CN112424216A - 比伐卢定的合成方法 - Google Patents
比伐卢定的合成方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN112424216A CN112424216A CN201880094571.2A CN201880094571A CN112424216A CN 112424216 A CN112424216 A CN 112424216A CN 201880094571 A CN201880094571 A CN 201880094571A CN 112424216 A CN112424216 A CN 112424216A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- fmoc
- tert
- butoxy
- resin
- glutamic acid
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- OIRCOABEOLEUMC-GEJPAHFPSA-N bivalirudin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 OIRCOABEOLEUMC-GEJPAHFPSA-N 0.000 title claims abstract description 50
- 108010055460 bivalirudin Proteins 0.000 title claims abstract description 50
- 229960001500 bivalirudin Drugs 0.000 title claims abstract description 49
- 238000010189 synthetic method Methods 0.000 title description 4
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 54
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 35
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims abstract description 25
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 claims abstract description 13
- NTFTULBKHJJQAW-HNNXBMFYSA-N 9h-fluoren-9-ylmethyl n-[(2s)-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]carbamate Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 NTFTULBKHJJQAW-HNNXBMFYSA-N 0.000 claims abstract description 6
- 239000003875 Wang resin Substances 0.000 claims description 61
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 46
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 32
- 239000011347 resin Substances 0.000 claims description 27
- 229920005989 resin Polymers 0.000 claims description 27
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 claims description 24
- NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N Piperidine Chemical compound C1CCNCC1 NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 24
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 24
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 24
- GLUUGHFHXGJENI-UHFFFAOYSA-N Piperazine Chemical compound C1CNCCN1 GLUUGHFHXGJENI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 19
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 claims description 19
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 claims description 16
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 claims description 13
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 claims description 13
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 12
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 claims description 12
- 238000006482 condensation reaction Methods 0.000 claims description 9
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 5
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 claims description 5
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-diisopropylethylamine Substances CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- NERFNHBZJXXFGY-UHFFFAOYSA-N [4-[(4-methylphenyl)methoxy]phenyl]methanol Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1COC1=CC=C(CO)C=C1 NERFNHBZJXXFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 claims description 3
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 claims description 3
- 230000008961 swelling Effects 0.000 claims description 2
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 6
- 206010042674 Swelling Diseases 0.000 claims 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 claims 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 abstract description 4
