CN112451559A - 葛花提取物在预防和治疗氧化损伤方面中的用途 - Google Patents

葛花提取物在预防和治疗氧化损伤方面中的用途 Download PDF

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王建智
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Abstract

本发明涉及葛花提取物在预防和治疗氧化损伤方面中的用途。具体地,本发明提供一种葛花提取物的用途,用于制备组合物,所述的组合物用于选自下组的一种或多种用途:(i)预防和/或治疗氧化性损伤;(ii)预防和/或治疗与氧化性损伤相关的疾病;(iii)葡萄膜炎。本发明所述的葛花提取物能够显著抑制或降低活性氧自由基,从而用于预防和/或治疗氧化性损伤及其相关疾病如视网膜色素上皮细胞病变和葡萄膜炎。

Description

葛花提取物在预防和治疗氧化损伤方面中的用途
技术领域
本发明涉及药物领域,具体涉及葛花提取物在预防和治疗氧化损伤方面中的 用途。
背景技术
氧化应激(OxidativeStress,OS)是指体内氧化与抗氧化作用失衡的一种 状态,倾向于氧化,导致中性粒细胞炎性浸润,蛋白酶分泌增加,产生大量氧 化中间产物。氧化应激是由自由基在体内产生的一种负面作用,并被认为是导 致衰老和疾病的一个重要因素。
在氧化性损伤中,活性氧自由基(ROS)是引起蛋白质氧化损伤的重要因素。 ROS可以通过多种代谢途径产生,如化学毒物与药物代谢、细胞呼吸、辐射、 光照等。ROS具有较高的反应活性。
氧化性损伤与多种疾病有关,例如眼部疾病、炎症、红斑狼疮、光老化、 银屑病等等,然而,现有临床药物中缺乏对氧化损伤有效治疗的药物,从而限 制了对氧化损伤疾病的治疗和预防。
因此,本领域需要开发一种能够有效预防和/或治疗氧化性损伤的药物。
发明内容
本发明的目在于提供一种能够有效预防和/或治疗氧化性损伤的药物。
本发明第一个方面提供一种葛花提取物的用途,用于制备组合物,所述的 组合物用于选自下组的一种或多种用途:(i)预防和/或治疗氧化性损伤;(ii) 预防和/或治疗与氧化性损伤相关的疾病;(iii)预防和/或治疗葡萄膜炎。
优选地,所述的氧化性损伤是由氧化性物质和/或光照引起的氧化损伤。
优选地,所述的氧化性物质包括氧化性药物。
优选地,所述的氧化性损伤包括眼部氧化性损伤。
优选地,所述的氧化性损伤包括视网膜色素上皮细胞的氧化性损伤。
优选地,所述的预防和/或治疗氧化性损伤包括抑制或降低活性氧自由基的 生成来预防和/或治疗氧化性损伤。
优选地,所述的与氧化性损伤相关的疾病选自下组:视网膜色素上皮细胞 病变、葡萄膜炎,或其组合。
优选地,所述的组合物为药物组合物、食品组合物或保健品组合物。
优选地,所述的组合物还包括药学上、食品上或保健品上可接受的载体。
优选地,所述的组合物的剂型为固体制剂或液体制剂。
优选地,所述的组合物的剂型为口服制剂或注射制剂。
优选地,所述的组合物的剂型为乳液、片剂、胶囊剂、口服液、颗粒剂、 散剂或糖浆剂。
优选地,所述的组合物为口服液。
优选地,所述的葛花提取物选自下组:醇提取物、水提取物、醇水溶液提 取物,或其组合。
优选地,所述的醇包括C1-C4低级醇。
优选地,所述的葛花提取物包括干浸膏。
优选地,所述的葛花提取物包括干提取物。
优选地,所述的葛花提取物通过选自下组的溶剂提取制备而得:水、C1-C4 低级醇、C1-C4低级醇水溶液,或其组合。
优选地,所述的葛花提取物通过以下方法制备而得:
将葛花加提取溶剂提取,过滤,滤液浓缩干燥后,得到葛花提取物。
优选地,所述的提取溶剂包括水、C1-C4低级醇或C1-C4低级醇水溶液。
优选地,所述的葛花提取物通过以下方法制备而得:
向葛花中加入4-6重量倍的90-98%(v/v)乙醇,加热回流提取8-12h后,过 滤,滤液经减压浓缩干燥后,得到所述葛花醇提取物。
