CN112480225B

CN112480225B - GrpE蛋白及其编码基因作为分子靶标在培育抗性植物中的应用

Info

Publication number: CN112480225B
Application number: CN202011388733.9A
Authority: CN
Inventors: 方荣祥; 张玉满; 陈晓英; 肖娜; 王海婷
Original assignee: Institute of Microbiology of CAS
Current assignee: Institute of Microbiology of CAS
Priority date: 2020-12-01
Filing date: 2020-12-01
Publication date: 2022-05-31
Anticipated expiration: 2040-12-01
Also published as: CN112480225A

Abstract

本发明公开了GrpE蛋白及其编码基因作为分子靶标在培育抗性植物中的应用。本发明提供了抑制GrpE基因表达的核酸分子或重组载体在制备抗刺吸式害虫的转基因植物中的应用。本发明还提供了抑制GrpE基因表达的核酸分子或重组载体在制备条纹叶枯病抗性植物中的应用。所述应用是通过抑制作为传播媒介的刺吸式害虫实现的。本发明的发明人在研究水稻‑灰飞虱‑RSV三者互作的过程中，从水稻灰飞虱中发掘了一个新基因GrpE，将水稻灰飞虱GrpE或其同源基因作为分子靶标可用于农作物抗刺吸式害虫的抗性育种，通过RNAi技术抑制昆虫体内GrpE或其同源基因的表达，从而获得对灰飞虱等刺吸式害虫具有抗性的转基因植物。

Description

GrpE蛋白及其编码基因作为分子靶标在培育抗性植物中的应用

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及GrpE蛋白及其编码基因作为分子靶标在培育抗性植物中的应用。

背景技术

植物害虫是危害农作物产量和质量的重要因子，随着农作物单一品种的大规模种植，以及全球气候变暖的影响，作物害虫的危害日趋严重。目前防治害虫的有效措施仍以施用化学农药为主，存在农药残留和环境污染等弊端，而理想的生物防治在实际应用中具有多种局限性。

随着现代生物技术的快速发展，转基因抗虫植物(如棉花，杨树等)已在国内大规模种植，抗虫基因部分替代了常规农药，推动了我国现代生态农业的进程。从最新的国内外专利和研究报道发现，应用于抗虫植物的基因主要有以下几种来源：(1)苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis，Bt)：该菌在芽孢形成过程中产生称为δ-内毒素的杀虫晶体蛋白(Insecticidal Crystal Proteins，ICPs)和非δ-内毒素的杀虫营养蛋白(vegatativeinsecticidal protein，Vip)；大量表达Bt杀虫蛋白的植物具有较理想的抗虫特性；(2)植物蛋白酶抑制剂(Proteinase inhibitors)，凝集素(plant lectins)等也被用于抗虫植物的研究；(3)人工合成的抗虫多肽。在以上多种来源的抗虫基因中，Bt对大食量咀嚼式昆虫(如棉铃虫)因杀虫效果显著而得到广泛应用，但是随着大规模的多代种植，棉铃虫的抗虫性逐年提高，因此需警惕棉铃虫大规模爆发的潜在风险。目前的研究集中于利用Bt基因编码杀虫蛋白的多样性进行多种Bt的组合和优化进一步提高植物抗虫性。

植物刺吸式害虫(如飞虱，蚜虫等)，因其繁殖速度快/周期短等特点，严重危害水稻、棉花、大豆等重要农作物；又因其食量小，缺乏有效抗虫基因，导致这类害虫得不到有效控制。除了自身危害，这类昆虫还经常是多种病毒的传播媒介，例如水稻灰飞虱是危害严重的水稻条纹病毒(Rice stripe virus，RSV)的重要传播媒介，进一步加重了灰飞虱对水稻的危害。目前对刺吸式害虫的防治措施仍以农药为主，因此面对靶基因的相对匮乏，抗刺吸式昆虫育种是现代植物生物技术中面临的巨大挑战，亟待发掘用于防治刺吸式害虫的新型靶标基因。

发明内容

本发明的目的是提供GrpE蛋白及其编码基因作为分子靶标在培育抗性植物中的应用。

本发明提供了抑制GrpE基因表达的核酸分子在制备抗刺吸式害虫的转基因植物中的应用。

本发明还提供了抑制GrpE基因表达的重组载体在制备抗刺吸式害虫的转基因植物中的应用。

本发明还提供了抑制GrpE基因表达的核酸分子在制备条纹叶枯病抗性植物中的应用。所述应用是通过抑制作为传播媒介的刺吸式害虫实现的。

本发明还提供了抑制GrpE基因表达的重组载体在制备条纹叶枯病抗性植物中的应用。所述应用是通过抑制作为传播媒介的刺吸式害虫实现的。

本发明还提供了一种培育抗刺吸式害虫的转基因植物的方法，包括如下步骤：在受体植物中导入抑制GrpE基因表达的核酸分子或抑制GrpE基因表达的重组载体，得到抗刺吸式害虫的转基因植物。

本发明还保护所述方法在防控植物条纹叶枯病中的应用。

所述植物为单子叶植物或双子叶植物。

所述植物为禾本科植物。

所述植物为水稻属植物。

所述植物为水稻。

所述条纹叶枯病为条纹病毒引起的条纹叶枯病。

所述条纹叶枯病为水稻条纹病毒引起的条纹叶枯病。

抑制GrpE基因表达的核酸分子具体可为特异DNA分子Ⅰ或特异DNA分子Ⅱ或特异DNA分子Ⅲ。

抑制GrpE基因表达的重组载体具体可为重组质粒Ⅰ或重组质粒Ⅱ或重组质粒Ⅲ。

本发明还保护特异DNA分子Ⅰ或特异DNA分子Ⅱ或特异DNA分子Ⅲ。

所述特异DNA分子Ⅰ为双链DNA分子，其中具有片段甲和片段乙；所述片段甲和所述片段乙反向互补；所述片段甲如序列表的序列2中第1-702位核苷酸所示。特异DNA分子Ⅰ中，由CaMV35S启动子(P_35S启动子)驱动片段甲和片段乙表达。CaMV35S启动子如序列表的序列7所示。

所述特异DNA分子Ⅱ为双链DNA分子，为如下(c1)或(c2)或(c3)或(c4)：

(c1)表达amiGPa和amiRGPb的DNA分子；amiRGPa如序列表的序列4所示；amiRGPb如序列表的序列6所示；

(c2)具有P_C2-amiGPa-Nos表达盒和P_NSE-amiGPb-Nos表达盒的DNA分子；P_C2-amiGPa-Nos表达盒如序列表的序列11中第7-2647位核苷酸所示；P_NSE-amiGPb-Nos表达盒如序列表的序列11中第2648-5085位核苷酸所示；