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 abstract description 3
- 229940123900 Direct thrombin inhibitor Drugs 0.000 abstract description 2
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 abstract description 2
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 abstract description 2
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 abstract description 2
- 238000001308 synthesis method Methods 0.000 abstract description 2
- 239000003868 thrombin inhibitor Substances 0.000 abstract description 2
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 abstract 1
- 229940003354 angiomax Drugs 0.000 abstract 1
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 abstract 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 abstract 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- -1 tert-butyl (tert-butoxy) -glutamic acid (tert-butoxy) -tyrosine (tert-butyl) -pyridine Chemical compound 0.000 description 56
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 56
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 54
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 30
- 125000004213 tert-butoxy group Chemical group [H]C([H])([H])C(O*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 27
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 25
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 25
- 229960002989 glutamic acid Drugs 0.000 description 23
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 23
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 22
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 22
- ZPGDWQNBZYOZTI-SFHVURJKSA-N (2s)-1-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonyl)pyrrolidine-2-carboxylic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21 ZPGDWQNBZYOZTI-SFHVURJKSA-N 0.000 description 21
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 20
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 19
- 239000007822 coupling agent Substances 0.000 description 17
- OTKXCALUHMPIGM-FQEVSTJZSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-5-[(2-methylpropan-2-yl)oxy]-5-oxopentanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](CCC(=O)OC(C)(C)C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 OTKXCALUHMPIGM-FQEVSTJZSA-N 0.000 description 15
- NDKDFTQNXLHCGO-UHFFFAOYSA-N 2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)acetic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)NCC(=O)O)C3=CC=CC=C3C2=C1 NDKDFTQNXLHCGO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 9
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000005897 peptide coupling reaction Methods 0.000 description 8
- 238000002953 preparative HPLC Methods 0.000 description 8
- SJVFAHZPLIXNDH-JOCHJYFZSA-N (2r)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-3-phenylpropanoic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)O)NC(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21)C1=CC=CC=C1 SJVFAHZPLIXNDH-JOCHJYFZSA-N 0.000 description 7
- JAUKCFULLJFBFN-VWLOTQADSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-3-[4-[(2-methylpropan-2-yl)oxy]phenyl]propanoic acid Chemical compound C1=CC(OC(C)(C)C)=CC=C1C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21 JAUKCFULLJFBFN-VWLOTQADSA-N 0.000 description 7
- SJVFAHZPLIXNDH-QFIPXVFZSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-3-phenylpropanoic acid Chemical compound C([C@@H](C(=O)O)NC(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21)C1=CC=CC=C1 SJVFAHZPLIXNDH-QFIPXVFZSA-N 0.000 description 7
