CN112481276B

CN112481276B - 玉米基因ZmSCL14在调控植物开花期中的应用

Info

Publication number: CN112481276B
Application number: CN202011574117.2A
Authority: CN
Inventors: 葛磊; 安海龙; 马斌; 王晓冬; 李雪; 王敬丹; 冯宇
Original assignee: Shandong Agricultural University
Current assignee: Shandong Agricultural University
Priority date: 2020-12-28
Filing date: 2020-12-28
Publication date: 2022-04-01
Anticipated expiration: 2040-12-28
Also published as: CN112481276A

Abstract

本发明公开了玉米基因ZmSCL14在调控植物开花期中的应用。所述玉米基因ZmSCL14的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明利用现有的植物基因工程技术获得重组超表达载体，再利用农杆菌侵染转化法转化二穗短柄草愈伤组织，经组织培养和鉴定筛选，获得了纯合的超表达ZmSCL14基因的二穗短柄草植株。将其与相同条件下生长的野生型植株进行比较，超表达ZmSCL14基因的二穗短柄草表现出晚花表型，延迟二穗短柄草开花，且还能减缓二穗短柄草植株的生长速度，并参与调控与开花相关基因的表达，因此ZmSCL14基因可以应用于培育晚花或矮小品种，具有很高的农业应用价值。

Description

玉米基因ZmSCL14在调控植物开花期中的应用

技术领域

本发明涉及植物基因工程技术领域，具体涉及玉米基因ZmSCL14在调控植物开花期中的应用。

背景技术

植物的生命周期过程需要经历不同的发育阶段，其中最重要的两个阶段是：产生叶片，完成生物量积累，这一阶段被称为营养生长阶段；形成花器官，完成授粉从而产生种子，这一阶段被称为生殖生长阶段。植物从营养生长阶段到生殖生长阶段的转变通常被称为成花转变。成花转变的发生需要环境信号和生长信号共同的作用，例如日照长短，温度，植物生长年龄等。植物开花时间调控机理的研究对于人类研究植物进化和繁殖具有重要作用。抽穗期和花序发育的改变能够直接影响植物的产量，开花时间的早晚也会根据实际的生产和市场需求体现出不同的价值，适度晚花同样是对农业生产具有重要意义的农艺性状。

GRAS蛋白是植物中特有的蛋白家族，GRAS基因家族被称为“绿色革命”基因。目前发现的GRAS蛋白家族涉及到植物转录水平调控和植物生长发育的多种信号转导途径。GRAS基因包括十个亚家族，分别是：AtLAS (Arabidopsis LATERAL SUPPRESSOR)、AtSCL(Arabidopsis SCR-like)、HAM (HAIRY MERISTEM)、AtSCR (Arabidopsis SCR)、DLT(DWARF AND LOW TILLERING)、AtSCL3、DELLA、AtPAT1 (Arabidopsis phytochrome Asignal transduction 1-1)、AtSHR (Arabidopsis SHORTROOT) and LISCL (Liliumlongiflorum SCR-like)。

LISCL亚家族成员具有强烈的转录激活功能。在对麝香百合（Lilium longiflorum）的研究中，研究者发现LISCL在减数分裂前期与调控花药减数分裂相关基因启动子相结合，从而激活基因，促进细胞分裂。辐射松（Pinus radiata）的PrSCL1基因与欧洲板栗（Castanea sativa）CsSCL1基因在根部以外表达量不高，受生长素诱导，参与早期不定根细胞的伸长、发育的调控。烟草（Nicotiana tabacum）NsGRAS1基因同样影响细胞伸长。AtSCL14基因主要参与植物的解毒，其表达量上调可以增加植物对异型性物质异烟酸（isonicotinicacid）和2,4,6-三碘间甲酰胺苯甲酸（2,4,6-triiodobenzoicacid）的耐受性。水稻中的抗旱基因OsGRAS23是AtSCL14在水稻中的同源基因，对GA、JA、PEG6000、NaCl均有响应，能够显著提高抗旱能力。但截至目前，仍有很多的新LISCL亚家族基因成员的新功能等待被发现和研究。

发明内容

本发明提供了玉米基因ZmSCL14在调控植物开花期中的应用。本发明将ZmSCL14的全长CDS连接到带有UBI启动子的表达载体上，利用农杆菌侵染转化二穗短柄草，验证该基因的超表达可以使植物出现晚花性状并降低植株的生长速度。

为实现上述发明目的，本发明采用以下技术方案予以实现：

本发明提供了玉米基因ZmSCL14在调控植物开花期中的应用。

进一步的：所述玉米基因ZmSCL14的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

进一步的：超表达玉米基因ZmSCL14的株系与野生型株系相比具有晚花性状。

进一步的：在植物的营养生长阶段，超表达玉米基因ZmSCL14的株系与野生型株系相比，植株生长速度缓慢。

进一步的：所述玉米基因ZmSCL14超表达后引起表达量变化的开花相关基因包括FLD、FD、FTL和VRN1。

进一步的：超表达玉米基因ZmSCL14的株系中基因FLD、FD、FTL的表达量明显上调且高于野生型植株；基因VRN1的表达量显著下降且低于野生型植株。

进一步的：所述植物包括二穗短柄草。

与现有技术相比，本发明的优点和有益效果：

本发明从玉米中分离和克隆到ZmSCL14基因，利用现有的植物基因工程技术获得重组超表达载体，再利用农杆菌侵染转化法转化二穗短柄草愈伤组织，经组织培养和鉴定筛选，获得了纯合的超表达ZmSCL14基因的二穗短柄草转基因株系。将其与相同条件下生长的野生型植株进行比较，超表达ZmSCL14基因的二穗短柄草表现出晚花2-3周的表型，延迟二穗短柄草开花，且还能减缓二穗短柄草植株的生长速度，并参与调控与开花相关基因的表达，因此ZmSCL14基因可以应用于培育晚花或矮小品种，具有很高的农业应用价值。