(c3)序列表的序列11中第7-5085位核苷酸所示的DNA分子；

(c4)序列表的序列11所示的DNA分子。

特异DNA分子Ⅲ为双链DNA分子，其中由P_COY启动子驱动amiRGPa表达。

P_COY启动子具体如序列表的序列8所示。

本发明还保护重组质粒Ⅰ或重组质粒Ⅱ或重组质粒Ⅲ。

所述重组质粒Ⅰ中具有所述特异DNA分子Ⅰ。

所述重组质粒Ⅱ中具有所述特异DNA分子Ⅱ。

所述重组质粒Ⅲ中具有所述特异DNA分子Ⅲ。

所述重组质粒Ⅰ具体可为实施例中的质粒GP1。

所述重组质粒Ⅱ具体可为实施例中的质粒GP2。

所述重组质粒Ⅲ具体可为实施例中的质粒GP3。

以上任一所述GrpE基因为编码GrpE蛋白的基因。

GrpE蛋白为如下(a1)或(a2)或(a3)：

(a1)序列表中序列1所示的蛋白质；

(a2)将序列表中序列1所示的蛋白质经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与刺吸式害虫发育相关的由其衍生的蛋白质；

(a3)来源于刺吸式害虫且与(a1)所限定的氨基酸序列至少具有75％、至少具有80％、至少具有85％、至少具有90％、至少具有95％、至少具有96％、至少具有97％、至少具有98％或至少具有99％以上同一性且与刺吸式害虫发育相关的蛋白质。

所述GrpE基因为如下(b1)或(b2)或(b3)：

(b1)编码区如序列表中序列2所示的DNA分子；

(b2)来源于刺吸式害虫且与(b1)至少具有75％、至少具有80％、至少具有85％、至少具有90％、至少具有95％、至少具有96％、至少具有97％、至少具有98％或至少具有99％以上同一性且编码所述蛋白质的DNA分子；

(b3)在严格条件下与(b1)限定的核苷酸序列杂交且编码所述蛋白质的DNA分子。

以上任一所述刺吸式害虫具体可为灰飞虱。

刺吸式害虫以及由其传播的病毒病害对农业危害严重，快速发展的生物技术将为刺吸式害虫的有效防治提供新途径。本发明的发明人在研究植物(水稻)-昆虫媒介(灰飞虱)-病毒(RSV)三者互作的过程中，从水稻灰飞虱(Laodelphax striatellus)中发掘了一个新基因GrpE(GP)。灰飞虱攻虫实验结果表明，携带GP-RNAi靶标的转基因水稻的抗虫性明显高于野生型植株以及转化空载体植株。因此，将水稻灰飞虱GrpE或其同源基因作为分子靶标可用于农作物抗刺吸式害虫的抗性育种，通过RNAi技术抑制昆虫体内GrpE或其同源基因的表达，从而获得对灰飞虱等刺吸式害虫具有抗性的转基因植物。本发明具有重要应用价值。

附图说明

图1为amiRGPa和amiRGPb的靶序列区域示意图以及质粒GP1、质粒GP2、质粒GP3、质粒GP4的结构示意图。

图2为实施例2中各个独立株系的灰飞虱存活率结果。

图3为质粒GP1、质粒GP2、质粒GP3和质粒GP4获得抗虫独立株系的百分比。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。以下提供的实施例可作为本技术领域普通技术人员进行进一步改进的指南，并不以任何方式构成对本发明的限制。

下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。实施例中的各个重组质粒，均已进行测序验证。如无特殊说明，以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。

植物表达载体pCAMBIA-HAN记载于如下文献：Zhang Y.,Yan Y.,Wang L.,YangK.,Xiao N.,Liu Y.,Fu Y.,Sun Z.,Fang R.and Chen X.(2012)A novel rice gene,NRRresponds to macronutrient deficiency and regulates root growth.MolecularPlant,5(1):63-72.。

植物表达载体pCAMBIA-1300-D4S记载于如下文献：Zhang Y.,Yan Y.,Wang L.,Yang K.,Xiao N.,Liu Y.,Fu Y.,Sun Z.,Fang R.and Chen X.(2012)A novel ricegene,NRR responds to macronutrient deficiency and regulates rootgrowth.Molecular Plant,5(1):63-72.。

植物表达载体pCAMBIA-1300-SGN记载于如下文献：Zhang Y.,Yan Y.,Wang L.,Yang K.,Xiao N.,Liu Y.,Fu Y.,Sun Z.,Fang R.and Chen X.(2012)A novel ricegene,NRR responds to macronutrient deficiency and regulates rootgrowth.Molecular Plant,5(1):63-72.。将序列表中序列12所示的DNA分子插入植物表达载体pCAMBIA-1300-SGN的PstI和BamHI酶切位点间(即替换掉CaMV 35S启动子)，得到的重组质粒命名为质粒p130-NSE。

发明人前期研究发现，灰飞虱(L.striatellus)的GrpE基因是灰飞虱幼虫转换为成虫期间的关键基因，从而认为GrpE基因可作为防控灰飞虱的潜在靶标基因，将抑制GrpE基因表达的核酸分子导入植物，得到的转基因植物具有灰飞虱抗性。灰飞虱的cDNA中GrpE基因的开放阅读框如序列表的序列2所示，编码序列表的序列1所示的蛋白质。

实施例1、重组质粒的构建

amiRGPa和amiRGPb的靶序列区域示意图见图1的A。

质粒GP1、质粒GP2、质粒GP3、质粒GP4的结构示意图见图1的B。

一、GrpE基因沉默植物表达载体的构建(GrpE-RNAi)

1、制备序列表的序列2所示的双链DNA分子。

2、以步骤1的DNA分子为模板，采用GPa-Eco和GPa-kpn组成的引物对进行PCR扩增，回收PCR扩增产物。

GPa-Eco：5'-CGGAATTCATGGGGCCGATATCGATGTGTC-3’；

GPa-kpn：5'-GGGGTACCGGTAGCTTTTGCTTTTGAAATTCCT-3’。

3、取步骤2得到的PCR扩增产物，采用限制性内切酶EcoR I和Kpn I进行双酶切，回收酶切产物。

4、以步骤1的DNA分子为模板，采用GPb-Bam和GPb-Xba组成的引物对进行PCR扩增，回收PCR扩增产物。

GPb-Bam：5'-CGGGATCCGGTAGCTTTTGCTTTTGAAATTCCT-3’；

GPb-Xba：5'-GCTCTAGAATGGGGCCGATATCGATGTGTC-3’。

5、取步骤4得到的PCR扩增产物，采用限制性内切酶Bam HI和Xba I进行双酶切，回收酶切产物。

6、以植物表达载体pCAMBIA-HAN为出发载体，通过两组双酶切反应(EcoRI/Kpn I酶切反应，Bam HI/Xba I酶切反应)，插入步骤3得到的酶切产物和步骤5得到的酶切产物，得到GrpE基因沉默植物表达载体，又称为质粒GrpE-RNAi或质粒GP1。质粒GP1中，由CaMV35S启动子(P_35S启动子)驱动目的片段表达。CaMV35S启动子如序列表的序列7所示。

二、GrpE基因的人工小RNA植物表达载体的构建

1、取序列表的序列3所示的双链DNA分子，采用限制性内切酶Xba I和Sac I进行双酶切，回收酶切产物。序列表的序列3所示的双链DNA分子表达后得到amiRGPa，amiRGPa如序列表的序列4所示。