- FODJWPHPWBKDON-IBGZPJMESA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-4-[(2-methylpropan-2-yl)oxy]-4-oxobutanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](CC(=O)OC(C)(C)C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 FODJWPHPWBKDON-IBGZPJMESA-N 0.000 description 7
- KJYAFJQCGPUXJY-UMSFTDKQSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-4-oxo-4-(tritylamino)butanoic acid Chemical compound C([C@@H](C(=O)O)NC(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21)C(=O)NC(C=1C=CC=CC=1)(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 KJYAFJQCGPUXJY-UMSFTDKQSA-N 0.000 description 7
- HNICLNKVURBTKV-NDEPHWFRSA-N (2s)-5-[[amino-[(2,2,4,6,7-pentamethyl-3h-1-benzofuran-5-yl)sulfonylamino]methylidene]amino]-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)pentanoic acid Chemical compound C12=CC=CC=C2C2=CC=CC=C2C1COC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)NS(=O)(=O)C1=C(C)C(C)=C2OC(C)(C)CC2=C1C HNICLNKVURBTKV-NDEPHWFRSA-N 0.000 description 7
- QXVFEIPAZSXRGM-DJJJIMSYSA-N (2s,3s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-3-methylpentanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 QXVFEIPAZSXRGM-DJJJIMSYSA-N 0.000 description 7
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 7
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 7
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 6
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 6
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 6
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 6
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 6
- HNKJADCVZUBCPG-UHFFFAOYSA-N thioanisole Chemical compound CSC1=CC=CC=C1 HNKJADCVZUBCPG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- HOWRYJAQRWXUKI-NSHDSACASA-N (2s)-3-(4-hydroxyphenyl)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxyamino]propanoic acid Chemical compound CC(C)(C)ON[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 HOWRYJAQRWXUKI-NSHDSACASA-N 0.000 description 3
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 3
- QEPWHIXHJNNGLU-KRWDZBQOSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)pentanedioic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 QEPWHIXHJNNGLU-KRWDZBQOSA-N 0.000 description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 2
- 239000012026 peptide coupling reagents Substances 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UIDQSTVPYKMCEY-UHFFFAOYSA-N 2-[(2,4-dimethoxyphenyl)methyl-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonyl)amino]acetic acid Chemical compound COC1=CC(OC)=CC=C1CN(CC(O)=O)C(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21 UIDQSTVPYKMCEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LQVMZVKOVPITOO-UHFFFAOYSA-N 9h-fluoren-1-ylmethyl carbonochloridate Chemical group C1C2=CC=CC=C2C2=C1C(COC(=O)Cl)=CC=C2 LQVMZVKOVPITOO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930182832 D-phenylalanine Natural products 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-MRVPVSSYSA-N D-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-MRVPVSSYSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005336 cracking Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 229960005190 phenylalanine Drugs 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 239000000376 reactant Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 125000002221 trityl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1C([*])(C1=C(C(=C(C(=C1[H])[H])[H])[H])[H])C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/08—Linear peptides containing only normal peptide links having 12 to 20 amino acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/81—Protease inhibitors