优选地,所述的C1-C4低级醇包括甲醇、乙醇、丙醇和丁醇中的一种或多 种。
优选地,在所述的醇水溶液中,所述醇的体积分数为80-98%,较佳地 85-98%(v/v),更佳地90-98%(v/v)。
优选地,在C1-C4低级醇水溶液中,所述C1-C4低级醇的体积分数为 80-98%,较佳地85-98%(v/v),更佳地90-98%(v/v)。
优选地,所述的组合物还包括维生素C。
优选地,所述的组合物还包括木糖醇。
本发明第二个方面提供一种组合物,所述的组合物包括葛花提取物和维生 素C。
优选地,所述的葛花提取物选自下组:醇提取物、水提取物,醇水溶液提 取物,或其组合。
优选地,所述的醇包括C1-C4低级醇。
优选地,所述的葛花提取物通过以下方法制备而得:
向葛花中加入4-6重量倍的90-98%(v/v)乙醇,加热回流提取8-12h后,过 滤,滤液经减压浓缩干燥后,得到所述葛花醇提取物。
优选地,所述的C1-C4低级醇包括甲醇、乙醇、丙醇和丁醇中的一种或多 种。
优选地,在所述的醇水溶液中,所述醇的体积分数为80-98%,较佳地 85-98%(v/v),更佳地90-98%。
优选地,所述的葛花提取物如本发明第一个方面所述。
优选地,所述的组合物为药物组合物、食品组合物或保健品组合物。
优选地,所述的组合物还包括药学上、食品上或保健品上可接受的载体。
优选地,所述的组合物的剂型为固体制剂或液体制剂。
优选地,所述的组合物的剂型为口服制剂或注射制剂。
优选地,所述的组合物的剂型为乳液、片剂、胶囊剂、口服液、颗粒剂、 散剂或糖浆剂。
优选地,所述的组合物为口服液。
优选地,所述的口服液包括葛花提取物、维生素C和水。
优选地,所述的组合物还包括木糖醇。
优选地,所述的葛花提取物与维生素C的重量比为(0.2-5):(0.2-8), 较佳地(0.5-3):(0.5-5),更佳地(0.5-1.5):(0.8-3),更佳地(0.8-1.2): (1-3)。
优选地,所述的葛花提取物的含量为1-99wt%,较佳地10-90wt%,更佳 地20-80wt%,以组合物的总重量计算。
优选地,所述的维生素C的含量为1-99wt%,较佳地10-90wt%,更佳地 20-80wt%,以组合物的总重量计算。
本发明第三个方面提供一种如本发明第二个方面所述的组合物的用途,用 于制备药物,所述的药物用于(i)预防和/或治疗氧化性损伤;(ii)预防和/ 或治疗与氧化性损伤相关的疾病;(iii)预防和/或治疗葡萄膜炎。
应理解,在本发明范围内中,本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例) 中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合,从而构成新的或优选的技术方 案。
具体实施方式
本发明发现葛花提取物能够显著抑制或降低活性氧自由基,从而用于预防 和/或治疗氧化性损伤及其相关疾病如视网膜色素上皮细胞病变和葡萄膜炎。
术语
除非另有定义,否则本文中所用的所有技术和科学术语的含义与本发明所 属领域普通技术人员普遍理解的含义相同。
如本文所用,术语“包括”、“包含”与“含有”可互换使用,不仅包括开放式 定义,还包括半封闭式、和封闭式定义。换言之,所述术语包括了“由……构成”、 “基本上由……构成”。
如本文所用,“葛花”中药名,为豆科植物野葛Pueraria lobata(Willd.)Ohwi、 甘葛藤P.thomsonii Benth.的花。
如本文所用,术语“95%(v/v)乙醇”是指乙醇的体积分数为95%的乙醇水溶 液,例如,95%的乙醇通过95ml无水乙醇+5ml水配制。
葛花提取物
本发明提供一种葛花提取物,优选地,所述的葛花提取物包括但不限于醇 提取物、水提取物或醇水溶液提取物。优选地,所述的葛花提取物为干提取物。
在一个优选方式中,所述的醇包括C1-C4低级醇。
在一个优选方式中,所述的葛花提取物通过以下方法制备而得:
将葛花加C1-C4低级醇水溶液提取,过滤,滤液浓缩干燥后,得到葛花提 取物。