附图说明

图1：玉米ZmSCL14基因编码的氨基酸与二穗短柄草、拟南芥、水稻以及高粱中SCL14蛋白构建的进化树。

图2：PCR扩增ZmSCL14基因检测的电泳条带。

图3：构建的超表达载体的示意图以及酶切位点。

图4：T0代转基因株系的叶片DNA鉴定结果；其中，M为Marker，+为连接ZmSCL14的质粒载体阳性对照，-为野生型短柄草基因组阴性对照。

图5：开花时间和株高的统计结果；其中A为T2代纯合子幼苗时期的表型图，B为T2代纯合子成熟期表型图，C为开花时间统计结果；D对株高的统计结果。

图6：超表达ZmSCL14转基因植株开花相关基因的表达量分析结果。

具体实施方式

下面结合附图和具体实施例来对本发明的技术方案做进一步详细的说明。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件；所用试剂材料如未具体说明，均为市售产品。

实施例1：玉米ZmSCL14基因的序列分析、克隆与载体构建

一、玉米ZmSCL14基因的获取

利用玉米基因组数据库网站gramene找到基因GRMZM2G368909，命名为ZmSCL14，ZmSCL14基因组序列如SEQ ID NO.1所示，全长为2421 bp，其CDS序列如SEQ ID NO.2所示，长度为1938 bp，并编码了645个氨基酸，编码的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。

将ZmSCL14的氨基酸序列与二穗短柄草、小麦、拟南芥、水稻以及高粱中SCL14蛋白构建进化树，如图1所示，玉米ZmSCL14蛋白与高粱SbSCL14蛋白同源性较近。

二、玉米ZmSCL14基因的克隆与载体构建

1、RNA的提取：使用全式金TRIzon提取玉米的总RNA；

（1）取新鲜植物组织材料在液氮中充分研磨，每30-50mg组织加入1ml TRIzon，漩涡振荡混匀，室温放置5min，使蛋白核酸复合物完全分离；

（2）室温，12000 rpm离心10分钟，取上清液移至新的RNase-Free离心管中；

（3）向上述离心管中加入400µL氯仿，剧烈震荡15s，室温放置2-3min(可用氯仿抽提两次)，于4℃，12000 rpm离心15分钟，液体分层，将最上层无色水相转移至一个新RNase-Free离心管中；

（4）加入等体积异丙醇，颠倒混匀，室温放置10min后，4℃，12000 rpm离心10分钟，弃上清；

（5）沉淀物中加入1mL RNase-Free水配制的75%乙醇（现用现配），洗涤沉淀（可洗涤两次），4℃，12000 rpm离心5分钟，弃上清（尽量将上清全部吸干），室温干燥5-10分钟，加入30-100µL无RNase的水溶解沉淀，沉淀溶解后可置于-80℃冰箱长久保存；

2、反转录cDNA第一链的合成：

将提取的RNA溶解后测定RNA浓度，然后使用TransScript One-Step gDNARemoval and cDNA Synthesis SuperMix反转录试剂盒进行反转录。取5μg总RNA，加入2×反应缓冲液10μL，引物oligo dT（0.5μg/μL）1μL，反转录酶1μL，去基因组酶1μL，补水到20μL，在42℃孵育30分钟，85℃酶失活5分钟。

3、ZmSCL14基因的克隆：

根据玉米ZmSCL14基因的CDS序列设计得到ZmSCL14基因引物对，其序列为（5’-3’）：

上游引物：ATggtaccATGATAATGGACCCTCGTCC（SEQ ID NO.4）；

下游引物：ATggatccCTAGCTAGTCCATGCTGAAA（SEQ ID NO.5）；

使用2×Phanta Max MasterMix进行PCR扩增，反应体系为：Mix 25μL，上游引物2μL，下游引物2μL，cDNA模板1μL，水补齐到50μL。

PCR反应条件为：95℃预变性 5分钟；95℃变性15秒，58℃退火15秒，72℃延伸2分钟，共重复35个循环；72℃后延伸5分钟；4℃保温。

反应结束后，进行琼脂糖凝胶电泳，检测到目的条带后（图2），切胶并进行胶回收，胶回收方法根据康为世纪琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒进行。

4、表达载体的构建：

用Kpn1和BamH1酶切带有UBI启动子的pPZP211空载体和目的片段，37℃酶切一个小时之后，进行琼脂糖凝胶电泳，切除正确的条带进行胶回收，将胶回收产物使用T4 DNA连接酶进行连接，连接产物转化进大肠杆菌DH5α菌株中，再涂布于含有SPE的LB平板上生长过夜。