- C07K14/815—Protease inhibitors from leeches, e.g. hirudin, eglin
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
活性药物成分(API)比伐卢定(Bivalirudin)是20个氨基酸的肽，其含有一个碱基和5个氨基酸残基。化学式为C98H138N24O33，且分子量为2180.3g/mol。比伐卢定也被称为Angiomax。它是被指定用作抗凝剂的直接凝血酶抑制剂。本发明提供合成比伐卢定的方法，特别是提供使用Fmoc‑Leu‑Wang树脂作为载体的通过固相肽合成的比伐卢定合成方法。该方法具有收率高、副产物少和分离纯化简单的优点，且与现有技术相比，该方法节省时间且适用于中试和工业化生产。
Description
技术领域
本发明涉及生物医学领域，并且本发明特别是涉及比伐卢定的合成方法。
常规比伐卢定合成方法耗时且工艺复杂，并且不能大规模实现，且因此本领域技术人员致力于开发新的比伐卢定合成方法。
背景技术
固相肽合成(SPPS)是用于多肽合成的快速方法。然而，用于合成大量长肽如比伐卢定的常规SPPS既费时，又产生大量溶剂浪费。作为广泛使用的活性药物成分，比伐卢定是被指定用作抗凝剂的直接凝血酶抑制剂。开发用于制备大量高纯度比伐卢定的高效且经济的SPPS方法具有重要意义。
发明内容
本发明的目的是提供比伐卢定的制备方法。
根据本发明的第一方面，提供用于生产比伐卢定的方法，比伐卢定通过使用固相肽合成(SPPS)来制备，其中该方法使用Fmoc-Leu-Wang树脂或Fmoc-Leu-2CT树脂、Rink酰胺ProTide(LL)树脂和ChemMatrix wang树脂作为载体进行多肽的固相合成。
此外，多肽固相合成方法中使用的偶联剂选自由2-肟氰乙酸乙酯、N,N-二异丙基碳二亚胺、N,N'-二环己基碳二亚胺、N,N-二异丙基乙胺组成的组。
此外，在Fmoc脱保护方法中，加入哌啶/N,N-二甲基甲酰胺/甲酸(优选1/4体积的哌啶/N,N-二甲基甲酰胺，甲酸5％-20％哌啶体积)/哌嗪，且加热条件优选借助于水浴、油浴或微波加热反应进行2至5分钟。
此外，在反应完成之后，用N,N-二甲基甲酰胺将多肽的固相合成反应中的反应物中的每个洗涤2-3次。
此外，在树脂上的多肽固相合成反应中的氨基酸缩合反应在50至120℃的温度下进行；反应时间根据温度优选为10至30分钟。
此外，进行在固相合成反应中的多肽的氨基酸缩合反应，并在进行裂解反应之前用氮气吹扫树脂。
此外，反应中加入的三氟乙酸的纯度为95％，温度为10-50℃，且裂解反应时间为1-3小时。
此外，在多肽的固相合成反应中，所使用的氨基酸的当量是树脂的摩尔量的两倍。
此外，将粗制的比伐卢定通过Pre-HPLC用100％水至100％乙腈的水/乙腈梯度在20分钟内纯化。
此外，将纯化的比伐卢定溶液通过冻干机在-50至-70℃下冻干18-48小时。
附图说明
图1是比伐卢定分子结构的示意图。
图2是制备的比伐卢定的HPLC分析。
图3是制备的比伐卢定的质谱。
具体实施方式
图1所示的比伐卢定是20个氨基酸的合成肽。现在将参考具体实施例描述本发明。必须理解的是，这些实例仅是对本发明的说明，而无意于限制本发明的范围。除非另有说明，否则百分比和份数均以重量计。除非另有说明，否则以下实例中使用的实验材料和试剂可从商业来源获得。
表1氨基酸缩写的列表
[表1]
| 名称 | 三字母符号 | 单字母符号 |
| 精氨酸 | Arg | R |
| 天冬酰胺 | Asn | N |
| 天冬氨酸 | acid | D |
| 苯丙氨酸 | Phe | F |
| 谷氨酸 | acid | E |
| 甘氨酸 | Gly | G |
| 异亮氨酸 | Ile | I |
| 亮氨酸 | Leu | L |
| 苯丙氨酸 | Phe | F |
| 脯氨酸 | Pro | P |
| 酪氨酸 | Tyr | Y |
表2化学试剂缩写的列表
[表2]
表3中间体和Fmoc保护的氨基酸的列表
[表3]
本发明提供通过固相肽合成的使用Fmoc-Leu-wang树脂的比伐卢定合成方法，包括以下步骤：
步骤1，芴基甲氧基羰基-亮氨酸-Wang树脂可直接购买(西格玛奥德里奇(SigmaAldrich))，它可减少第一步的合成并加快合成效率；
步骤2：在氮气下将树脂于DMF中溶胀5至15分钟；
步骤3：在以下条件下，除去芴基甲氧基羰基氯保护基：甲酸(5％-20％哌啶体积)/哌嗪在50℃至120℃下于DMF中保持2分钟。
步骤4：制备芴基甲氧基羰基-酪氨酸(叔丁基)-亮氨酸-Wang树脂：将步骤1中获得的芴基甲氧基羰基-亮氨酸-Wang树脂脱保护，用DMF洗涤，且使Fmoc-L-Tyr-(叔丁基)-OH在多肽偶联剂的条件下经缩合反应，得到芴基甲氧基羰基-酪氨酸(叔丁基)-亮氨酸-Wang树脂；
步骤5：制备芴基甲氧基羰基-谷氨酸(叔丁氧基)-酪氨酸-(叔丁基)-亮氨酸-Wang树脂：将步骤2中获得的Fmoc-二肽脱保护并洗涤，且然后使之在肽偶联剂的条件下与Fmoc-L-谷氨酸(叔丁氧基)-OH反应，得到芴基甲氧基羰基-谷氨酸(叔丁氧基)-酪氨酸-(叔丁基)-亮氨酸-Wang树脂；
步骤6：制备芴基甲氧基羰基-谷氨酸(叔丁氧基)-谷氨酸(叔丁氧基)-酪氨酸-(叔丁基)-亮氨酸-Wang树脂。将所得的芴基甲氧基羰基-谷氨酸(叔丁氧基)-酪氨酸-(叔丁基)-亮氨酸-Wang树脂脱保护、洗涤并加入Fmoc-L-谷氨酸(叔丁氧基)-OH，且然后在肽偶联剂的条件下反应，得到芴基甲氧基羰基-谷氨酸(叔丁基(叔丁氧基)-谷氨酸(叔丁氧基)-酪氨酸(叔丁基)-吡啶(叔丁基)-亮氨酸-Wang树脂；
步骤7：制备芴基甲氧基羰基-脯氨酸-谷氨酸(叔丁氧基)-谷氨酸(叔丁氧基)-酪氨酸-(叔丁基)-亮氨酸-Wang树脂。将谷氨酸(叔丁氧基)-谷氨酸(叔丁氧基)酪氨酸-(叔丁基)-亮氨酸-Wang树脂脱保护、洗涤，且然后在多肽偶联剂的条件下与芴基甲氧基羰基-脯氨酸-OH反应，获得芴基甲氧基羰基-脯氨酸-谷氨酸(叔丁氧基)-谷氨酸(叔丁氧基)-酪氨酸-(叔丁基)-亮氨酸-Wang树脂。谷氨酸-(叔丁氧基)-谷氨酸(叔丁氧基)酪氨酸-(叔丁基)-亮氨酸-Wang树脂；
步骤8：制备芴基甲氧基羰基-异亮氨酸-脯氨酸-谷氨酸(叔丁氧基)-谷氨酸(叔丁氧基)-酪氨酸(叔丁基)-亮氨酸-Wang树脂。将芴基甲氧基羰基-脯氨酸-谷氨酸(叔丁氧基)-谷氨酸-(叔丁氧基)-酪氨酸(叔丁基)-亮氨酸-Wang树脂脱保护、洗涤并在肽偶联剂的条件下加入芴基甲氧基羰基-异亮氨酸-OH，得到芴基甲氧基羰基-异亮氨酸-脯氨酸-谷氨酸(叔丁氧基)-谷氨酸(叔丁氧基)-酪氨酸(叔丁基)-亮氨酸-Wang树脂；
步骤9：制备芴基甲氧基羰基-谷氨酸(叔丁氧基)-异亮氨酸-脯氨酸-谷氨酸(叔丁氧基)-谷氨酸(叔丁氧基)-酪氨酸-(叔丁基)-亮氨酸-Wang树脂。将步骤6中获得的芴基甲氧基羰基-异亮氨酸-脯氨酸-谷氨酸(叔丁氧基)-谷氨酸(叔丁氧基)-酪氨酸-(叔丁基)-亮氨酸-Wang树脂脱保护、洗涤，且在肽偶联剂的存在下加入Fmoc-L-Glu(Otbu)-OH并使之反应，得到芴基甲氧基羰基谷氨酸(叔丁氧基)-异亮氨酸-脯氨酸-谷氨酸(叔丁氧基)-谷氨酸(叔丁氧基)-酪氨酸(叔丁基)-亮氨酸-Wang树脂；
步骤10：制备芴基甲氧基羰基-谷氨酸(叔丁氧基)-谷氨酸(叔丁氧基)-异亮氨酸-脯氨酸-谷氨酸(叔丁氧基)-谷氨酸-(叔丁氧基)-酪氨酸(叔丁基)-亮氨酸-Wang树脂。向步骤7中获得的芴基甲氧基羰基-谷氨酸(叔丁氧基)-异亮氨酸-脯氨酸-谷氨酸(叔丁氧基)-谷氨酸-(叔丁氧基)-酪氨酸(叔丁基)-亮氨酸-Wang树脂加入Fmoc-L-Glu(Otbu)并使之在多肽偶联剂的条件下经受缩合反应，得到芴基甲氧基羰基-谷氨酸(叔丁氧基)-谷氨酸(叔丁氧基)-异亮氨酸-脯氨酸-谷氨酸(叔丁氧基)-谷氨酸(叔丁氧基)-酪氨酸(叔丁基)-亮氨酸-Wang树脂；