2、以植物表达载体pCAMBIA-1300-D4S为出发载体，通过Xba I/Sac I酶切反应，插入步骤1得到的酶切产物，得到质粒p130-GPa。质粒p130-GPa中，由P_35S启动子驱动amiRGPa表达。P_35S启动子为组成型启动子。

3、用P_COY启动子(如序列表的序列8所示)取代质粒p130-GPa的Pst I和Spe I酶切位点之间的小片段，得到质粒p130-P_COY-GPa，又称为质粒GP3。质粒GP3中，由P_COY启动子驱动amiRGPa表达。P_COY启动子为植物维管束特异启动子。

4、用P_C2启动子(如序列表的序列9所示)取代质粒p130-GPa的Hind III和Xba I酶切位点之间的小片段，得到质粒p130-P_C2-GPa。质粒p130-P_C2-GPa中，由P_C2启动子驱动amiRGPa表达。P_C2启动子为叶脉特异启动子。质粒p130-P_C2-GPa中，具有P_C2-amiGPa-Nos表达盒，P_C2-amiGPa-Nos表达盒如序列表的序列11中第7-2647位核苷酸所示。

5、取序列表的序列5所示的双链DNA分子，采用限制性内切酶Sma I和Sac I进行双酶切，回收酶切产物。序列表的序列5所示的双链DNA分子表达后得到amiRGPb，amiRGPb如序列表的序列6所示。

6、以质粒p130-NSE为出发载体，通过Sma I/Sac I酶切反应，插入步骤5得到的酶切产物，得到质粒p130-P_NSE-GPb。质粒p130-P_NSE-GPb中，由P_NSE启动子驱动amiRGPb表达。P_NSE启动子为绿色组织特异启动子。质粒p130-P_NSE-GPb中，具有P_NSE-amiGPb-Nos表达盒，P_NSE-amiGPb-Nos表达盒如序列表的序列11中第2648-5085位核苷酸所示。

7、用P_UBI启动子(如序列表的序列10所示)取代质粒p130-P_NSE-GPb的Hind III和Bam HI酶切位点之间的小片段，得到质粒p130-Pubi-GPb，又称为质粒GP4。质粒GP4中，由P_UBI启动子驱动amiRGPb表达。P_UBI启动子为组成型高表达启动子。

8、取质粒p130-P_NSE-GPb，用限制性内切酶Eco RI进行酶切，回收P_NSE-amiGPb-Nos表达盒。

9、取质粒p130-P_C2-GPa，用限制性内切酶Eco RI进行酶切，回收线性化质粒。

10、将步骤8得到的P_NSE-amiGPb-Nos表达盒和步骤9得到的线性化质粒连接，得到质粒p130-P_C2NSE-GPa+b，又称为质粒GP2。质粒GP2中，具有序列表的序列11所示的特异DNA分子。序列表的序列11中，第7-2647位核苷酸为P_C2-amiGPa-Nos表达盒(第7-2092位核苷酸为P_C2启动子，第2105-2376位核苷酸编码amiRGPa，第2383-2647位核苷酸为Nos终止子)，第2648-5085位核苷酸为P_NSE-amiGPb-Nos表达盒(第2648-4537位核苷酸为P_NSE启动子，第4543-4814位核苷酸表达amiRGPb，第4821-5085位核苷酸为Nos终止子)。

实施例2、转基因水稻的制备和鉴定

一、转基因水稻的制备

1、将重组质粒导入农杆菌EHA105，得到重组农杆菌。

2、将重组农杆菌与水稻日本晴的成熟胚愈伤组织进行共培养，然后进行抗性筛选(抗性筛选采用50mg/L浓度的潮霉素)、然后依次进行预分化、分化、生根，得到T₀代再生植株。

3、取T₀代再生植株，自交并收获种子。

4、取步骤3得到的种子，采用含50mg/L潮霉素的培养基培养，筛选可以正常生长的T₁代植株。

5、培养正常生长的T₁代转基因植株，自交并收获种子。

6、取步骤5得到的种子，采用含50mg/L潮霉素的培养基培养，筛选可以正常生长的T₂代植株。

7、培养正常生长的T₂代转基因植株，自交并收获种子。

8、抽样取步骤7得到的种子，采用含50mg/L潮霉素的培养基培养。

对于某一T₂代的单株种子，如果其抽样检测的种子(大于等于30粒)均可在含有潮霉素的培养基上正常生长为植株，该T₂代植株为纯合转基因植株，其自交后代为独立纯系。

采用质粒GP1作为重组质粒进行上述步骤，获得了8个独立纯系，依次命名为纯系GP1-1、纯系GP1-2、纯系GP1-3、纯系GP1-4、纯系GP1-5、纯系GP1-6、纯系GP1-7、纯系GP1-8。

采用质粒GP2作为重组质粒进行上述步骤，获得了19个独立纯系，依次命名为纯系GP2-1、纯系GP2-2、纯系GP2-3、纯系GP2-4、纯系GP2-5、纯系GP2-6、纯系GP2-7、纯系GP2-8、纯系GP2-9、纯系GP2-10、纯系GP2-11、纯系GP2-12、纯系GP2-13、纯系GP2-14、纯系GP2-15、纯系GP2-16、纯系GP2-17、纯系GP2-18、纯系GP2-19。

采用质粒GP3作为重组质粒进行上述步骤，获得了12个独立纯系，依次命名为纯系GP3-1、纯系GP3-2、纯系GP3-3、纯系GP3-4、纯系GP3-5、纯系GP3-6、纯系GP3-7、纯系GP3-8、纯系GP3-9、纯系GP3-10、纯系GP3-11、纯系GP3-12。

采用质粒GP4作为重组质粒进行上述步骤，获得了6个独立纯系，依次命名为纯系GP4-1、纯系GP4-2、纯系GP4-3、纯系GP4-4、纯系GP4-5、纯系GP4-6。

采用植物表达载体pCAMBIA-1300进行上述步骤，获得转空载体株系。

二、植物对灰飞虱的抗性鉴定

鉴定获得的各个独立纯系的T₂代植株的种子长成的植株对灰飞虱的抗性。将转空载体株系的T₂代植株的种子长成的植株作为阴性对照，用EV表示。将水稻日本晴作为野生对照。

1、植物培养：将T₂代植株的种子在自来水中浸泡3天，然后播种于含有50ml培养基质(蛭石:营养土；V:V/5:1)的玻璃瓶中，以100目尼龙布封口，在温室(25℃；16h光照/8h黑暗)中培养，每周从上部洒水。

2、灰飞虱接种实验：将3龄灰飞虱幼虫接种于4d水稻幼苗上(8头/4株/瓶)，7瓶/独立纯系，共计28株/独立纯系。接种灰飞虱幼虫的水稻幼苗继续培养14天，然后统计灰飞虱的存活率。