挑取白色单个菌落在LB平板上划线，进行菌落PCR验证，选取阳性菌落在LB液体培养基中过夜后，使用康为世纪高纯度质粒小提取试剂盒提取质粒DNA，送至北京六合华大公司进行DNA测序，结果证实阳性质粒中确实含有ZmSCL14的CDS序列，保存测序正确的菌株和质粒，以用于后续实验，至此得到了UBI::ZmSCL14的超表达载体pPZP211-ZmSCL14（图3）。

5、重组菌株的构建：

取2.5μL重组载体通过冻融法转化农杆菌EHA105，得到的菌液涂布于LB固体培养基上，倒置培养2-3天后，挑取单菌落进行PCR和酶切双鉴定，保存鉴定结果均为阳性的重组农杆菌单菌落，用于后续实验。

实施例2：超表达ZmSCL14转基因二穗短柄草阳性苗的筛选

1、二穗短柄草愈伤组织侵染及组织培养

（1）溶液和培养基的配置：

侵染液配方（1L体系）：10×Macro MS Salts 100mL；100×Micro MS Salts 10μL；200×Fe-EDTA 5mL；100×M5 Vitamin 10mL；蔗糖 30g；葡萄糖 30g；定容后用KOH调节pH至5.5，121℃、灭菌20min后置于冰箱冷藏保存。

CIM培养基配方（1L体系）：10×Macro MS Salts 100mL；100×Micro MS Salts10mL；200×Fe-EDTA 5mL；100×M5 Vitamins 10mL；CuSO4（8mg/mL） 7.5mL；2,4-D（1mg/mL）2.5mL；MES 0.5g；蔗糖 30g；肌醇 100mg；Phytagel 3g；定容至1L利用KOH调节pH至5.8，121℃、灭菌20min后倒入无菌培养皿中冷却凝固，无菌袋封存备用。

生芽培养基配方（1L体系）：10×Macro MS Salts 100mL；100×Micro MS Salts10mL；200×Fe-EDTA 5mL；100×M5 Vitamins 10mL；蔗糖 30g；肌醇 100mg；MES 0.5g；水解酪蛋白 500mg；Kinetin（激动素 KT 1mg/mL） 400μL；Phytagel 3g；定容至 1L，利用KOH调pH至5.8，121℃、灭菌20min后加入G418 (80mg/mL) 1mL和替卡西林（160mg/mL) 0.5mL，摇匀倒入无菌培养皿中冷却凝固，无菌袋封存备用。

生根培养基配方（1L体系）：10×Macro MS Salts 40mL；100×Micro MS Salts40mL；200×Fe-EDTA 5mL；100×B5 Vitamins 10mL；蔗糖 10g；MES 0.5g；Phytagel 3g；定容至1L；利用KOH调pH至5.8，灭菌后加入200μL NAA（1mg/mL）摇匀倒入无菌培养皿中冷却凝固，无菌袋封存备用。

10×Macro MS Salts（1L）：KNO₃ 19g；NH₄NO₃ 16.5g；CaCl₂·2H₂O 4.4g；MgSO₄·7H₂O 3.7g；KH₂PO₄ 1.7g。

100×Micro MS Salts（1L）：H₃BO₃ 0.62g；MnSO₄·H₂O 1.69g；ZnSO₄·7H₂O 0.86g；KI 0.083g；Na₂MoO₄·2H2O 0.025g；CuSO₄·5H₂O（250mg/L）10mL；CoCl₂·6H₂O（280mg/L）9mL。

100×M5 Vitamins（1L）：Nicotinic acid 0.04g；Thiamine-HCl 0.05g；Cysteine4g；Glycine 0.2g；Pyridoxine-HCl 0.04g；肌醇 10g。

100×B5 Vitamins（1L）：Nicotinic acid 100mg；Thiamine-HCl 1g；Pyridoxine-HCl 100mg；Myo-inositol 10g。

200×Fe-EDTA配方：硫酸亚铁 5.56g/L；乙二胺四乙酸二钠 7.46g/L；先溶化Na₂EDTA·2H₂O，再将FeSO₄·7H₂O置于烧杯中，加热10-20min直至溶液成为浅茶色，温度降至室温即可定容。

（2）取发育完整的幼嫩的二穗短柄草种子，用50mL 0.05%浓度的无菌吐温水加5mL次氯酸钠在超净工作台中泡洗5分钟，再用无菌去离子水清洗三遍，在体视显微镜下用镊子剖取种子的胚，放在普通CIM培养基上，避光条件下28℃培养3-4周即可获得愈伤组织；

（3）挑选实施例1中鉴定呈阳性的重组农杆菌单菌落，加到20ml LB培养基中，再向其中加入20μL壮观霉素（50mg/ml）和20μL利福平（50mg/ml），28℃过夜培养；

（4）培养的菌液10000 rmp离心10min，弃上清，加侵染液重新悬浮菌体；

（5）将重悬后的菌液倒入盛有二穗短柄草愈伤组织的小烧杯中，摇晃2min，静止1min，再摇晃2min；去掉菌液，将愈伤组织放在铺好滤纸的培养皿中，28℃暗培养3天；

