，直至反应液变为金黄色，加入盐酸离心洗涤，再用去离子水洗涤直至pH呈中性，过滤，干燥，得到氧化石墨烯；将1g氧化石墨烯加入到30mL乙醇中超声分散均匀，再加入0.5mL 3-(异丁烯酰氧)丙基三甲氧基硅烷，升温至80℃后保温搅拌反应4h，蒸干溶剂后，用乙醇洗涤3次，60℃下真空干燥过夜，得到乙烯基功能化的氧化石墨烯；
(2)制备分子印迹复合材料：
将1g乙烯基功能化的氧化石墨烯分散在60mL乙腈中，再加入0.2g莱鲍迪苷A、0.4g丙烯酰胺和6g乙二醇二甲基丙烯酸酯，室温下磁力搅拌1h，再加入0.04g偶氮二异丁腈，通氮气排空氧气后超声(超声功率300W)处理1h，密封条件下在40℃水浴中热引发聚合反应24h，形成聚合物；
将所述聚合物研磨成粉，过100目筛后，通过索氏萃取，用甲醇/乙酸(9/1，v/v)的混合溶剂进行洗涤，除去模板分子莱鲍迪苷A，直到洗涤液中检测不到模板分子，再用甲醇洗涤至中性，60℃下真空干燥，即得到所述分子印迹复合材料。
对上述莱鲍迪苷A的纯品进行HPLC分析，其纯度为93.6％，回收率分别为88.7％。
对比例1
本发明提出的一种从甜叶菊中提取莱鲍迪苷A的方法，其包括如下步骤：
S1、将甜叶菊干叶粉碎至30目后，按照料液比1:5加入500mL去离子水中，室温下超声辅助提取15min(超声功率360W，每工作10s，停5s)，过滤，滤渣拧干后重复提取两次，合并滤液，得到茶褐色提取液，即为浸提液；
S2、将10mL所述浸提液以0.1mL/min的流速上样至装填有100mg非分子印迹复合材料的分离柱，先采10mL纯水进行洗脱，除去杂质，再采用3mL乙醇水(1:9，v/v)混合溶剂进行洗脱，除去甜菊糖S，最后采用3mL乙醇水(1:1，v/v)混合溶剂进行洗脱，收集洗脱液，得到莱鲍迪苷A的纯品；
在该对比例中，所述非分子印迹复合材料是通过下述方法制备得到：
(1)制备乙烯基功能化的氧化石墨烯
将1g鳞片石墨和120mL浓硫酸、15mL浓磷酸混匀后，搅拌条件下加入6g KMnO4，完毕后在30℃水浴中搅拌反应1h，再缓慢滴加H2O2(30wt％)溶液，直至反应液变为金黄色，加入盐酸离心洗涤，再用去离子水洗涤直至pH呈中性，过滤，干燥，得到氧化石墨烯；将1g氧化石墨烯加入到30mL乙醇中超声分散均匀，再加入0.5mL 3-(异丁烯酰氧)丙基三甲氧基硅烷，升温至80℃后保温搅拌反应4h，蒸干溶剂后，用乙醇洗涤3次，60℃下真空干燥过夜，得到乙烯基功能化的氧化石墨烯；
(2)制备非分子印迹复合材料：
将1g乙烯基功能化的氧化石墨烯分散在100mL乙腈中，再加入1.5g丙烯酰胺和7.5g乙二醇二甲基丙烯酸酯，室温下磁力搅拌1h，再加入0.15g偶氮二异丁腈，通氮气排空氧气后超声(超声功率300W)处理1h，密封条件下在60℃水浴中热引发聚合反应20h，形成聚合物，将该聚合物研磨成粉，过100目筛后，得到所述非分子印迹复合材料。
对上述莱鲍迪苷A的纯品进行HPLC分析，其纯度为53.1％，回收率分别为45.2％。
对比例2
本发明提出的一种从甜叶菊中提取莱鲍迪苷A的方法，其包括如下步骤：
S1、将甜叶菊干叶粉碎至30目后，按照料液比1:5加入500mL去离子水中，室温下超声辅助提取15min(超声功率360W，每工作10s，停5s)，过滤，滤渣拧干后重复提取两次，合并滤液，得到茶褐色提取液，即为浸提液；
S2、将10mL所述浸提液以0.1mL/min的流速上样至装填有100mg分子印迹复合材料的分离柱，先采10mL纯水进行洗脱，除去杂质，再采用3mL乙醇水(1:9，v/v)混合溶剂进行洗脱，除去甜菊糖S，最后采用3mL乙醇水(1:1，v/v)混合溶剂进行洗脱，收集洗脱液，得到莱鲍迪苷A的纯品；
在该对比例中，所述分子印迹复合材料是通过下述方法制备得到：
(1)制备氧化石墨烯
将1g鳞片石墨和120mL浓硫酸、15mL浓磷酸混匀后，搅拌条件下加入6g KMnO4，完毕后在30℃水浴中搅拌反应1h，再缓慢滴加H2O2(30wt％)溶液，直至反应液变为金黄色，加入盐酸离心洗涤，再用去离子水洗涤直至pH呈中性，过滤，干燥，得到氧化石墨烯；
(2)制备分子印迹复合材料：
将1g氧化石墨烯分散在100mL乙腈中，再加入0.3g莱鲍迪苷A、1.5g丙烯酰胺和7.5g乙二醇二甲基丙烯酸酯，室温下磁力搅拌1h，再加入0.15g偶氮二异丁腈，通氮气排空氧气后超声(超声功率300W)处理1h，密封条件下在60℃水浴中热引发聚合反应20h，形成聚合物；