可以观察到，食用转基因水稻的灰飞虱在1周后开始有死亡发生。

存活率结果见图2。图2中，以EV为对照，*,**表示SPSS统计分析，P＝0.5,0.01时灰飞虱存活率分别呈现显著和极显著差异。食用阴性对照的灰飞虱存活率为91.88％-97.92％。食用野生对照的灰飞虱存活率与食用阴性对照的灰飞虱存活率无显著差异。转化质粒GP1的水稻幼苗对灰飞虱表现最明显的抗性，从8个独立株系中获得了4个具有明显抗虫性的独立株系(即纯系GP1-1、纯系GP1-2、纯系GP1-5、纯系GP1-8)，灰飞虱存活率为60.04-78.93％。转化质粒GP2的水稻幼苗，从19个独立纯系中获得了2个具有明显抗虫性的独立株系(即纯系GP2-1、纯系GP2-14)。转化GP3质粒的水稻幼苗，从12个独立纯系中获得了1个具有明显抗虫性的独立株系(即纯系GP3-2)。转化质粒GP4的水稻幼苗，未获得具有明显抗虫性的独立株系。质粒GP1、质粒GP2、质粒GP3和质粒GP4获得抗虫独立株系的百分比比较见图3。结果表明：由CaMV 35S启动子驱动GrpE-RNAi长片段shRNA沉默载体的转基因水稻具有明显的抗灰飞虱效果；从转化由组织特异启动子P_C2，P_NSE表达2个靶点的水稻中也筛选获得了具有明显抗虫的水稻株系。

本发明所获得具明显抗虫效果的转基因水稻具有正常的农艺性状。

本发明研究表明灰飞虱食用携带GrpE-RNAi靶标的转基因水稻仅1-2周即表现明显抗虫效果，因此水稻灰飞虱GrpE基因可作为抗刺吸式昆虫的有效靶基因应用于植物抗虫育种，具有重要应用价值。

以上对本发明进行了详述。对于本领域技术人员来说，在不脱离本发明的宗旨和范围，以及无需进行不必要的实验情况下，可在等同参数、浓度和条件下，在较宽范围内实施本发明。虽然本发明给出了特殊的实施例，应该理解为，可以对本发明作进一步的改进。总之，按本发明的原理，本申请欲包括任何变更、用途或对本发明的改进，包括脱离了本申请中已公开范围，而用本领域已知的常规技术进行的改变。按以下附带的权利要求的范围，可以进行一些基本特征的应用。