（6）再将愈伤组织转移到含有浓度为80mg/L的G418抗生素的CIM筛选培养基中28℃培养10-14天，更换新的筛选培养基继续培养10-14天，挑选生长状态良好的愈伤组织到生芽培养基中，长日照（16 h光照/8 h黑暗）的周期下诱导生芽，出芽后放入装有生根培养基的生根瓶中，在正常光照条件下诱导生根，生根后移栽到土壤中，得到二穗短柄草的超表达ZmSCL14转基因植株。

2、转基因阳性苗的筛选

（1）将上述得到的超表达ZmSCL14转基因植株作为T0代，取其叶片提取基因组DNA，进行PCR鉴定，结果（图4）显示所选植株均为阳性植株。

（2）将收获的T0代种子在萌发后作为T1代，取其叶片提取基因组DNA，进行PCR鉴定，结果显示T1代植株的阳性：阴性比例在2:1至6:1之间，阳性株系是单拷贝。

（3）将收获的T1代阳性种子在萌发后作为T2代，取其叶片提取基因组DNA，进行PCR鉴定；若结果显示某一株系的T2代不发生T-DNA分离，则认定该株系为纯合系，选择该纯合株系用于后续的实验。

实施例3：超表达ZmSCL14转基因株系表型分析

1、将实施例2得到的纯合子T0代株系与分化得来的野生型二穗短柄草T0代株系（对照组，WT）培养幼苗，在移栽幼苗时进行编号，按编号次序取单株作群体分析，若40%以上的单株表现出一致的表型，则认为该表型是代表性表型，由此筛选得到两株代表性的转基因株系，编号为OE2和OE3；

2、统计T2代纯合子植株的开花时长和株高：开花时长为T2代二穗短柄草种子在光照条件下，使用湿滤纸从萌发开始计天数，至露芒（与小麦类似，二穗短柄草穗部外稃上有芒，在穗生长发育过程中芒从旗叶叶鞘中伸出时，即为露芒）所经历的天数；株高为地上部、从基部至主茎末端的高度。

统计结果如图5所示，纯合的转基因株系OE2和OE3较野生型株系WT花开时长更长，因此说明超表达ZmSCL14转基因株系较野生型晚花；且在营养生长阶段，纯合的转基因株系OE2和OE3的株高野生型株系WT矮，但最终仍能达到与野生型的高度，说明超表达ZmSCL14转基因株系在营养生长阶段的植株生长速度较野生型缓慢，进而导致株高矮。

实施例4：超表达ZmSCL14转基因株系开花相关基因表达量检测

依据qRT-PCR引物设计要求，使用Beacon Designer 7和Primer Premier 5.0等软件设计多个开花相关基因的特异引物。引物对序列分别为：