优选地,所述的葛花提取物通过以下方法制备而得:
向葛花中加入4-6重量倍的90-98%(v/v)乙醇,加热回流提取8-12h后,过 滤,滤液经减压浓缩干燥后,得到所述葛花醇提取物。
在一个优选方式中,所述的C1-C4低级醇包括甲醇、乙醇、丙醇和丁醇中 的一种或多种。
在一个优选方式中,在所述的醇水溶液中,所述醇的体积分数为80-98%, 较佳地85-98%(v/v),更佳地90-98%。
用途
本发明提供一种葛花提取物的用途,用于(i)预防和/或治疗氧化性损伤; (ii)预防和/或治疗与氧化性损伤相关的疾病;和/或(iii)预防和/或治疗葡萄 膜炎。
在一个优选方式中,所述的氧化性损伤是由氧化性物质和/或光照引起的氧 化损伤。
在一个优选方式中,所述的氧化性损伤包括眼部氧化性损伤。
在一个优选方式中,所述的氧化性损伤包括视网膜色素上皮细胞的氧化性 损伤。
在一个优选方式中,所述的预防和/或治疗氧化性损伤包括抑制或降低活性 氧自由基的生成来预防和/或治疗氧化性损伤。
代表性地,所述的与氧化性损伤相关的疾病包括视网膜色素上皮细胞病变 和葡萄膜炎中的一种或多种。
组合物
本发明还提供一种组合物,所述的组合物可以为药物组合物、食品组合物 或保健品组合物。
本发明所述的组合物还包括药学上、食品上或保健品上可接受的载体。
如本文所用,术语“药学上、食品上或保健品上可接受的载体”指的是:一种 或多种相容性固体、半固体、液体或凝胶填料,它们适合于人体或动物使用, 而且有足够的纯度和足够低的毒性。
应理解,在本发明中,所述的载体没有特别的限制,可选用本领域常用材 料,或用常规方法制得,或从市场购买得到。药学可接受的载体部分例子有纤 维素及其衍生物(如甲基纤维素、乙基纤维素、羟丙甲基纤维素、羧甲基纤维素 钠等)、明胶、滑石粉、固体润滑剂(如硬脂酸、硬脂酸镁)、硫酸钙、植物油(如 豆油、芝麻油等)、多元醇(如丙二醇、甘油、山梨醇等)、乳化剂(如吐温)、润 湿剂(如十二烷基硫酸钠)、缓冲剂、螯合剂、增稠剂、pH调节剂、透皮促进剂、 着色剂、调味剂、稳定剂、抗氧化剂、防腐剂、抑菌剂、无热原水等。
在本发明中,药物组合物的剂型包括(但不限于)口服制剂或注射制剂。
代表性地,所述的组合物的剂型为乳液、片剂、胶囊剂、口服液、颗粒剂、 散剂或糖浆剂。
本发明还提供一种组合物,所述的组合物包括葛花提取物和维生素C。葛 花提取物和维生素C联合应对预防和/或治疗氧化性损伤及其相关疾病具有协 同效果。
优选地,所述的组合物还包括木糖醇。当组合物口服给药时,木糖醇能够 改善口味,提高口服给药的顺应性。
在一个优选方式中,所述的葛花提取物与维生素C的重量比为(0.2-5): (0.2-8),较佳地(0.5-3):(0.5-5),更佳地(0.5-1.5):(0.8-3),更佳 地(0.8-1.2):(1-3)。
本发明还提供一种含有葛花提取物和维生素C的组合物的用途,用于(i) 预防和/或治疗氧化性损伤;(ii)预防和/或治疗与氧化性损伤相关的疾病;(iii) 预防和/或治疗葡萄膜炎。
本发明的主要技术效果包括:
1、本发明发现葛花提取物能够显著抑制或降低活性氧自由基,从而用于预 防和/或治疗氧化性损伤及其相关疾病如视网膜色素上皮细胞病变和葡萄膜炎。
2、本发明发现葛花提取物和维生素C对预防和/或治疗氧化性损伤及其相 关疾病具有协同效果。
下面结合具体实施例,进一步阐述本发明。应理解,这些实施例仅用于说明 本发明而不用于限制本发明的范围。
实施例1
葛花醇提取物的制备
将葛花粉碎后,加入5重量倍的95%(v/v)乙醇,加热回流提取10h后,过 滤,滤液经减压浓缩干燥后,得到干浸膏,即葛花醇提取物。
实施例2考察葛花醇提取物对氧化损伤的改善作用
葛花醇提取物:实施例1制备所得。
统计学分析:计量采用M±SD,采用SPSS软件进行数据分析,两两比较 采用t检验,以p<0.05为具有统计学意义。
实验方法:
ARPE-19细胞(人视网膜色素上皮细胞)接种于96孔板中,每孔1x106细胞,加入100μL含有10%FBS的DME/F12培养基,孵育24h后,分成空白 对照组、过氧化氢对照组、葛花醇提取物低剂量组、葛花醇提取物中剂量组、 葛花醇提取物高剂量组、维生素C组和葛花醇提取物+维生素C组,其中,空 白对照组和过氧化氢对照组更换培养基,葛花醇提取物低剂量组、葛花醇提取 物中剂量组和葛花醇提取物高剂量组分别更换含有5μg/ml、10μg/ml和20μg/ml 葛花醇提取物的培养基,维生素C组更换含有20μg/ml维生素C的培养基,葛 花醇提取物+维生素C组更换含有5μg/ml葛花醇提取物和10μg/ml维生素C的 培养基,孵育24h后,加入含有5%BSA DME/F12培养基孵育30min后,过氧 化氢对照组、葛花醇提取物低剂量组、葛花醇提取物中剂量组和葛花醇提取物 高剂量组、维生素C组和葛花醇提取物+维生素C组分别更换含有5μg/ml过 氧化氢(H2O2)的DME/F12培养基(含有5%BSA)100μml进行氧化诱导,空白对照组更换DME/F12培养基(含有5%BSA),孵育24h,每组更换含有 0.5mg/mL MTT的DME/F12培养基(含有5%BSA),继续培养4h。培养结束 后,离心除去上清液,加入DMSO溶解细胞并在490nm波长下检测吸光值。 每个药物浓度设置3个复孔,实验重复3次。
不同组给药对视网膜色素上皮细胞的存活率详见表1所示。
表1不同组细胞的存活率(M±SD)
Figure BDA0002712804990000071
Figure BDA0002712804990000081
注:与过氧化氢对照组相比,*为p<0.05,**为p<0.05。
从表1中可以看出,与空白对照组相比,过氧化氢对照组的细胞存活率显 著降低,表明过氧化氢通过氧化应激损伤ARPE-19细胞。然而,与单独的过氧 化氢处理相比,过氧化氢处理ARPE-19细胞在葛花醇提取物的作用下,细胞存 活率显著提高,因此,表1表明,葛花醇提取物能够显著改善人视网膜色素上 皮细胞的氧化应激损伤,从而能够用于预防和治疗由于氧化应激导致的视网膜 上皮细胞的病变引起的眼部疾病。此外,从表1中还可以看出,葛花醇提取物 和维生素C联合应用能够协同用于改善人视网膜色素上皮细胞的氧化应激损 伤,提高治疗效果。
实施例3考察葛花醇提取物对制氧化应激产生的ROS的抑制作用
葛花醇提取物:实施例1制备所得。
统计学分析:计量采用M±SD,采用SPSS软件进行数据分析,两两比较 采用t检验,以p<0.05为具有统计学意义。
实验方法:
ARPE-19细胞(人视网膜色素上皮细胞)接种于96孔板中,每孔1x106细胞,加入100μL含有10%FBS的DME/F12培养基,孵育24h后,分成空白 对照组、过氧化氢对照组、葛花醇提取物低剂量组、葛花醇提取物中剂量组、 葛花醇提取物高剂量组、维生素C组和葛花醇提取物+维生素C组,其中,空 白对照组和过氧化氢对照组更换培养基,葛花醇提取物低剂量组、葛花醇提取 物中剂量组和葛花醇提取物高剂量组分别更换含有5μg/ml、10μg/ml和20μg/ml 葛花醇提取物培养基,维生素C组更换含有20μg/ml维生素C的培养基,葛花 醇提取物+维生素C组更换含有5μg/ml葛花醇提取物和10μg/ml维生素C的培 养基,孵育24h后,每孔用200μL HBSS清洗一遍,加入100μL含有50μmol/mL DCFDA(2'7'-二氯荧光素乙酰乙酸)并无CO2的HBSS培养0.5h后,用200μL HBSS清洗后,过氧化氢对照组、葛花醇提取物低剂量组、葛花醇提取物中剂 量组、葛花醇提取物高剂量组、维生素C组和葛花醇提取物+维生素C组分别 加入100μL含有5μg/ml过氧化氢(H2O2)的DME/F12培养基(含有5%BSA) 进行氧化诱导,空白对照组加入100μL DME/F12培养基(含有5%BSA),孵 育24h后,在激发波长488nm,发射波长530nm条件下检测荧光强度。实验重 复3次。