步骤11：制备芴基甲氧基羰基-苯丙氨酸-谷氨酸(叔丁氧基)-谷氨酸(叔丁氧基)-异亮氨酸-脯氨酸-谷氨酸(叔丁氧基)-谷氨酸(叔丁氧基)-酪氨酸(叔丁基)-亮氨酸-Wang树脂。将步骤8中获得的肽芴基甲氧基羰基-谷氨酸(叔丁氧基)-谷氨酸(叔丁氧基)-异亮氨酸-脯氨酸-谷氨酸(叔丁氧基)-谷氨酸(叔丁氧基)-酪氨酸(叔丁基)-亮氨酸-Wang树脂脱保护、洗涤，并在肽偶联剂的条件下使之与芴基甲氧基羰基-苯丙氨酸-OH反应，得到芴基甲氧基羰基-苯丙氨酸-谷氨酸(叔丁氧基)-谷氨酸(叔丁氧基)-异亮氨酸-脯氨酸-谷氨酸(叔丁氧基)-谷氨酸(叔丁氧基)酪氨酸(叔丁基)-亮氨酸-Wang树脂；
步骤12：制备芴基甲氧基羰基天冬氨酸(叔丁氧基)-苯丙氨酸-谷氨酸(叔丁氧基)-谷氨酸(叔丁氧基)-异亮氨酸-脯氨酸-谷氨酸(叔丁氧基)-谷氨酸(叔丁氧基)-酪氨酸(叔丁基)-亮氨酸-Wang树脂。将步骤9中获得的肽脱保护、洗涤并用芴基甲氧基羰基天冬氨酸(叔丁氧基)-OH处理，得到芴基甲氧基羰基天冬氨酸(叔丁氧基)-苯丙氨酸-谷氨酸(叔丁氧基)-谷氨酸(叔丁氧基)-异亮氨酸-脯氨酸-谷氨酸(叔丁氧基)-谷氨酸(叔丁氧基)-酪氨酸(叔丁基)-亮氨酸-Wang树脂；
步骤13：制备芴基甲氧基羰基-甘氨酸-天冬氨酸(叔丁氧基)-苯丙氨酸-谷氨酸(叔丁氧基)-谷氨酸(叔丁氧基)异亮氨酸-脯氨酸-谷氨酸(叔丁氧基)-谷氨酸(叔丁氧基)-酪氨酸(叔丁基)-亮氨酸-Wang树脂。将步骤10中获得的肽脱保护、洗涤并在多肽偶联剂的条件下用芴基甲氧基羰基-甘氨酸-OH处理，得到芴基甲氧基羰基-甘氨酸-天冬氨酸(叔丁氧基)-苯丙氨酸-谷氨酸(叔丁氧基)-谷氨酸(叔丁氧基)异亮氨酸-脯氨酸-谷氨酸(叔丁氧基)-谷氨酸(叔丁氧基)-酪氨酸(叔丁基)-亮氨酸-Wang树脂；
步骤14：制备芴基甲氧基羰基-天冬酰胺(三苯甲基)-甘氨酸-天冬氨酸(叔丁氧基)-苯丙氨酸-谷氨酸(叔丁氧基)-谷氨酸(叔丁氧基)异亮氨酸-脯氨酸-谷氨酸(叔丁氧基)-谷氨酸(叔丁氧基)-酪氨酸(叔丁基)-亮氨酸-Wang树脂。将步骤11中获得的肽脱保护、洗涤并在肽偶联剂的条件下用芴基甲氧基羰基-天冬酰胺(三苯甲基)-OH处理，得到芴基甲氧基羰基-天冬酰胺(三苯甲基)-甘氨酸-天冬氨酸(叔丁氧基)-苯丙氨酸-谷氨酸(叔丁氧基)-谷氨酸(叔丁氧基)异亮氨酸-脯氨酸-谷氨酸(叔丁氧基)-谷氨酸(叔丁氧基)-酪氨酸(叔丁基)-亮氨酸-Wang树脂；
步骤15：制备芴基甲氧基羰基-甘氨酸-天冬酰胺(三苯甲基)-甘氨酸-天冬氨酸(叔丁氧基)-苯丙氨酸-谷氨酸(叔丁氧基)-谷氨酸(叔丁氧基)异亮氨酸-脯氨酸-谷氨酸(叔丁氧基)-谷氨酸(叔丁氧基)-酪氨酸(叔丁基)-亮氨酸-Wang树脂。将步骤12中获得的肽脱保护、洗涤并在多肽偶联剂的条件下与芴基甲氧基羰基-甘氨酸-OH经受缩合反应，得到芴基甲氧基羰基-甘氨酸-天冬酰胺(三苯甲基)-甘氨酸-天冬氨酸(叔丁氧基)-苯丙氨酸-谷氨酸(叔丁氧基)-谷氨酸(叔丁氧基)异亮氨酸-脯氨酸-谷氨酸(叔丁氧基)-谷氨酸(叔丁氧基)-酪氨酸(叔丁基)-亮氨酸-Wang树脂；
步骤16：制备芴基甲氧基羰基-甘氨酸-甘氨酸-天冬酰胺(三苯甲基)-甘氨酸-天冬氨酸(叔丁氧基)-苯丙氨酸-谷氨酸(叔丁氧基)-谷氨酸(叔丁氧基)异亮氨酸-脯氨酸-谷氨酸(叔丁氧基)-谷氨酸(叔丁氧基)-酪氨酸(叔丁基)-亮氨酸-Wang树脂。将芴基甲氧基羰基-甘氨酸-天冬酰胺(三苯甲基)-甘氨酸-天冬氨酸(叔丁氧基)-苯丙氨酸-谷氨酸(叔丁氧基)-谷氨酸(叔丁氧基)异亮氨酸-脯氨酸-谷氨酸(叔丁氧基)-谷氨酸(叔丁氧基)-酪氨酸(叔丁基)-亮氨酸-Wang树脂脱保护、洗涤并在肽偶联剂的条件下加入芴基甲氧基羰基-甘氨酸-OH，得到芴基甲氧基羰基-甘氨酸-甘氨酸-天冬酰胺(三苯甲基)-甘氨酸-天冬氨酸(叔丁氧基)-苯丙氨酸-谷氨酸(叔丁氧基)-谷氨酸(叔丁氧基)异亮氨酸-脯氨酸-谷氨酸(叔丁氧基)-谷氨酸(叔丁氧基)-酪氨酸(叔丁基)-亮氨酸-Wang树脂；
步骤17：制备芴基甲氧基羰基-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-天冬酰胺(三苯甲基)-甘氨酸-天冬氨酸(叔丁氧基)-苯丙氨酸-谷氨酸(叔丁氧基)-谷氨酸(叔丁氧基)异亮氨酸-脯氨酸-谷氨酸(叔丁氧基)-谷氨酸(叔丁氧基)-酪氨酸(叔丁基)-亮氨酸-Wang树脂。将芴基甲氧基羰基-甘氨酸-甘氨酸-天冬酰胺(三苯甲基)-甘氨酸-天冬氨酸(叔丁氧基)-苯丙氨酸-谷氨酸(叔丁氧基)-谷氨酸(叔丁氧基)异亮氨酸-脯氨酸-谷氨酸(叔丁氧基)-谷氨酸(叔丁氧基)-酪氨酸(叔丁基)-亮氨酸-Wang树脂脱保护、洗涤并在多肽偶联剂的条件下与芴基甲氧基羰基-甘氨酸-OH经受缩合反应，得到芴基甲氧基羰基-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-天冬酰胺(三苯甲基)-甘氨酸-天冬氨酸(叔丁氧基)-苯丙氨酸-谷氨酸(叔丁氧基)-谷氨酸(叔丁氧基)异亮氨酸-脯氨酸-谷氨酸(叔丁氧基)-谷氨酸(叔丁氧基)-酪氨酸(叔丁基)-亮氨酸-Wang树脂；
步骤18：制备芴基甲氧基羰基-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-天冬酰胺(三苯甲基)-甘氨酸-天冬氨酸(叔丁氧基)-苯丙氨酸-谷氨酸(叔丁氧基)-谷氨酸(叔丁氧基)异亮氨酸-脯氨酸-谷氨酸(叔丁氧基)-谷氨酸(叔丁氧基)-酪氨酸(叔丁基)-亮氨酸-Wang树脂。将芴基甲氧基羰基-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-天冬酰胺(三苯甲基)-甘氨酸-天冬氨酸(叔丁氧基)-苯丙氨酸-谷氨酸(叔丁氧基)-谷氨酸(叔丁氧基)异亮氨酸-脯氨酸-谷氨酸(叔丁氧基)-谷氨酸(叔丁氧基)-酪氨酸(叔丁基)-亮氨酸-Wang树脂脱保护、洗涤并在多肽偶联剂的条件下与芴基甲氧基羰基-甘氨酸-OH经缩合反应，得到芴基甲氧基羰基-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-天冬酰胺(三苯甲基)-甘氨酸-天冬氨酸(叔丁氧基)-苯丙氨酸-谷氨酸(叔丁氧基)-谷氨酸(叔丁氧基)异亮氨酸-脯氨酸-谷氨酸(叔丁氧基)-谷氨酸(叔丁氧基)-酪氨酸(叔丁基)-亮氨酸-Wang树脂；
步骤19：制备芴基甲氧基羰基-脯氨酸-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-天冬酰胺(三苯甲基)-甘氨酸-天冬氨酸(叔丁氧基)-苯丙氨酸-谷氨酸(叔丁氧基)-谷氨酸(叔丁氧基)异亮氨酸-脯氨酸-谷氨酸(叔丁氧基)-谷氨酸(叔丁氧基)-酪氨酸(叔丁基)-亮氨酸-Wang树脂。将芴基甲氧基羰基-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-天冬酰胺(三苯甲基)-甘氨酸-天冬氨酸(叔丁氧基)-苯丙氨酸-谷氨酸(叔丁氧基)-谷氨酸(叔丁氧基)异亮氨酸-脯氨酸-谷氨酸(叔丁氧基)-谷氨酸(叔丁氧基)-酪氨酸(叔丁基)-亮氨酸-Wang树脂脱保护、洗涤并在多肽偶联剂的条件下加入芴基甲氧基羰基-脯氨酸-OH，得到芴基甲氧基羰基-脯氨酸-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-天冬酰胺(三苯甲基)-甘氨酸-天冬氨酸(叔丁氧基)-苯丙氨酸-谷氨酸(叔丁氧基)-谷氨酸(叔丁氧基)异亮氨酸-脯氨酸-谷氨酸(叔丁氧基)-谷氨酸(叔丁氧基)-酪氨酸(叔丁基)-亮氨酸-Wang树脂；