qRT-CO1-F：5′-TCAACAGCTCCGTTTACAAGG-3′（SEQ ID NO.6）；

qRT-CO1-R：5′-GCATAACAGTACACCACGCT-3′（SEQ ID NO.7）；

qRT-GI-F：5′-AGGCCAATCTTCAAAGTTGCA-3′（SEQ ID NO.8）；

qRT-GI-R：5′-GCAAAATGTCTGTGATCCAAGG-3′（SEQ ID NO.9）；

qRT-PPD1-F：5′-TCGCTTGAGTTGAGCTTGAA-3′（SEQ ID NO.10）；

qRT-PPD1-R：5′-TTTTCACTGCCTCTGAGCTG-3′（SEQ ID NO.11）；

qRT-FVE-F：5′-GTGGCACTTTGCAGATATGG-3′（SEQ ID NO.12）；

qRT-FVE-R：5′-GCAGCTTGCCAAGTGAGTCT-3′（SEQ ID NO.13）；

qRT-FCA-F：5′-CTTCTGAAGAGGCCGAGAGA-3′（SEQ ID NO.14）；

qRT-FCA-R：5′-TGCAGTTGCCTGCTTATTCA-3′（SEQ ID NO.15）；

qRT-FLD-F：5′-CCGATGCACAAGATCAGAGA-3′（SEQ ID NO.16）；

qRT-FLD-R：5′-GCACCAAGCGAGATATCCAT-3′（SEQ ID NO.17）；

qRT-FY-F：5′-GACGAACAGTGGACTACACGAG-3′（SEQ ID NO.18）；

qRT-FY-R：5′-GTCGAAGGGTTGTCTGGGTA-3′（SEQ ID NO.19）；

qRT-VRT2-F：5′-ACAACTCGCAGAATCAAG-3′（SEQ ID NO.20）；

qRT-VRT2-R：5′-AATTCACCGACACTCAAC-3′（SEQ ID NO.21）；

qRT-FD-F：5′-GGAGGAGGTGATCTGGAAGG-3′（SEQ ID NO.22）；

qRT-FD-R：5′-CCGAGGTAGGTGAACTCCAG-3′（SEQ ID NO.23）；

qRT-VRN1-F：5′-TGCAGAAGGAACTTGTGGAG-3′（SEQ ID NO.24）；

qRT-VRN1-R：5′-AAGAGCTAGTTTGCGGGTGT-3′（SEQ ID NO.25）；

qRT-LFY-F：5′-TCCATCTCTACGAGCAGTGC-3′（SEQ ID NO.26）；

qRT-LFY-R：5′-CGCATCTTGGGCTTGTTGAT-3′（SEQ ID NO.27）；

qRT-SOC1-F：5′-TGAGGGCTTGTCACAGAAAC-3′（SEQ ID NO.28）；

qRT-SOC1-R：5′-GCTGATCTTCAAACACCTGAGT-3′（SEQ ID NO.29）；

qRT-SOC1L-F：5′-CTTGGGCGAAAACTTAGGAGA-3′（SEQ ID NO.30）；

qRT-SOC1L-R：5′-AGCAGCATCGTCTCCTTCTC-3′（SEQ ID NO.31）；

qRT-TFL1-F：5′-TTGGTCGGGTGATTGGAGAA-3′（SEQ ID NO.32）；

qRT-TFL1-R：5′-CAACTGCTGATGGGTAGAGC-3′（SEQ ID NO.33）；

qRT-FTL1-F：5′-GAGTACTTGCACTGGCTGGT-3′（SEQ ID NO.34）；

qRT-FTL1-R：5′-GCCGAGCTGCTGGAATAGAA-3′（SEQ ID NO.35）。

利用qRT-PCR专用96孔板和高透光率封口膜，荧光定量PCR仪Icycler real-timePCR system进行qRT-PCR分析，每个样品3次重复。提取植株一叶期总RNA经反转录得到cDNA，将其作为模板，建立反应体系，反应体系参照SYBR Green Realtime PCR Master Mix（QPK-201）说明书，反应条件如下：95℃预变性60秒；95℃变性10秒，58±5.0℃退火10秒，72℃延伸15秒，共重复50-60个循环；65℃孵育20秒，融解曲线65-95℃，每0.5℃读一次数，保持1秒。

将多个样品混合，进行第一次扩增，检测引物是否可用，根据融解曲线验证引物扩增的特异性，单一峰即认为特异扩增，如有双峰，适当调整退火温度及引物用量。使用混合模板按10倍浓度依次稀释，共稀释4次，用5个浓度的样品构建相对标准曲线，验证所有引物的扩增效率，以及目的序列在此浓度范围内是否具有线性扩增的关系。以BdUBC18为内参，调整各模板浓度使内参Ct值之差小于2。每个基因扩增均有内参同时扩增，默认条件下读取Ct 值，每个样品做三次重复。

结果如图6所示，与野生型相比，两株超表达ZmSCL14转基因株系中涉及开花相关基因中FLD（FLOWERING locus D-like），FD (FLOWERING LOCUS D)和FTL (FLOWERING LOCUS T)的表达量均明显上调且高于野生型株系，但是VRN1（VERNALIZATION1）基因的表达量显著下降且低于野生型植株，可以解释超表达ZmSCL14转基因株系晚花表型的成因。

以上证据表明ZmSCL14基因参与调控了部分开花相关基因的表达，并使得超表达ZmSCL14基因表现为晚花性状，而且还能说明ZmSCL14超表达能够推迟二穗短柄草的开花时间并降低二穗短柄草植株的生长速度。

以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其进行限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的普通技术人员来说，依然可以对前述实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明所要求保护的技术方案的精神和范围。

序列表

<110> 山东农业大学

<120> 玉米基因ZmSCL14在调控植物开花期中的应用

<160> 35

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 2421

<212> DNA

<213> 玉米(Zea mays)