将所述聚合物研磨成粉，过100目筛后，通过索氏萃取，用甲醇/乙酸(9/1，v/v)的混合溶剂进行洗涤，除去模板分子莱鲍迪苷A，直到洗涤液中检测不到模板分子，再用甲醇洗涤至中性，60℃下真空干燥，即得到所述分子印迹复合材料。
对上述莱鲍迪苷A的纯品进行HPLC分析，其纯度为76.4％，回收率分别为61.2％。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种从甜叶菊中提取莱鲍迪苷A的方法，其特征在于，包括如下步骤：
将甜叶菊干叶浸提后得到浸提液；
将所述浸提液上样至装填有分子印迹复合材料的分离柱，洗脱剂洗脱后，得到莱鲍迪苷A的纯品；
其中，所述分子印迹复合材料包括石墨烯的载体和分子印迹聚合物；
所述分子印迹聚合物以莱鲍迪苷A为模板分子，以丙烯酰胺为功能单体、以乙二醇二甲基丙烯酸酯为交联剂，以乙腈为致孔剂。
2.根据权利要求1所述从甜叶菊中提取莱鲍迪苷A的方法，其特征在于，所述分子印迹复合材料是通过下述方法制备得到：
(1)将氧化石墨烯与3-(异丁烯酰氧)丙基三甲氧基硅烷进行偶联反应，得到乙烯基功能化的氧化石墨烯；
(2)将乙烯基功能化的氧化石墨烯与莱鲍迪苷A、丙烯酰胺、乙二醇二甲基丙烯酸酯、偶氮二异丁腈和乙腈进行聚合，得到未除去模板的分子印迹聚合物；
(3)将未除去模板的分子印迹聚合物用洗脱液进行洗脱，脱出莱鲍迪苷A，即得到所述分子印迹复合材料。
3.根据权利要求2所述从甜叶菊中提取莱鲍迪苷A的方法，其特征在于，步骤(1)具体包括：将氧化石墨烯分散于乙醇中，加入3-(异丁烯酰氧)丙基三甲氧基硅烷，升温至70-90℃后搅拌反应3-5h，蒸干溶剂后，洗涤，干燥，得到乙烯基功能化的氧化石墨烯。
4.根据权利要求2或3所述从甜叶菊中提取莱鲍迪苷A的方法，其特征在于，氧化石墨烯与3-(异丁烯酰氧)丙基三甲氧基硅烷质量体积比为1g:0.1-1mL。
5.根据权利要求2-4任一项所述从甜叶菊中提取莱鲍迪苷A的方法，其特征在于，步骤(2)具体包括：将乙烯基功能化的氧化石墨烯分散在乙腈中，加入莱鲍迪苷A、丙烯酰胺、乙二醇二甲基丙烯酸酯和偶氮二异丁腈混匀，充氮除氧后密封，加热至40-70℃后反应18-24h，得到未除去模板的分子印迹聚合物。
6.根据权利要求5所述从甜叶菊中提取莱鲍迪苷A的方法，其特征在于，莱鲍迪苷A与乙烯基功能化的氧化石墨烯的质量比为1:2-5；莱鲍迪苷A、丙烯酰胺、乙二醇二甲基丙烯酸酯的质量比为1:2-8:20-30；偶氮二异丁腈的用量是丙烯酰胺质量的1-20％；莱鲍迪苷A、乙腈的质量体积比为1g:200-400mL。
7.根据权利要求2-6任一项所述从甜叶菊中提取莱鲍迪苷A的方法，其特征在于，步骤(3)具体包括：将未除去模板的分子印迹聚合物研磨成粉，用甲醇和乙酸的混合液进行洗脱，除去模板分子莱鲍迪苷A，得到所述分子印迹复合材料。
8.根据权利要求1-7任一项所述从甜叶菊中提取莱鲍迪苷A的方法，其特征在于，所述“将甜叶菊干叶浸提后得到浸提液”具体包括：将甜叶菊干叶粉碎后，按照料液比1:4-6加入去离子水中，以300-400W的功率超声辅助提取10-20min，过滤后，得到浸提液。
9.根据权利要求1-8任一项所述从甜叶菊中提取莱鲍迪苷A的方法，其特征在于，所述浸提液中莱鲍迪苷A的浓度为0.5-5mg/mL。
10.根据权利要求1-9任一项所述从甜叶菊中提取莱鲍迪苷A的方法，其特征在于，所述洗脱剂为体积分数40-60％的乙醇水溶液。
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Citations (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20020198349A1 (en) * | 2001-03-02 | 2002-12-26 | Tucker Norton | Droplet polymerization method for synthesis of molecularly imprinted polymers |
| CN102144768A (zh) * | 2010-02-10 | 2011-08-10 | 田景振 | 一种利用固定生物酶酶改甜菊苷母液糖的方法 |
| CN104034677A (zh) * | 2014-06-09 | 2014-09-10 | 新疆维吾尔自治区产品质量监督检验研究院 | 七通道分子印迹聚合物传感器阵列及用其检测偶氮色素的方法和用途 |