步骤20：制备芴基甲氧基羰基-Arg(Pbf)-脯氨酸-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-天冬酰胺(三苯甲基)-甘氨酸-天冬氨酸(叔丁氧基)-苯丙氨酸-谷氨酸(叔丁氧基)-谷氨酸(叔丁氧基)异亮氨酸-脯氨酸-谷氨酸(叔丁氧基)-谷氨酸(叔丁氧基)-酪氨酸(叔丁基)-亮氨酸-Wang树脂。将芴基甲氧基羰基-脯氨酸-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-天冬酰胺(三苯甲基)-甘氨酸-天冬氨酸(叔丁氧基)-苯丙氨酸-谷氨酸(叔丁氧基)-谷氨酸(叔丁氧基)异亮氨酸-脯氨酸-谷氨酸(叔丁氧基)-谷氨酸(叔丁氧基)-酪氨酸(叔丁基)-亮氨酸-Wang树脂脱保护、洗涤并在肽偶联剂的条件下加入芴基甲氧基羰基-Arg(Pbf)-OH，得到芴基甲氧基羰基-Arg(Pbf)-脯氨酸-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-天冬酰胺(三苯甲基)-甘氨酸-天冬氨酸(叔丁氧基)-苯丙氨酸-谷氨酸(叔丁氧基)-谷氨酸(叔丁氧基)异亮氨酸-脯氨酸-谷氨酸(叔丁氧基)-谷氨酸(叔丁氧基)-酪氨酸(叔丁基)-亮氨酸-Wang树脂；
步骤21：制备芴基甲氧基羰基-脯氨酸-Arg(Pbf)-脯氨酸-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-天冬酰胺(三苯甲基)-甘氨酸-天冬氨酸(叔丁氧基)-苯丙氨酸-谷氨酸(叔丁氧基)-谷氨酸(叔丁氧基)异亮氨酸-脯氨酸-谷氨酸(叔丁氧基)-谷氨酸(叔丁氧基)-酪氨酸(叔丁基)-亮氨酸-Wang树脂。将芴基甲氧基羰基-Arg(Pbf)-脯氨酸-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-天冬酰胺(三苯甲基)-甘氨酸-天冬氨酸(叔丁氧基)-苯丙氨酸-谷氨酸(叔丁氧基)-谷氨酸(叔丁氧基)异亮氨酸-脯氨酸-谷氨酸(叔丁氧基)-谷氨酸(叔丁氧基)-酪氨酸(叔丁基)-亮氨酸-Wang树脂脱保护、洗涤并在肽偶联剂的条件下加入芴基甲氧基羰基-脯氨酸-OH，得到芴基甲氧基羰基-脯氨酸-Arg(Pbf)-脯氨酸-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-天冬酰胺(三苯甲基)-甘氨酸-天冬氨酸(叔丁氧基)-苯丙氨酸-谷氨酸(叔丁氧基)-谷氨酸(叔丁氧基)异亮氨酸-脯氨酸-谷氨酸(叔丁氧基)-谷氨酸(叔丁氧基)-酪氨酸(叔丁基)-亮氨酸-Wang树脂；
步骤22：制备芴基甲氧基羰基-D-Phe-脯氨酸-Arg(Pbf)-脯氨酸-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-天冬酰胺(三苯甲基)-甘氨酸-天冬氨酸(叔丁氧基)-苯丙氨酸-谷氨酸(叔丁氧基)-谷氨酸(叔丁氧基)异亮氨酸-脯氨酸-谷氨酸(叔丁氧基)-谷氨酸(叔丁氧基)-酪氨酸(叔丁基)-亮氨酸-Wang树脂。将芴基甲氧基羰基-脯氨酸-Arg(Pbf)-脯氨酸-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-天冬酰胺(三苯甲基)-甘氨酸-天冬氨酸(叔丁氧基)-苯丙氨酸-谷氨酸(叔丁氧基)-谷氨酸(叔丁氧基)异亮氨酸-脯氨酸-谷氨酸(叔丁氧基)-谷氨酸(叔丁氧基)-酪氨酸(叔丁基)-亮氨酸-Wang树脂脱保护、洗涤并在肽偶联剂的条件下加入芴基甲氧基羰基-D苯丙氨酸-OH，得到芴基甲氧基羰基-D-Phe-脯氨酸-Arg(Pbf)-脯氨酸-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-天冬酰胺(三苯甲基)-甘氨酸-天冬氨酸(叔丁氧基)-苯丙氨酸-谷氨酸(叔丁氧基)-谷氨酸(叔丁氧基)异亮氨酸-脯氨酸-谷氨酸(叔丁氧基)-谷氨酸(叔丁氧基)-酪氨酸(叔丁基)-亮氨酸-Wang树脂；
步骤23：将芴基甲氧基羰基-D-Phe-脯氨酸-Arg(Pbf)-脯氨酸-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-天冬酰胺(三苯甲基)-甘氨酸-天冬氨酸(叔丁氧基)-苯丙氨酸-谷氨酸(叔丁氧基)-谷氨酸(叔丁氧基)异亮氨酸-脯氨酸-谷氨酸(叔丁氧基)-谷氨酸(叔丁氧基)-酪氨酸(叔丁基)-亮氨酸-Wang树脂洗涤并再次脱保护，得到NH2-D-Phe-脯氨酸-Arg(Pbf)-脯氨酸-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-天冬酰胺(三苯甲基)-甘氨酸-天冬氨酸(叔丁氧基)-苯丙氨酸-谷氨酸(叔丁氧基)-谷氨酸(叔丁氧基)异亮氨酸-脯氨酸-谷氨酸(叔丁氧基)-谷氨酸(叔丁氧基)-酪氨酸(叔丁基)-亮氨酸-Wang树脂；
步骤24：将NH2-D-Phe-脯氨酸-Arg(Pbf)-脯氨酸-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-天冬酰胺(三苯甲基)-甘氨酸-天冬氨酸(叔丁氧基)-苯丙氨酸-谷氨酸(叔丁氧基)-谷氨酸(叔丁氧基)异亮氨酸-脯氨酸-谷氨酸(叔丁氧基)-谷氨酸(叔丁氧基)-酪氨酸(叔丁基)-亮氨酸-Wang树脂洗涤三次，且裂解来自固体支持物的肽在以下条件下进行：TFA/TIS/H2O 94∶2.5∶2.5三小时。
步骤25：将裂解溶液用乙醚沉淀，并以3500-5000rpm离心，得到白色沉淀。将沉淀物洗涤，并再用乙醚离心另外3次，得到最终的沉淀物并在真空下干燥。
步骤26：将粗制的比伐卢定通过制备型HPLC用100％水至100％乙腈的水/乙腈梯度在20分钟内纯化。
步骤27：将纯化的比伐卢定溶液通过冻干机在-50至-70℃下冻干18-48小时，得到纯度高于98％的所制备比伐卢定。
本发明的优势
用于合成比伐卢定的SPPS的常规方法通常产生大量难以分离的副产物，处理费用高昂的大量废物。本方法比所用常规SPPS方法更快，产生的废物更少，且可以高产率获得比伐卢定。
实例1
肽的合成通过采用从Fmoc-Leu-Wang树脂(40g，取代容量0.67meq/g)开始的逐步Fmoc SPPS(固相肽合成)程序进行。Fmoc脱保护通过用甲酸(5％-20％哌啶体积)/哌嗪的DMF溶液进行。序列中的后续其他氨基酸按以下顺序连接：Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-D-Phe-OH。氨基酸的偶联和解偶联在50℃-120℃下进行2-3分钟，并通过Kaiser测试进行监控。肽的TFA裂解用TFA/TIS/H2O 94∶5∶1进行3小时，随后沉淀并用乙醚洗涤2次。粗肽的产率为85％。将粗制的比伐卢定通过制备型HPLC用100％水至100％乙腈的水/乙腈梯度在20分钟内纯化。将纯化的比伐卢定溶液通过冻干机在-50至-70℃下冻干18-48小时，得到纯度高于98％的所制备比伐卢定。
实例2
肽的合成通过采用从Fmoc-Leu-2CT树脂(40g，取代容量0.8meq/g)开始的逐步Fmoc SPPS(固相肽合成)程序进行。将树脂转移到肽合成仪的反应容器中，并使用2摩尔过量的受保护氨基酸与甲酸(5％-20％哌啶体积)/哌嗪的DMF溶液进行合成。Fmoc脱保护反应在50℃-120℃下进行2-3分钟，重复两次。序列中的后续其他氨基酸按以下顺序连接：Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-D-Phe-OH。肽的TFA裂解用TFA/TIS/H2O 94∶5∶1进行3小时，随后沉淀并用乙醚洗涤3次。粗肽的产率为86.44％。将粗制的比伐卢定通过制备型HPLC用100％水至100％乙腈的水/乙腈梯度在20分钟内纯化。将纯化的比伐卢定溶液通过冻干机在-50至-70℃下冻干18-48小时，得到纯度高于98％的所制备比伐卢定。
实例3
肽的合成通过采用从Fmoc-Feu-2CT树脂(40g，取代容量1.1meq/g)开始的逐步Fmoc SPPS(固相肽合成)程序进行。将树脂转移到肽合成仪的反应容器中。Fmoc脱保护通过用甲酸(5％-20％哌啶体积)/哌嗪的DMF溶液进行。Fmoc脱保护反应在50℃至120℃下进行1分钟，重复两次。序列中的后续其他氨基酸按以下顺序连接：Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-D-Phe-OH。氨基酸的偶联和解偶联在50℃-120℃下进行2分钟，并重复两次。肽的TFA裂解用TFA/茴香硫醚/苯酚/H2O/TES 89∶2.5∶2.5∶5∶1进行3小时，随后沉淀并用乙醚洗涤4次。粗肽的产率为88.12％。将粗制的比伐卢定通过制备型HPLC用100％水至100％乙腈的水/乙腈梯度在20分钟内纯化。将纯化的比伐卢定溶液通过冻干机在-50至-70℃下冻干18-48小时，得到纯度高于98％的所制备比伐卢定。纯度通过HPLC分析，如图2所示。校正质量分析，如图3所示。