<400> 1

gtcggcgaag tccttcggcg ttccgatcat caacttttct tccaatttgt agttctctct 60

aagcggaatc cttgtgttct tgagagagag agagagagag agagagagag agagagagag 120

agagagagac tcagaaaggt agcgcagagg tgagatttgt aacctgtaat aagtgacttg 180

tggcgctgaa gatcgaaagt cagagaaatc ttgtggatac aagctccacc tccaaggaat 240

gataatggac cctcgtcctc gtgacgatcc caacctcggt gctcgattgc ccaccccaaa 300

tccacccgca cctcacatga ttagcttctc cctccagcag ccacagcttc agttcttccc 360

ttcgtatgga ttccacggcc acagccacag ctctcctgtc agctcgcatc catctccacc 420

ctcggccatg cctggctgca ccacgccaag cccggcatcg acaaccacaa ccgagccaga 480

cagcgtcgag gatttttccg agactgttgc tgacgacgcg gtcctagcat acatcaacca 540

gttccttctt gaagacgagg acgaggaatc ctatcctatt accagcgcgc ctgtggagga 600

ttcagcactc ctcgccgccg tcgagaaacc attcgtcgac atcctcgagt ctgccaagcc 660

tatcgcagca cagggctatg aagtaaagtc ttggatcact gatgactgtg attctacagg 720

aagcggaagg tttcgcgatg tggtcacaag tagtctgcct cgtgaaatgg tgcgggaggg 780

tttagttggt gctgctcata agggtcagaa gaacccgcgt gacgaggaca tggagatgga 840

ggggaggaag agcaaacagt cggcactgtg tgacgaagag actgtccggg agatgtttga 900

caaggtgctg ttgtgtaccg acaagaactg tgagttccac tcaccaatgc cagccgatgc 960

acagatcagc gggggatatg tgaaaggatc tagaaataag cgagggcgaa ggaaggggag 1020

atcaggttct ggtgcagagg aggagccagt tgatctcaca accctactca tacattgtgc 1080

tcaggccgcg gctatcgacg accacaggaa ctcaagcgag ctgctgaaac agatcaggaa 1140

gcattcctct gctactggag atgctggcca gagattggca cactacttcg ccgatgggct 1200

ggaggctcgc ctagctggct ctggcagcag catctaccgt tcgcttgctg caaagagaac 1260

ttccactggt gatatactga aggcgttcag tttgtatgtc aaagcatgtc cgtttaggat 1320

actatcacac tatgtcgcaa acacgaccat cttaaacgct acgaagagcg ccacaaggct 1380

gcacatcata gactacggga taatgtatgg tttccagtgg ccagtcctca tgcagcggct 1440

ctcaaagaga cctggtggcc ccccgtacct tcggatcact ggtatagact ttcccctgtc 1500

aggattccgc cctgcagagc gtgttgaggc gacagggcgg cggttgcatg agtatgcccg 1560

tatgttcaat gtcccatttg aataccaagc cattgctgcc aagtgggata ctatccaagt 1620

taaagatctc aacatgaaga gcgatgagtt cgtcgtcgtt aactgcctct accggatgag 1680

gaacatgatg gacgagacgg tgacggatga cagcccgaga acgcgggttt tgaacacaat 1740

cagaaagctg aatccccatc tgttcgttca tgggatcgtc aatggtactt acaatgcacc 1800

cttcttcgtg acgcggttta aggaggctat gttcttcttc tcttcgatct ttgatatgct 1860

cgaagcgaat gccttacgga tggatgagca taggctgctg atagagagag agttctttgg 1920

ccgggaagct gtcaatgtga ttgcctgtga gggcacagag aggattgaaa ggccagagac 1980

ctacaaacaa tggcagatga gaaacctcag ggcaggcttc cggcagttag ctctggacag 2040

ggagataatg aagagagcaa ggtacaaggt aagcaagagc tatcaggggg atttcctcgt 2100

ggacgaagat aacaagtgga tgctacaagg ttggaagggt cgtatcatat atgcactttc 2160

agcatggact agctagactt gtaaatatta gtgagctact gagctgctta gctgacctct 2220

tccattaatt tcttgattaa tcaccatttc attttgctgt attatgttta cgttgttgaa 2280

tctagccctc ttttagaaac caaagttttg tatgtttgaa ttggctgcaa taatagaatc 2340

ttgtccgtgt ctgcctgaca tatttgtgtt aatagtgtaa gaggtgtttc tctatctttg 2400

ttcctgtctt tggaaagaag a 2421

<210> 2

<211> 1938

<212> DNA

<213> 玉米(Zea mays)