序列表

<110> 中国科学院微生物研究所

<120> GrpE蛋白及其编码基因作为分子靶标在培育抗性植物中的应用

<130> GNCYX202824

<160> 12

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 234

<212> PRT

<213> Laodelphax striatellus

<400> 1

Met Gly Pro Ile Ser Met Cys Leu Arg Leu Gly Arg Leu Ala Val Asp

1 5 10 15

Asn Ser Ser His Tyr Gly Val Tyr Ser Ala Ile Ala Thr Asn Leu Arg

20 25 30

His Ala Ser Val Leu Pro Thr Arg Ile Gly Val Arg His Asn Thr Thr

35 40 45

Ala Ser Glu Glu Ala Lys Asn Thr Glu Asn Glu Asn Leu Ser Glu Thr

50 55 60

Glu Lys Glu Leu Lys Ser Lys Leu Asp Asn Ile Thr Glu Glu Phe Glu

65 70 75 80

Lys Phe Lys Val Gln Ser Gln Gln Thr Leu Asp Met Trp Lys Arg Gly

85 90 95

Val Ala Asp Ala Glu Asn Ala Arg Lys Arg Thr Glu Lys Gln Leu Val

100 105 110

Asp Thr Arg Gln Phe Ala Ile Gln Lys Phe Ala Lys Asp Ile Leu Glu

115 120 125

Val Ala Asp Cys Leu Ser Arg Ala Ile Asp Ser Val Pro Lys Thr Glu

130 135 140

Ile Thr Asp Gln Asn Pro His Leu Lys Asn Leu Tyr Glu Gly Leu Thr

145 150 155 160

Leu Thr Asp Ser Glu Leu His Arg Val Phe Arg Thr His Gly Leu Ala

165 170 175

Gln Ile Asn Pro Ile Gly Glu Leu Phe Asp Pro Asn Tyr His Gln Ala

180 185 190

Leu Phe Asp Lys Glu Asp Glu Glu Lys Lys Pro Gly Thr Val Ile Val

195 200 205

Val Gln Lys Val Gly Tyr Lys Leu Asn Glu Arg Val Ile Arg Pro Ala

210 215 220

Leu Val Gly Ile Ser Lys Ala Lys Ala Thr

225 230

<210> 2

<211> 705

<212> DNA

<213> Laodelphax striatellus

<400> 2

atggggccga tatcgatgtg tctgcgattg ggacgattgg ctgtggacaa tagctctcat 60

tatggggttt actcagctat tgctacaaat ttaaggcatg cttctgttct tccaaccaga 120

ataggcgtaa gacacaacac aacagcttct gaagaagcta agaataccga aaatgaaaat 180

ttgtcagaaa ccgagaaaga actcaaatcc aaattagata atatcactga agaatttgaa 240

aaattcaaag tccaatcgca gcaaactttg gatatgtgga agagaggtgt agcagatgct 300

gaaaacgctc ggaaaagaac cgaaaaacag ctggttgata caagacagtt cgctattcag 360

aaattcgcca aagatattct ggaagtggcc gactgtttgt ccagagcaat cgatagcgtt 420

ccaaaaacgg aaatcactga ccagaatcca catttgaaga atctctatga aggattaaca 480

ctaactgact cggagctcca cagagtattt aggactcatg gcttggcaca aatcaatcca 540

attggtgaac tgttcgatcc caactatcat caggccttat ttgataagga ggatgaggaa 600

aagaagccag gaactgttat tgttgtgcag aaagtaggat acaaactgaa tgaacgtgtc 660

atacgaccag cattggtagg aatttcaaaa gcaaaagcta cctaa 705

<210> 3

<211> 290

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

tctagaacta gtgttgtgga cgttgctatt gctacaaatt taaaaggggt gttgctgtgg 60

gtcgattgag ctgctgggtc atggatcccg ttagcctact ccatgttcat cattcagctc 120

gagatctgaa agaaactact ccaatttata ctaatagtat gtgtgtagat aggaaaatga 180

tggagtactc gttgttggga taggcttatg gcttgcatgc cccaggagct gcatcaaccc 240

tacatggacc ctcttaaatt tgtagcaata gctgcatctt ttgtgagctc 290

<210> 4

<211> 272

<212> RNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 4

guuguggacg uugcuauugc uacaaauuua aaaggggugu ugcugugggu cgauugagcu 60

gcugggucau ggaucccguu agccuacucc auguucauca uucagcucga gaucugaaag 120

aaacuacucc aauuuauacu aauaguaugu guguagauag gaaaaugaug gaguacucgu 180

uguugggaua ggcuuauggc uugcaugccc caggagcugc aucaacccua cauggacccu 240

cuuaaauuug uagcaauagc ugcaucuuuu gu 272

<210> 5

<211> 283

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 5

cccgggttgt ggacgttgac tgtttgtcca gagcaaaagg ggtgttgctg tgggtcgatt 60

gagctgctgg gtcatggatc ccgttagcct actccatgtt catcattcag ctcgagatct 120

gaaagaaact actccaattt atactaatag tatgtgtgta gataggaaaa tgatggagta 180

ctcgttgttg ggataggctt atggcttgca tgccccagga gctgcatcaa ccctacatgg 240

accctcttgc tctggacaaa cagtctgcat cttttgtgag ctc 283

<210> 6

<211> 272

<212> RNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 6

guuguggacg uugacuguuu guccagagca aaaggggugu ugcugugggu cgauugagcu 60

gcugggucau ggaucccguu agccuacucc auguucauca uucagcucga gaucugaaag 120

aaacuacucc aauuuauacu aauaguaugu guguagauag gaaaaugaug gaguacucgu 180

uguugggaua ggcuuauggc uugcaugccc caggagcugc aucaacccua cauggacccu 240

cuugcucugg acaaacaguc ugcaucuuuu gu 272

<210> 7

<211> 1346

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 7

tcgacgaatt aattccaatc ccacaaaaat ctgagcttaa cagcacagtt gctcctctca 60

gagcagaatc gggtattcaa caccctcata tcaactacta cgttgtgtat aacggtccac 120

atgccggtat atacgatgac tggggttgta caaaggcggc aacaaacggc gttcccggag 180

ttgcacacaa gaaatttgcc actattacag aggcaagagc agcagctgac gcgtacacaa 240

caagtcagca aacagacagg ttgaacttca tccccaaagg agaagctcaa ctcaagccca 300

agagctttgc taaggcccta acaagcccac caaagcaaaa agcccactgg ctcacgctag 360

gaaccaaaag gcccagcagt gatccagccc caaaagagat ctcctttgcc ccggagatta 420

caatggacga tttcctctat ctttacgatc taggaaggaa gttcgaaggt gaaggtgacg 480

acactatgtt caccactgat aatgagaagg ttagcctctt caatttcaga aagaatgctg 540

acccacagat ggttagagag gcctacgcag caggtctcat caagacgatc tacccgagta 600

acaatctcca ggagatcaaa taccttccca agaaggttaa agatgcagtc aaaagattca 660

ggactaattg catcaagaac acagagaaag acatatttct caagatcaga agtactattc 720

cagtatggac gattcaaggc ttgcttcata aaccaaggca agtaatagag attggagtct 780

ctaaaaaggt agttcctact gaatctaagg ccatgcatgg agtctaagat tcaaatcgag 840

gatctaacag aactcgccgt gaagactggc gaacagttca tacagagtct tttacgactc 900

aatgacaaga agaaaatctt cgtcaacatg gtggagcacg acactctggt ctactccaaa 960

aatgtcaaag atacagtctc agaagaccaa agggctattg agacttttca acaaaggata 1020

atttcgggaa acctcctcgg attccattgc ccagctatct gtcacttcat cgaaaggaca 1080

gtagaaaagg aaggtggctc ctacaaatgc catcattgcg ataaaggaaa ggctatcatt 1140

caagatctct ctgccgacag tggtcccaaa gatggacccc cacccacgag gagcatcgtg 1200

gaaaaagaag acgttccaac cacgtcttca aagcaagtgg attgatgtga catctccact 1260

gacgtaaggg atgacgcaca atcccactat ccttcgcaag acccttcctc tatataagga 1320

agttcatttc atttggagag gacacg 1346

<210> 8

<211> 886

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 8

gatatcggca aattggtgca accactcaga caaaagatgg caccaacagg agacaagaga 60

atgaatccag aaacatggaa gatggtaaga cagataaaag aaaaggtgaa aaatctccct 120

gatcttcagt taccacctaa agattcattc atcataatag agacggatgg ttgtatgact 180

ggctggggag ccgtctgcaa atggaaaatg tcaaagcatg atccaagaag caccgaaaga 240

atttgtgcct atgctagtgg atcattcaat ccaataaaat caaccatcga tgcagagatt 300

caggcggcaa tccatggcct ggataaattc aaaatttatt atcttgataa aaaggagctc 360

ataattcgct cagactgtga agcaattatc aaattttaca acaagacgaa cgaaaataag 420

ccgtctagag ttagatggtt aacattttca gatttcttaa caggtcttgg aatcacagtt 480

acattcgagc acatagatgg aaagcataat ggcttagcag atgctctatc aagaatgata 540

aatttcattg tggagaaaaa tgatgaatct ccatacaggt tcacttcatc agtagaggac 600

gcactaaagg tctgcaatga tgatcacgga agaaatttga tatccgccgt catcaatgac 660

atcatcacag tactgaggag atgaatactt agccatgaag tagcgtgcga atattaccta 720

tgcctttatt cgcagcgtta gtggcactga aaggcataaa gtttgttcgt tcttatcaaa 780

aacgaatctt atctttgtaa cttggttacc cggtatgccg gttccctagc tttatttcct 840

tatttaagca cttgtgtagt agcttagaaa accaacacaa caacac 886

<210> 9

<211> 2086

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 9

acagcatttc ccacggttat cacccctggg ttctggctgc tcagagcagc aagagccaca 60

gcattgtttg ttccattgtt aaactgaaaa tggactaatc cttgtggaaa cacaaacaca 120

tcacccttgt taagaacctt ggtgaacaac ttattctcgg ggttcgatat cacgaagccg 180

acatagagag atccttcgag aacggtcggg atctcggtgg cacgtggatg agtgtgaggc 240

gggttgaggc cgttgggcgc atagtcgatg cggacgaggg agacgcccat ggtgttcaga 300

cccgggatct gtgcaacgtt gacggtggta acgttggatc cctgcttgtt ggtggtgttg 360

ccggccatgt ggaggccgga gaagaagaag tcgccggcga caacgtcctt ggcgtccttg 420

caagggaacc catttacacg cactgcatat ggatccgtga acagaatcat cagtatggtc 480

agtcacacaa aattacagta tatatatgcg gagttcttgc agatcgagta ccttgagaca 540

tcttgtcgac gacgcagaag tcctgaagaa ggccaggatc ggaggcgatg gcgccatgag 600

agcaccacag agccaagagg gcaacgacag caagctgctg gaggaagcag gcgccaacag 660

cagccatagc tggagcctgg aggaggcaga gagttctcta tagaaaagaa tacttatggt 720

atagcagatt gctctgatga tatatatatt gtgatgaact gatgatgaag aatgtcatgg 780

attgagagga aagctggtat ttataggggg agttcaggtt tcagaatagc ctattgaact 840

ctgaaatctc tggtaatgat tgtgatgaca gagaatattg tctgtctgtg catgccatgc 900

atgcgtcgta cagcaccaag aacgagtcac tgctagctag tagctagata ggaagaaggc 960

gtcatacata aaatacataa tattgcgtgg atgggcaacc tgcagtctgc agatacatat 1020

acctatctat cctgaaataa atcttattaa tgttatcata catgctttgt gcttgaagaa 1080

gtctaagcca tggatgagta ctgtatctgc agacttagca gccgtggcta ttaatgttgt 1140

ccaaggtgga tatatggatc atattaattc tttactggtt tgctgtttgc cggccggcct 1200

gatcatcgat tgacaatggt ccgatctcca ttgtaatatt cttatctcat catagcaatt 1260

aaaattaaca ccatatttgt tccggagaaa aatgcacgta aggaaataat aatgcttgct 1320

tttcattgct tgcttccttc caagaagacg ggattaaaac tccttcgacc aaccgaaatg 1380

acagaggatt gactacacgc ctatactatc tacaaaatta tgcctaatta aacgttggat 1440

ataagaggac ggactcccat atcaaaattt attaagactc tgcatgcctt gaaaccgagt 1500

acatcgacta atccacacct tgttgtggtg ctaactgctg catgcctttc tcaatgataa 1560

tgatacctaa ttaaaacgta gttttcccaa acagaatttg ttaaccgaac gacgaacgcg 1620

taatgcatag ccattattaa attgttgctt gacgtaattt gtttaagcag gtgccgttac 1680

catcgagtcc acctggagag agcacaattt acacatgatg aagaatcagt cagaagctat 1740

attagcttct tactgaattt gctgtagccg ctgctgcagg caggccacaa cacgtttatt 1800

cagacttgtt ccaaattacc agagaattgg cgtagaccat ttcttcaaac ctcaatacat 1860

attaaacatc caattaactt tctcaacaca aagcaagcac aagccagctt gatcctccta 1920

ctctactcca tctctatata tactgggtat ctctcacccc gtttgaagca cacagcaaag 1980

catcatcatc agttcatcac atcacaagaa actttgcgtt gcatcctttt gtttcctgct 2040

aaaattgaca cgcacttgat ttagtgatta gtgtcctaaa ctccta 2086

<210> 10

<211> 1997

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 10

ctagtgcaga agtaacacca aacaacaggg tgagcatcga caaaagaaac agtaccaagc 60

aaataaatag cgtatgaagg cagggctaaa aaaatccaca tatagctgct gcatatgcca 120

tcatccaagt atatcaagat caaaataatt ataaaacata cttgtttatt ataatagata 180

ggtactcaag gttagagcat atgaatagat gctgcatatg ccatcatgta tatgcatcag 240

taaaacccac atcaacatgt atacctatcc tagatcgata tttccatcca tcttaaactc 300

gtaactatga agatgtatga cacacacata cagttccaaa attaataaat acaccaggta 360

gtttgaaaca gtattctact ccgatctaga acgaatgaac gaccgcccaa ccacaccaca 420

tcatcacaac caagcgaaca aaaagcatct ctgtatatgc atcagtaaaa cccgcatcaa 480

catgtatacc tatcctagat cgatatttcc atccatcatc ttcaattcgt aactatgaat 540

atgtatggca cacacataca gatccaaaat taataaatcc accaggtagt ttgaaacaga 600

attctactcc gatctagaac gaccgcccaa ccagaccaca tcatcacaac caagacaaaa 660

aaaagcatga aaagatgacc cgacaaacaa gtgcacggca tatattgaaa taaaggaaaa 720

gggcaaacca aaccctatgc aacgaaacaa aaaaaatcat gaaatcgatc ccgtctgcgg 780

aacggctaga gccatcccag gattccccaa agagaaacac tggcaagtta gcaatcagaa 840

cgtgtctgac gtacaggtcg catccgtgta cgaacgctag cagcacggat ctaacacaaa 900

cacggatcta acacaaacat gaacagaagt agaactaccg ggccctaacc atggaccgga 960

acgccgatct agagaaggta gagagggggg gggggggagg acgagcggcg taccttgaag 1020

cggaggtgcc gacgggtgga tttgggggag atctggttgt gtgtgtgtgc gctccgaaca 1080

acacgaggtt ggggaaagag ggtgtggagg gggtgtctat ttattacggc gggcgaggaa 1140