实例4
肽的合成通过采用从Fmoc-Leu-Chemmatrix树脂(40g，取代容量0.67meq/g)开始的逐步Fmoc SPPS(固相肽合成)程序进行。将树脂转移到肽合成仪的反应容器中。Fmoc脱保护通过用甲酸(5％-20％哌啶体积)/哌嗪的DMF溶液进行。Fmoc脱保护反应在50℃-120℃下进行1分钟，重复两次。序列中的后续其他氨基酸按以下顺序连接：Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-D-Phe-OH。氨基酸的偶联和解偶联在50℃-120℃下进行2分钟。肽的TFA裂解用TFA/茴香硫醚/苯酚/H2O/TES 89∶2.5∶2.5∶5∶1进行3小时，随后沉淀并用乙醚洗涤4次。粗肽的产率为84.15％。将粗制的比伐卢定通过制备型HPLC用100％水至100％乙腈的水/乙腈梯度在20分钟内纯化。将纯化的比伐卢定溶液通过冻干机在-50至-70℃下冻干18-48小时，得到纯度高于98％的所制备比伐卢定。
实例5
肽的合成通过采用从Fmoc-Feu-Wang树脂(40g，取代容量0.67meq/g)开始的逐步Fmoc SPPS(固相肽合成)程序进行。将树脂转移到肽合成仪的反应容器中。Fmoc脱保护通过用甲酸5％-20％哌啶体积)/哌嗪的DMF溶液进行。Fmoc脱保护反应在50℃-120℃下进行1分钟，重复两次。序列中的后续其他氨基酸按以下顺序连接：Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-DmBGly-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-D-Phe-OH。氨基酸的偶联和解偶联在50℃-120℃下进行2分钟，并在第10个氨基酸之后重复两次。合成时间为4小时20分钟。肽的TFA裂解用TFA/茴香硫醚/苯酚/H2O/TES 89∶2.5∶2.5∶5∶1进行3小时，随后沉淀并用乙醚洗涤4次。粗肽的产率为81.86％。将粗制的比伐卢定通过制备型HPLC用100％水至100％乙腈的水/乙腈梯度在20分钟内纯化。将纯化的比伐卢定溶液通过冻干机在-50至-70℃下冻干18-48小时，得到纯度高于98％的所制备比伐卢定。
实例6
肽的合成通过采用从CEM树脂的Protide树脂(40g，取代容量0.18meq/g)开始的逐步Fmoc SPPS(固相肽合成)程序进行。将树脂转移至肽合成仪(Cem Liberty Blue)的反应容器中，并在50℃-120℃下用KI和DIPEA的DMF溶液将第一氨基酸与树脂偶联10分钟。Fmoc脱保护用甲酸5％-20％哌啶体积)/哌嗪的DMF溶液进行。Fmoc脱保护在50℃-120℃下进行1分钟，重复两次。序列中的后续其他氨基酸按以下顺序连接：Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-D-Phe-OH。氨基酸的偶联和解偶联在50℃-120℃下进行2分钟。肽的TFA裂解用TFA/茴香硫醚/苯酚/H2O/TES 89∶2.5∶2.5∶5∶1进行3小时，随后沉淀并用乙醚洗涤4次。粗肽的产率为82.16％。将粗制的比伐卢定通过制备型HPLC用100％水至100％乙腈的水/乙腈梯度在20分钟内纯化。将纯化的比伐卢定溶液通过冻干机在-50至-70℃下冻干18-48小时，得到纯度高于98％的所制备比伐卢定。
实例7
肽的合成通过采用从Fmoc-Leu-Wang或2CT树脂(40g，取代容量0.67/1.1meq/g)开始的逐步Fmoc SPPS(固相肽合成)程序进行。将树脂转移到肽合成仪的反应容器中。Fmoc脱保护用甲酸5％-20％哌啶体积)/哌嗪的DMF溶液进行。Fmoc脱保护反应在50℃-120℃下进行1分钟，重复两次。序列中的后续其他氨基酸按以下顺序连接：Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-D-Phe-OH。氨基酸的偶联和解偶联在50℃-120℃下进行2分钟。肽的TFA裂解用TFA/TIS/H2O 94∶5∶1进行3小时，随后沉淀并用乙醚洗涤4次。粗肽的产率为87.56％。将粗制的比伐卢定通过制备型HPLC用100％水至100％乙腈的水/乙腈梯度在20分钟内纯化。将纯化的比伐卢定溶液通过冻干机在-50至-70℃下冻干18-48小时，得到纯度高于98％的所制备比伐卢定。
Claims (10)
1.一种合成方法，其特征在于使用固相肽合成生产比伐卢定，其中，所述方法使用Fmoc-Leu-Wang树脂、Fmoc-Leu-2CT树脂、Rink酰胺ProTide(LL)树脂和ChemMatrix wang树脂作为载体进行所述多肽的所述固相合成。
2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述多肽固相合成方法中使用的多肽连接剂选自由2-肟氰乙酸乙酯、N,N-二异丙基碳二亚胺、N,N-二异丙基乙胺、二甲基甲酰胺(DMF)、二氯甲烷(DCM)和甲酸组成的组。
3.根据权利要求1所述的方法，其中，将所述Fmoc-Leu-Wang树脂、Fmoc-Leu-2CT树脂、Rink酰胺ProTide(LL)树脂和ChemMatrix wang树脂用作用于所述多肽的所述固相合成反应的载体。
4.根据权利要求1所述的方法，其中，所述多肽固相肽合成方法通过Fmoc脱保护方法进行。
5.根据权利要求4所述的方法，其中，将哌啶/N,N-二甲基甲酰胺/甲酸/哌嗪加入所述Fmoc脱保护方法中，并且所述脱芴基甲氧基羰基保护反应在加热或微波下进行。
6.根据权利要求1所述的方法，其中，所述多肽通过固相合成反应生产，且然后在每次反应完成之后用N,N-二甲基甲酰胺洗涤2-3次。
7.根据权利要求6所述的方法，其中，在所述树脂上的所述多肽的所述固相合成反应中的氨基酸的缩合反应在与所述树脂量相比的2-10倍当量下在50至120℃下进行。
8.根据权利要求6所述的方法，其中，在所述多肽的所述固相合成反应中的所述氨基酸缩合反应完成之后，在裂解反应完成之前，用氮气吹扫所述树脂。
9.根据权利要求8所述的方法，其中，在所述裂解反应中加入的三氟乙酸的纯度为＞95％，反应温度为25℃，且裂解反应时间为1-3小时。
10.根据权利要求1所述的方法，其中，用DMF使所述树脂在所述多肽的所述固相合成反应之前经受溶胀处理。
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PCT/CN2018/091752 WO2019241903A1 (en) | 2018-06-19 | 2018-06-19 | Synthetic method of bivalirundin |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN112424216A true CN112424216A (zh) | 2021-02-26 |
Family
ID=68982571
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201880094571.2A Pending CN112424216A (zh) | 2018-06-19 | 2018-06-19 | 比伐卢定的合成方法 |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP3810627A4 (zh) |
| CN (1) | CN112424216A (zh) |