<400> 2

atgataatgg accctcgtcc tcgtgacgat cccaacctcg gtgctcgatt gcccacccca 60

aatccacccg cacctcacat gattagcttc tccctccagc agccacagct tcagttcttc 120

ccttcgtatg gattccacgg ccacagccac agctctcctg tcagctcgca tccatctcca 180

ccctcggcca tgcctggctg caccacgcca agcccggcat cgacaaccac aaccgagcca 240

gacagcgtcg aggatttttc cgagactgtt gctgacgacg cggtcctagc atacatcaac 300

cagttccttc ttgaagacga ggacgaggaa tcctatccta ttaccagcgc gcctgtggag 360

gattcagcac tcctcgccgc cgtcgagaaa ccattcgtcg acatcctcga gtctgccaag 420

cctatcgcag cacagggcta tgaagtaaag tcttggatca ctgatgactg tgattctaca 480

ggaagcggaa ggtttcgcga tgtggtcaca agtagtctgc ctcgtgaaat ggtgcgggag 540

ggtttagttg gtgctgctca taagggtcag aagaacccgc gtgacgagga catggagatg 600

gaggggagga agagcaaaca gtcggcactg tgtgacgaag agactgtccg ggagatgttt 660

gacaaggtgc tgttgtgtac cgacaagaac tgtgagttcc actcaccaat gccagccgat 720

gcacagatca gcgggggata tgtgaaagga tctagaaata agcgagggcg aaggaagggg 780

agatcaggtt ctggtgcaga ggaggagcca gttgatctca caaccctact catacattgt 840

gctcaggccg cggctatcga cgaccacagg aactcaagcg agctgctgaa acagatcagg 900

aagcattcct ctgctactgg agatgctggc cagagattgg cacactactt cgccgatggg 960

ctggaggctc gcctagctgg ctctggcagc agcatctacc gttcgcttgc tgcaaagaga 1020

acttccactg gtgatatact gaaggcgttc agtttgtatg tcaaagcatg tccgtttagg 1080

atactatcac actatgtcgc aaacacgacc atcttaaacg ctacgaagag cgccacaagg 1140

ctgcacatca tagactacgg gataatgtat ggtttccagt ggccagtcct catgcagcgg 1200

ctctcaaaga gacctggtgg ccccccgtac cttcggatca ctggtataga ctttcccctg 1260

tcaggattcc gccctgcaga gcgtgttgag gcgacagggc ggcggttgca tgagtatgcc 1320

cgtatgttca atgtcccatt tgaataccaa gccattgctg ccaagtggga tactatccaa 1380

gttaaagatc tcaacatgaa gagcgatgag ttcgtcgtcg ttaactgcct ctaccggatg 1440

aggaacatga tggacgagac ggtgacggat gacagcccga gaacgcgggt tttgaacaca 1500

atcagaaagc tgaatcccca tctgttcgtt catgggatcg tcaatggtac ttacaatgca 1560

cccttcttcg tgacgcggtt taaggaggct atgttcttct tctcttcgat ctttgatatg 1620

ctcgaagcga atgccttacg gatggatgag cataggctgc tgatagagag agagttcttt 1680

ggccgggaag ctgtcaatgt gattgcctgt gagggcacag agaggattga aaggccagag 1740

acctacaaac aatggcagat gagaaacctc agggcaggct tccggcagtt agctctggac 1800

agggagataa tgaagagagc aaggtacaag gtaagcaaga gctatcaggg ggatttcctc 1860

gtggacgaag ataacaagtg gatgctacaa ggttggaagg gtcgtatcat atatgcactt 1920

tcagcatgga ctagctag 1938

<210> 3

<211> 645

<212> PRT

<213> 玉米(Zea mays)