gggaaagcga aggagcggtg ggaaaggaat cccccgtagc tgccgtgccg tgagaggagg 1200

aggaggccgc ctgccgtgcc ggctcacgtc tgccgctccg ccacgcaatt tctggatgcc 1260

gacagcggag caagtccaac ggtggagcgg aactctcgag aggggtccag aggcagcgac 1320

agagatgccg tgccgtctgc ttcgcttggc ccgacgcgac gctgctggtt cgctggttgg 1380

tgtccgttag actcgtcgac ggcgtttaac aggctggcat tatctactcg aaacaagaaa 1440

aatgtttcct tagttttttt aatttcttaa agggtatttg tttaattttt agtcacttta 1500

ttttattcta ttttatatct aaattattaa ataaaaaaac taaaatagag ttttagtttt 1560

cttaatttag aggctaaaat agaataaaat agatgtacta aaaaaattag tctataaaaa 1620

ccattaaccc taaaccctaa atggatgtac taataaaatg gatgaagtat tatataggtg 1680

aagctatttg caaaaaaaaa ggagaacaca tgcacactaa aaagataaaa ctgtagagtc 1740

ctgttgtcaa aatactcaat tgtcctttag accatgtcta actgttcatt tatatgattc 1800

tctaaaacac tgatattatt gtagtactat agattatatt attcgtagag taaagtttaa 1860

atatatgtat aaagatagat aaactgcact tcaaacaagt gtgacaaaaa aaatatgtgg 1920

taatttttta taacttagac atgcaatgct cattatctct agagaggggc acgaccgggt 1980

cacgctgcac tgcacta 1997

<210> 11

<211> 5091

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 11

aagcttacag catttcccac ggttatcacc cctgggttct ggctgctcag agcagcaaga 60

gccacagcat tgtttgttcc attgttaaac tgaaaatgga ctaatccttg tggaaacaca 120

aacacatcac ccttgttaag aaccttggtg aacaacttat tctcggggtt cgatatcacg 180

aagccgacat agagagatcc ttcgagaacg gtcgggatct cggtggcacg tggatgagtg 240

tgaggcgggt tgaggccgtt gggcgcatag tcgatgcgga cgagggagac gcccatggtg 300

ttcagacccg ggatctgtgc aacgttgacg gtggtaacgt tggatccctg cttgttggtg 360

gtgttgccgg ccatgtggag gccggagaag aagaagtcgc cggcgacaac gtccttggcg 420

tccttgcaag ggaacccatt tacacgcact gcatatggat ccgtgaacag aatcatcagt 480

atggtcagtc acacaaaatt acagtatata tatgcggagt tcttgcagat cgagtacctt 540

gagacatctt gtcgacgacg cagaagtcct gaagaaggcc aggatcggag gcgatggcgc 600

catgagagca ccacagagcc aagagggcaa cgacagcaag ctgctggagg aagcaggcgc 660

caacagcagc catagctgga gcctggagga ggcagagagt tctctataga aaagaatact 720

tatggtatag cagattgctc tgatgatata tatattgtga tgaactgatg atgaagaatg 780

tcatggattg agaggaaagc tggtatttat agggggagtt caggtttcag aatagcctat 840

tgaactctga aatctctggt aatgattgtg atgacagaga atattgtctg tctgtgcatg 900

ccatgcatgc gtcgtacagc accaagaacg agtcactgct agctagtagc tagataggaa 960

gaaggcgtca tacataaaat acataatatt gcgtggatgg gcaacctgca gtctgcagat 1020

acatatacct atctatcctg aaataaatct tattaatgtt atcatacatg ctttgtgctt 1080

gaagaagtct aagccatgga tgagtactgt atctgcagac ttagcagccg tggctattaa 1140

tgttgtccaa ggtggatata tggatcatat taattcttta ctggtttgct gtttgccggc 1200

cggcctgatc atcgattgac aatggtccga tctccattgt aatattctta tctcatcata 1260

gcaattaaaa ttaacaccat atttgttccg gagaaaaatg cacgtaagga aataataatg 1320

cttgcttttc attgcttgct tccttccaag aagacgggat taaaactcct tcgaccaacc 1380

gaaatgacag aggattgact acacgcctat actatctaca aaattatgcc taattaaacg 1440

ttggatataa gaggacggac tcccatatca aaatttatta agactctgca tgccttgaaa 1500

ccgagtacat cgactaatcc acaccttgtt gtggtgctaa ctgctgcatg cctttctcaa 1560

tgataatgat acctaattaa aacgtagttt tcccaaacag aatttgttaa ccgaacgacg 1620

aacgcgtaat gcatagccat tattaaattg ttgcttgacg taatttgttt aagcaggtgc 1680

cgttaccatc gagtccacct ggagagagca caatttacac atgatgaaga atcagtcaga 1740

agctatatta gcttcttact gaatttgctg tagccgctgc tgcaggcagg ccacaacacg 1800

tttattcaga cttgttccaa attaccagag aattggcgta gaccatttct tcaaacctca 1860

atacatatta aacatccaat taactttctc aacacaaagc aagcacaagc cagcttgatc 1920

ctcctactct actccatctc tatatatact gggtatctct caccccgttt gaagcacaca 1980

gcaaagcatc atcatcagtt catcacatca caagaaactt tgcgttgcat ccttttgttt 2040

cctgctaaaa ttgacacgca cttgatttag tgattagtgt cctaaactcc tatctagaac 2100

tagtgttgtg gacgttgcta ttgctacaaa tttaaaaggg gtgttgctgt gggtcgattg 2160

agctgctggg tcatggatcc cgttagccta ctccatgttc atcattcagc tcgagatctg 2220

aaagaaacta ctccaattta tactaatagt atgtgtgtag ataggaaaat gatggagtac 2280

tcgttgttgg gataggctta tggcttgcat gccccaggag ctgcatcaac cctacatgga 2340

ccctcttaaa tttgtagcaa tagctgcatc ttttgtgagc tcgaatttcc ccgatcgttc 2400

aaacatttgg caataaagtt tcttaagatt gaatcctgtt gccggtcttg cgatgattat 2460

catataattt ctgttgaatt acgttaagca tgtaataatt aacatgtaat gcatgacgtt 2520

atttatgaga tgggttttta tgattagagt cccgcaatta tacatttaat acgcgataga 2580

aaacaaaata tagcgcgcaa actaggataa attatcgcgc gcggtgtcat ctatgttact 2640

agatcgggaa ttctctaaca caagaaaaga aaaaagatat caatatataa aatgaaactt 2700

gctgaagttt tgcatccttt tccataaaat acagagggaa agagacaaat gacatggtca 2760

acatagatcc aaagagaaaa aaacaccagg caatcttatc atattgatca cacttttgct 2820

gatgaaacat cagatgacac tatgacagca acctctctcc aaaataaatt cgtataaact 2880

gaaaccgatg gagaaatggt ccttgattat tacaggtatc cacaagagca acaaggaaag 2940

attgtttttt taaaaaaaca agaacaagga ggtagatata tagtagaaga aagtaaaaca 3000

ggatacggcg aaattcaggg ggctgtggcc tccatttggc gcaaaatcct gcggcctgcc 3060

gcataaatgc aaaccatgta acgcaacctg tcggctcatc gatctgctcg tattggatgg 3120

ataagcatcc ccttgcacct gggtcaaaca ctcaaaacga ccctcttctg ggaaccttgt 3180

atttttctct atttgtaaac agatcctccg gttttttatg ctttatataa aagcaggatg 3240

ctttctcttt ttctttttta aaaaataaac taaaaaagac caccactagc atcttaaaag 3300

gctggcctca tttggatgaa ttttaaagca tcttccgttt tattctgatt ccgtatatcc 3360

ggaaatggaa gggaaacggt agaggttttt ctcttaaccg ttttaatggt gtaccgtttt 3420

tattcatttt tttaaaaaga aaatagtata gtacccacaa tctatgggag taaagaaaac 3480

cataactctt atgtgctgtt acattagtat tttagtattg atgctataat accatcatga 3540