不同组给药对视网膜色素上皮细胞的活性氧自由基(ROS)水平的影响如表 2所示:
表2不同组细胞的ROS相对表达水平(M±SD)
Figure BDA0002712804990000091
注:与过氧化氢对照组相比,*为p<0.05,**为p<0.05,
从表2中可以看出,与空白对照组相比,过氧化氢对照组的ROS含量显 著提高,表明过氧化氢对ARPE-19细胞导致氧化应激损伤。然而,与单独的过 氧化氢处理相比,过氧化氢处理ARPE-19细胞在葛花醇提取物的作用下,细胞 中的ROS水平显著降低,因此,表2表明,葛花醇提取物能够显著抑制氧化应 激产生的ROS,从而能够用于治疗由于氧化应激导致的视网膜上皮细胞的病变 引起的眼部疾病。此外,从表2中还可以看出,葛花醇提取物和维生素C联合 应用能够协同用于抑制氧化应激产生的ROS水平。
实施例4考察葛花醇提取物对葡萄膜炎的治疗效果
葛花醇提取物:实施例1制备所得。
统计学分析:计量采用M±SD,采用SPSS软件进行数据分析,两两比较 采用t检验,以p<0.05为具有统计学意义。
葡萄膜炎小鼠模型的构建:
通过用视网膜抗原感光器间受体类视黄醇结合蛋白(IRPB,每只小鼠200 μg)在补充有结核分枝杆菌H37RA至2.5mg/ml的不完全弗氏佐剂中的乳液在 大腿和尾巴的基部皮下注射免疫C57BL/6j小鼠来诱葡萄膜炎小鼠模型,此外, 腹膜内注射百日咳毒素(300ng/小鼠)。
实验方法
将葡萄膜炎小鼠分成模型对照组和葛花醇提取物组,每组各8只,在葛花 醇提取物组中,用生理盐水将葛花醇提取物灌胃给药(葛花醇提取物给药剂量 为10mg/kg体重),模型对照组小鼠灌胃给予生理盐水,分别每天2次灌胃给 药,在给药后的第10天扩瞳后通过眼底镜检查对葡萄膜炎的病情进行观察, 观察结果如下表3所示:
表3眼底镜检查结果
Figure BDA0002712804990000101
从表3中可以看出,葛花醇提取物对葡萄膜炎具有有效的治疗作用。
以上所述仅为本申请的优选实施例而已,并不用于限制本申请,对于本领 域的技术人员来说,本申请可以有各种更改和变化。凡在本申请的精神和原则 之内,所作的任何修改、等同替换、改进等,均应包含在本申请的保护范围之 内。

Claims (10)

1.一种葛花提取物的用途,其特征在于,用于制备组合物,所述的组合物用于选自下组的一种或多种用途:(i)预防和/或治疗氧化性损伤;(ii)预防和/或治疗与氧化性损伤相关的疾病;(iii)预防和/或治疗葡萄膜炎。
2.如权利要求1所述的用途,其特征在于,所述的氧化性损伤包括视网膜色素上皮细胞的氧化性损伤。
3.如权利要求1所述的用途,其特征在于,所述的预防和/或治疗氧化性损伤包括抑制或降低活性氧自由基的生成来预防和/或治疗氧化性损伤。
4.如权利要求1所述的用途,其特征在于,所述的与氧化性损伤相关的疾病选自下组:视网膜色素上皮细胞病变、葡萄膜炎,或其组合。
5.如权利要求1所述的用途,其特征在于,所述的葛花提取物选自下组:醇提取物、水提取物、醇水溶液提取物,或其组合。
6.一种组合物,其特征在于,所述的组合物包括葛花提取物和维生素C。
7.如权利要求6所述的组合物,其特征在于,所述的葛花提取物选自下组:醇提取物、水提取物,醇水溶液提取物,或其组合。
8.如权利要求6所述的组合物,其特征在于,所述的组合物为药物组合物、食品组合物或保健品组合物。
9.如权利要求6所述的组合物,其特征在于,所述的组合物还包括木糖醇。
10.一种如权利要求6所述的组合物的用途,其特征在于,用于制备药物,所述的药物用于(i)预防和/或治疗氧化性损伤;(ii)预防和/或治疗与氧化性损伤相关的疾病;(iii)预防和/或治疗葡萄膜炎。
CN202011062572.4A 2020-09-30 2020-09-30 葛花提取物在预防和治疗氧化损伤方面中的用途 Pending CN112451559A (zh)

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