<400> 3

Met Ile Met Asp Pro Arg Pro Arg Asp Asp Pro Asn Leu Gly Ala Arg

1 5 10 15

Leu Pro Thr Pro Asn Pro Pro Ala Pro His Met Ile Ser Phe Ser Leu

20 25 30

Gln Gln Pro Gln Leu Gln Phe Phe Pro Ser Tyr Gly Phe His Gly His

35 40 45

Ser His Ser Ser Pro Val Ser Ser His Pro Ser Pro Pro Ser Ala Met

50 55 60

Pro Gly Cys Thr Thr Pro Ser Pro Ala Ser Thr Thr Thr Thr Glu Pro

65 70 75 80

Asp Ser Val Glu Asp Phe Ser Glu Thr Val Ala Asp Asp Ala Val Leu

85 90 95

Ala Tyr Ile Asn Gln Phe Leu Leu Glu Asp Glu Asp Glu Glu Ser Tyr

100 105 110

Pro Ile Thr Ser Ala Pro Val Glu Asp Ser Ala Leu Leu Ala Ala Val

115 120 125

Glu Lys Pro Phe Val Asp Ile Leu Glu Ser Ala Lys Pro Ile Ala Ala

130 135 140

Gln Gly Tyr Glu Val Lys Ser Trp Ile Thr Asp Asp Cys Asp Ser Thr

145 150 155 160

Gly Ser Gly Arg Phe Arg Asp Val Val Thr Ser Ser Leu Pro Arg Glu

165 170 175

Met Val Arg Glu Gly Leu Val Gly Ala Ala His Lys Gly Gln Lys Asn

180 185 190

Pro Arg Asp Glu Asp Met Glu Met Glu Gly Arg Lys Ser Lys Gln Ser

195 200 205

Ala Leu Cys Asp Glu Glu Thr Val Arg Glu Met Phe Asp Lys Val Leu

210 215 220

Leu Cys Thr Asp Lys Asn Cys Glu Phe His Ser Pro Met Pro Ala Asp

225 230 235 240

Ala Gln Ile Ser Gly Gly Tyr Val Lys Gly Ser Arg Asn Lys Arg Gly

245 250 255

Arg Arg Lys Gly Arg Ser Gly Ser Gly Ala Glu Glu Glu Pro Val Asp

260 265 270

Leu Thr Thr Leu Leu Ile His Cys Ala Gln Ala Ala Ala Ile Asp Asp

275 280 285

His Arg Asn Ser Ser Glu Leu Leu Lys Gln Ile Arg Lys His Ser Ser

290 295 300

Ala Thr Gly Asp Ala Gly Gln Arg Leu Ala His Tyr Phe Ala Asp Gly

305 310 315 320

Leu Glu Ala Arg Leu Ala Gly Ser Gly Ser Ser Ile Tyr Arg Ser Leu

325 330 335

Ala Ala Lys Arg Thr Ser Thr Gly Asp Ile Leu Lys Ala Phe Ser Leu

340 345 350

Tyr Val Lys Ala Cys Pro Phe Arg Ile Leu Ser His Tyr Val Ala Asn

355 360 365

Thr Thr Ile Leu Asn Ala Thr Lys Ser Ala Thr Arg Leu His Ile Ile

370 375 380

Asp Tyr Gly Ile Met Tyr Gly Phe Gln Trp Pro Val Leu Met Gln Arg

385 390 395 400

Leu Ser Lys Arg Pro Gly Gly Pro Pro Tyr Leu Arg Ile Thr Gly Ile

405 410 415

Asp Phe Pro Leu Ser Gly Phe Arg Pro Ala Glu Arg Val Glu Ala Thr

420 425 430

Gly Arg Arg Leu His Glu Tyr Ala Arg Met Phe Asn Val Pro Phe Glu

435 440 445

Tyr Gln Ala Ile Ala Ala Lys Trp Asp Thr Ile Gln Val Lys Asp Leu

450 455 460

Asn Met Lys Ser Asp Glu Phe Val Val Val Asn Cys Leu Tyr Arg Met

465 470 475 480

Arg Asn Met Met Asp Glu Thr Val Thr Asp Asp Ser Pro Arg Thr Arg

485 490 495

Val Leu Asn Thr Ile Arg Lys Leu Asn Pro His Leu Phe Val His Gly

500 505 510

Ile Val Asn Gly Thr Tyr Asn Ala Pro Phe Phe Val Thr Arg Phe Lys

515 520 525

Glu Ala Met Phe Phe Phe Ser Ser Ile Phe Asp Met Leu Glu Ala Asn

530 535 540

Ala Leu Arg Met Asp Glu His Arg Leu Leu Ile Glu Arg Glu Phe Phe

545 550 555 560

Gly Arg Glu Ala Val Asn Val Ile Ala Cys Glu Gly Thr Glu Arg Ile

565 570 575

Glu Arg Pro Glu Thr Tyr Lys Gln Trp Gln Met Arg Asn Leu Arg Ala

580 585 590

Gly Phe Arg Gln Leu Ala Leu Asp Arg Glu Ile Met Lys Arg Ala Arg

595 600 605

Tyr Lys Val Ser Lys Ser Tyr Gln Gly Asp Phe Leu Val Asp Glu Asp

610 615 620

Asn Lys Trp Met Leu Gln Gly Trp Lys Gly Arg Ile Ile Tyr Ala Leu

625 630 635 640

Ser Ala Trp Thr Ser

645

<210> 4

<211> 28

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 4

atggtaccat gataatggac cctcgtcc 28

<210> 5

<211> 28

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 5

atggatccct agctagtcca tgctgaaa 28

<210> 6

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 6

tcaacagctc cgtttacaag g 21

<210> 7

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 7

gcataacagt acaccacgct 20

<210> 8

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 8

aggccaatct tcaaagttgc a 21

<210> 9

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 9

gcaaaatgtc tgtgatccaa gg 22

<210> 10

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 10

tcgcttgagt tgagcttgaa 20

<210> 11

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 11

ttttcactgc ctctgagctg 20

<210> 12

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 12

gtggcacttt gcagatatgg 20

<210> 13

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 13

gcagcttgcc aagtgagtct 20

<210> 14

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 14

cttctgaaga ggccgagaga 20

<210> 15

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 15

tgcagttgcc tgcttattca 20

<210> 16

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 16

ccgatgcaca agatcagaga 20

<210> 17

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 17

gcaccaagcg agatatccat 20

<210> 18

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 18

gacgaacagt ggactacacg ag 22

<210> 19

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 19

gtcgaagggt tgtctgggta 20

<210> 20

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 20

acaactcgca gaatcaag 18

<210> 21

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 21

aattcaccga cactcaac 18

<210> 22

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 22

ggaggaggtg atctggaagg 20

<210> 23

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 23

ccgaggtagg tgaactccag 20

<210> 24

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 24

tgcagaagga acttgtggag 20

<210> 25

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 25

aagagctagt ttgcgggtgt 20

<210> 26

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 26

tccatctcta cgagcagtgc 20

<210> 27

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 27

cgcatcttgg gcttgttgat 20

<210> 28

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 28

tgagggcttg tcacagaaac 20

<210> 29

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 29

gctgatcttc aaacacctga gt 22

<210> 30

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 30

cttgggcgaa aacttaggag a 21

<210> 31

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 31

agcagcatcg tctccttctc 20

<210> 32

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 32

ttggtcgggt gattggagaa 20

<210> 33

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 33

caactgctga tgggtagagc 20

<210> 34

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 34

gagtacttgc actggctggt 20

<210> 35

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 35

gccgagctgc tggaatagaa 20

Claims

1.玉米基因ZmSCL14在调控植物开花期中的应用，其特征在于，所述玉米基因ZmSCL14的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.根据权利要求1所述的玉米基因ZmSCL14在调控植物开花期中的应用，其特征在于，超表达玉米基因ZmSCL14的株系与野生型株系相比具有晚花性状。

3.根据权利要求1所述的玉米基因ZmSCL14在调控植物开花期中的应用，其特征在于，在植物的营养生长阶段，超表达玉米基因ZmSCL14的株系与野生型株系相比，植株生长速度缓慢。

4.根据权利要求1所述的玉米基因ZmSCL14在调控植物开花期中的应用，其特征在于，所述玉米基因ZmSCL14超表达后引起表达量变化的开花相关基因包括FLD、FD、FTL和VRN1。

5.根据权利要求4所述的玉米基因ZmSCL14在调控植物开花期中的应用，其特征在于，超表达玉米基因ZmSCL14的株系中基因FLD、FD、FTL的表达量明显上调且高于野生型植株；基因VRN1的表达量显著下降且低于野生型植株。

6.根据权利要求1所述的玉米基因ZmSCL14在调控植物开花期中的应用，其特征在于，所述植物包括二穗短柄草。