agtatttaaa ttagttattt actttttttt gaatgttcac taatagttac tttgatgtaa 3600

aatcataatg taaacatgaa tgtaatttgc ttgccctatg ctatgttgtt tccaaagtct 3660

tattttcatt ttcttttgat gtttaggtat tgctactatc gttatcgttt gcagctttat 3720

catttcagtt ctgttttcaa gaaaaataat aataattaat atgatttgag cattttccta 3780

acagtttcat cccattcatg ttcatgtttt tgttttcttt tcctaactga gagccctcca 3840

ctcggagcaa cttatagttc atagaaaatg tttatctaac atgtgactaa tatatgtttt 3900

agacactgag aaaaaatcaa cattcagtta aaacaatgct agaaaagccc tactagtatt 3960

aaggctgagt tctaaacttt aaatctaaac tatacttact tttttttatt agcatgtttt 4020

ttaaactacc aaatggttcg ttatgtaaaa acaaaattta tatgtattga agtttgtttt 4080

acatgtcact ccaatatgga gtttccccaa agctcatcat ggaaagtact cctacaatac 4140

ttacaagggc taatatgaaa ttttcactat ccgtactcct cttgaggttt tcttcttgct 4200

tctagagcca cctgttaaag aggcggcctt gcttgcttcc tttccagatt cctccatagc 4260

tcacagaaac ctcacaaccc tagttcggcg agagccggaa gctatcaagc taagcgagat 4320

acgaaggaaa gcggttcttg cagcagaaat ttcaaggctt tgccgccaaa tttggcccaa 4380

gtttggctca aaatccacca ttgcaggccc ctgcccctcg ggaggctaaa gcgagacgaa 4440

ggtaagcggt tcttgcggga gaaatttcga agctttgccg acaaatttgg ttgtgagttt 4500

ggctcggaaa tccgccattt gcggtgcagg ccggatcccc gggttgtgga cgttgactgt 4560

ttgtccagag caaaaggggt gttgctgtgg gtcgattgag ctgctgggtc atggatcccg 4620

ttagcctact ccatgttcat cattcagctc gagatctgaa agaaactact ccaatttata 4680

ctaatagtat gtgtgtagat aggaaaatga tggagtactc gttgttggga taggcttatg 4740

gcttgcatgc cccaggagct gcatcaaccc tacatggacc ctcttgctct ggacaaacag 4800

tctgcatctt ttgtgagctc gaatttcccc gatcgttcaa acatttggca ataaagtttc 4860

ttaagattga atcctgttgc cggtcttgcg atgattatca tataatttct gttgaattac 4920

gttaagcatg taataattaa catgtaatgc atgacgttat ttatgagatg ggtttttatg 4980

attagagtcc cgcaattata catttaatac gcgatagaaa acaaaatata gcgcgcaaac 5040

taggataaat tatcgcgcgc ggtgtcatct atgttactag atcgggaatt c 5091

<210> 12

<211> 2208

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 12

atgccctggc tagcttcttc atcacttcag gcttctggaa acgtcacatg ctttcttccc 60

accagagaaa attaagcagt gatagctgca ggatattact ccgtaacgta ctggccagta 120

gaaaagtctc catagtgcct gaattttcag tgcacatttg ttagcatctg catctctcag 180

caaattaaag tctatctgtg tgagagagat gaaactgccc atgcttttct ttccatccaa 240

ttaatcattt gaaccacttg gcataaacta tgctcataac aaagagatta acacatgagc 300

aaatcccagg caatagaaaa gtagaattct ctaacacaag aaaagaaaaa agatatcaat 360

atataaaatg aaacttgctg aagttttgca tccttttcca taaaatacag agggaaagag 420

acaaatgaca tggtcaacat agatccaaag agaaaaaaac accaggcaat cttatcatat 480

tgatcacact tttgctgatg aaacatcaga tgacactatg acagcaacct ctctccaaaa 540

taaattcgta taaactgaaa ccgatggaga aatggtcctt gattattaca ggtatccaca 600

agagcaacaa ggaaagattg tttttttaaa aaaacaagaa caaggaggta gatatatagt 660

agaagaaagt aaaacaggat acggcgaaat tcagggggct gtggcctcca tttggcgcaa 720

aatcctgcgg cctgccgcat aaatgcaaac catgtaacgc aacctgtcgg ctcatcgatc 780

tgctcgtatt ggatggataa gcatcccctt gcacctgggt caaacactca aaacgaccct 840

cttctgggaa ccttgtattt ttctctattt gtaaacagat cctccggttt tttatgcttt 900

atataaaagc aggatgcttt ctctttttct tttttaaaaa ataaactaaa aaagaccacc 960

actagcatct taaaaggctg gcctcatttg gatgaatttt aaagcatctt ccgttttatt 1020

ctgattccgt atatccggaa atggaaggga aacggtagag gtttttctct taaccgtttt 1080

aatggtgtac cgtttttatt cattttttta aaaagaaaat agtatagtac ccacaatcta 1140

tgggagtaaa gaaaaccata actcttatgt gctgttacat tagtatttta gtattgatgc 1200

tataatacca tcatgaagta tttaaattag ttatttactt ttttttgaat gttcactaat 1260

agttactttg atgtaaaatc ataatgtaaa catgaatgta atttgcttgc cctatgctat 1320

gttgtttcca aagtcttatt ttcattttct tttgatgttt aggtattgct actatcgtta 1380

tcgtttgcag ctttatcatt tcagttctgt tttcaagaaa aataataata attaatatga 1440

tttgagcatt ttcctaacag tttcatccca ttcatgttca tgtttttgtt ttcttttcct 1500

aactgagagc cctccactcg gagcaactta tagttcatag aaaatgttta tctaacatgt 1560

gactaatata tgttttagac actgagaaaa aatcaacatt cagttaaaac aatgctagaa 1620

aagccctact agtattaagg ctgagttcta aactttaaat ctaaactata cttacttttt 1680

tttattagca tgttttttaa actaccaaat ggttcgttat gtaaaaacaa aatttatatg 1740

tattgaagtt tgttttacat gtcactccaa tatggagttt ccccaaagct catcatggaa 1800

agtactccta caatacttac aagggctaat atgaaatttt cactatccgt actcctcttg 1860

aggttttctt cttgcttcta gagccacctg ttaaagaggc ggccttgctt gcttcctttc 1920

cagattcctc catagctcac agaaacctca caaccctagt tcggcgagag ccggaagcta 1980

tcaagctaag cgagatacga aggaaagcgg ttcttgcagc agaaatttca aggctttgcc 2040

gccaaatttg gcccaagttt ggctcaaaat ccaccattgc aggcccctgc ccctcgggag 2100

gctaaagcga gacgaaggta agcggttctt gcgggagaaa tttcgaagct ttgccgacaa 2160

atttggttgt gagtttggct cggaaatccg ccatttgcgg tgcaggcc 2208

Claims

1.抑制GrpE基因表达的核酸分子在制备抗刺吸式害虫的转基因植物中的应用；

所述抑制GrpE基因表达的核酸分子为特异DNA分子Ⅰ；

所述特异DNA分子Ⅰ为双链DNA分子，其中具有片段甲和片段乙；所述片段甲和所述片段乙反向互补；所述片段甲如序列表的序列2中第1-702位核苷酸所示；所述特异DNA分子Ⅰ中，由CaMV35S启动子驱动片段甲和片段乙表达；

所述刺吸式害虫为灰飞虱；所述植物为水稻。

2.抑制GrpE基因表达的重组载体在制备抗刺吸式害虫的转基因植物中的应用；

所述抑制GrpE基因表达的重组载体为具有特异DNA分子Ⅰ的重组载体；

所述刺吸式害虫为灰飞虱；所述植物为水稻。

3.抑制GrpE基因表达的核酸分子在制备条纹叶枯病抗性植物中的应用；

所述抑制GrpE基因表达的核酸分子为特异DNA分子Ⅰ；

所述植物为水稻。

4.抑制GrpE基因表达的重组载体在制备条纹叶枯病抗性植物中的应用；

所述植物为水稻。

5.一种培育抗刺吸式害虫的转基因植物的方法，包括如下步骤：在受体植物中导入抑制GrpE基因表达的核酸分子或抑制GrpE基因表达的重组载体，得到抗刺吸式害虫的转基因植物；

所述抑制GrpE基因表达的核酸分子为特异DNA分子Ⅰ；

所述刺吸式害虫为灰飞虱；所述植物为水稻。

6.权利要求5所述方法在防控植物条纹叶枯病中的应用；所述植物为水稻。

7.特异DNA分子Ⅰ，其为双链DNA分子，具有片段甲和片段乙；所述片段甲和所述片段乙反向互补；所述片段甲如序列表的序列2中第1-702位核苷酸所示；所述特异DNA分子Ⅰ中，由CaMV35S启动子驱动片段甲和片段乙表达。

8.重组质粒Ⅰ，其中具有权利要求7所述的特异DNA分子Ⅰ。