| CN104098739A (zh) * | 2013-04-09 | 2014-10-15 | 江南大学 | 莱鲍迪苷a分子印迹聚合物的制备方法 |
| CN104262536A (zh) * | 2014-09-15 | 2015-01-07 | 江苏大学 | 一种活性/可控氧化石墨烯表面离子印迹聚合物及其制备方法与应用 |
| WO2015006764A1 (en) * | 2013-07-12 | 2015-01-15 | The Coca-Cola Company | Compositions and methods for improving rebaudioside m solubility |
| CN108341781A (zh) * | 2017-01-25 | 2018-07-31 | 中国科学院上海生命科学研究院 | 植物次生代谢产物生物合成途径中相关酶类的解析方法 |
| CN110183574A (zh) * | 2019-01-14 | 2019-08-30 | 苏州福赛思生物科技有限公司 | 一种苯硼酸基聚合物载体及其选择性吸附糖类物质的应用 |
| CN110292915A (zh) * | 2019-07-19 | 2019-10-01 | 华中师范大学 | 表面分子印迹石墨烯整体纤维及其制备方法和应用 |
-
2020
- 2020-11-26 CN CN202011348322.7A patent/CN112500440B/zh active Active
Patent Citations (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20020198349A1 (en) * | 2001-03-02 | 2002-12-26 | Tucker Norton | Droplet polymerization method for synthesis of molecularly imprinted polymers |
| CN102144768A (zh) * | 2010-02-10 | 2011-08-10 | 田景振 | 一种利用固定生物酶酶改甜菊苷母液糖的方法 |
| CN104098739A (zh) * | 2013-04-09 | 2014-10-15 | 江南大学 | 莱鲍迪苷a分子印迹聚合物的制备方法 |
| WO2015006764A1 (en) * | 2013-07-12 | 2015-01-15 | The Coca-Cola Company | Compositions and methods for improving rebaudioside m solubility |
| CN104034677A (zh) * | 2014-06-09 | 2014-09-10 | 新疆维吾尔自治区产品质量监督检验研究院 | 七通道分子印迹聚合物传感器阵列及用其检测偶氮色素的方法和用途 |
| CN104262536A (zh) * | 2014-09-15 | 2015-01-07 | 江苏大学 | 一种活性/可控氧化石墨烯表面离子印迹聚合物及其制备方法与应用 |
| CN108341781A (zh) * | 2017-01-25 | 2018-07-31 | 中国科学院上海生命科学研究院 | 植物次生代谢产物生物合成途径中相关酶类的解析方法 |
| CN110183574A (zh) * | 2019-01-14 | 2019-08-30 | 苏州福赛思生物科技有限公司 | 一种苯硼酸基聚合物载体及其选择性吸附糖类物质的应用 |
| CN110292915A (zh) * | 2019-07-19 | 2019-10-01 | 华中师范大学 | 表面分子印迹石墨烯整体纤维及其制备方法和应用 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 叶发银: ""高纯度莱鲍迪苷A的制备和甜菊苷的酶法改性研究"", 《中国优秀博硕士学位论文全文数据库 工程科技I辑》 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
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