| WO (1) | WO2019241903A1 (zh) |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101033249A (zh) * | 2006-03-10 | 2007-09-12 | 周逸明 | 固相多肽合成比筏芦定的制备方法 |
| CN102532274A (zh) * | 2012-02-13 | 2012-07-04 | 成都圣诺生物制药有限公司 | 一种比伐卢定的制备方法 |
| CN103242431A (zh) * | 2013-05-20 | 2013-08-14 | 齐鲁制药有限公司 | 一种比伐卢定的制备方法 |
| CN103319570A (zh) * | 2013-05-30 | 2013-09-25 | 深圳翰宇药业股份有限公司 | 一种比伐卢定的制备方法 |
| CN103374054A (zh) * | 2012-04-28 | 2013-10-30 | 上海第一生化药业有限公司 | 一步法固相合成多肽的方法 |
| US20170226152A1 (en) * | 2015-10-23 | 2017-08-10 | Cem Corporation | Solid phase peptide synthesis |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2008543884A (ja) * | 2005-09-14 | 2008-12-04 | ノベタイド，リミティド | ビバリルジンの生成方法 |
| US20090062511A1 (en) * | 2007-09-05 | 2009-03-05 | Raghavendracharyulu Venkata Palle | Process for the preparation of bivalirudin and its pharmaceutical compositions |
| US20110160431A1 (en) * | 2009-04-06 | 2011-06-30 | Novetide, Ltd. | Production of peptides containing poly-gly sequences using fmoc chemistry |
| CN101555274B (zh) * | 2009-05-15 | 2013-08-21 | 海南双成药业股份有限公司 | 一种多肽固相合成比法卢定粗品的制备方法 |
| CN102286076B (zh) * | 2011-06-23 | 2014-03-12 | 成都圣诺科技发展有限公司 | 比伐卢定的制备方法 |
-
2018
- 2018-06-19 EP EP18923472.7A patent/EP3810627A4/en not_active Withdrawn
- 2018-06-19 CN CN201880094571.2A patent/CN112424216A/zh active Pending
- 2018-06-19 WO PCT/CN2018/091752 patent/WO2019241903A1/en unknown
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101033249A (zh) * | 2006-03-10 | 2007-09-12 | 周逸明 | 固相多肽合成比筏芦定的制备方法 |
| CN102532274A (zh) * | 2012-02-13 | 2012-07-04 | 成都圣诺生物制药有限公司 | 一种比伐卢定的制备方法 |
| CN103374054A (zh) * | 2012-04-28 | 2013-10-30 | 上海第一生化药业有限公司 | 一步法固相合成多肽的方法 |
| CN103242431A (zh) * | 2013-05-20 | 2013-08-14 | 齐鲁制药有限公司 | 一种比伐卢定的制备方法 |
| CN103319570A (zh) * | 2013-05-30 | 2013-09-25 | 深圳翰宇药业股份有限公司 | 一种比伐卢定的制备方法 |
| US20170226152A1 (en) * | 2015-10-23 | 2017-08-10 | Cem Corporation | Solid phase peptide synthesis |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 王风亮等: "使用新型耦合活化剂Oxyma 高效合成利拉鲁肽", 有机化学, vol. 36, pages 218 - 221 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2019241903A1 (en) | 2019-12-26 |
| EP3810627A4 (en) | 2022-03-09 |
| EP3810627A1 (en) | 2021-04-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP3398960B1 (en) | Method for preparing semaglutide | |
| Schiller et al. | Synthesis of side‐chain to side‐chain cyclized peptide analogs on solid supports | |
| TWI453216B (zh) | 比伐盧定（Ｂｉｖａｌｉｒｕｄｉｎ）的製造方法 | |
| WO2010028131A1 (en) | Process for the preparation of pramlintide | |
| KR20100036326A (ko) | 프람린타이드의 생산 방법 | |
| CN109575109B (zh) | 片段缩合制备地加瑞克的方法 | |
| CN110204611B (zh) | 一种固相片段法合成比伐卢定 | |
| WO2020252883A1 (zh) | 胸腺肽Tα-1的合成方法 | |
| WO2020199461A1 (zh) | 一种多肽衍生化合物的合成方法 | |
| CN108383896B (zh) | 一种片段法合成戈舍瑞林的方法 | |
| CN112424216A (zh) | 比伐卢定的合成方法 | |
| CN109988213B (zh) | 一种用于多肽液相合成载体的化合物及其制备方法和用途 | |
| CN114230653A (zh) | 一种氯毒素的制备方法 | |
| WO2021103458A1 (zh) | 一种地加瑞克的固相合成方法 | |
| CN113801199B (zh) | 一种卡贝缩宫素的全固相合成方法 | |
| WO2021026800A1 (zh) | 醋酸地加瑞克的合成方法 | |
| WO2021007703A1 (en) | A method for preparing liraglutide via a solid phase peptide synthesis | |
| CN111944040A (zh) | 一种固相合成阿巴帕肽的方法 | |
| WO2019127920A1 (zh) | 一种液相球形载体及其制备方法和应用 | |
| WO2021007701A1 (en) | A method for preparing liraglutide via a solid phase peptide synthesis | |
| CN113801190A (zh) | 寡肽-1盐酸盐的制备方法 | |
| CN114945580B (zh) | 用于合成南吉博肽的方法 | |
| CN110330552B (zh) | 醋酸地加瑞克的合成方法 | |
| CN113135988B (zh) | 一种胸腺肽β4的制备方法 | |
| CN114057829A (zh) | 一种n-甲基化多肽的固相合成方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination |